吳翔，胡耀華，邢紅宇，鄭才玲，卓書(shū)偉，高戈

（海南省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 ?？?570203）

論著

白藜蘆醇對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔肺動(dòng)脈高壓相關(guān)炎癥因子表達(dá)的影響*

吳翔，胡耀華，邢紅宇，鄭才玲，卓書(shū)偉，高戈

（海南省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 ?？?570203）

目的通過(guò)檢測(cè)白藜蘆醇（Res）干預(yù)后實(shí)驗(yàn)性兔肺動(dòng)脈高壓（PAH）模型肺組織中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的差異，探討其在PAH發(fā)病機(jī)制中的作用。方法將36只新西蘭兔隨機(jī)分為6組。對(duì)照組（A組）：動(dòng)物皮下注射二甲基亞砜30 mg/kg。造模組：實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，皮下注射野百合堿30 mg/kg，連續(xù)注射7 d造模，然后將造模動(dòng)物隨機(jī)分為5組：模型組（B組）、實(shí)驗(yàn)藥物組（C組）、高劑量組（D1組）、中劑量組（D2組）、低劑量組（D3組），每組6只。注射后第45天，分別進(jìn)行B超、心肌細(xì)胞蘇木精-伊紅染色和Tunnel染色，檢測(cè)造模是否成功，造模成功后按體重計(jì)算給藥劑量，受試藥物高劑量120 mg/（kg·d），中劑量60 mg/（kg·d），低劑量30 mg/（kg·d），陽(yáng)性對(duì)照藥物前列腺環(huán)素1 mg/（kg·d）喂飼相應(yīng)的動(dòng)物，1次/d，連續(xù)6周，每日觀察動(dòng)物的食量、活動(dòng)、毛色及大小便變化，每周稱體重。每隔2周隨機(jī)采集各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒，分別對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清3種生物學(xué)標(biāo)志物[轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）]的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果Res干預(yù)實(shí)驗(yàn)性兔PAH模型后，NF-κB、COX-2、iNos血清表達(dá)水平改善，其中高劑量組改善效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物前列腺環(huán)素。且在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，NF-κB的特異性最明顯，其他指標(biāo)雖然有變化，但顯著性不如NF-κB。結(jié)論Res抑制血清中分泌NF-κB、COX-2、iNos的能力優(yōu)于前列腺環(huán)素，Res可以通過(guò)抑制NF-κB/iNOS/COX2通路避免細(xì)胞損傷，改善PAH癥狀，表現(xiàn)出和前列腺環(huán)素相同或更好的作用。

肺動(dòng)脈高壓；白藜蘆醇；細(xì)胞因子

肺動(dòng)脈高壓（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一大類以肺動(dòng)脈壓進(jìn)行性升高為特點(diǎn)的肺血管疾病[1]。其主要特征是肺動(dòng)脈阻塞引起的肺血管阻力進(jìn)行性升高，同時(shí)伴有肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖增加、凋亡減少，導(dǎo)致不可逆的肺血管重構(gòu)[2]。在這種低氧狀態(tài)下的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)于重構(gòu)的肺動(dòng)脈周圍，并釋放出大量的細(xì)胞因子，發(fā)揮趨化和黏附作用，使肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和平滑肌細(xì)胞增殖加劇[3]，最終導(dǎo)致患者右室心肌肥厚、心室重構(gòu)、右心衰竭?，F(xiàn)在越來(lái)越多的研究表明，多血清學(xué)因子參與的炎癥機(jī)制導(dǎo)致的免疫反應(yīng)是平滑肌細(xì)胞增生的重要原因[4-5]。目前，對(duì)PAH的治療主要集中在新型血管擴(kuò)張劑，如前列環(huán)素類似物、5-羥色胺抑制劑等。該藥物對(duì)PAH來(lái)說(shuō)，雖然能短期改善血管環(huán)境，延緩患者病情，但不能從根本上解決PAH患者血管重構(gòu)機(jī)制，達(dá)到治愈PAH的目標(biāo)[6]。新的藥理學(xué)提出，新藥物干預(yù)要著眼于對(duì)抗各種促增殖因子或抑制平滑肌細(xì)胞炎癥因子的滲出，抑制平滑肌細(xì)胞增殖，阻抑炎癥細(xì)胞因子的滲出，改善肺動(dòng)脈微環(huán)境是治療PAH新的方向。白藜蘆醇（Resveratrol，Res）一種生物性很強(qiáng)的非黃酮類多酚化合物，是自然界多種植物抵抗外來(lái)侵害時(shí)產(chǎn)生的一種植物毒素[7]。對(duì)Res藥理作用的認(rèn)識(shí)來(lái)自1989年世界衛(wèi)生組織“世界心血管疾病控制系統(tǒng)-monic PROJECT（莫尼卡項(xiàng)目）”，認(rèn)為高脂飲食與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，紅葡萄酒中的Res對(duì)心臟具有保護(hù)作用[8]。以后的研究證實(shí)，Res具有抗氧化、阻滯細(xì)胞周期等多種作用[9-10]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)Res干預(yù)實(shí)驗(yàn)性兔PAH模型肺組織中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平的差異，探討其在PAH發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康新西蘭兔[中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，合格證：SCXK（湘）2015-0003）]36只，雌雄各半，體重1.5～2.0㎏。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

