何豐瑞 陳艷 于燕

【摘要】目的 建立植物油中15種多環(huán)芳烴的中性氧化鋁小柱固相萃取—高效液相色譜檢測方法。 方法 植物油經(jīng)正己烷溶解后過中性氧化鋁固相萃取小柱凈化， Waters PAH 4.6×250mm色譜柱進行分離，乙腈-水梯度洗脫，流速1.5ml/min，進樣量10ul，柱溫30，熒光檢測器檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果 15種多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在濃度為0.01-0.50ug/mL的范圍內(nèi)，在熒光檢測器下呈良好的線性關(guān)系，該方法的檢出限為0.1-1.5ug/kg之間，樣品的加標(biāo)回收率在62.14%-120.35%之間，RSD在0.91%-4.32%之間。結(jié)論 本實驗所用方法具有樣品前處理簡單，檢測方法高效快速，靈敏度高，準(zhǔn)確性好等優(yōu)點，能夠滿足植物油中多種多環(huán)芳烴含量的檢測。

【關(guān)鍵詞】多環(huán)芳烴；植物油；高效液相色譜法；食品安全

Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of 15 PAHs in plant oil by SPE-HPLC.Methods The edible vegetable oil was dissolved in n-hexaneand，cleaned up with neutral alumina SPE cartridges. The 15 PAHs was carried out by waters-PAHs column （ 4. 6 mm ×250 mm） with a gradient elution using acetonitrile-water as mobile phase at a flow rate of 1. 5 ml /min，the column temperature was 30 ℃，and the injection volume was 10 μl. Detection was carried out by a fluorescence detector with external standard.Results The 15 PAHs solution was a good linear relationship at a concentration within a range of 0.01-0.50ug / mL， The LOD was in the range of 0. 1 ～ 1.5 μg /kg with average recovery ranging from 62.14% to 120.35%. The RSD was in the range of 0. 91% ～ 4.32 0%.Conclusions The method had the advantages of simple pretreatment，high sensitivity and accuracy，which could be applied to the determination of the 15 PAHs in plant oil.

Keywords： PAHs ；Edible vegetable oil ；HPLC；Food safety

【中圖分類號】R4 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1671-8801（2016）05-0010-02

多環(huán)芳烴是一組由兩個或兩個以上苯環(huán)和稠環(huán)鏈接在一起的芳香族化合物及其衍生物，來源于工業(yè)生產(chǎn)、有機物熱解或不完全燃燒等，為持久性有機污染物 [1]。環(huán)境中的PAH能通過生物轉(zhuǎn)化[2，3]等多種途徑到達食物鏈，參與機體的代謝作用。PAHs 對生育、發(fā)育、血液、心臟、神經(jīng)及免疫系統(tǒng)等具 有毒性，能誘發(fā)多種癌癥[4]。流行病學(xué)研究表明[5]，PAHs 通過皮膚、呼吸道、消化道等均可被人體吸收，有誘發(fā)皮膚癌、肺癌、直腸癌、膀胱癌等作用，人類對 PAHs 暴露的主要來源是通過飲食[6]。 植物油是飲食中多環(huán)芳烴的主要來源[7]。由于植物原料中 PAHs 的存在，生產(chǎn)過程中工藝、技術(shù)、設(shè)備條件的不足，以及在運輸過程中受環(huán)境污染等原因，都可能導(dǎo)致食用油中最終含有一定量PAHs。因此建立植物油中多種PAHs同時測定的方法，監(jiān)測植物油中多環(huán)芳烴的含量顯得尤為重要。食用植物油基質(zhì)復(fù)雜，PAHs種類繁多且大多含量較低，高效的提取凈化濃縮方法是測定的關(guān)鍵。目前植物油中PAHs的檢測方法主要有熒光分光光度法、GC/GC-MS法、高效液相色譜法，本研究通過查閱文獻及其進行相關(guān)實驗研究，建立了中性氧化鋁固相萃取柱--高效液相色譜法測定植物油中15種多環(huán)芳烴的檢測方法。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品

