張曉鷹,郭丹,王洗清

(1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院,遼寧 遼陽 111000; 2.遼寧省鳳城市畜牧技術(shù)推廣中心,遼寧 鳳城 118100)

遼寧絨山羊胚胎移植受體母羊生殖內(nèi)分泌調(diào)控規(guī)律研究

張曉鷹1,郭丹1,王洗清2

(1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院,遼寧 遼陽 111000; 2.遼寧省鳳城市畜牧技術(shù)推廣中心,遼寧 鳳城 118100)

本研究以30只母羊?yàn)樵囼?yàn)樣本,研究在胚胎移植后,經(jīng)過同期發(fā)情處理和超排處理的妊娠母羊、未妊娠母羊和自然發(fā)情妊娠母羊的生殖內(nèi)分泌調(diào)控規(guī)律。用放射免疫法測定血清中促卵泡素(FSH)、促黃體素(LH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)和促乳素(PRL)5種激素動(dòng)態(tài)變化,同時(shí)測定血清中生化指標(biāo)和白介素-1 (IL-1 )、白介素-6 (IL-6)、轉(zhuǎn)化生長因子- (TGF- )、胰島素樣生長因子-II(IGF-II)、表皮生長因子(EGF)等五種細(xì)胞因子水平和血清膽固醇、葡萄糖、總蛋白、鈣、鉀等的變化規(guī)律。結(jié)果表明:血清FSH、LH、E2、P4、PRL、表皮生長因子EGF和血清膽固醇、鈣等物質(zhì)在妊娠受體和早期妊娠失敗受體血清中含量存在的差異,為預(yù)測胚胎移植后受體羊經(jīng)過2個(gè)情期后能否繼續(xù)妊娠提供了重要參考信息。

遼寧絨山羊;胚胎移植受體母羊;生殖內(nèi)分泌

遼寧絨山羊是世界上最優(yōu)秀的絨山羊品種,具有產(chǎn)絨量高、絨纖維長、細(xì)度良好、體形大、適應(yīng)性強(qiáng)、遺傳性能穩(wěn)定、改良低產(chǎn)山羊效果顯著等特點(diǎn),其產(chǎn)絨量居全國之首,被譽(yù)為“中華國寶”,是我國農(nóng)業(yè)領(lǐng)域擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的特殊品種資源。主要分布在蓋州及其相鄰的岫巖、遼陽、本溪、鳳城、寬甸、莊河、瓦房店等地區(qū)。遼寧絨山羊種用價(jià)值極高,改良低產(chǎn)羊效果顯著,被稱為“中國絨山羊之父”［1]。

本研究建立在規(guī)?；q山羊胚胎移植生產(chǎn)的基礎(chǔ)上,研究絨山羊經(jīng)過同期發(fā)情和超排處理后,進(jìn)行胚胎移植操作,妊娠母羊的主要激素、細(xì)胞因子和生化物質(zhì)的變化規(guī)律。一方面為羊妊娠生理學(xué)、妊娠病理學(xué)研究及闡明細(xì)胞因子對(duì)哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育免疫調(diào)控作用機(jī)理提供理論基礎(chǔ);另一方面,為進(jìn)一步進(jìn)行絨山羊體外胚胎生產(chǎn)、胚胎移植產(chǎn)業(yè)化及相關(guān)科學(xué)研究提供重要理論依據(jù),在生產(chǎn)實(shí)踐中具有指導(dǎo)意義。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物本試驗(yàn)的試驗(yàn)羊均由遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司提供,選擇體質(zhì)健壯、無疾病、發(fā)情狀態(tài)一致且有過分娩記錄的母羊共30只,分為3組。處理組:胚胎移植妊娠母羊10只,經(jīng)過同期發(fā)情處理和超數(shù)排卵處理;對(duì)照組Ⅰ:自然發(fā)情,正常配種妊娠母羊10只,發(fā)情一致,未經(jīng)過藥物處理;受體組Ⅱ:胚胎移植未妊娠的受體母羊10只,經(jīng)同期發(fā)情處理。

