郝媛媛

(池州市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽池州 247000)

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉

郝媛媛

(池州市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽池州 247000)

建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中的丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉。采用Acclaim120 C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以1.5 g／L磷酸氫二銨溶液（用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH至2.7～3.5）–甲醇混合液（體積比為95∶5）作為流動(dòng)相，流量為1.0 mL／min，在214 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。丙酸與雙乙酸鈉的質(zhì)量濃度在0.05～0.5 mg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。丙酸和雙乙酸鈉的加標(biāo)回收率分別為95.58%～98.95%，96.12%～99.25%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.50%，1.41%(n=6)。該法適用于糕點(diǎn)及調(diào)味品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉含量的檢測(cè)。

高效液相色譜法；食品；丙酸；丙酸鈣（鈉）；雙乙酸鈉

隨著社會(huì)的發(fā)展和生活質(zhì)量的提高，人們對(duì)食品安全的關(guān)注度不斷提升，食品中防腐劑的添加越來(lái)越受到人們的重視。近年，政府加強(qiáng)了對(duì)食品安全的監(jiān)管，加大了對(duì)食品中添加劑濫加行為的處置力度。

丙酸鈣（鈉）能有效防止食物變質(zhì)，對(duì)各類霉菌、革蘭氏陰性桿菌或好氧芽孢桿菌有較強(qiáng)的抑制作用，而且對(duì)酵母菌無(wú)害［1–2］。雙乙酸鈉為乙酸鈉與乙酸的分子復(fù)合物，無(wú)殘留，無(wú)致癌因素，是高效霉菌與細(xì)菌的抑制劑［3–4］。丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉作為防腐劑被廣泛運(yùn)用到各類食品中。但是由于丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉均屬于化學(xué)物質(zhì)，長(zhǎng)期過(guò)量食用會(huì)對(duì)人體造成不同程度的傷害，所以開展食品中的丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉的限量檢測(cè)具有重要的意義。

針對(duì)食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉的測(cè)定，目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法主要有氣相色譜法（GB／T 5009.120–2003）［5］，液相色譜法（GB/T 23382–2009，GB／T 23383–2009）［6–8］。在日常的檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，氣相色譜法定性定量能力較差，液相色譜法更簡(jiǎn)單，易操作，方法準(zhǔn)確度更好。筆者參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)［9–15］，建立一種高效液相色譜法，使其能同時(shí)測(cè)定食品中丙酸鈣（鈉）和雙乙酸鈉，該方法簡(jiǎn)單快速、定量準(zhǔn)確，時(shí)效性強(qiáng)，不僅可以避免長(zhǎng)時(shí)間使用磷酸鹽緩沖鹽作為流動(dòng)相對(duì)C18色譜柱分離度的影響，而且還可大幅提高檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)日常檢驗(yàn)工作的工作效率。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Ultimate 3000型，配二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；

分析天平：XPE204型，感量為0.000 1 g，瑞士梅特勒–托利多公司；

超聲波儀：KQ3200E型，昆山市超聲儀器有限公司；

離心機(jī)：DT5–2B型，額定轉(zhuǎn)速5 000 r／min，北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；

實(shí)驗(yàn)室用超純水機(jī)：AKCD–UV–1840型，臺(tái)灣艾柯電器公司；

丙酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于99%，上海玉博生物科技有限公司；

雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于99%，上海玉博生物科技有限公司；

甲醇：色譜純；

磷酸、磷酸氫二銨：分析純；

實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

1.2 色譜條件

色 譜 柱：Acclaim120 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)賽默飛世科技公司）；流動(dòng)相：1.5 g／L磷酸氫二銨溶液（用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH至2.7～3.5）–甲醇混合液（體積比為95∶5），流量為1.0 mL／min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：214 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取5 g（精確至0.01 g）樣品至50 mL具塞離心管中，加水20 mL，加入1 mol／L磷酸溶液0.5 mL，混勻，經(jīng)超聲浸提10 min后用1 mol／L磷酸溶液調(diào)pH值約為3，用水定容至標(biāo)線，搖勻。以不低于4 000 r／min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣，在1.2色譜條件下測(cè)定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

準(zhǔn)確稱取丙酸、雙乙酸鈉各1.0 g （精確至0.000 1 g）于2只100 mL容量瓶中，用水定容并搖勻，配制成質(zhì)量濃度均為10 mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。再分別吸取丙酸、雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.25，0.5， 1.0，2.0，2.5 mL于50 mL容量瓶中，分別加入0.2 mL 1 mol／L磷酸溶液，用水定容至標(biāo)線，搖勻，配制成丙酸、雙乙酸鈉系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.4，0.5 mg／mL?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，按照1.2色譜條件由低濃度到高濃度依次進(jìn)行測(cè)定。以溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中丙酸的含量，然后換算成丙酸鈣（鈉）的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

