張瑞城

海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，海南?？?70102

激素敏感型腎病綜合征患兒CD 19+CD 23+B細(xì)胞、CD 4+CD 25+T細(xì)胞、E-選擇素和白介素-12水平變化及其與白蛋白、血膽固醇的相關(guān)性

張瑞城

海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，海南?？?70102

目的探討激素敏感型腎病綜合征患兒CD19+CD23+B細(xì)胞，CD4+CD25+T細(xì)胞，E-選擇素和白介素-12含量變化及其與白蛋白堯血膽固醇的相關(guān)性。方法選取2012年3月~2015年1月在海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行治療的初發(fā)激素敏感型腎病綜合征患兒35例作為觀察組，另選取在門診體檢的健康兒童30例作為對照組，觀察并比較兩組治療前堯治療4周堯治療8周B細(xì)胞堯T細(xì)胞亞群堯E-選擇素和白介素-12水平；分析B細(xì)胞堯T細(xì)胞亞群堯E-選擇素和白介素-12水平與治療前血白蛋白和血膽固醇水平的相關(guān)性。結(jié)果①觀察組CD4+CD25+T細(xì)胞治療前與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療8周后CD4+CD25+T細(xì)胞水平與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），觀察組CD19+CD23+B淋巴細(xì)胞與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；于觀察組治療前和治療4周E-選擇素和白介素-12明顯高于對照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；觀察組治療8周后E-選擇素和白介素-12明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；盂E-選擇素與血白蛋白呈負(fù)相關(guān)（r=-0.417，P<0.05），與血膽固醇成正相關(guān)（r=0.527，P<0.05）；白介素-12與血白蛋白呈負(fù)相關(guān)（r=-0.722，P< 0.01），與血膽固醇成正相關(guān)（r=0.817，P<0.01）；CD19+CD23+B細(xì)胞和CD4+CD25+T與血白蛋白堯血膽固醇無相關(guān)性（P>0.05)。結(jié)論CD4+CD25+T細(xì)胞/E-選擇素和白介素-12與敏感型腎病綜合征相關(guān)，其中E-選擇素和白介素-12與該疾病嚴(yán)重程度可能具有一定相關(guān)性。

激素敏感型腎病綜合征；B淋巴細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞；E-選擇素

腎病綜合征是兒童常見的腎小球疾病，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確。由于兒童腎病綜合征有近50%會(huì)復(fù)發(fā)，故尋求一種臨床參考指標(biāo)對于腎病綜合征病情檢測具有重要意義[1]。研究證實(shí)，在腎病綜合征患者會(huì)出現(xiàn)脂質(zhì)和白蛋白紊亂現(xiàn)象，具體表現(xiàn)為高血脂和低白蛋白血癥，這對監(jiān)測腎病綜合征患兒病情尤其是發(fā)現(xiàn)合并并發(fā)癥患兒有重要的參考價(jià)值[2]。近期研究認(rèn)為T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂以及比例失調(diào)導(dǎo)致腎小球?yàn)V過膜通透性改變是引起兒童腎病綜合征發(fā)生以及進(jìn)展的主要原因[3]。近年來有研究利用CD20單克隆抗體緩解難治性腎病綜合征獲得成功，認(rèn)為B淋巴細(xì)胞同樣參與了腎病綜合征發(fā)生與發(fā)展[4]。本研究通過對激素敏感型腎病綜合征患兒CD19+CD23+B細(xì)胞，CD4+CD25+T細(xì)胞及其可能相關(guān)因子E-選擇素和白介素-12水平進(jìn)行測定，觀察治療前后各因子水平變化，現(xiàn)報(bào)道如下；

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年3月~2015年1月在海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行治療的初發(fā)激素敏感型腎病綜合征患兒35例作為觀察組，其中男24例，女11例，年齡2~11歲，平均年齡（5.12依2.17）歲。對照組選取同期在門診體檢的健康兒童30例，其中男20例，女10例，年齡2~12歲，平均年齡（5.42依2.46）歲。兩組性別堯年齡一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)；患兒符合葉腎病綜合征診治循證指南曳中對腎病綜合征的診斷，并且在應(yīng)用潑尼松足量治療臆4周癥狀消失，蛋白尿轉(zhuǎn)陰[5]；患兒為初次發(fā)病，并且入；診治前未使用過糖皮質(zhì)激素或者兔疫抑制劑。

