連鵬

（遼寧省錦州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心121004）

錦州市豬O型口蹄疫免疫抗體水平調(diào)查

連鵬

（遼寧省錦州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心121004）

在2013～2015年，從錦州市各豬養(yǎng)殖場(chǎng)共采集了20567份血清，應(yīng)用口蹄疫O型液相阻斷ELISA實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，結(jié)果為2013～2015年養(yǎng)殖場(chǎng)整體抗體合格率86.48%，表明，錦州市本地養(yǎng)殖場(chǎng)豬口蹄疫抗體水平整體比較高，并有逐年上升的趨勢(shì)。

豬O型口蹄疫；抗體；液相阻斷ELISA；調(diào)查

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄獸的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病的臨診特征是傳播速度快、流行范圍廣，成年動(dòng)物的口腔黏膜、蹄部和乳房等處皮膚發(fā)生水皰和潰爛，幼齡動(dòng)物多因心肌炎使其死亡率升高。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將該病例為A類傳染病之一，在我國(guó)也列為一類傳染病，屬于國(guó)家強(qiáng)制免疫項(xiàng)目。自1999年我國(guó)爆發(fā)第5次O型口蹄疫疫情以來(lái)，由于近年來(lái)貫徹實(shí)施以免疫預(yù)防為主的防治策略，各地均未出現(xiàn)豬O型口蹄疫的急性爆發(fā)和大面積流行情況，此病得到了有效控制。為了了解近3年來(lái)錦州市本地養(yǎng)殖場(chǎng)和外地調(diào)入錦州豬的豬O型口蹄疫抗體水平情況，在2013～2015年，從本地養(yǎng)殖場(chǎng)采集了20567份血清進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 待檢血清

2013～2015年，從錦州市的5個(gè)縣市區(qū)豬場(chǎng)采集的血清。

1.2 試劑

口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，包括96孔酶標(biāo)板、液體加樣槽、U型96孔抗原抗體反應(yīng)板、封板膜、口蹄疫O型病毒抗原、口蹄疫O型病毒兔抗血清、口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清、兔抗豚鼠血清IgG-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物、口蹄疫O型陽(yáng)性對(duì)照血清、口蹄疫陰性對(duì)照血清、3%雙氧水、PBST濃縮液、豚鼠抗血清稀釋液、終止液、碳酸鹽緩沖液膠囊、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液片劑、OPD片劑。購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 檢測(cè)方法

（1）包被：ELISA板每孔用50ul兔抗病毒血清包被，室溫下置濕盒過(guò)夜。

（2）洗滌：用PBS液洗板5次。

（3）加被檢血清，在另一酶標(biāo)板中加入50ul被檢血清 （每份血清重復(fù)做2次），2倍連續(xù)稀釋起始為1：4。

（4）向稀釋好的酶標(biāo)板中加入抗原，每孔內(nèi)加入相應(yīng)的同型病毒抗原50ul，混合后置4℃過(guò)夜，或在37℃孵育1h，加入抗原后使血清的起始稀釋度為1： 8。

（5）將50ul的血清/抗原混合物轉(zhuǎn)移到兔血清包被的ELISA板中，置37℃孵育 1h。

（6） 洗板同 （2）。

（7）每孔滴加50ul前一步使用的同型病毒抗原的豚鼠抗血清，置37℃孵育1h。

附表 2013～2015年錦州市豬養(yǎng)殖場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體水平監(jiān)測(cè)結(jié)果

附圖 2013～2015年錦州市豬O型口蹄疫抗體水平趨勢(shì)圖

（8）洗板：每孔加50ul酶結(jié)合物，置37℃孵育1h。

（9）再洗板每孔加50ul含0.05%過(guò)氧化氫 （3%質(zhì)量濃度）的鄰苯二胺。

（10）加50ul1.25mol/L硫酸終止反應(yīng)，15min后，將板置于分光光度計(jì)上，在492nm波長(zhǎng)條件下讀取光吸收值。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

抗體滴度以50%終滴度表示，即該稀釋度50%孔的抑制率大于抗原對(duì)照孔抑制率均數(shù)的50%。置37℃孵育1h。 ≥1： 64， 99%以上保護(hù)； ＜1： 4，不保護(hù)； 1： 4～1： 45， 50%保護(hù)。

2 結(jié)果

（1） 2013～2015年共監(jiān)測(cè)本地豬養(yǎng)殖場(chǎng)1351個(gè)，20567份樣品，抗體合格數(shù)17786份，抗體合格率86.48%，其中2013～2015年抗體合格率分別為86.62%，86.18%，86.63% （監(jiān)測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)附表）。

（2）錦州市本地豬養(yǎng)殖場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體水平趨勢(shì) （見(jiàn)附圖）。

3 討論

（1）本次調(diào)查結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)這幾年實(shí)施豬O型口蹄疫強(qiáng)制免疫，本地養(yǎng)殖場(chǎng)豬O型口蹄疫抗體一直處于較高水平，都在70%以上，近3年相差不大，都維持在較高的抗體水平，易感動(dòng)物長(zhǎng)期處于有效的保護(hù)狀態(tài)。

（2）雖然錦州地區(qū)豬O型口蹄疫抗體一直較高，但是由于是抽檢，并不能完全客觀的反應(yīng)所有豬群的情況，絕大多數(shù)豬O型口蹄疫抗體保護(hù)率符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但同時(shí)存在少部分在50%保護(hù)或不保護(hù)的狀態(tài)，這點(diǎn)應(yīng)引起重視，保證免疫抗體達(dá)到較高的均勻度至關(guān)重要。

（3）少部份不合格樣品的原因可能有以下3點(diǎn)，一是與疫苗質(zhì)量有關(guān)，國(guó)產(chǎn)疫苗在生產(chǎn)工藝上仍然存在很多問(wèn)題，免疫期短，不能完全有效阻斷病毒的感染復(fù)制，需要嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)。二是我國(guó)防疫體系還不健全，特別是基層，管理松散，村防疫員素質(zhì)有待提高。三是免疫操作不規(guī)范，一些村防疫員不按照免疫程序操作，漏免，免疫劑量不夠等情況時(shí)有發(fā)生，需要加大管理及檢查力度，做到應(yīng)免盡免。

總之，我國(guó)應(yīng)繼續(xù)實(shí)行以免疫為主的綜合防治措施，切實(shí)改善疫苗質(zhì)量，提高免疫效果，減少不良反應(yīng)，共同把好免疫關(guān)、檢測(cè)關(guān)，將防控工作做好。

連鵬 （1984.5-），男，遼寧省錦州市人，本科，獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)、診斷、流行病學(xué)調(diào)查等工作。