1.2 主要試劑

1.2.1 測試試劑膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖、鈣和鉀五種試劑盒和促卵泡素(FSH)、促黃體素(LH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)、促乳素(PRL)五種放射免疫測定試劑盒均購于天津協(xié)和醫(yī)藥科技有限公司;白介素-1β(I L-1β)、白介素-6(I L-6)、轉(zhuǎn)化生長因子-a(TG F-a)、胰島素樣生長因子-II(IG F-II)放射免疫測定試劑盒均購于中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所;表皮生長因子(E G F)放射免疫測定試劑盒購于北京原子能研究所;孕酮CID R購自新西蘭。

1.2.2 超數(shù)排卵藥物促卵泡素FSH(100 IU/支,寧波第二激素廠產(chǎn)),促卵泡素FSH(400 mg/瓶,加拿大產(chǎn)),孕馬血清促性腺激素P M S G(1 000 IU/支,寧波市三生藥業(yè)有限公司產(chǎn)),促黃體素LH(40 mg/瓶,加拿大產(chǎn))。

2 試驗(yàn)方法

2.1 同期發(fā)情、超數(shù)排卵方案供體母羊放栓15 d后,開始激素超排,采取后腿內(nèi)側(cè)肌肉注射,分8針注射,前7針為加拿大FSH(40 mg),每針間隔12 h。第8針為國產(chǎn)的PMSG(300 IU),各超排藥物需統(tǒng)一用稀釋液溶解后,用移液器按計(jì)量分裝到EPPENDOF管內(nèi),冷凍保存,避免藥物因反復(fù)凍融而導(dǎo)致藥物成份的變化。

2.2 血樣的采集和處理處理組和對(duì)照組均在胚胎移植后的0、30、45、60、75、90、105、120、137 d,對(duì)20只胚胎移植受體母羊和10只自然發(fā)情、配種的妊娠母羊進(jìn)行頸靜脈采血,現(xiàn)場離心后,分離血清,分裝在1.5 m L離心管中,于-20℃條件下保存。用以測定FSH、LH、PRL、P4、E2五種激素及IL-1、IL-6、EGF、IGF-II、TGF-a五種細(xì)胞因子的變化規(guī)律和血清膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖、鈣、鉀含量。

2.3 生化物質(zhì)的測定方法樣本中的葡萄糖經(jīng)葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和過氧化氫,后者在過氧化物酶的作用下,將還原性的4-氨基安替雙林與酚偶聯(lián)合成可被子分光光度計(jì)測定的醌類化合物。樣本中游離膽固醇,經(jīng)過系列反應(yīng)產(chǎn)生醌亞胺,可用分光光度法在500 n m處設(shè)定其吸光度(A)值,然后推算出膽固醇的含量。

血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基百里香酚藍(lán)(MT B)結(jié)合,生成藍(lán)色絡(luò)合物,通過比色與同樣處理的鈣標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較而得出最后結(jié)果。

血清蛋白質(zhì)的測定方法用雙縮脲法。凡分子中含有兩個(gè)氨基甲?；幕衔锒寄芘c堿性酮溶液作用,形成紫色復(fù)合物,而測得。

血清中鉀的測定原理為:在堿性介質(zhì)中,經(jīng)蛋白沉淀劑處理后的血清樣本中的鉀離子與N A-T P B反應(yīng)產(chǎn)生混濁并有穩(wěn)定懸浮液,混濁度與樣本中鉀離子濃度成正比。