白藜蘆醇（中南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院研制，純度98.5%），陽(yáng)性對(duì)照藥物（前列腺環(huán)素膠囊，浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：0504081）。含藥溶液的配制：白藜蘆醇高劑120 mg/kg，中劑量60 mg/kg，低劑量30 mg/kg，前列腺環(huán)素配成濃度1 mg/ml的溶液。1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型復(fù)制與動(dòng)物分組36只新西蘭兔每日觀察動(dòng)物的食量、活動(dòng)、毛色及大小便變化，每周稱體重。隨機(jī)選取6只為A組（對(duì)照組）：皮下注射二甲基亞砜30 mg/kg。剩余30只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，皮下注射野百合堿30 mg/kg，復(fù)制PAH動(dòng)物模型，連續(xù)注射7 d后，將造模動(dòng)物隨機(jī)分為5組：B組（模型組）、C組（實(shí)驗(yàn)藥物組）、D1組（高劑量組）、D2組（中劑量組）、D3組（低劑量組），每組6只。注射后第45天，分別進(jìn)行B超、心肌細(xì)胞蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE）和Tunnel染色，檢測(cè)造模是否成功。

1.3.2 給藥將兔稱重，造模成功后按體重計(jì)算給藥劑量，受試藥物按高劑量120 mg/（kg·d）、中劑量60 mg/（kg·d）、低劑量30 mg/（kg·d），陽(yáng)性對(duì)照藥物前列腺環(huán)素1 mg/（kg·d）喂飼相應(yīng)的動(dòng)物，1次/d，連續(xù)6周。

1.3.3 檢測(cè)各模型組外周血各因子的水平自給藥開(kāi)始，每隔2周隨機(jī)采集各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)試劑盒，分別對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清3種生物學(xué)標(biāo)志物[轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）]的含量進(jìn)行檢測(cè)。每份標(biāo)本雙空白對(duì)照，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。最后用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔吸光度值并計(jì)算濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較用重復(fù)測(cè)量方差分析，方差齊則兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模情況

模型組動(dòng)物在野百合堿注射后90 d出現(xiàn)呼吸困難，有胸、腹水形成，并有肝臟淤血、腫大，心臟增大，右室壁肥厚等心衰表現(xiàn)。

B超檢查顯示，模型組主要參數(shù)變化為三尖瓣反流速率＞3.4 m/s，肺動(dòng)脈收縮壓＞50 mmHg。其他參數(shù)包括肺動(dòng)脈瓣反流速率的增加和右射血時(shí)間的短暫加速，右心腔內(nèi)徑增大，室間隔形狀和運(yùn)動(dòng)的異常，右心室壁厚度的增加和主肺動(dòng)脈擴(kuò)張。

心肌細(xì)胞HE與Tunnel染色對(duì)比顯示，心肌細(xì)胞肥厚，排列紊亂。Tunnel染色顯示，心肌細(xì)胞凋亡增加。見(jiàn)附圖。

附圖B超、心肌細(xì)胞HE和Tunnel染色結(jié)果

2.2 血清NF-κB、COX-2、iNos水平的變化

各項(xiàng)觀察指標(biāo)證明野百合堿動(dòng)物模型造模成功。NF-κB、COX-2、iNos的濃度在第2、4和6周與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)合B超結(jié)果說(shuō)明實(shí)驗(yàn)中第2、4和6周處于PAH發(fā)展過(guò)程的早期，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)PAH模型中該3種生物標(biāo)志物可間接反映PAH早期的病理變化，對(duì)早期PAH的研究有重要價(jià)值。但NF-κB、TNF-α、PGE2、iNOS在第6周特異性更強(qiáng)。且在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，NF-κB的特異性最為明顯，其他指標(biāo)雖有變化，但顯著性不如NF-κB。