排除標(biāo)準(zhǔn)；排除感染堯兔疫類疾病堯肝腎功能障礙堯內(nèi)分泌疾病等。

1.2 方法

1.2.1 治療方法患兒經(jīng)確診后應(yīng)用潑尼松2mg/（kg窯d）（浙江仙琚制藥公司，國藥準(zhǔn)字H20023134）進(jìn)行治療，共治療8周。

1.2.2 檢測方法CD19+CD23+B細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞檢測采用流式細(xì)胞術(shù)，相關(guān)抗體為美國beckmen公司產(chǎn)；E-選擇素和白介素-12檢測選用酶聯(lián)兔疫吸附法，取患兒靜脈血3 mL，以2000 r/min離心5 min，取上清應(yīng)用酶聯(lián)兔疫吸附法進(jìn)行檢測，試劑盒由上海森雄藥品有限公司提供。血清膽固醇檢測采用酶法測定，血清白蛋白應(yīng)用雙向凝膠電泳法，采取清晨靜脈血2mL，1500 r/min離心10min，取上清進(jìn)行檢測，試劑為美國Fisher公司生產(chǎn)，按操作按試劑說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)依標(biāo)準(zhǔn)差（x依s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者B淋巴細(xì)胞亞群堯T淋巴細(xì)胞亞群

觀察組CD4+CD25+T細(xì)胞治療前與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療8周后CD4+CD25+T水平與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），CD19+CD23+B淋巴細(xì)胞與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較（%，x依s）

2.2 兩組患者E-選擇素和白介素-12比較

觀察組治療前和治療4周E-選擇素和白介素-12明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；觀察組治療8周后E-選擇素和白介素-12明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組患者E-選擇素和白介素-12比較（x依s）

2.3 患兒治療前四種因子與血白蛋白和血膽固醇相關(guān)性研究

E-選擇素與血白蛋白呈負(fù)相關(guān)（r=-0.417，P<0.05），與血膽固醇成正相關(guān)（r=0.527，P<0.05）；白介素-12與血白蛋白呈負(fù)相關(guān)（r=-0.722，P<0.01），與血膽固醇成正相關(guān)（r=0.817，P<0.01）；CD19+CD23+B細(xì)胞和CD4+CD25+T與血白蛋白堯血膽固醇無顯著相關(guān)性（P>0.05）。見表3。