以上五種物質(zhì)測定的操作程序按試劑盒說明并加以修改進(jìn)行測定。

2.4 激素含量的測定方法血清促卵泡素試劑盒的測定靈敏度為0.6 mIU/m L,最佳曲線方程為為4P. LOGISTIC,擬合度為0.999 8;黃體促生成素試劑盒的測定靈敏度為0.4 mIU/mL,最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3)擬合度為0.999 8;血清雌二醇放免試劑盒的測定靈敏度為1.4 pg/mL,最佳曲線方程為Y=F(LN (X)∧3)擬合度為0.999 88;血清孕酮放免試劑盒的測定靈敏度為0.5 mIU/mL,最佳曲線方程為4P.LOGISTIC,擬合度為0.999 7;血清促乳素放免試劑盒的測定靈敏度為1.0 ng/mL,最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3),擬合度為0.999 88。

2.5 血清細(xì)胞因子的測定方法

2.5.1 白細(xì)胞介素1 測定白細(xì)胞介素1β測定試劑盒的測定范圍為0.1～24.3 ng/mL,靈敏度小于0.08 ng/mL。試驗(yàn)采用平衡法,標(biāo)準(zhǔn)品在使用前溶解和配制。最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3),擬合度為0.999 88。

2.5.2 白細(xì)胞介素-6的測定白細(xì)胞介素-6放免試劑盒的測定范圍為50～4 000 pg/mL,靈敏度小于50 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3),擬合度為0.999 9,采用平衡法。

2.5.3 轉(zhuǎn)化生長因子 的測定轉(zhuǎn)化生長因子a的測定試劑盒的測定范圍為3.3～270 pg/mL,靈敏度小于5 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3),擬合度為0.999 99,試驗(yàn)采用平衡法,加樣程序:向每管加入分離劑500μL,充分混勻后放室溫15～20 min, 4℃條件下離心3 500 r/min,20 min。棄去上清,在自動(dòng)γ計(jì)數(shù)儀上測定放免性,依據(jù)放免儀上的程序,讀出有關(guān)指標(biāo)及樣品濃度。

2.5.4 胰島素樣生長因子 的測定胰島素樣生長因子Ⅱ的測定試劑盒的測定范圍為0.1～8.1 pg/mL,靈敏度小于0.1 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F(LN(X)∧3),擬合度為0.999 85,試驗(yàn)采用平衡法。

2.5.5 表皮生長因子的測定表皮生長因子放免試劑盒采用競爭性放免分析法,125I-E GF和待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的E GF與有限量的E GF抗體競爭反應(yīng),加入分離劑,使復(fù)合物部分與游離抗原部分分離,棄去上清液,測沉的放射性計(jì)數(shù),放射性強(qiáng)度與抗原濃度成正比。最佳曲線方程為LOGIT(Y)=A+B*(LN(X)∧3),擬合度為0.999 48。

表1 妊娠期遼寧絨山羊五種激素的變化(0～45 d)Table1 Changes o f five hormones in Liaoning cashmere goats during gestation period

3 結(jié)果與分析

3.1 妊娠期遼寧絨山羊五種激素水平的變化由表1和表2可知,胚胎移植受體母羊與非胚胎移植母羊血清中FS H在整個(gè)妊娠期間的變化趨勢基本一致,但非胚胎移植妊娠母羊的FSH于妊娠期的105 d左右達(dá)到最大含量,為2.04士1.06 mIU/mL,與胚胎移植妊娠母羊的1.18士0.58 mIU/mL相比,差異顯著(P＜0.05)。高峰值之后下降,于分娩前恢復(fù)到正常水平。但對(duì)照組Ⅱ(1個(gè)月以后妊娠失敗的母羊)第45天時(shí)的FSH顯著高于試驗(yàn)處理組和對(duì)照I組,并且差異顯著(P＜0.05)。

胚胎移植妊娠受體與非胚胎移植受體羊的LH的變化在妊娠90 d以前的變化趨勢一致,含量差異不顯著(P＞0.05)。第105天,非移植妊娠受體LH顯著升高,達(dá)3.04士1.24 mIU/mL,并與其各組差異顯著(P＜0.05)。妊娠137 d時(shí),非移植妊娠受體LH含量下降,移植妊娠受體LH升高,但與其他各組差異不顯著(P＞0.05)。1個(gè)月左右中止妊娠組LH于30～45 d時(shí)都顯著高于妊娠羊的含量,差異顯著(P＜0.05)。

