王玲姝,李 翊,仲麗麗

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

?

電針對(duì)肥胖大鼠肥胖指標(biāo)及脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響*

王玲姝1,李 翊2,仲麗麗1

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：觀察電針對(duì)飲食致肥胖模型大鼠體質(zhì)量、腹圍、Lee's指數(shù)、血脂血糖指標(biāo)及脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響。方法：選取清潔級(jí)SD雄性大鼠50只，采用高脂飼料致肥胖造模方法復(fù)制肥胖模型，并另選取10只作為正常對(duì)照組 。10周后將22只肥胖造模成功大鼠隨機(jī)分為電針組和模型對(duì)照組各11只。治療2周后檢查3組大鼠體質(zhì)量、腹圍、Lee’s指數(shù)、血糖、血脂、腹部皮下及內(nèi)臟脂肪濕重，電鏡下觀察脂肪細(xì)胞大小。結(jié)果：與模型對(duì)照組相比，電針組體質(zhì)量、腹圍、Lee’s指數(shù)、血清中葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平、腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重、脂肪細(xì)胞大小和直徑均小于模型對(duì)照組(均P<0.05),電針組上述指標(biāo)與正常對(duì)照組相比則仍有差異。結(jié)論：電針可以改善肥胖大鼠的體質(zhì)量，縮小腹圍，調(diào)節(jié)血糖血脂，減少腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪，對(duì)大鼠的肥胖狀態(tài)有明顯的調(diào)整作用。

肥胖；電針；大鼠；脂肪細(xì)胞

肥胖是21世紀(jì)的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，世界衛(wèi)生組織(WHO)2015年調(diào)查顯示，世界各國(guó)的肥胖人數(shù)比1980年翻了三番，肥胖癥成為了全球范圍內(nèi)的健康危機(jī)[1-2]。肥胖與血脂異常、2型糖尿病、冠心病、高血壓、某些癌癥等疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系[3]，因此，對(duì)單純性肥胖防治成為日益受各國(guó)關(guān)注的問(wèn)題。

單純性肥胖治療方式多樣，國(guó)外以手術(shù)、控制飲食、運(yùn)動(dòng)等為主[4]。在中國(guó)，針灸減肥是近年來(lái)興起的減肥方式，其中電針治療肥胖效果較好，副作用小，深受患者歡迎。為了了解電針對(duì)肥胖大鼠的減肥療效，本研究采用高脂飼料致肥胖的造模方法復(fù)制肥胖模型，觀察肥胖大鼠經(jīng)電針治療后的體質(zhì)量、腹圍、血脂血糖指標(biāo)、腹部皮下及內(nèi)臟脂肪濕重及脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變情況，并與模型對(duì)照組及正常對(duì)照組比較，為臨床電針治療肥胖提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

60只2月齡清潔級(jí)SD雄性大鼠，體質(zhì)量(190.41±2.23)g，購(gòu)于哈爾濱興華家兔養(yǎng)殖公司。高脂飼料由哈爾濱阿恩地實(shí)驗(yàn)儀器行提供。每100g高脂飼料配方：60g普通飼料，10g豬油，8g全脂奶粉，5g豆粉，5g蔗糖，5g蛋黃粉，5g花生，2g鹽[5-6]。大鼠飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)均在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)針灸實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，由培訓(xùn)合格的專業(yè)人員負(fù)責(zé)。

1.2 試劑與儀器

主要試劑：葡萄糖(Glu)測(cè)試盒、甘油三酯(TG)測(cè)定試劑盒、總膽固醇(TCH酶法)測(cè)試盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)測(cè)定試劑盒、血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)試盒，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

主要儀器：直徑為0.25mm、長(zhǎng)13mm毫針(蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司),G6805電麻儀(揚(yáng)州市凱達(dá)醫(yī)療設(shè)備有限公司)，Au2700型全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus公司)，RM2235型切片機(jī)(德國(guó)Leica公司)，TM3030型掃描電子顯微鏡(日本日立公司)，電子天平(上海方瑞儀器有限公司)，離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及肥胖模型制備

