劉翠紅 陳 科 姚雪清 鐘智軒 劉楚楚

不同液相色譜儀測(cè)定辣椒油中維生素E的含量分析※

劉翠紅 陳 科 姚雪清 鐘智軒 劉楚楚

目的 建立不同液相色譜儀測(cè)定辣椒油中維生素E的含量測(cè)定方法。方法 在相同試驗(yàn)條件下，采用不同液相色譜儀測(cè)定辣椒油中維生素E的含量。以維生素E為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）為分離柱，甲醇為流動(dòng)相洗脫，紫外檢測(cè)，流速1.0 ml/min。結(jié)果 維生素E線性范圍10～80 μg/ml，3臺(tái)儀器測(cè)得維生素E的相關(guān)系數(shù)分別為0.9978、0.9990、0.9998，加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為97.8%、1.8%，98.2%、0.92%，99.4%、0.53%。結(jié)論 超高效液相色譜法試劑簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確快速，回收率高，適用于辣椒油中維生素E含量的測(cè)定。

紫外檢測(cè)器；超高效液相色譜儀；辣椒油；維生素E

辣椒油是一種調(diào)料，但其辣度與營(yíng)養(yǎng)密切相關(guān)。辣椒中含有豐富的維生素C、E、β-胡蘿卜素、葉酸、鎂及鉀[1]；辣椒中的辣椒素還具有抗炎及抗氧化作用，有助于降低心臟疾病、某些腫瘤及慢性疾病的發(fā)病率[2]。人體試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，辣椒能增加人體能量消耗，幫助減肥[3]；經(jīng)常進(jìn)食辣椒可以有效延緩動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展及血液中脂蛋白的氧化[4]。大部分人認(rèn)為，經(jīng)常進(jìn)食辣椒可刺激胃部，甚至引起胃潰瘍[5]。但實(shí)際上辣椒素可預(yù)防和治療胃潰瘍[6]。

維生素E也稱(chēng)為生育酚[7]，由4種生育酚和8種同系物質(zhì)組成，屬于脂溶性維生素[8]。維生素E可以維持人體肌肉和生殖系統(tǒng)正常代謝，保持中樞神經(jīng)和血管系統(tǒng)的完整，還可有效清除自由基[9]。維生素E有促進(jìn)生育和抗氧化功能，已廣泛應(yīng)用于化妝品、食品和醫(yī)藥行業(yè)中，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，給分析檢測(cè)工作帶來(lái)了一定困難[10]。維生素E在自然環(huán)境中極不穩(wěn)定，影響因素復(fù)雜，其含量測(cè)定也是難點(diǎn)[11]。維生素E的主要檢測(cè)方法包括滴定法、紫外可見(jiàn)分光光度法、紅外分光光度法、熒光檢測(cè)法、電化學(xué)分析法、薄層色譜法、超臨界色譜法、高效液相色譜法[12]。前7種檢測(cè)方法存在試樣前處理復(fù)雜、重復(fù)性差、結(jié)果準(zhǔn)確度低等缺點(diǎn)，而高效液相色譜法，特別是超高效液相色譜法，具有靈敏度高、重復(fù)性好、檢測(cè)速度快和準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。

超高效液相色譜法是采用細(xì)粒徑填料（117 μm）和細(xì)內(nèi)徑柱子而獲得柱效高達(dá)（100 000～300 000）的液相色譜技術(shù)[13]，利用創(chuàng)新技術(shù)進(jìn)行整體設(shè)計(jì)，從而大幅度改善色譜分離度、樣品通量和靈敏度[14]。

本研究將采用國(guó)產(chǎn)和島津高效液相色譜儀、超高效液相色譜儀，對(duì)辣椒油中維生素E的含量進(jìn)行測(cè)定，比較高效液相色譜和超高效液相色譜兩種儀器檢測(cè)維生素E含量結(jié)果，建立一種辣椒油中維生素E快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑 維生素E標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100062-200608；辣椒油，四川翠宏食品有限公司，批號(hào)：20151206；色譜純甲醇。

1.2 儀器 L-3000高效液相色譜儀；LC-20AT島津高效液相色譜儀；L-6000超高效液相色譜儀；超聲波清洗器。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 精密稱(chēng)取維生素E標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1000 g置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配成濃度為10 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

