李 梅，張 季，王蘭蘭，蔡 璐

(遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測院，貴州 遵義 563000)

?

茶籽油脂肪酸指紋圖譜的比較與分析

李 梅，張 季，王蘭蘭，蔡 璐

(遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測院，貴州 遵義 563000)

以茶籽油為研究對象，將茶籽油與其它植物油通過氣相色譜法，圖譜數(shù)據(jù)采用平均矢量法，并通過導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)匹配，創(chuàng)建了茶籽油和其它植物油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并對它們的相似度進(jìn)行了分析。分析表明：同類植物油脂之間相似度高；不同類植物油脂間相似度低。建立茶籽油脂肪酸成分的特征指紋圖譜。為茶籽油的品質(zhì)評價和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了科學(xué)依據(jù)。

茶籽油；氣相色譜法；脂肪酸；指紋圖譜

茶油與椰子油、橄欖油、棕櫚油都稱為世界上的四大木本食用植物油，豐富的活性成分和獨有的脂肪酸組成使它一直保有保健食用油的稱號。主要分布在我國的廣西、江西、浙江、廣東、湖南等地[1]。茶籽油的脂肪酸組成通常含有79%的油酸、10%的亞油酸和1%的亞麻酸, 還含有豐富的生育酚、植物甾醇、角鯊烯等營養(yǎng)物質(zhì), 容易被人體消化吸收,具有降低人體血清的膽固醇，預(yù)防和治療高血壓、心血管系統(tǒng)疾病的功效[2-3]。

樣品的前處理是GC分析植物油脂中脂肪酸的關(guān)鍵步驟，不恰當(dāng)?shù)那疤幚矸椒ú粌H耗時、繁瑣，還會給我們帶來極大的分析誤差[4-5]。近年來，茶葉、白酒以及蜂膠等食品方面也開始逐步采用中藥標(biāo)準(zhǔn)建立指紋圖譜，幫助消費(fèi)者和監(jiān)管者控制產(chǎn)品質(zhì)量和協(xié)助摻假檢測[6-7]。本文對茶籽油進(jìn)行了研究，主要比較了茶籽油和其它三種植物油的指紋圖譜。

1 實 驗

1.1 供試藥劑

37種脂肪酸混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(10 mg/mL, 1.2 mL)購于上海安譜實驗科技股份有限公司；色譜甲醇，美國天地有限公司；色譜異辛烷，美國天地有限公司；氫氧化鈉和氯化鈉，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；無水硫酸鈉，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；三氟化硼甲醇溶液，上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.2 溶液的制備

0.5% mol/L的氫氧化鈉-甲醇溶液: 將2 g氫氧化鈉溶于100 mL純度為99.5%以上的甲醇中。三氟化硼甲醇溶液：質(zhì)量為14%的三氟化硼甲醇溶液。飽和氯化鈉：稱取36 g氯化鈉于燒杯中，加入100 mL蒸餾水?dāng)嚢枞芙饧纯伞?/p>

1.3 儀器設(shè)備

氣相色譜儀帶FID檢測器，美國安捷倫公司；工作站軟件，Agilent OpenLab工作軟件；色譜柱，CNW CD-2560(100.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；電子天平，ALC-210.4型，德國Sartorius公司。數(shù)顯恒溫水浴鍋，HH-6型，常州潤華電器有限公司。

1.4 樣品檢測方法

1.4.1 前處理方法

稱取植物油脂試樣100～200 mg于250 mL磨口三角瓶中，加入4 mL 0.5% mol/L的氫氧化鈉-甲醇溶液和少許沸石，向三角瓶中導(dǎo)入幾分鐘干燥氮氣，排掉空氣后迅速接上冷凝裝置，在85 ℃左右的水浴中回流至油滴全部消失，大概20 min左右；回流過程中每隔1～2 min緩慢的搖動三角瓶，以防止氫氧化鈉生成固態(tài)附著在瓶壁上。再用移液管從冷凝管上部緩慢的加入5 mL三氟化硼甲醇溶液于沸騰的溶液里，繼續(xù)沸騰10 min；接著再繼續(xù)加入10.0 mL異辛烷，取下冷凝裝置和三角瓶，迅速向三角瓶中加入20 mL飽和氯化鈉溶液，蓋上瓶蓋，猛烈振搖30 s；放置2 min使其靜止分層，取上層溶液2～3 mL于10 mL比色管中，加入適量無水硫酸鈉除去溶液中的水痕跡，靜止過濾后取清液1 mL于進(jìn)樣瓶中上機(jī)檢測。