丙酸和雙乙酸鈉在200 nm左右有最大的吸收峰，但200 nm左右樣液中的雜質(zhì)吸收峰比較多；而在214 nm處待測(cè)組分也有較大吸收峰，同時(shí)雜質(zhì)吸收峰較小，所以實(shí)驗(yàn)選擇214 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

國(guó)標(biāo)方法GB／T 23382–2009與GB／T 23383–2009均采用1.5 g／L磷酸氫二銨溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定，而在大批量檢驗(yàn)過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間使用磷酸鹽緩沖鹽作為流動(dòng)相會(huì)造成C18色譜柱分離度下降，色譜峰形變差。采用1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇(體積比分別為90∶10，95∶5，92∶8)作為流動(dòng)相進(jìn)行比較試驗(yàn)［16–19］，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相為1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇（體積比為95∶5）時(shí)，色譜圖中待測(cè)組分分離效果很好，色譜峰形尖銳，滿足實(shí)驗(yàn)要求，故本實(shí)驗(yàn)選擇1.5 g／L磷酸氫二銨溶液–甲醇（體積比為95∶5）為流動(dòng)相。

2.3 線性方程和檢出限

按照1.2色譜條件測(cè)定1.3.2的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以待測(cè)組分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算得到線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見表1。由表1可知，兩種待測(cè)組分在質(zhì)量濃度為0.05～0.5 mg／mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，滿足實(shí)驗(yàn)要求。以3倍信噪比計(jì)算檢出限，得出丙酸的檢出限為0.03 g／kg，雙乙酸鈉的檢出限為0.015 g／kg。

表1 丙酸、雙乙酸鈉的線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)

2.4 精密度試驗(yàn)

按照1.2色譜條件對(duì)1.3.2中質(zhì)量濃度為0.1mg／mL的丙酸、雙乙酸鈉混合標(biāo)準(zhǔn)溶液依次平行測(cè)定6次，計(jì)算丙酸、雙乙酸鈉測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見表2。由表2可知，丙酸測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.50% (n=6)，雙乙酸鈉測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.41% (n=6)，表明本法精密度良好，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

取空白樣品醬油、糕點(diǎn)、面包各1個(gè)，稱取均勻的空白樣品各5 g，加入3種不同濃度的丙酸、雙乙酸鈉混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.1的前處理方法處理加標(biāo)樣品，按照1.2色譜條件測(cè)定，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，丙酸的加標(biāo)回收率為95.58%～98.95%，雙乙酸鈉的加標(biāo)回收率為96.12%～99.25%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

表3 丙酸、雙乙酸鈉的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

圖1為空白樣品加標(biāo)色譜圖。由圖1可知，樣品基質(zhì)與被測(cè)成分丙酸、雙乙酸鈉的色譜峰分離良好，且兩種目標(biāo)化合物色譜峰峰形尖銳、對(duì)稱，利于準(zhǔn)確定量。

圖1 丙酸、雙乙酸鈉加標(biāo)色譜圖

3 結(jié)語(yǔ)

建立了一種能同時(shí)測(cè)定食品中的丙酸、雙乙酸鈉含量的高效液相色譜法。該方法的回收率、精密度等技術(shù)指標(biāo)均符合GB／T27404–2008［20］的要求，方法簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確度高、實(shí)用性強(qiáng)，可以大大提高檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)大批量檢驗(yàn)工作的工作效率。

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Simultaneous Determination of Propionic Acid and Sodium Diacetate in Food by HPLC

Hao Yuanyuan
(Chizhou Food and Drug Inspection Center, Chizhou 247000, China)

A method was established for simultaneous determination of calcium (sodium) propionate and sodium diacetate in food by HPLC. The chromatographic column was Acclaim120 C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 1.5 g／L diammonium hydrogen phosphate solution (pH value was adjusted to 2.7–3.5 by using 1 mol／L phosphate solution)–methanol mixed liquor with volume ratio of 95∶5 was used as the mobile phase with the flow rate of 1.0 mL／min, and the detection wavelength was selected as 214 nm. The mass concentration of propionic acid and sodium diacetate has good linearity in the range of 0.05–0.5 mg／mL with the correlation coefficient greater than 0.999. The recovery of standard addition for propionic acid and sodium diacetate were 95.58%–98.95% and 96.12%–99.25%, respectively. The RSD for propionic acid and sodium diacetate was 1.50% and 1.41%(n=6), respectively. This method was suit for determination of calcium propionate and sodium diacetate in pastry and condiment.

high performance liquid chromatography; food; propionic acid; calcium propionate; sodium propionate; sodium diacetate

O657.7

A

1008–6145(2016)06–0059–03

10.3969／j.issn.1008–6145.2016.06.014

聯(lián)系人：郝媛媛；E-mail: 446903913@qq.com

2016–10–18