妊娠期母羊雌二醇血清含量的變化趨勢在移植妊娠受體羊和非移植妊娠試驗(yàn)組基本一致,移植妊娠受體于妊娠105 d左右達(dá)高峰值,為4.57士1.47 pg/ mL,于妊娠137 d左右恢復(fù)正常水平。非移植妊娠受體羊的雌二醇在血清中的含量在整個(gè)妊娠期基本恒定。中止妊娠試驗(yàn)組于第45天雌二醇在血清中的含量(4.06士1.03 pg/mL)顯著高于妊娠遼寧絨山羊(P＜0.05)。

母羊妊娠期不論是移植妊娠受體母羊還是非移植妊娠母羊的血清孕酮含量變化趨勢一致。在妊娠的60 d左右達(dá)到一個(gè)高峰,分別為13.42士1.70 ng/mL和11.94士4.61 ng/mL,二者差異不顯著(P＞0.05);于妊娠的105 d左右達(dá)第二個(gè)高峰,分別為17.31士0.99 ng/mL和18.57士0.82 ng/mL,二者差異不顯著(P＞0.05),但與第一次峰值差異顯著(P＜0.05)。對(duì)照組孕酮含量于妊娠的30 d開始下降,45 d時(shí)為4.53士1.09 g/mL,低于胚胎移植妊娠受體和非胚胎移植妊娠受體,且差異顯著(P＜0.05)。

母羊血清中的P R L在移植妊娠受體與非移植妊娠受體在整個(gè)妊娠期的變化趨勢不同,非移植妊娠母羊于妊娠105 d時(shí)P R L為最高,為5.89士2.39 ng/mL,與移植妊娠受體差異顯著(P＜0.05)。中止妊娠組的P R L從妊娠30 d開始就高于成功妊娠的試驗(yàn)組,于45 d時(shí)達(dá)6.01士1.70 ng/mL,高于成功妊娠試驗(yàn)組的1.20士0.47 ng/mL和3.44士1.28 ng/mL,且差異顯著(P＜0.05)。

3.2 遼寧絨山羊妊娠期主要幾種細(xì)胞因子水平的變化由表3和表4可知,妊娠期白介素-1β在移植妊娠受體與非移植妊娠受體組變化規(guī)律不完全一致,妊娠前期90 d以前各組差異不顯著(P＞0.05),妊娠105 d和120 d時(shí)差異顯著(P＜0.05),以105 d時(shí)移植妊娠受體為最高,含量值為0.04士0.009 ng/mL,非移植妊娠受體羊?yàn)?.02士0.004 ng/mL。中止妊娠組羊的血清IL-1的含量在妊娠35至45天之間由0.03士0.02 ng/mL下降至0.017士0.009 ng/mL。但與胚胎移植妊娠受體羊和非胚胎移植妊娠母羊相比差異不顯著(P＞0.05)。

表2 妊娠期遼寧絨山羊五種激素的變化(60～137 d)Table2 Changes o f five hormones in Liaoning cashmere goats during gestation period

表3 遼寧絨山羊妊娠期幾種細(xì)胞因子的變化(0～45 d)Table3 Changes of several cytokines in Liaoning cashmere goats during pregnancy

表4 遼寧絨山羊妊娠期幾種細(xì)胞因子的變化(60～137 d)Table4 Changes of several cytokines in Liaoning cashmere goats during pregnancy