1.4.2 樣品的氣相色譜檢測條件

儀器: Agilent 7890A氣相色譜儀(美國安捷倫公司)；色譜柱：CNW CD-2560 (100.0 m×0.25 mm×0.25 μm)；色譜柱升溫程序：初始柱溫140 ℃(保持5 min)→7 ℃/min升溫→222 ℃(保持8 min)→10 ℃/min升溫→240 ℃(保持15 min)；柱流速：0.6 mL/min；載氣：高純氮；純度99.999%；進(jìn)樣量：1 μL；分流比30：1；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測器溫度：260 ℃；空氣流量：300 mL/min；氫氣流量：30 mL/min；尾吹氣流量：25 mL/min。

2 植物油脂指紋圖譜的建立

2.1 一般菜籽油指紋圖譜及指紋圖譜分析

把菜籽油的指紋圖譜分為一般菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和低芥酸菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜[8]。

本實驗中菜籽油的樣品量很多，我們隨機(jī)選取8個芥酸值“3.0～60.0”之間的合格的菜籽油作為一般菜籽油的樣品譜圖，根據(jù)《中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗研究技術(shù)指南(試行)》的要求，導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗證，生成指紋圖譜[9-10]。

表1 一般菜籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.2 低芥菜籽油指紋圖譜及指紋圖譜分析

實驗隨機(jī)選取了8個芥酸值在“ND-3.0”之間的合格的菜籽油樣品，經(jīng)氣相色譜檢驗獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對含量，再通過人工選擇有效峰和對所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為14個。

表2 低芥酸菜籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

續(xù)表2

3C18 028 3541 8010C22 033 6810 334C18 1n9c29 17958 8011C22 1n934 6421 815C18 2n6c30 36619 2012C24 036 9660 166C20 030 8900 5813C24 138 1220 197C20 131 7231 65

2.3 大豆油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

本實驗一共采集大豆油樣品8個批次，經(jīng)氣相色譜檢驗獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對含量，把樣品譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗證，再通過人工選擇有效峰和對所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為11個。

表3 大豆油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.4 茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

本實驗一共采集茶籽油樣品8個批次，經(jīng)氣相色譜檢驗獲得脂肪酸甲酯組成成分及其相對含量，把樣品譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的軟件”進(jìn)行校準(zhǔn)驗證，再通過人工選擇有效峰和對所有峰共有率的篩查，確定共有峰含為11個。將所有共有峰脂肪酸甲酯的峰面積和保留時間，采用平均矢量法，建立山菜籽油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(見表4)。

表4 茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析

2.5 植物油脂標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度分析

采用共有峰模式建立的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，需要將所有的大豆油、茶籽油和菜籽油的樣品譜圖，導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)( 2004A) ”軟件，通過夾角余弦法，建立樣品之間和樣品與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間的相似度[11-12]。詳見表5。

表5 茶籽油指紋圖譜相似度

參考國家藥典委員會頒布的“中藥注射劑色譜指紋圖譜實驗研究技術(shù)指南(試行) ”的相似度劃分界限[13-14]，將相似度在0.90以上作為符合該種油脂相似度評定標(biāo)準(zhǔn)，相似度低于0.90的判定不符合。每種油脂的樣品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜很接近，說明該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能代表該類樣品的整體性[15]。

表6 茶籽油與其它植物油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間的相似度

通過大豆油、低芥菜籽油、一般菜籽油和茶籽油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜間的相似度 (見表7)，比較每類油脂的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度。

表7 四類油脂標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度

大豆油與一般菜籽油之間的差異為0.712，一般菜籽油與低芥菜籽之間的差異為0.952?？梢姡话悴俗延团c低芥菜籽油雖然因為芥酸值的不同分為了高低兩類，但是它們都棣屬于菜籽油這一大類，組成成份相近，所以相似度高[16-17]。

