劉亞舉，齊孝蕊（許昌市公安局刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南許昌461000）

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降解檢材親緣關(guān)系鑒定1例

劉亞舉，齊孝蕊
（許昌市公安局刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南許昌461000）

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學(xué)；親子關(guān)系；X染色體；短串聯(lián)重復(fù)序列；插入/缺失

1案　例

1.1簡要案情

1998年10月末，在某鋼材市場的大門處發(fā)現(xiàn)一名女性死者，系機(jī)械性窒息死亡，經(jīng)目擊者證實(shí)其是來討賬的，而債務(wù)人王某（系鋼材市場商戶）已失蹤。2013年5月，在外省將潛逃的王某抓獲，并供述了死者的家庭住址，辦案人員送檢死者疑似父母生物樣本和案發(fā)時(shí)提取的死者血紗布，要求DNA檢驗(yàn)確定身源。1.2檢驗(yàn)過程及結(jié)果

取死者血樣檢材適量，按照磁珠法提取基因組DNA，用30 μL純水進(jìn)行洗脫。按IdentifilerTMPlus試劑盒（美國AB公司）、Investigator?DIPplex試劑盒（德國QIAGEN公司）和AGCU X-12試劑盒（無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司）說明書配制PCR反應(yīng)液，在9700型擴(kuò)增儀（美國AB公司）上采用10μL擴(kuò)增體系，模板DNA為1、2、4μL進(jìn)行梯度擴(kuò)增，其中IdentifilerTMPlus試劑盒分28和30個(gè)循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增、Investigator? DIPplex和AGCU X-12試劑盒進(jìn)行30個(gè)循環(huán)擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物在3130型遺傳分析儀（美國AB公司）上檢測，用GeneMapper ID-X軟件進(jìn)行STR分型。

死者血紗布結(jié)果是，IdentifilerTMPlus試劑盒采用2 μL模板DNA經(jīng)30個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，檢出的STR基因座數(shù)最多，為12個(gè)STR基因座分型（其中CSF1PO、D16S539、D2S1338和D18S51基因座未檢出）；而Investigator?DIPplex和AGCU X-12試劑盒采用1 μL模板DNA進(jìn)行30個(gè)循環(huán)擴(kuò)增即可檢出全部基因分型；檢出的基因分型均小于260bp。

1.3鑒定意見

疑似父母與女死者11個(gè)常染色體STR基因座、12個(gè)X-STR基因座和30個(gè)插入/缺失（insertion/deletion，InDel）位點(diǎn)的基因型符合生物學(xué)上的親緣關(guān)系。

2討　論

在本案中，通過DNA提取、PCR擴(kuò)增方法的改善，以及PCR試劑盒的選擇使用，檢出的基因分型均在260 bp以下，說明死者血樣DNA已降解。微量、降解DNA檢材采用常用試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)，大片段的基因座常不能擴(kuò)增成功，針對這樣的情況，一般采用MiniFiler[1]、AGCU Mini[2]進(jìn)行補(bǔ)充檢驗(yàn)，但miniSTR也有等位基因丟失、染料污斑、片段長度確定難等缺陷[3]。而InDel和單核苷酸多態(tài)性（SNP）為二等位基因，具有檢測片段短、突變率低的優(yōu)點(diǎn)，適合微量、降解的生物樣本進(jìn)行個(gè)體識別和親緣關(guān)系鑒定。

本例DNA檢驗(yàn)采用的Investigator?DIPplex試劑盒包含30個(gè)獨(dú)立常染色體InDel，兼具STR和SNP的優(yōu)點(diǎn)，分布在19個(gè)常染色體上，擴(kuò)增子片段短（70~ 205bp），適合微量降解的現(xiàn)場檢材；X-STR與常染色體STR具有相同的效力，通常應(yīng)用在一些特殊的親緣關(guān)系（如父女關(guān)系）鑒定中，由于AGCU X-12試劑盒能檢測X染色體上的12個(gè)miniSTR（68~240 bp），因此也適用于微量降解檢材的檢驗(yàn)。本案例屬于父母皆疑，將父母作為一個(gè)整體考慮時(shí)，他們與女兒在30個(gè)InDel和12個(gè)X-STR基因座的基因型符合孟德爾遺傳規(guī)律，雖然其系統(tǒng)效能不足以滿足鑒定需求，但同時(shí)結(jié)合所檢出的11個(gè)常染色體STR結(jié)論，能夠確定該死者的身源。

本案檢驗(yàn)提示，隨著微量、陳舊降解檢材DNA提取方法的成熟，PCR擴(kuò)增試劑盒的選擇也至關(guān)重要，雖然二等位基因的SNP和InDel不可以替代常染色體STR，但另辟蹊徑能夠拓展DNA技術(shù)在法庭科學(xué)中的應(yīng)用，促進(jìn)DNA技術(shù)的深度應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]唐建平，吳丹，張晨，等. MiniFiler試劑盒運(yùn)用于法醫(yī)微量物證的檢驗(yàn)[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2007，23（4）：304-306.

[2]蘇艷佳，吳微微，郝宏蕾，等. AGCU Mini系統(tǒng)在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2012，27（3）：219-221.

[3]王會(huì)品，劉超，孫宏鈺. MiniSTR技術(shù)的研究進(jìn)展[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2006，22（2）：159-160，S1-S2.

（本文編輯：李成濤）

·院系風(fēng)采·

收稿日期：（2014-09-15）

作者簡介：劉亞舉（1978—），男，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證檢驗(yàn)及鑒定；E-mail：horse3697@126.com

文章編號：1004-5619（2016）01-0080-01

中圖分類號：DF795.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.01.024