2.2.1 靜息狀態(tài)下血清NF-κb表達(dá)的VAS評(píng)分比較①模型組與對(duì)照組造模后第2、4、6、8、10和12周靜息狀態(tài)下測(cè)量VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.643，P=0.000）。模型組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=92.923，P=0.000），相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。模型組與對(duì)照組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=13.576，P=0.000）。②高、中、低劑量組與實(shí)驗(yàn)藥物組靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=19.646、21.321和17.231，P=0.000）。高、中、低劑量組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=88.432、90.425和92.421，P=0.000），對(duì)照組與高、中、低劑量組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中、低劑量組與對(duì)照組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 13.213、12.242和14.381，P=0.000）。③高、中劑量組與低劑量組（D3組）靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=19.995和18.543，P=0.000）。高、中劑量組與低劑量組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=90.311和88.921，P=0.000），高、中劑量組與低劑量組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中劑量組與低劑量組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=16.281和17.521，P=0.000）。見(jiàn)表1。

表1 靜息狀態(tài)下血清NF-κB表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

表1 靜息狀態(tài)下血清NF-κB表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

組別第2周第4周第6周第8周第10周第12周A組3.77±0.553.57±0.673.63±0.533.45±0.633.67±0.583.69±0.47 B組145.65±26.43174.42±25.32183.21±28.93181.43±23.18163.43±25.32154.83±21.33 C組65.64±16.1273.73±18.4276.64±19.5368.86±17.4363.76±19.4460.63±18.94 D1組33.54±6.4836.82±7.4332.72±5.9331.73±5.7226.43±4.9225.93±4.83 D2組43.54±9.5445.82±9.2648.63±7.3342.42±7.3838.21±6.5439.64±6.65 D3組87.43±17.4388.83±21.8484.12±22.3776.73±20.8172.51±19.4470.72±17.82

2.2.2 靜息狀態(tài)下血清COX-2表達(dá)的VAS評(píng)分比較①模型組與對(duì)照組造模后第2、4、6、8、10和12周比較靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.832，P=0.000）。模型組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=89.221，P=0.000），實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.932，P=0.000）。②高、中、低劑量組與實(shí)驗(yàn)藥物組（C組）靜息狀態(tài)下測(cè)量VAS評(píng)分比較，采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，不同時(shí)間點(diǎn)間的VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.021、18.382和19.736，P=0.000）。高、中、低劑量組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=90.732、89.291和90.532，P=0.000），高、中、低劑量組與對(duì)照組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中、低劑量組與對(duì)照組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=16.291、15.388和15.891，P=0.000）。③中、低劑量組與實(shí)驗(yàn)藥物組（C組）靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=17.861和17.402，P=0.000）。高、中劑量組與低劑量組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=92.762和90.881，P=0.000），高、中劑量組與低劑量組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中劑量組與低劑量組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.621和18.832，P=0.000）。見(jiàn)表2。

表2 靜息狀態(tài)下血清COX-2表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

表2 靜息狀態(tài)下血清COX-2表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

組別第2周第4周第6周第8周第10周第12周A組5.03±1.565.23±1.686.04±1.575.37±1.625.84±1.895.18±1.71 B組6.43±1.876.84±1.797.85±1.998.03±2.038.54±1.679.03±2.13 C組5.44±1.635.37±1.345.89±1.735.63±1.645.55±1.935.51±1.63 D1組5.07±1.525.23±1.625.57±1.725.32±1.675.17±1.835.02±1.49 D2組5.28±1.545.35±1.635.46±1.695.22±1.465.27±1.535.11±1.68 D3組6.05±1.946.23±1.987.15±2.076.86±1.566.62±1.936.25±1.77

2.2.3 靜息狀態(tài)下血清iNos表達(dá)的VAS評(píng)分比較①模型組與對(duì)照組（A組）造模后第2、4、6、8、10和12周比較靜息狀態(tài)下同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.438，P=0.000）。模型組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=91.125，P=0.000），對(duì)照組與模型組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分較低。模型組與對(duì)照組的VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.372，P=0.000）。②高、中、低劑量組與實(shí)驗(yàn)藥物組（C組）靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.41220.448、和19.821，P=0.000）。高、中、低劑量組與對(duì)照組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=93.283、93.295和91.436，P=0.000），對(duì)照組與高、中、低劑量組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中、低劑量組與對(duì)照組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.392、15.983和15.837，P=0.000）。③高、中劑量組與低劑量組（D3組）靜息狀態(tài)下不同時(shí)間點(diǎn)間VAS評(píng)分比較，經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=21.882和20.179，P=0.000）。高、中劑量組與低劑量組靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=92.661和91.827，P=0.000）。高、中劑量組與低劑量組相比在靜息狀態(tài)下VAS評(píng)分比較低。高、中劑量組與低劑量組VAS評(píng)分變化趨勢(shì)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.721和16.429，P=0.000）。見(jiàn)表3。