母羊妊娠期血清中IL-6的含量在移植妊娠受體組和非移植妊娠組于妊娠105 d以前的變化趨勢基本一致,移植妊娠受體羊于120 d時(shí)含量最低,為57.23士2.38 p g/mL,妊娠137 d時(shí)稍有回升,而非移植妊娠母羊高達(dá)174.7士26.49 p g/mL,至妊娠137 d時(shí)基本恒定,兩試驗(yàn)組差異顯著(P＜0.05)。中止妊娠組羊的血清IL-6含量于30～45 d與成功妊娠兩組羊的變化趨勢一致(30 d時(shí)為110.83士20.37 p g/ mL,45 d時(shí)為101.4士26.40 p g/mL),含量值差異不顯著(P＞0.05)。

母羊妊娠期血清中TGF-a的含量在移植妊娠受體組和非移植妊娠組于妊娠120 d以前的變化趨勢基本一致,30、45、60、90、105、120 d的含量值差異不顯著(P＞0.05),妊娠137 d時(shí)以非移植妊娠組含量最高,為21.40 p g/mL,移植妊娠受體為11.46 p g/ mL,二者差異顯著(P＜0.05)。45 d以后,未能繼續(xù)妊娠組血清中TGF-a的變化與妊娠試驗(yàn)組的變化規(guī)律相同,含量值妊娠45 d為13.9士4.33 p g/mL,與處理組差異不顯著(P＞0.05)。

母羊妊娠期,移植妊娠受體和非移植妊娠羊的血清IGF-II含量的變化趨勢不完全一致,且非移植妊娠羊的的含量在整個(gè)妊娠期都高于移植妊娠受體羊,差異顯著(P＜0.05)。未能繼續(xù)妊娠羊于45 d時(shí)的含量值最低為0.027士0.002 ng/mL,但與移植妊娠受體羊的含量(0.033士0.016 ng/mL)相比差異不顯著(P＞0.05)

表5 遼寧絨山羊妊娠期五種生化物質(zhì)的變化(0～45 d)Table5 Changes o f biochemical substances in Liaoning cashmere goats during gestation period

母羊妊娠期EGF血清的含量在移植妊娠受體組和非移植妊娠母羊組的變化趨勢在0～45 d期間基本一致,且各時(shí)期的含量值差異不顯著(P＞0.05)。妊娠失敗組在妊娠30 d時(shí)與兩妊娠組值接近,妊娠45 d時(shí),顯著升高,含量值為3.38士0.62μg/L,與兩妊娠組(2.083士0.099μg/L、2.15士0.67μg/L)相比差異顯著(P＜0.05)。

3.3 遼寧絨山羊妊娠期幾種主要生化物質(zhì)的變化由表5和表6可知,遼寧絨山羊妊娠期血清膽固醇的變化:處理組和兩個(gè)對(duì)照組在整個(gè)妊娠期和變化趨勢基本一致,處理組羊妊娠120 d時(shí)血清膽固醇含量最高值為111.89士10.19 mg/d L,顯著高于對(duì)照Ⅱ組。胚胎移植妊娠受體母羊的血清膽回醇含量顯著高于非移植妊娠母羊,也高于移植妊娠失敗母羊的血清膽固醇含量。

羊妊娠期血清葡萄糖的變化:胚胎移植受體母羊妊娠期血清葡萄糖的含量顯著低于非胚胎移植母羊妊娠期的血清含量,但二者的變化規(guī)律基本相似,隨著妊娠期的延長,血清葡萄糖含量降低,于妊娠105 d左右血清葡萄糖含量最低(分別為33.01士3.70 mmol/ L和57.61士9.93 mmol/L)、120 d左右稍有升高。移植妊娠但于45 d以后妊娠失敗母羊的血清葡萄糖含量界于二者之間。

遼寧絨山羊妊娠期血清蛋白質(zhì)水平變化:胚胎移植妊娠母羊與非胚胎移植母羊血清蛋白水平均于妊娠137 d左右降至最低,分別為66.68士2.42 mg/m L和 59.92士8.01 mg/m L。胚胎移植妊娠受體于45 d左右妊娠失敗時(shí),血清蛋白質(zhì)水平的變化與對(duì)照組沒有顯著差異。

