張艷秋+王靜+袁子民+張振秋

【摘 要】目的：建立HPLC法測(cè)定都梁丸中阿魏酸的含量。方法：采用Diamonsil C18色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸（65∶35）為流動(dòng)相，柱溫35 ℃，測(cè)定波長(zhǎng)321nm。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997，平均加樣回收率為98.3%，RSD為1.02%。結(jié)論：該法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于都梁丸中阿魏酸的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】都梁丸；阿魏酸；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R286.0 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）15-0015-02

Abstract：Objective To establish HPLC for determining the content of ferullic acid in Duliang Pills.Method An HPLC method was developed.The chromatographic conditions were as follow： Diamonsil C18 column and methanol-0.1% phosphoric acid （65∶35） as mobile phase， The column temperature was 25℃，detection wavelength at 321nm.Result The recovery range of ferullic acid was 0.0144～0.288μg， r=0.9997.The average recovery rate was 98.3% and RSD was 1.02%.Conclusion The method is simple and accurate，with good repeatability，and can be used for determination of ferullic acid in Duliang Pills.

Keywords：Duliang Pills； Ferullic acid； HPLC

都梁丸（大蜜丸）由白芷（酒燉）、川芎兩味藥組成，具有祛風(fēng)散寒，活血通絡(luò)的功效，臨床主要用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛，癥見頭脹痛或刺痛、痛有定處、反復(fù)發(fā)作、遇風(fēng)寒誘發(fā)或加重。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2015版一部（HPLC法）[1]。目前，藥典都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)項(xiàng)下及文獻(xiàn)報(bào)道[2]的都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中均只測(cè)定了白芷中歐前胡素的含量，缺少對(duì)川芎中阿魏酸的質(zhì)量控制。本研究采用高效液相色譜法（HPLC法），測(cè)定都梁丸中阿魏酸含量，為都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）。

1.2 材料 阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：0738-200108中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水；都梁丸（大蜜丸，市售）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸（65∶35）；柱溫：35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm，流速：1.0mL/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含0.0144mg的對(duì)照品溶液備用。

2.3 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，以70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜后置棕色量瓶中，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn) 按處方量取白芷細(xì)粉，按都梁丸制法制備陰性樣品，再按“2.3”供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照液及對(duì)照品溶液各10μL，按“2.1”色譜條件依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在阿魏酸相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰干擾，HPLC色譜圖見圖1。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件依法測(cè)定，記錄各色譜峰峰面積，以阿魏酸色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，阿魏酸對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=4710X–0.284，r=0.9997。表明進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)20150910），分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，結(jié)果供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.93%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次供試樣品（批號(hào)20150910），按“2.3”供試品溶液制備方法，同法制備6份供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μL依法測(cè)定，記錄各色譜峰峰面積，并按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為0.177mg/g，RSD為1.73%。

2.8 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)20150910）10μL，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及各色譜峰峰面積，結(jié)果表明該法精密度良好，RSD為1.86%。

2.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量重量差異項(xiàng)下的本品（0.177mg/g，批號(hào)20150910），剪碎，混勻，取約3g，共取6份，分別精密稱定，各精密加入等量的硅藻土，研勻，取約1g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入阿魏酸對(duì)照品溶液（0.085mg/mL）1.0mL，再分別精密加入70%甲醇24mL，其余按“2.3”供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并依法測(cè)定，結(jié)果見表1，表明回收率符合相關(guān)規(guī)定。

2.10 含量測(cè)定 取20150910、20150915、20150923批樣品，分別按“2.3”供試品溶液的制備方法制備，按“2.1”色譜條件依法測(cè)定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果阿魏酸的含量分別為0.177mg/g、0.168mg/g、0.186mg/g（n=3）。

3 討論

3.1 本品川芎采用原粉入藥，實(shí)驗(yàn)中參考藥典川芎中阿魏酸的含量測(cè)定方法[3]，對(duì)供試品溶液的制備方法中所用溶劑（甲醇、70%甲醇）、提取時(shí)間（20min、30min、40min）、提取方法（回流、超聲）進(jìn)行了考察，結(jié)果回流法優(yōu)于超聲法，提取30min基本提取完全[4]。本品由于含有大量蜂蜜，實(shí)驗(yàn)中加入了硅藻土，主要目的為降低黏性，易于溶劑浸潤(rùn)、滲透提取。

3.2 文獻(xiàn)對(duì)都梁滴丸（白芷、川芎提取后入藥）采用HPLC同時(shí)測(cè)定了阿魏酸、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素的含量[5]，后續(xù)研究中對(duì)于都梁丸也可以嘗試同時(shí)測(cè)定阿魏酸、歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素等多種成分，以進(jìn)一步提高本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：1325.

[2]曹紅，邢俊波，陳玉敏，等.都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào) 2012，28（5）：417-419.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：41.

[4]RP-HPLC法測(cè)定天麻頭痛片中阿魏酸含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，13（2）：330-331.

[5]席海為，馬強(qiáng)，李強(qiáng)，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（16）：81-85.

（編輯：熊金富）