2.2 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，加甲醇分別稀釋為10、20、40、60、80 μg/ml系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品約0.2 g，置于10 ml離心管中，加適量甲醇，混合均勻，超聲提取1 min，加甲醇定容，以3.5×103rpm離心1 min，取上清液過(guò)0.45 μm濾膜后作為待測(cè)溶液。

2.4 色譜條件 色譜柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；紫外檢測(cè)器。

2.5 線性關(guān)系考察 吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10、20、40、60、80 μg/ml各20 μl注入液相色譜儀中，分別測(cè)定，以峰面積（y）對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）進(jìn)行回歸，得回歸方程，維生素E在10～80 μg/ml與峰面積保持良好線性關(guān)系，見(jiàn)表1。

2.6 精密度試驗(yàn) 取40 μg/ml的維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄保留時(shí)間和峰面積，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），L-3000型高效液相色譜儀測(cè)得保留時(shí)間和峰面積的RSD為1.3%和1.8%，LC-20AT型高效液相色譜儀測(cè)得保留時(shí)間和峰面積的RSD為0.50%和1.2%，L-6000型超高效液相色譜儀測(cè)得保留時(shí)間和峰面積的RSD為0.059%和0.11%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的辣椒油（批號(hào)：20151206）樣品約0.2 g，共6份，分別精密加入濃度為1.0 mg/ml維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.5、1.0 ml，按2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，取20 μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算維生素E的回收率及其RSD，L-3000型高效液相色譜儀測(cè)得維生素E的平均回收率和RSD為97.8%、1.8%，LC-20AT型高效液相色譜儀測(cè)得維生素E的平均回收率和RSD為98.2%、0.92%，L-6000型超高效液相色譜儀測(cè)得維生素E的平均回收率和RSD為99.4%、0.53%，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部GB/T 5009.28-2003《食品中維生素A和維生素E的測(cè)定》[15]、中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部GB 5413.9-2010《嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測(cè)定》[16]、中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部NY/T 1598-2008《食用油中維生素E組分和含量的測(cè)定高效液相色譜法》[17]測(cè)定方法，只適用于一般的樣品，而辣椒油中含有辣椒和油，存在特殊性，采用國(guó)標(biāo)處理方法不能有效處理。目前，對(duì)辣椒油中維生素E進(jìn)行測(cè)定的方法報(bào)道較少，檢測(cè)沒(méi)有參考依據(jù)。超高效液相色譜法試劑簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確快速，回收率高，適用于辣椒油中維生素E含量的測(cè)定。

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[17] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T1598-2008《食用油中維生素E組分和含量的測(cè)定 高效液相色譜法》[S].北京,2008.

Comparison of the content of vitamin E in pepper oil by different liquid chromatograph

Liu Cuihong Chen Ke Yao Xueqing Zhong Zhixuan Liu Chuchu

Objective Establish different liquid chromatograph the content determination method for determination of vitamin E in chili oil.Methods Under the same experimental conditions,the analytical method of the content of vitamin E in chili oil was determined by different instruments.Vitamin E as a standard substance,C18column (250 mm× 4.6 mm,5 μm)as Separation column,Methanol as mobile phase elution,UV detection,Flow rate of 1.0 ml/min.Results the linear range of vitamin E was between 10-80 μg/ml,The correlation coefficients of vitamin E were measured by three instruments were 0.9978,0.9990,0.9998,the recovery rate and relative standard deviation were 97.8%,1.8%, 98.2%,0.92%,99.4%,0.53%.Conclusion Ultra performance liquid chromatography reagent is simple and easy to operate.The results are reproducible,accurate,rapid and high recovery rate.It is suitable for the determination of vitamin E in chili oil.

UV;UHPLC;Chili oil;Vitamin E

TS255.7

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.11.005

廣東省?；瘷z測(cè)中心有限公司，廣東廣州 510663

國(guó)家重大科學(xué)儀器設(shè)備開(kāi)發(fā)與專(zhuān)項(xiàng)--新型高速、高靈敏度、高通量色譜分析儀器的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用項(xiàng)目，應(yīng)用超高效液相色譜進(jìn)行化妝品與保健品的快速檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證任務(wù)（2012YQ14000807）

劉翠紅（1978-），碩士學(xué)位。研究方向：化妝品、保健食品、藥物標(biāo)準(zhǔn)研究