遼寧絨山羊妊娠期血清中鈣的變化:胚胎移植妊娠受體母羊血清鈣于妊娠前90 d基本處于恒定水平,以后隨妊娠期延長而有所下降。45 d以后不能繼續(xù)妊娠的胚胎移植受體母羊血清鈣水平顯著低于繼續(xù)妊娠的母羊(1.7 mmol/L vs 2.32～2.59 mmol/L)。

羊妊娠期血清鉀的變化:胚胎移植妊娠受體母羊血清鉀的濃度高于非胚胎移植妊娠母羊,二者的變化趨勢于妊娠75 d以前基本一致,即妊娠后,血清中鉀濃度有所升高,于分娩前下降至正常水平(分別為4.64士0.64 mmol/L和2.49士1.04 mmol/L),移植妊娠于45 d左右妊娠失敗組與另兩組差異不顯著,不具有妊娠診斷意義。

表6 遼寧絨山羊妊娠期五種生化物質(zhì)的變化(60～137 d)Table6 Changes of biochem ical substances in Liaoning cashmere goats during gestation period

4 討論

4.1 遼寧絨山羊妊娠期主要激素的變化研究表明,胚胎移植后的受體母羊懷孕前期,約有1/3的胚胎流失［2],隨著妊娠期的延長,胚胎死亡現(xiàn)象繼續(xù)發(fā)生［3]。懷孕期胚胎死亡可能是孕酮不足,因?yàn)槟秆蛘麄€(gè)懷孕期都需要孕酮來維持妊娠［4]。遼寧絨山羊血漿孕酮含量于妊娠的最后7～10 d下降,分娩時(shí)極低,這主要由于胎盤的孕酮產(chǎn)生率低和代謝清除率增加的緣故。血漿雌激素含量在整個(gè)妊娠期都很低,而分娩前48 h急劇升高。很明顯,孕酮產(chǎn)生率的下降和雌激素產(chǎn)生率的增加,兩者都可能是由胎兒皮質(zhì)醇的增加所引起的［5]。

Karagiannidis等［6]研究綿羊妊娠后0、4、8、12、16 d時(shí)血清雌二醇含量時(shí)指出,妊娠綿羊高于非妊娠綿羊,與本試驗(yàn)中妊娠后0和30 d測定結(jié)果一致。另有研究表明,懷孕120 d時(shí),自體移植母羊雌激素的基礎(chǔ)分泌水平為0.3士0.1 ng［7]。這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。至妊娠結(jié)束時(shí)達(dá)高峰,但本試驗(yàn)胚胎移植受體妊娠組在105 d有一個(gè)峰值,說時(shí)此時(shí)胎盤分泌雌激素能力強(qiáng),到末期趨于穩(wěn)定,說明妊娠結(jié)束,對(duì)黃體的溶解結(jié)束,這種雌激素峰值提前出現(xiàn)的現(xiàn)象是否與移植純種肉羊胚胎后生長發(fā)育特別快而對(duì)母體產(chǎn)生效應(yīng)有關(guān),尚需進(jìn)一步研究。

王應(yīng)安等研究也指出,孕酮含量隨懷孕時(shí)間的增長而升高,分娩前下降,與本試驗(yàn)結(jié)果一致,本試驗(yàn)研究非妊娠遼寧絨山羊組孕酮水平較低,支持A r o r等的觀點(diǎn),即妊娠階段,孕酮的突然下降與胚胎死亡存在密切關(guān)系。

另外各試驗(yàn)組中的PRL變化規(guī)律與LH高度一致,體現(xiàn)二者的協(xié)同作用,進(jìn)行遼寧絨山羊胚胎移植生產(chǎn)時(shí),胚胎移植以后,上述相關(guān)激素從不同程度、不同角度以及從不同機(jī)理調(diào)節(jié)、維持著受體羊妊娠過程,并且可以在生產(chǎn)上有重要意義的時(shí)期(移植后45 d左右),通過檢測它們的水平來預(yù)測胚胎發(fā)育狀況或進(jìn)行“45 d受體妊娠簡易識(shí)別”。