1.1.2 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀（waters e2695-2475），色譜柱Waters PAH 4.6×250mm，中性氧化鋁固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，快速混合器，氮吹儀；高頻數(shù)控超聲清洗器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，電熱恒溫水浴鍋，16種PAHs 混合標(biāo)準(zhǔn)品（o2si）。其它試劑：正己烷，乙腈，四氫呋喃，高純水。

1.2方法

1.2.1儀器條件

1.2.1.1 高效液相色譜儀條件

色譜柱：Waters PAH 4.6×250mm C18；流動相：乙腈：水梯度洗脫，25分鐘內(nèi)乙腈濃度50%至100%變化；流速：1.5ml/min；進樣量：10?l；柱溫30℃ 。

1.2.1.2 15種多環(huán)芳烴熒光檢測器檢測波長設(shè)置，見表1。

1.2.2樣品前處理

取樣：準(zhǔn)確稱取0.400g植物油于50ml離心管，用5 mL正己烷溶解，渦旋混勻；過柱：將溶解好的油樣通過預(yù)先用30 mL正己烷活化過的中性氧化鋁固相萃取柱Cleanert BaP-SPE，用80mL正己烷洗脫，收集洗脫液；濃縮：在45℃水浴中將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用總計10 mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到15ml離心管，氮吹儀吹干；定容：用200?L的乙腈四氫呋喃溶液（9+1）定容。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)系列的制備

將200mg/L的PAHs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈稀釋至2.0ug/mL的中間儲備液，-18℃避光保存，臨用時再用乙腈配制濃度為0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.20ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

2結(jié)果與討論

2.1檢出限、精密度及加標(biāo)回收率。

在優(yōu)化的實驗條件下，以熒光強度y對多環(huán)芳烴濃度x進行線性回歸，得到15種多環(huán)芳烴的回歸方程，相關(guān)系數(shù)在0.9984～0.9997之間，15種多環(huán)芳烴在濃度為0.01～0.50ug/mL的范圍內(nèi)，熒光檢測器下呈良好的線性關(guān)系。將0.08ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照1.2.1的儀器條件重復(fù)測定6次，保留時間定性，以峰面積計算各多環(huán)芳烴的RSD。將一定含量的標(biāo)準(zhǔn)品加入植物油樣品基質(zhì)中，按本文方法處理后上機測定，根據(jù)各種PAHs的色譜圖信噪比計算出每種多環(huán)芳烴的檢出限。準(zhǔn)確吸取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入到0.400g基質(zhì)油樣品中，震蕩混勻，前處理后上機測定，根據(jù)峰面積計算15種多環(huán)芳烴的含量，每個濃度水平測定三次，用均值計算15種多環(huán)芳烴的加標(biāo)回收率。

2.2色譜柱的選擇

將Waters PAHs專用柱和普通C18柱分離多環(huán)芳烴進行效果比較，發(fā)現(xiàn)Waters PAHs柱具有分析時間短，分離效果好，靈敏度高的特點，15種多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)在Waters PAHs柱上均能達到基線分離，而waters SunFireTMC18色譜柱有芴、二氫苊以及苯并[g，h，i]芘、茚并[1，2，3-c，d]芘分離效果不佳，可能會對化合物的定性定量產(chǎn)生影響，且全部分析時間明顯長于Waters PAHs專用柱，降低了實驗效率，不利于數(shù)量較大樣品的檢測。因此本方法采用Waters PAHs柱對15種多環(huán)芳烴進行分離。

2.3實際樣品的測定

本次實驗從西安市各大超市采集了桶裝定型包裝菜籽油，花生油，以及玉米油，用本方法檢測，各種植物油中15種多環(huán)芳烴的檢測結(jié)果均小于檢出限，為未檢出，實際樣品圖譜見圖3。

3 結(jié)論

實踐證明本實驗所用方法具有樣品前處理簡單，檢測方法高效快速，靈敏度高，準(zhǔn)確性好等優(yōu)點，能夠滿足植物油中多種多環(huán)芳烴含量的檢測。

參考文獻

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