12籠共60只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，抽簽法抽取2籠共10只大鼠作為正常對(duì)照組，喂養(yǎng)普通飼料；其余10籠共50只大鼠為肥胖組，喂養(yǎng)高脂飼料。每周定時(shí)測(cè)量體重，當(dāng)肥胖組大鼠體重超過(guò)正常對(duì)照組體重20%時(shí)，作為肥胖大鼠模型復(fù)制成功[7]。10周后22只肥胖大鼠造模成功。將22只大鼠隨機(jī)分為電針組和模型對(duì)照組，每組各11只。模型對(duì)照組實(shí)驗(yàn)環(huán)境同電針組，但不行電針治療。正常對(duì)照組正常飼養(yǎng)10周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 各組干預(yù)方法

①電針組：造模成功后轉(zhuǎn)為普通飼料喂養(yǎng)，于每天同一時(shí)間治療。選取中脘、氣海和雙側(cè)天樞，取穴部位參照林文注等主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中大鼠穴位圖譜。將大鼠固定于實(shí)驗(yàn)架上，常規(guī)消毒后，毫針針刺，針刺深度約為5mm左右，平補(bǔ)平瀉法捻轉(zhuǎn)1min，然后接電麻儀，選取雙側(cè)天樞、中脘氣海兩組穴位連電，脈沖選取疏密波，電流強(qiáng)度選取1mA。通電后留針30min，每日1次，每周7次，共治療2周后采集指標(biāo)。

②模型對(duì)照組：造模成功后轉(zhuǎn)為普通飼料喂養(yǎng)，同樣于每天同一時(shí)間固定在實(shí)驗(yàn)架上，不做其他處理。2周后采集指標(biāo)。

③正常對(duì)照組：普通飼料喂養(yǎng)，不做任何處理。2周后采集指標(biāo)。

2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.3.2 血糖、血脂指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有大鼠禁食24h，麻醉開(kāi)腹后，于心尖處取血，離心，分離血清，-20℃保存。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清葡萄糖(Glu)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量。

2.3.3 腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重 取血后，剝離各組大鼠腹部皮下脂肪以及內(nèi)臟脂肪(包括腸系膜脂肪組織、腎周脂肪組織、附睪周?chē)窘M織)，于精度為0.1g的電子天平稱濕重(g)，計(jì)算大鼠每500g體重含腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重量。每500g體重含皮下(或內(nèi)臟)脂肪濕重量=皮下(或內(nèi)臟)脂肪(g)/實(shí)測(cè)體重(g)×500g。

2.3.4 皮下和內(nèi)臟脂肪組織HE染色 大鼠脂肪稱濕重后，選取腹部皮下和雙腎區(qū)相同部位的脂肪組織，10%福爾馬林浸泡，石蠟包埋，制成15μm厚的切片，行 HE 染色。電鏡(×100倍)下觀察脂肪細(xì)胞大小，每張切片100倍下觀察30個(gè)脂肪細(xì)胞，測(cè)量細(xì)胞直徑(μm)、面積(μm2)。

3 結(jié)果

3.1 一般情況

造模期間，3組大鼠均表現(xiàn)較為活潑，正常對(duì)照組大鼠皮毛致密、毛發(fā)光滑、有光澤，生長(zhǎng)、進(jìn)食及二便均正常。造模組第1周即出現(xiàn)進(jìn)食飲水量增加，大便較臭較稀，至第4周時(shí)部分大鼠出現(xiàn)食量減少，體重增加不明顯，形成肥胖抵抗。10周后44.0%肥胖大鼠造模成功。絕大部分大鼠皮毛疏松，毛發(fā)無(wú)光澤，大小便臭味較大。治療期間，電針組大鼠攝食量減少，大便恢復(fù)正常，皮毛疏松程度稍有改善。造模及治療期間未出現(xiàn)大鼠死亡或丟失情況。

3.2 3組大鼠體質(zhì)量、腹圍、Lee’s指數(shù)的比較

見(jiàn)表1、圖1。治療前，電針組和模型對(duì)照組大鼠體質(zhì)量與正常對(duì)照組比較，差異超過(guò)20%，3項(xiàng)指標(biāo)與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示大鼠肥胖模型誘導(dǎo)成功。