4.2 遼寧絨山羊妊娠期幾種主要細(xì)胞因子的變化白介素在許多方面與生殖有密切關(guān)系,直接或間接地影響著動(dòng)物的生殖活動(dòng)。早期研究表明,IL-1β存在于子宮內(nèi)膜,著床期高表達(dá),因此可能參與胚胎的著床過程［8]。IL-6是由許多免疫和非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的多功能蛋白,循環(huán)中的IL-6水平較高,常伴隨著組織的損傷和病理情況。研究指出,IL-6能夠影響哺乳動(dòng)物的早期胚胎發(fā)育,能引起早期流產(chǎn)［9]。本試驗(yàn)中,未能繼續(xù)妊娠組IL-6水平高于妊娠組,但差異不顯著,妊娠后期,胚胎移植組和非胚胎移植組間存在差異,這與IL-6的理論相符。

Kanai-Azuma等進(jìn)行地各種生長因子對(duì)小鼠外胎盤錐體細(xì)胞(Ectoplacetal cone cells,EPCC)增殖、遷移、轉(zhuǎn)化的影響研究,發(fā)現(xiàn)IGF-Ⅱ能使EPPP轉(zhuǎn)化成滋養(yǎng)層巨細(xì)胞(trophoblastic giant cells, TGCS),表明其在胎盤形成及發(fā)育過程中起著重要的作用。另外,IGF-Ⅱ也能促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞的增殖,刺激乳腺上皮組織DNA的合成和乳汁生成,促進(jìn)乳腺的發(fā)育成熟。試驗(yàn)中未能繼續(xù)妊娠的遼寧絨山羊血清IGF-Ⅱ水平于45 d時(shí)低于妊娠遼寧絨山羊,可能與它在胎盤形成及發(fā)育方面的功能有關(guān)。

大量的研究證實(shí),在不同的哺乳動(dòng)物中TGF-a在胎兒發(fā)育的不同方面起作用［10]。母羊懷孕55 d以前,如果切除卵巢會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn),因?yàn)槿鄙貱 L,而胎盤分泌的孕酮又不足以維持妊娠。母羊懷孕90 d時(shí),血循環(huán)中有一半的孕酮來源于C L,另一半來源于胎盤［11]。但胚胎又不能通過子宮分泌的TGF-a來維持C L分泌孕酮,而是通過胚胎與子宮內(nèi)膜的相互作用破壞TGF-a的抵抗能力和抑制黃體溶解［12],本試驗(yàn)中,母羊妊娠137 d時(shí)非移植妊娠組含顯著高于妊娠組,與此理論相吻合。

表皮生長因子(Epidermal Growth Factor, EGF)在動(dòng)物體內(nèi)具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng),參與多種生理、病理過程。魏志新等［13]在人上研究表明,EGF濃度的變化可以直接反映胎兒的生長發(fā)育狀態(tài)。因此在妊娠過程中尤其是妊娠晚期檢測母血和羊水中的EGF的濃度,可作為胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況的指標(biāo)之一。本試驗(yàn)的45 d以后不能繼續(xù)妊娠的對(duì)照組羊血清中EGF的含量值顯著高于妊娠羊,這可能是與EGF水平過高而導(dǎo)致母羊不能繼續(xù)妊娠的原因。王少為等在人上研究則表明,EGF在血清中低至一定水平也難以維持妊娠,而致流產(chǎn),雖然存在時(shí)間和個(gè)體的差異,但說明,EGF水平的變化與妊娠關(guān)系密切。

