沈曉棠

赤峰市醫(yī)院 心內(nèi)三科 (赤峰 024000)

?

·論 著·

抗β1腎上腺素受體自身抗體在心衰患者血清中的分布及其對(duì)不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響研究

沈曉棠

赤峰市醫(yī)院 心內(nèi)三科 (赤峰 024000)

目的 探討抗β1腎上腺素受體自身抗體(β1-AA)在心衰(HF)患者血清中的分布，及其對(duì)不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響研究。方法 選取2010年12月至2013年12月赤峰市醫(yī)院收治的符合納入標(biāo)準(zhǔn)的HF患者70例，作為試驗(yàn)組；選取同時(shí)間段我院無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者70例，作為對(duì)照組；并選擇若干只健康、β1-AA陰性的雄性c型小鼠，體質(zhì)量約20 g。對(duì)照組和試驗(yàn)組均應(yīng)用ELISA檢測β1-AA滴度；將檢測β1-AA呈陽性的患者的β1-AA提純，按照不同質(zhì)量濃度梯度注入到雄性c型小鼠淋巴細(xì)胞中，并利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力，應(yīng)用AnnexinV/PI雙染法檢測不同亞型T淋巴細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組β1-AA滴度較高(t=15.216，P<0.001)， β1-AA陽性檢出率高(2=53.178,P<0.001)。β1-AA按照不同質(zhì)量濃度梯度注射到c型小鼠淋巴細(xì)胞后，未激活小鼠淋巴細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.408，P=0.161)；CD3/CD28激活后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)；β1-AA促進(jìn)了不同亞型T淋巴細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)。結(jié)論 β1-AA可以損害不同亞型T淋巴細(xì)胞，加重HF患者病情。

β1腎上腺素受體自身抗體；心衰；不同亞型T淋巴細(xì)胞；凋亡；增殖能力

目前，心衰(HF)已成為重大公共衛(wèi)生事件[1]。 HF往往由各種疾病引起心肌收縮能力減弱，從而使心臟的血液輸出量減少，不足以滿足機(jī)體需要，并由此產(chǎn)生一系列癥狀和體征。 抗β1腎上腺素受體自身抗體(β1-AA)是新近發(fā)現(xiàn)的一種存在于許多類型心血管疾病患者血清中的自身抗體，能夠與β1-腎上腺素受體(β1-AR)細(xì)胞外第二環(huán)抗原肽段結(jié)合，發(fā)揮類受體激動(dòng)劑樣作用。運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科技，對(duì)HF的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究，可以降低病人死亡率，提高預(yù)后效果[2]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2010年12月至2013年12月赤峰市醫(yī)院收治的70例HF患者為試驗(yàn)組患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)超聲心動(dòng)圖、心電圖、X線體格檢查確診為HF患者，自愿參與本次研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有嚴(yán)重器質(zhì)性疾??；心功能Ⅳ級(jí)；收縮壓<90 mm Hg； 心率<55 次/min。另外，選取同時(shí)間段我院無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者70例為對(duì)照組。兩組年齡、性別和入院時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 兩組患者一般情況比較±s)

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

采用若干只健康、體質(zhì)量約20 g、β1-AA陰性的雄性c型小鼠。所有小鼠均由我院特定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心供應(yīng)，合格證明齊全。

1.3 檢測方法

試驗(yàn)組和對(duì)照組均應(yīng)用ELISA檢測β1-AA滴度[3]，β1-AA呈陽性患者應(yīng)用 IgG親和純化試劑盒提純?chǔ)?-AA，提純?chǔ)?-AA后，按0.01、0.10、1.00、10.0 μmol/L 4種質(zhì)量濃度梯度注入到雄性c型小鼠淋巴細(xì)胞中，并以同樣質(zhì)量濃度的陰性β1-AA注射到同種雄性c型小鼠淋巴細(xì)胞中，利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力[4-5]，應(yīng)用AnnexinV/PI雙染法檢測不同亞型T淋巴細(xì)胞凋亡情況[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組β1-AA檢測情況

試驗(yàn)組的β1-AA滴度較高(t=15.216，P<0.001)，β1-AA陽性數(shù)所占比例達(dá)68.57%，遠(yuǎn)高于對(duì)照組(8.57%)(2=53.178,P<0.001)(表2)。

表2 兩組β1-AA檢測情況

2.2 β1-AA對(duì)不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

利用CCK8試劑盒檢測得出，未激活小鼠T淋巴細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.408，P=0.161)；激活CD3/CD28小鼠T淋巴細(xì)胞后，各質(zhì)量濃度均可抑制不同亞型T細(xì)胞增殖(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)(表3)。

2.3 β1-AA對(duì)不同亞型T淋巴細(xì)胞凋亡情況

β1-AA促進(jìn)不同亞型T淋巴細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，加速T淋巴細(xì)胞凋亡(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)(表4)。