治療后，模型對(duì)照組大鼠3項(xiàng)指標(biāo)與正常對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示模型對(duì)照組大鼠即使改用普通飼料，依舊沒(méi)有恢復(fù)到普通大鼠的體重。

而經(jīng)過(guò)2周的治療后電針組大鼠在體質(zhì)量、腹圍、Lee’s指數(shù)方面與正常對(duì)照組和模型對(duì)照組相比差異分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示電針組大鼠在經(jīng)過(guò)兩周的電針治療后，肥胖指標(biāo)已經(jīng)明顯下降，但是沒(méi)有達(dá)到正常組大鼠的水平。3組大鼠電針治療前后體質(zhì)量的變化見(jiàn)圖1。

表1 治療前后各組大鼠體質(zhì)量、腹圍與Lee’s指數(shù)比較

3.3 各組大鼠血糖、血脂值變化比較

由表2可見(jiàn)，模型對(duì)照組的血脂、血糖水平均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，經(jīng)過(guò)電針治療后，除高密度脂蛋白以外，血糖、血脂水平雖未達(dá)到正常水平，但是有明顯下降，提示電針有降低血脂、血糖的作用。

3.4 各組大鼠治療后腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重的比較

見(jiàn)表3。無(wú)論電針組還是模型對(duì)照組，皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重與正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，而與模型對(duì)照組比較，電針組治療后皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪濕重差異分別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，提示電針能降低大鼠腹部皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪，但還未下降到正常水平。

圖1 3組大鼠體質(zhì)量變化趨勢(shì)圖

表2 治療后各組大鼠血糖、血脂值比較

表3 治療后各組大鼠皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪比較

3.5 各組大鼠治療后脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)比較

電針組脂肪細(xì)胞形狀呈多角形，細(xì)胞膜內(nèi)縮，大小不均一，見(jiàn)圖2-A。模型對(duì)照組脂肪細(xì)胞體積大，較為飽滿，大小不均一，細(xì)胞交界處可見(jiàn)合成大細(xì)胞的趨勢(shì)，見(jiàn)圖2-B。正常對(duì)照組脂肪細(xì)胞體積較小，大小較均一、飽滿，見(jiàn)圖2-C。

治療后，與正常對(duì)照組比較，電針組和模型對(duì)照組大鼠的腹部脂肪細(xì)胞直徑、面積的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而兩組之間比較，差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示電針能夠縮小肥胖大鼠的脂肪細(xì)胞，改善細(xì)胞形態(tài)，但是并沒(méi)有恢復(fù)到正常狀態(tài)。見(jiàn)表4。

表4 治療后各組大鼠腹部皮下和腎周脂肪直徑、面積比較

圖2 3組大鼠腹腔脂肪組織切片(10×10)

4 討論

單純性肥胖患者體內(nèi)熱量攝入大于消耗，脂肪在體內(nèi)不斷積聚，脂肪細(xì)胞體積不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致患者體重超重或肥胖[8]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肥胖癥病位在中焦，正如張志聰所言:“中焦之氣，蒸其津液，化其精微，發(fā)泄于腠理，淖注于骨……溢于外則皮肉膏肥，郁于內(nèi)則膏肓豐滿”，故在治療本病時(shí)應(yīng)強(qiáng)調(diào)調(diào)理脾胃。中脘穴為胃之募、腑之會(huì)，天樞是大腸之募穴，是陽(yáng)明脈氣所發(fā)，主疏調(diào)腸腑、理氣行滯、消食，是腹部要穴。中脘配天樞，健脾化濕。氣海有培補(bǔ)元?dú)狻⒁鏆庵?yáng)之功，清代醫(yī)家陳士鐸認(rèn)為:“肥人多痰，乃氣虛也，虛則不能運(yùn)行，故痰生之”。經(jīng)過(guò)三穴配合治療，能夠疏通經(jīng)絡(luò)、強(qiáng)健脾胃、祛除水濕、調(diào)和氣血、幫助運(yùn)化，達(dá)到減肥之功效。電針治療后大鼠攝食量減少，體質(zhì)量、體脂明顯下降，與模型組比較有顯著性差異，說(shuō)明電針對(duì)肥胖大鼠亢盛食欲的失衡狀態(tài)，有明顯的抑制調(diào)節(jié)作用，這種調(diào)節(jié)對(duì)針刺減肥起到了直接的作用。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)查閱大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，采用較為合理的高脂飼料配方配備飼料，復(fù)制大鼠肥胖模型，符合人類單純性肥胖癥的自然致病的病因。喂養(yǎng)2月齡SD雄性大鼠10周，致肥率達(dá)44.0%。造模成功后改用普通飼料喂養(yǎng)，改變大鼠飲食結(jié)構(gòu)，又符合患者下決心減肥后開(kāi)始轉(zhuǎn)變飲食結(jié)構(gòu)，降低脂肪的攝入，更為貼近實(shí)際情況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肥胖大鼠經(jīng)電針治療后，對(duì)體重、腹圍、Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪含量、血脂血糖等指標(biāo)均有良性調(diào)整作用，且能使脂肪細(xì)胞體積明顯變小，這是治療肥胖病最重要的組織學(xué)特征[9]。說(shuō)明電針對(duì)單純型肥胖癥的療效確切，值得推廣。