4.3 妊娠受體生化物質(zhì)含量的變化血液中膽固醇、蛋白質(zhì)等物質(zhì)在動(dòng)物的繁殖生理中發(fā)揮重要作用,N a t h等(2004)研究過阿斯薩母山羊妊娠的90、120、140 d和分娩時(shí)、分娩后15 d時(shí)血液膽固醇和蛋白質(zhì)含量,指出妊娠山羊妊娠90 d時(shí),膽固醇含量達(dá)到高峰,隨妊娠期延長逐漸下降,分娩時(shí)降到最低值,與本研究結(jié)果不完全一致,可能是品種不同所致。蛋白質(zhì)含量從妊娠90 d后有所升高,于分娩時(shí)降到較低值,與本研究部分結(jié)果基本一致［14]。遼寧絨山羊妊娠期伴隨著一系列的生理生化的變化。妊娠期胎兒由于生長發(fā)育的需要,大量吸收母體的鈣,孕婦在孕期的血容量增加,血鈣濃度相對(duì)降低,再由于腎小球?yàn)V過率的增加而使尿鈣排泄增高,另外孕期雌激素的升高又在一定程度上抑制了母體對(duì)骨鈣的重吸收,因此孕婦體內(nèi)處于低鈣狀態(tài)［15]。本試驗(yàn)遼寧絨山羊妊娠期血清總鈣水平低于正常非妊娠期測定的水平,與報(bào)道的一致。兩妊娠組在不同采樣時(shí)間血鈣差異不顯著,均在妊娠后期下降,但非妊娠組發(fā)現(xiàn),在移植后45 d血鈣含量卻顯著下降,這可能與母體當(dāng)時(shí)的生理狀態(tài)有關(guān)［16]。另外,胚胎移植妊娠受體和非胚胎移植妊娠受體血液中蛋白、膽固醇及鉀等的含量在相同的妊娠時(shí)間處于不同的水平,說明胚胎移植入受體后影響其機(jī)體的代謝狀態(tài),但代謝狀態(tài)的改變對(duì)所移植的胚胎的進(jìn)一步發(fā)育不一定有顯著影響,在這方面的研究未見相同報(bào)道。

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Study on the regulation of reproductive ewes receptor of embryo transfer Liaoning cashmere goats

Zhang Xiaoying1,Guo Dan1,Wang Xiqing2
(1.Animal Husbandry Institute of Liaoning Province,Liaoning Liaoyang 111000; 2.Livestock Technology Promotion Center,Liaoning Fengcheng 118100)

There are thirty ewes as the test sample to study on the reproductive endocrinology regular pattern of after embryo transfer,handling the same period after estrus and pregnancy ewes superovulation treatment,not ewes and reproductive endocrine regulation of the law of nature estrus pregnant ewes pregnancy.Determination of serum follicle stimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH),progesterone(P4),estradiol(E2)and prolactin(PRL)5 Dynamic Change hormone by radioimmunoassay,and serum biochemical markers and interleukin-1β(IL-1β),interleukin-6 (IL-6),transforming growth factor-a(TGF-a),insulin-like growth factor-II(IGF-II),epidermal growth factor(EGF),etc.variation five cell factor and serum cholesterol,glucose,total protein,calcium,potassium and the like.The results showed:serum FSH,LH,E2,P4,PRL,cytokine EGF and serum cholesterol,serum calcium receptor material difference in the content of failure present in the receptor pregnancy and early pregnancy,as forecast after the embryo transplant recipients after sheep after two estrus pregnancy can continue to provide important reference information.

Liaoning Cashmere goats;Embryo transfer ewes receptor;Reproductive Endocrinology

S827.3

B

1672-9692(2016)10-0007-09

2016-08-15

張曉鷹(1970-),男,高級(jí)畜牧師,主要從事絨山羊飼養(yǎng)管理等工作。

遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014020179);遼寧省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2015202004);遼寧省農(nóng)業(yè)領(lǐng)域青年科技創(chuàng)新人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(2014036)。