表3 不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖情況±s)

表4 不同亞型T淋巴細(xì)胞LDH釋放情況±s)

3 討論

隨著社會(huì)不斷發(fā)展，競爭力不斷提升，人們?cè)谌粘Ｉ钪械倪\(yùn)動(dòng)、飲食等方面形成許多不良習(xí)慣，因此，高血壓、高血糖、高血脂等一系列疾病隨之到來，HF的發(fā)病率上升，嚴(yán)重影響患者健康，降低患者生活質(zhì)量[7]。HF的病因復(fù)雜，常與感染、心律失常、過度勞累、情緒波動(dòng)、心臟病加重等有關(guān)[8]，其病理生理十分復(fù)雜，多種機(jī)制相互作用[9]，可以由神經(jīng)體液、心肌肥厚、心肌損害等先出現(xiàn)代償機(jī)制[10]，但是，代償有一定限度，導(dǎo)致心肌細(xì)胞能量供應(yīng)相對(duì)或絕對(duì)不足，使心肌收縮力和心室順應(yīng)性下降[11]，最終會(huì)導(dǎo)致HF發(fā)生。臨床上通常把HF分為急性HF和慢性HF[12]，其臨床表現(xiàn)為惡心、納差、呼吸困難、疲倦、少尿等，常伴有水電解質(zhì)平衡紊亂、腎功能不全、心律失常等[13]。

HF已成為心內(nèi)科醫(yī)生乃至整個(gè)醫(yī)學(xué)界亟需解決的問題。通過本研究可以看出，應(yīng)用ELISA檢測70例HFβ1-AA滴度，HF病人的β1-AA滴度明顯高于無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者(t=15.216，P<0.001)；HF病人的β1-AA陽性人數(shù)遠(yuǎn)高于無HF、無肝腎功能異常的其他疾病患者(2=53.178,P<0.001)，是其8倍左右(68.57%/8.57%)，表明HF患者血清中分布較多的β1-AA，可能β1-AA參與了HF過程或者存在于某些疾病，如高血壓、冠心病等，并且可能存在年齡關(guān)系[14]。

ELISA檢測得出的54例β1-AA呈陽性的患者，提純其β1-AA；其余86例患者提純陰性β1-AA。利用CCK8試劑盒檢測不同亞型T淋巴細(xì)胞增殖能力。通過本研究可以看出，未激活小鼠T淋巴細(xì)胞不存在β1-AA導(dǎo)致的增殖抑制(t=1.408，P=0.161)；但激活CD3/CD28小鼠T淋巴細(xì)胞使用陽性β1-AA后，則在不同質(zhì)量濃度梯度的β1-AA均有抑制T淋巴細(xì)胞增殖現(xiàn)象(t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001)，提示β1-AA可以抑制增殖，其可能導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞無法增殖分化以及釋放淋巴因子[15]，從而破壞了人體的細(xì)胞免疫，抑制了體液免疫的發(fā)生，降低機(jī)體免疫力，導(dǎo)致更多并發(fā)癥的發(fā)生。

LDH廣泛存在于機(jī)體組織細(xì)胞中，心肌細(xì)胞尤甚[16]。當(dāng)組織細(xì)胞受到破壞時(shí)，LDH可釋放入血，導(dǎo)致血清中LDH滴度升高。通過本研究可以看出，β1-AA促進(jìn)不同亞型T淋巴細(xì)胞LDH的釋放(t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001)，表明β1-AA可以破壞或者加速T淋巴細(xì)胞的凋亡，使血液中的LDH增高。

綜上所述，β1-AA可以抑制不同亞型的T淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡，導(dǎo)致HF患者病情加重，預(yù)后效果可能較差。

[1]王瑾, 呂婷婷,王麗,等.擴(kuò)張型心肌病患者血清中的β1-腎上腺素受體自身抗體通過β1-腎上腺素受體抑制CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖作用[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2013,33(7):518-524.

[2]Gong Y, Xiong H, Du Y,etal. Autoantibodies against β1-adrenoceptor induce blood glucose enhancement and insulin insufficient via T lymphocytes[J]．Immunol Res, 2016,64(2):584-593.

[3]李笑, 杜蕓輝,呂婷婷,等.心衰患者血清中β1腎上腺素受體自身抗體抑制不同亞型T淋巴細(xì)胞的增殖[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2014,34(3):205-211.

[4]Zhao Y, Huang H, Du Y,etal. β1-Adrenoceptor autoantibodies affect action potential duration and delayed rectifier potassium currents in guinea pigs [J]. Cardiovasc Toxicol, 2015,15(1):1-9.