3 結(jié) 論

本實驗通過GC法將茶籽油和其它植物油的脂肪酸檢驗結(jié)果采用平均矢量法建立了茶籽油和其它植物油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜并進(jìn)行了相似度分析，得出一般菜籽油、低芥菜籽油、大豆油和茶籽油樣品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜之間相似度分別為0.973、0.995、0.992和0.983，說明同類植物油脂之間相似度高；而把一般菜籽油、低芥菜籽油、大豆油和茶籽油之間進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜分析，則發(fā)現(xiàn)大豆油與一般菜籽油之間的差異最大，為0.712，說明不同類植油脂間相似度低。茶籽油中飽和脂肪酸含量為11.07%，低于菜籽油以外的其它4種植物油，所以茶籽油會降低膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量。茶籽油中不飽和脂肪酸含量為81.85%，高于大豆油和棕櫚油等其它植物油的含量，說明茶籽油對膽固醇有明顯降低的作用，使得人患冠心病的幾率降低。

[1] 朱勇.茶油的脂肪酸變化及其生物酚的抗氧作用[D].長沙:中南林業(yè)科技大學(xué),2013.

[2] Snyder J M, Frankel E N, Selke E. Capillary gas chromatographic analyses of headspace volatiles from vegetable oils[J]. Journal of the American Oil Chemists’ Society, 1985, 62(12): 1675-1679.

[3] 夏春華,朱全芳.茶籽制油工藝及茶籽油精煉方法實驗[J].中國茶葉,1981(6):24-26.

[4] 朱云,丁紅梅.大豆油脂肪酸甲酯化條件的研究[J].福建分析測試,2014(03):18-20.

[5] 喻鳳香,林親錄,黃中培,等.米糠油制備及其脂肪酸的氣相色譜分析[J].食品研究與開發(fā),2013(03):72-75.

[6] 何曉葉,李建科,趙偉,等.化學(xué)指紋圖譜技術(shù)在茶葉質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報,2015,33(1):49-54.

[7] 先春,陳仁遠(yuǎn),張明等.醬香型白酒指紋圖譜相似度的研究[J].釀酒科技,2014(10):43-46.[8] 孫翔宇,高貴田,段愛莉,顧浩峰,李冰,薛騫.多不飽和脂肪酸的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2012(07):418-423.

[9] 王蘇靜,常世卿.中藥色譜指紋圖譜技術(shù)與應(yīng)用.鄭州大學(xué)出版社,2008(09):56-57.

[10]任陽.飽和與不飽和脂肪酸對豬肌纖維組成的影響及其AMPK途徑研究[D].杭州:浙江大學(xué),2014.

[11]李強(qiáng),杜思邈,張忠亮,呂春明等.中藥指紋圖譜技術(shù)進(jìn)展及未來發(fā)展方向展望[J].中草藥,2013,44(22):3095-3104.

[12]彭濤,裴劍鋒,周家駒.利用JSP實現(xiàn)基于Internet中藥化學(xué)數(shù)據(jù)庫的檢索[J].計算機(jī)與應(yīng)用化學(xué),2002,19(6):800-802.

[13]楊輝,李寧.反式脂肪酸及各國管理情況介紹[J].中國食品學(xué)報,2010(04):8-13.

[14]楊春英,劉學(xué)銘,陳智毅.15種食用植物油脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].食品科學(xué),2013(06):211-214.

[15]謝遠(yuǎn)長,周斌,彭超.菜籽油中摻入大豆油后的鑒別方法初探[J].糧食與食品工業(yè),2010,17(2):52-54.

[16]張瑜,哀久志,關(guān)黃柏.1H-NMR指紋圖譜研究[J].中南藥學(xué),2012,10(5):392-394.

[17]唐芳,李小元.茶油脂肪酸甲酷化條件的研究[J].糧食與油脂,2010(8):36-39.

Comparison and Analysis of Fatty Acid Fingerprint in Tea Seed Oil

LIMei,ZHANGJi,WANGLan-lan,CAILu

(Inspection and Testing Institute for Product Quality in Zunyi City, Guizhou Zunyi 563000, China)

Taking tea seed oil as the research object, using meteorological chromatography, tea seed oil and other vegetable oils were imported to Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM by mean vector technique. The standard fingerprint of tea seed oil and other vegetable oils were established. The results of similarity analysis of standard fingerprints indicated that higher similarity was observed between the similar vegetable oils. The characteristic fingerprint of fatty acid composition of tea seed oil was established, it had laid a foundation for controlling the quality of tea seed oil by fatty acid composition. It provided the scientific basis for the quality evaluation and quality control standard of tea seed oil.

tea seed oil; gas chromatography; fatty acid; fingerprint

李梅(1982)，女，碩士研究生，研究方向：食品檢測。

O657.7+1

A

1001-9677(2016)022-0109-04