表3 E-選擇素和白介素-12與血白蛋白、膽固醇相關(guān)性

3 討論

兒童腎病綜合征發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前仍未明確。眾多學(xué)者傾向于與兔疫因子和兔疫紊亂有關(guān)[6]。一般認(rèn)為，腎病綜合征發(fā)病與B堯T淋巴細(xì)胞有關(guān)，具體表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞亞群比例異常[7]。目前對兒童腎病綜合征B堯T細(xì)胞亞群研究結(jié)論不一，有研究發(fā)現(xiàn)在兒童腎病綜合征活動(dòng)期存在CD4/CD8比值出現(xiàn)異常，提示腎病綜合征與CD4+以及CD8+T淋巴細(xì)胞異常有關(guān)[8]。目前認(rèn)為對CD4+Th細(xì)胞的檢測更能反映出T淋巴細(xì)胞的功能。其中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是目前研究的熱點(diǎn)[9]?；罨腃D4+CD25+T細(xì)胞主要通過兩種途徑發(fā)揮其兔疫調(diào)節(jié)作用；①接觸性途徑，此為CD4+CD25+T細(xì)胞主要調(diào)節(jié)方式，其能夠通過CTLA-4與靶細(xì)胞表面分子進(jìn)行結(jié)合，從而激活細(xì)胞內(nèi)信號途徑，抑制靶細(xì)胞的活性[10]；于分泌途徑；CD4+CD25+T細(xì)胞能夠通過TCR介導(dǎo)的信號進(jìn)行活化并分泌生長因子茁和具有抑制作用的白介素來發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[11]。此外，近來研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+T細(xì)胞表面含有一種胞外酶，此酶能夠?qū)TP降解為AMP，協(xié)助細(xì)胞發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用[12]。有研究認(rèn)為，CD4+CD25+T細(xì)胞能夠抑制各類活化的細(xì)胞毒性T細(xì)胞，減輕腎病綜合征患者凝血功能紊亂狀態(tài)[13]。也有研究發(fā)現(xiàn)，對于激素敏感型腎病綜合征患兒，在應(yīng)用潑尼松進(jìn)行治療后，CD4+CD25+T細(xì)胞明顯上升，而對于耐藥型腎病綜合征患兒，再經(jīng)治療后CD4+CD25+T細(xì)胞無明顯改變，認(rèn)為腎上腺糖皮質(zhì)激素類藥物是通過調(diào)節(jié)CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)而達(dá)到治療目的[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，腎病綜合征患兒在治療前CD4+CD25+T水平明顯低于對照組，而經(jīng)過潑尼松進(jìn)行治療8周后，CD4+CD25+T細(xì)胞水平明顯上升，并且與正常兒童差異不大。說明CD4+CD25+T細(xì)胞與患兒病情息息相關(guān)，其處于正常水平能夠抑制其他活性T細(xì)胞，抑制病情發(fā)生堯發(fā)展。

腎病綜合征除了與T細(xì)胞功能有關(guān)外，近年來許多研究認(rèn)為其與B淋巴細(xì)胞數(shù)量與功能有關(guān)[15]。研究發(fā)現(xiàn)，在激素敏感型腎病綜合征復(fù)發(fā)期間，發(fā)現(xiàn)有B細(xì)胞功能亢進(jìn)現(xiàn)象，表現(xiàn)為大量B細(xì)胞激活。B淋巴細(xì)胞出現(xiàn)高反應(yīng)性，會(huì)大量合成和分泌自身抗體，從而導(dǎo)致自身兔疫性疾病[16-17]。學(xué)者在對腎病綜合征患兒進(jìn)行活檢發(fā)現(xiàn)，其腎小球和腎間質(zhì)中并未發(fā)現(xiàn)B淋巴細(xì)胞浸潤現(xiàn)象[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，激素敏感型腎病綜合征患兒在治療前后CD19+CD23+B淋巴細(xì)胞與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為B淋巴細(xì)胞在腎病綜合征發(fā)揮作用不在于數(shù)量或者侵潤，可能是其功能上異常。因此本研究認(rèn)為CD19+CD23+B淋巴細(xì)胞并非導(dǎo)致腎病綜合征的直接因素。

E-選擇素作為一種細(xì)胞黏附分子選擇素家族成員，主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。E-選擇素參與多種自身兔疫性疾病發(fā)生與發(fā)展，并且其水平與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，白介素-12與IgA腎病有關(guān)，并且可以作為IgA腎病治療效果的評價(jià)指標(biāo)。并且在腎小球系膜區(qū)的白細(xì)胞介素-12陽性數(shù)也與各類腎病的病理類型有關(guān)[19]。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，腎病綜合征患兒血清中E-選擇素和白介素-12水平要高于正常兒，提示其兩種因子同樣與該疾病有關(guān)。