[1] World Health Organization.Fact sheet on overweight and obesity.http：//www.who.int/mediacentre/factsheets/fs311/en(accessed 30March 2015)

[2] World Health Organization.Obesity.http：//www.euro.who.int/en/health-topics/noncommunicable-diseases/obesity(accessed 05.05.2015)

[3] 中華醫(yī)學(xué)雜志編輯委員會(huì)．全國(guó)肥胖防治專題學(xué)術(shù)會(huì)議紀(jì)要[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2003,83(13):1183

[4] Ells LJ,Mead E,Atkinson G,et al.Surgery for thetreatment of obesity in children and adolescents.Cochrane Database of Systematic Reviews 2015,Issue 6.Art.No.:CD011740.DOI:10.1002/14651858.CD011740

[5] 楊海,胡燕榮,李南方,等.GIRK4在肥胖大鼠模型心肺組織中的表達(dá)研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2014,43(7):34-37

[6] 康永安,胡燕榮,高莉,等.GIRK4基因在肥胖大鼠腎臟組織的表達(dá)[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2013,35(1):36-39

[7] 唐紅珍.中醫(yī)綜合療法對(duì)肥胖大鼠脂肪細(xì)胞形態(tài)及血清高密度脂蛋白的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(9):2315-2317

[8] Harms M,Seale P.Brown and beige fat:development,function and therapeutic potential[J].Nature Medicine,2013,19(10):1252-1263

[9] 鄒大進(jìn).實(shí)用臨床肥胖病學(xué)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1999:57-59

Effect of Electro-acupuncture on obesity Index and Fat Cell Morphology of Obese Rats

WANG Ling-shu1,LI Yi2,ZHONG Li-li1

(1.TheFirstAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China;2.HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective：To observe the electro-acupuncture (EA) on body weight,abdominal circumference,obesity index and fat cell morphology of diet-induced obese rats. Methods：50SD male rats were fed with high fat diet to induce obesity models, and select other 10SD rats as the normal control group. After 10weeks 22obese rats of successful models were randomly divided into an EA group and a model control group. After 2weeks of treatment, check body mass, abdominal circumference, Lee's index, serum glucose serum lipids, abdominal subcutaneous and visceral fat wet weight, electron microscopy fat cell size in three groups.Results：Compared with the model control group,in EA group the body mass, waist circumference, Lee's index, serum glucose, cholesterol, triglycerides, low-density lipoprotein levels, abdominal subcutaneous fat and visceral fat wet weight, fat cell size and diameter were less than those in the model control group (P<0.05). Compared with the normal control group, the indicators in both EA group and model control group were significantly different(P<0.05).Conclusion：EA can lose body weight of obese rats,cut down abdominal circumference, regulate blood serum glucose and lipid,reduce subcutaneous fat and intra-abdominal fat.Electro-acupuncture has a good effect on promoting weight loss in obese rats.

Obesity;Electro-acupuncture;Rats;Adipocytes

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)優(yōu)秀創(chuàng)新人才支持計(jì)劃(2012年度)。

王玲姝(1977-)，女，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師,研究方向：針灸臨床及循證醫(yī)學(xué)。

R246.1

A

1005-0779(2016)10-0089-03

2016-04-15