表3 靜息狀態(tài)下血清iNos表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

表3 靜息狀態(tài)下血清iNos表達(dá)的VAS評(píng)分比較（ng/L±s）

組別第2周第4周第6周第8周第10周第12周A組67.43±13.2378.73±14.8375.62±14.6680.62±15.3478.73±17.7579.61±18.18 B組118.21±19.21125.43±21.02136.72±26.87149.32±29.36140.54±25.82142.12±30.27 C組88.43±21.6895.62±20.81103.66±21.93117.82±23.87104.72±22.8397.32±19.73 D1組72.63±11.8376.83±13.7280.73±14.2984.66±17.2476.23±15.3273.74±17.69 D2組80.43±18.4385.32±20.3288.32±19.4892.84±22.3285.39±17.4382.93±19.73 D3組103.72±26.37104.32±23.28107.94±27.43109.43±21.5693.84±19.9485.83±17.81

3 討論

成功復(fù)制肺動(dòng)脈高壓的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪沁M(jìn)行肺動(dòng)脈高壓相關(guān)性研究的前提和基礎(chǔ)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，復(fù)制肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型一般有低氧模型、高肺血流模型、野百合堿誘導(dǎo)聯(lián)合高肺血流模型及野百合堿誘導(dǎo)模型4種方法[11-13]。本實(shí)驗(yàn)選擇野百合堿誘導(dǎo)引起肺血管內(nèi)皮損傷、血管重構(gòu)，導(dǎo)致肺血管阻力增加，這與課題組研究人肺動(dòng)脈高壓發(fā)病的病理生理機(jī)制類似，由細(xì)胞、炎性介質(zhì)等多種因素相互作用引起PAH[14]。故本實(shí)驗(yàn)采用野百合堿誘導(dǎo)兔的肺動(dòng)脈高壓模型，在保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)M病理機(jī)制的同時(shí)，也可同時(shí)觀察白藜蘆醇干預(yù)藥物的作用機(jī)制和效果，為后期動(dòng)物機(jī)制的研究提供足夠的保證。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在B超檢查中，PAH組右心室壁增厚，主動(dòng)脈擴(kuò)張，心肌細(xì)胞增厚，排列紊亂。心肌細(xì)胞HE與Tunnel染色顯示，心肌細(xì)胞凋亡增加，符合肺動(dòng)脈高壓的病理學(xué)特征：肺動(dòng)脈內(nèi)膜增生、中膜肥厚及特征性叢樣病變，重構(gòu)的肺動(dòng)脈周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯[15]。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)得的3種因子在PAH的形成中有著緊密的聯(lián)系。NF-κB是一種參與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的重要轉(zhuǎn)錄因子，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物參與PAH的形成。有研究表明，肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活性增加，可抑制血管活性物質(zhì)前列環(huán)素的表達(dá)[16]。并且NF-κB本身也可被低氧環(huán)境激活，其激活可抑制肺血管平滑肌細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)其增殖，導(dǎo)致肺血管重構(gòu)。肺血管結(jié)構(gòu)重構(gòu)的重要組成部分中，膠原量的改變和分布形式的變化是其改變的關(guān)鍵因素之一[17]。而Ⅰ型膠原蛋白和前膠原的mNRA的增加，能調(diào)控膠原降解的金屬蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1，MMP-1）和金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1）表達(dá)失調(diào)，并且TIMP-1 mRNA表達(dá)的升高幅度明顯高于MMP-1[17]。TNF-α能增加肺血管的反應(yīng)性，減少肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞前列腺素的合成，誘導(dǎo)肺血管收縮[18]。環(huán)氧合酶是前列腺素合成初始步驟中的關(guān)鍵限速酶，在PAH形成中出現(xiàn)COX-2水平相應(yīng)的增高[19]。iNOS是一種關(guān)鍵限速酶，在生理狀態(tài)下表達(dá)量少，而在缺氧等病理狀態(tài)下可以出現(xiàn)表達(dá)的異常升高，從而促進(jìn)NO的過(guò)度產(chǎn)生，過(guò)量的NO與氧自由基相結(jié)合，生成過(guò)氧亞硝酸鹽，通過(guò)其細(xì)胞毒性作用引起組織損傷[20]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PAH組各因子的濃度與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所測(cè)得的3種因子在整個(gè)測(cè)定的時(shí)間段內(nèi)與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，每組數(shù)據(jù)與對(duì)照組相對(duì)比均處于高值，表明3種因子在PAH中具有一定特異性。分組對(duì)比結(jié)果顯示，NF-κB的最佳測(cè)定時(shí)間是第4周，此時(shí)特異性最明顯。本研究結(jié)果表明，NF-κB、COX-2、iNos在模型組動(dòng)物的血清中有明顯表達(dá)；在正常動(dòng)物的血清中只有極少量的表達(dá)；高、中劑量的受試藥物能夠抑制血清中NF-κB、COX-2、iNos的分泌。陽(yáng)性對(duì)照藥物（前列腺環(huán)素）是治療骨PAH的改善病情藥物。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，受試藥物抑制血清中分泌NF-κB、COX-2、iNos的能力優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物。白藜蘆醇是否有前列腺環(huán)素相同或更好的作用，有待進(jìn)一步研究。PAH機(jī)制十分復(fù)雜，早期癥狀不明顯，但是各細(xì)胞因子之間的具體作用機(jī)制、白藜蘆醇在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病過(guò)程中的活化過(guò)程仍需進(jìn)一步探索。