在腎病綜合征發(fā)病和進(jìn)展過程中，血脂水平與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，故有研究認(rèn)為患者血脂水平?jīng)Q定患兒的預(yù)后[20]。研究發(fā)現(xiàn)，患者血中血脂增高主要原因是由于腎小球?yàn)V過膜遭到破壞，導(dǎo)致血清中白蛋白從尿液中丟失，繼發(fā)高血脂癥，故患者表現(xiàn)為血清中血脂升高，白蛋白降低[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，腎病綜合征患兒E-選擇素和白介素-12與血清白蛋白和血脂具有相關(guān)性，說明兩種因子同樣與疾病發(fā)展具有相關(guān)性。而CD4+CD25+T細(xì)胞與血清白蛋白和血脂不具有相關(guān)性，說明CD4+CD25+T細(xì)胞并不是直接作用于該疾病，而是通過抑制其他兔疫細(xì)胞功能實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，CD4+CD25+T細(xì)胞，E-選擇素和白介素-12與敏感型腎病綜合征相關(guān)，因此可以作為兒童腎病綜合征診斷以及治療效果評估手段。此外，E-選擇素和白介素-12與血清白蛋白和血脂具有相關(guān)性，說明兩種因子可能是導(dǎo)致患兒出現(xiàn)蛋白尿堯高脂血癥的直接因素，因此可以作為疾病嚴(yán)重程度的評估手段。

[1]Ali SH，Ali AM，Najim AH.The predictive factors for re-lapses in children with steroid-sensitive nephrotic syn-drome[J].Saudi JKidney Dis Transpl，2016，27（1）；67-72.

[2]Corona-Rivera JR，P佴rez-Cort佴s G，Osuna-Osuna J，et al. Dermatoglyphics differences among children with nephrot-ic syndrome according to steroid response[J].Rev Med InstMex Seguro Soc，2016，54（2）；146-150.

[3]劉艾芹，子磊.原發(fā)性腎病綜合征患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及臨床意義[J].河北醫(yī)藥，2014，20（3）；458-460.

[4]楊玉京，封其華.原發(fā)性腎病綜合征患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥，2010，36（10）；127-1128.

[5]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)腎臟病學(xué)組.兒童常見腎臟疾病診治循證指南[J].中國兒科雜志，2009，47（3）；167-169.

[6]Larkins N，Kim S，Craig J，et al.Steroid-sensitive nephrot-ic syndrome；an evidence-based update of immunosup-pressive treatment in children[J].Arch Dis Child，2016，101（4）；404-408.

[7]Youssef DM，Elbehidy RM，El-Shal AS，et al.T helper 1 and T helper 2 cytokines in atopic children with steroidsensitive nephrotic syndrome[J].Iran JKidney Dis，2015，9（4）；298-305.

[8]毛曉燕，莫櫻，蔣小云.激素敏感型腎病綜合征兒童外周血T堯B淋巴細(xì)胞亞群的研究[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)；醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2012，33（4）；504-507.

[9]Uwaezuoke SN.Steroid-sensitive nephrotic syndrome in children；triggers of relapse and evolving hypotheses on pathogenesis[J].Ital JPediatr，2015，41；19.

[10]楊軍，李成榮，黃惠君，等.潑尼松治療原發(fā)性腎病綜合征對患兒CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響分析[J].中國實(shí)用兒科雜志，2009，24（5）；369-371.

[11]Yildiz B，Cetin N，Kural N，et al.CD19+CD23+B cells，CD4+CD25+T cells，E-selectin and interleukin-12 levels in children with steroid sensitivenephrotic syndrome[J]. Ital JPediatr，2013，39；42.

[12]王莉，李秋，王莉佳，等.原發(fā)性腎病綜合征患兒外周血Th17與CD4+CD25+Foxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平[J].細(xì)胞與分子兔疫學(xué)雜志，2010，26（8）；783-786.

[13]Benz K，Buttner M，Dittrieh K，et al.Charaeterisation of renal immune cell infiltrates in chi1dren with nephrotie syndrome[J].Pediatr Nephrol，2010，25（7）；1291-1298.

[14]宋曉翔，封其華，楊玉京.原發(fā)性腎病綜合征患兒CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞的變化及其意義[J].蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)；醫(yī)學(xué)版，2010，30（3）；521-523.

[15]Dwyer KM，Hanidziar D，Putheti P，et al.Expression of CD39 by human peripheral blood CD4+CD25+T cells de-notesa regulatorymemory phenotype[J].Am JTransplant，2010，10（11）；2410-2420.