[5]Lip G Y, Wrigley B J, Pisters R,etal. WITHDRAWN: Antiplatelet agents versus control or anticoagulation for heart failure in sinus rhythm [J]. Cochrane Database Syst Rev, 2016,5:CD003333.

[6]李笑, 杜蕓輝,左騫,等.β1腎上腺素受體自身抗體及其在心力衰竭發(fā)生發(fā)展中的作用[J].生理科學(xué)進(jìn)展,2013,44(5):385-389.

[7]楊大英. 卡維地洛對(duì)老年心衰伴室律失常患者抗β1、β2和α1腎上腺素受體自身抗體的作用[J].中國老年學(xué)雜志,2013,33(10):2442-2443.

[8]Woods K, Knights A J, Anaka M,etal．Mismatch in epitope specificities between IFNγ inflamed and uninflamed conditions leads to escape from T lymphocyte killing in melanoma[J]．J Immunother Cancer, 2016,4:10.

[9]Wang Z, Ding L, Wang Z,etal. Circulating CD4(+)CXCR5(+) T Cells Exacerbate B Cell Antibody Production in Crohn′s Disease Through IL-21 Secretion [J]. Immunol Invest, 2015,44(7):665-677.

[10] 苗夢露, 李七一,嚴(yán)士海,等.抗心衰顆粒對(duì)舒張性心衰大鼠RAAS及心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(3):247-250.

[11] 游廣輝. 加味真武湯對(duì)阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠模型的保護(hù)作用及其機(jī)制[J].中國生化藥物雜志,2015,35(11):33-36.

[12] Kuuliala K, Kuuliala A, Koivuniemi R,etal．Constitutive STAT3 Phosphorylation in Circulating CD4+ T Lymphocy-tes Associates with Disease Activity and Treatment Response in Recent-Onset Rheumatoid Arthritis [J]．PLoS One, 2015,10(9):e0137385.

[13] Piconese S, Barnaba V,etal. Stability of Regulatory T Cells Undermined or Endorsed by Different Type-1 Cytokines [J]. Adv Exp Med Biol, 2015,850:17-30.

[14] 姜玲, 丁立群,王禮彬,等.血清腦尿鈉肽水平監(jiān)測對(duì)老年心衰患者β1受體阻滯劑合理使用的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2013,33(6):1286-1287.

[15] Kuse N, Rahman M A, Murakoshi H，etal. Different Effects of Nonnucleoside Reverse Transcriptase Inhibitor Resistance Mutations on Cytotoxic T Lymphocyte Recognition between HIV-1 Subtype B and Subtype A/E Infections [J]. J Virol, 2015,89(14):7363-7372.

[16] 霍衛(wèi)松, 張磊,高宇哲,等.心衰標(biāo)志物可視化聯(lián)合檢測方法研究[J].影像科學(xué)與光化學(xué),2015,33(4):275-284.

A Study on the Distribution of β1-AA in the Serum of Patients with Congestive Heart Failure and Its Effect on the Proliferation of Different Subtypes of T lymphocytes

Shen Xiaotang.

The Third Department of Cardiology, Chifeng Municipal Hospital, Chifeng 024000, China

Objective To explore the distribution of β1-AA in the serum of patients with congestive heart failure and its effect on the proliferation of T lymphocyte proliferation. Methods 70 patients with congestive heart failure treated in Chifeng Municipal Hospital from December of 2010 to December of 2013 were selected and divided into the experiment group. Another 70 cases without heart failure or liver and kidney dysfunction were selected and divided into the control group. Besides, a number of healthy, β1-AA-negative male c mice with 20g were selected. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the β1-AA titer of both groups. The β1-AA of β1-AA-positive patients were purified and injected to the lymphocyte of the selected c mice according to the different β1-AA concentration gradients. CCK8 was used to detect different subtypes of T lymphocyte proliferation. AnnexinV/PI staining was used to detect different subtypes of T lymphocyte apoptosis. Results Compared with the control group, the experiment group had higher β1-AA titer (t=15.216，P<0.001) and higher rate of β1-AA positive detection (2=53.178,P<0.001). After the injection of β1-AA with different concentrations into the lymphocyte of c mice, no statistical significance was found in the activation of lymphocytes (t=1.408，P=0.161), but there was statistical significance after the activation of CD3/CD28 (t=10.161，P<0.001；t=18.084，P<0.001；t=20.187，P<0.001；t=27.525，P<0.001). β1-AA promoted the release of lactate dehydrogenase in the different subtypes of T lymphocytes (t=18.891，P<0.001；t=15.162，P<0.001；t=16.192，P<0.001；t=17.991，P<0.001). Conclusion β1-AA can damage different subtypes of T lymphocytes and aggravate the conditions of patients with congestive heart failure.

β1-AA；Congestive heart failure；Different subtypes of T lymphocytes；Apoptosis；Proliferation ability

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1712.080.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.05.021

R331

A