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（童穎丹 編輯）

Effect of resveratrol on expression of inflammatory factors related to pulmonary arterial hypertension in rabbits*

Xiang Wu,Yao-hua Hu,Hong-yu Xing,Cai-ling Zheng,Shu-wei Zhuo,Ge Gao
(Clinical Laboratory,Hainan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Haikou,Hainan 570203,China)

Objective To investigate the effect of resveratrol on the expression of related cytokines in lung tissue of pulmonary arterial hypertension(PAH)rabbits,and to explore their roles in the pathogenesis of PAH. Methods Thirty-six New Zealand rabbits were randomly divided into six groups.In the model control group (group A),the rabbits were subcutaneously injected with DMSO(30 mg/kg).To build the pulmonary arterial hypertension(PAH)model,after one week of adaptive feeding in the experimental group,the rabbits had subcutaneous injection of monocrotaline(MCT,30 mg/kg)for 7 consecutive days.Then the PAH model animals were randomly divided into 5 groups:model group(group B),positive drug control group(group C),high-dose group(group D1),midium-dose group(group D2),low-dose group(group D3)with 6 in each group.On the45th day after injection,ultrasonic examination and myocardial cell observation after HE staining and tunnel staining were used to make sure the success of modeling.After successful modeling,the dosage of drug was calculated according to body weight.The rabbits in the groups D1,D2 and D3 were fed with 120 mg/(kg·d) (high dose),60 mg/(kg·d)(midium dose)and 30 mg/(kg·d)(low dose)of resveratrol respectively;prostacyclin 1 mg/(kg·d)was used to feed the rabbits in the positive drug control group,once a day for 6 week.The changes of food intake,activity,hair color,and urine and feces were observed daily,the rabbits were weighed weekly.Peripheral blood samples were randomly collected from each group every 2 weeks.ELISA kits were used to detect serum levels of transcription factor kappa B(NF-κB),cyclooxygenase-2(COX-2)and inducible nitric oxide synthase(iNOS)respectively.Results The serum levels of NF-κB,COX-2 and iNOS were significantly improved after resveratrol intervention in the PAH rabbits,and the effect in the high-dose group was better than that in the positive control group.And among the three indicators NF-κB had the most obvious specificity.Conclusions Resveratrol inhibits serum levels of NF-κB,COX-2 and,iNOS,which is better than that of the prostacyclin.Resveratrol can prevent cell damage and improve symptoms of PAH by inhibiting the NF-κB/iNOS/COX-2 pathway,which is the same as or better than the effect of prostacyclin.

pulmonary arterial hypertension;resveratrol;cytokine

R544.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.23.003

1005-8982（2016）23-0010-06

2016-05-17

海南省衛(wèi)生計(jì)生行業(yè)科研項(xiàng)目（No：14A200026）

高戈，E-mail：ggboxy@163.com