[16]Mottet C，Uhlig HH，Powrie F.Cutting edge；cure of colitis by CD4+CD25+regulatory T cells[J].JImmunol，2003，170（8）；3939-3943.

[17]Kemper MJ，Zepf K，Klaassen I，et al.Changes of lym-phocyte population in pedoatric steroid-sensitive nephrot-ic syndrome are more pronounced in remission than in relapse[J].Am JNephrol，2005，25（2）；132-137.

[18]Shimada Y，HasegawaM，Takehara A，etal.Elevated serum L-selectin levels and decreased E-selectin expression in systemic sclerosis[J].Clin Exp Immunol，2001，124（3）；474-479.

[19]張慧儒，薛蘭芬，常麗麗.血清中白介素-12與IgA腎病療效分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2008，10（4）；595-597.

[20]張弘，葛宇明，熊保華.原發(fā)性小兒腎病綜合征血脂變化及其臨床意義[J].江漢大學(xué)學(xué)報(bào)；自然科學(xué)版，2005，33（2）；56-57.

[21]Swierczewska M，Ostalska-Nowicka D，Kempisty B，et al. Molecular basis of mechanisms of steroid resistance in children with nephrotic syndrome[J].Acta Biochim Pol，2013，60（3）；339-344.

Change of CD19+CD23+B cells,CD4+CD25+T cells and E-selectin and in-terleukin-12 in children w ith steroid sensitive nephrotic syndrome and their correlation w ith album in and blood cholesterol

ZHANGRuicheng
Department of Nephrology,Hainan Medical College Affiliated Hospital,Hainan Province,Haikou 570102,China

Ob jective To discuss the content changes of CD19+CD23+B cells,CD4+CD25+T cells,E-selectin and interleukin-12 of children with steroid-sensitive nephrotic syndrome and their relationship with album in and cholesterol.Methods From March 2012 to January 2015,in Hainan Medical College Affiliated Hospital,35 children with steroid sensitive nephrotic syndrome were selected as observation group;another 30 cases of healthy children received outpatient physical examination were chosen as controlgroup.B cells,T cellsubsets,E-selectin and interleukin-12 levels of two groups before treatment,after treatment 4 weeks and after treatment 8 weeks were observed and compared,the correlations among B cells,T cell subsets,E-selectin,interleukin-12 levels and blood albumin,blood cholesterol levelswere analyzed.Results①The CD4+CD25+T cells of observation group before treatmentwas compared with controlgroup,the differencewas statistically significant(P<0.05);the CD4+CD25+T levelafter 8weekswas compared with before treatment,the difference was statistically significant(P<0.05).CD19+CD23+B lymphocytes of observation groupwascomparedwith controlgroup,thedifferencewasnotstatistically significant(P>0.05).于E-selectin and interleukin -12 of observation group before treatment and after treatment 4 weeks were obviously higher than those of control group,the differences were statistically significant(P<0.05);E-selectin and interleukin-12 of observation group after treatment8weekswere obviously lower than those of controlgroup,the differenceswere statistically significant(P<0.05);盂E-selectinwasnegatively correlatedwith serum albumin (r=-0.417,P<0.05),it had a positive correlation withblood cholesterol(r=0.527,P<0.05);interleukin-12 was negatively correlated with blood albumin(r=0.722,P< 0.01),it had a positive relation with blood cholesterol(r=0.817,P<0.01);CD19+CD23+B cells and CD4+CD25+T cells had no significantcorrelation with blood albumin orblood cholesterol(P>0.05).Conclusion CD4+CD25+T cells,E-selectin and nterleukin-12 have something to do with steroid-sensitive nephrotic syndrome,and E-selectin and nterleukin-12 have certain correlation with the severity of the disease.

Steroid-Sensitive Nephrotic Syndrome;B lymphocytes;T lymphocytes;E-selectin

R726.9

A

1673-7210（2016）05（a）-0040-04

；2016-02-02本文編輯；蘇暢）

張瑞城（1976.7-），碩士，副主任醫(yī)師；研究方向；腎臟病基礎(chǔ)與臨床。