李鵬飛，馮葆欣，張衛(wèi)英，楊星雅

常規(guī)運(yùn)動生化血液分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

李鵬飛，馮葆欣，張衛(wèi)英，楊星雅

目的：使用運(yùn)動員定值新鮮血建立常規(guī)血細(xì)胞分析儀和血生化分析儀的輔助校準(zhǔn)方法。方法：根據(jù)比較實(shí)驗(yàn)的不同，總計(jì)采集213例(男155，女58)健將級及以上級別男、女運(yùn)動員靜脈血，取抗凝新鮮全血和混合血清。1)采血2 h內(nèi)以參加全國室間質(zhì)評工作的DIFF2血細(xì)胞分析儀作為參考儀器，給運(yùn)動員抗凝新鮮全血定值，用新鮮抗凝全血輔助校準(zhǔn)GEN.S血細(xì)胞分析儀，并通過重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和離群值檢驗(yàn)與參考儀器比對WBC、RBC、HGB、HCT、PLT等5個血細(xì)胞參數(shù)；2)取血4 h內(nèi)以參加全國室間質(zhì)評工作的7020生化分析儀作為參比儀器，把7020生化分析儀校準(zhǔn)品的量值傳遞給1份混合運(yùn)動員血清(由10份運(yùn)動員新鮮血清等量混合而成)，用新鮮混合血清輔助校準(zhǔn)MD-100生化分析儀，并通過重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和線性范圍檢驗(yàn)與參比儀器比較血清BUN、CK參數(shù)。結(jié)果：1)使用定值的新鮮抗凝全血輔助校準(zhǔn)GEN.S血細(xì)胞分析儀后，重復(fù)性比對實(shí)驗(yàn)的5個血細(xì)胞參數(shù)的CV%值分別為1.4、0.6、0.4、0.6、2.3，符合測試精密度范圍要求；偏差比對實(shí)驗(yàn)的5個血細(xì)胞參數(shù)的偏倚值(靶值±%)分別為-0.4、-0.5、1.8、-0.7、-4.1(男)和1.3、-0.8、1.5、-0.8、-4.2(女)，遠(yuǎn)小于血細(xì)胞分析儀的最大允許誤差范圍；離群值比對實(shí)驗(yàn)顯示，5個血細(xì)胞參數(shù)的異常高值離群值和異常低值離群值與參考儀器相比，沒有出現(xiàn)顯著差異(P>0.01)和偏離正態(tài)分布；2)使用定值的新鮮混合血清輔助校準(zhǔn)MD-100血生化分析儀后，重復(fù)性比對實(shí)驗(yàn)的血清BUN、CK參數(shù)的CV%值分別為0.92、1.22，符合測試精密度范圍要求；偏差比對實(shí)驗(yàn)的血清BUN參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.2，血清CK參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.9(男)、3.5(女)，遠(yuǎn)小于血生化分析儀的最大允許誤差范圍；線性范圍比對實(shí)驗(yàn)顯示，與參考儀器比較，血清CK高值的非線性拐點(diǎn)在1 000 U/L附近。結(jié)論：1)使用控制時(shí)間的定值新鮮抗凝全血是建立運(yùn)動生化常規(guī)血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法；2)使用控制時(shí)間的運(yùn)動員新鮮混合血清是建立常規(guī)血生化分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法。建議：1)在GEN.S輔助校準(zhǔn)后，對高水平運(yùn)動員血細(xì)胞參數(shù)離群值的甄別還需擴(kuò)大檢測范圍，并結(jié)合個體運(yùn)動訓(xùn)練背景進(jìn)行綜合判斷；2)對MD-100輔助校準(zhǔn)后，對高水平運(yùn)動員大于1 000 U/L的血清CK高值的檢測可以采用樣本倍比稀釋使數(shù)值回落在線性范圍內(nèi)的方法。

運(yùn)動生化；血液分析儀；校準(zhǔn)方法

1 研究目的

實(shí)驗(yàn)室常用DIFF2和GEN.S血細(xì)胞分析儀檢測運(yùn)動員血細(xì)胞指標(biāo)反映攜氧和恢復(fù)能力，常用7020和MD-100生化分析儀檢測運(yùn)動員血清肌酸激酶(CK)和尿素氮(BUN)指標(biāo)反饋訓(xùn)練負(fù)荷強(qiáng)度和負(fù)荷量。上述部分儀器有推薦的校準(zhǔn)品，但普遍存在有效期短、進(jìn)口試劑價(jià)格昂貴、預(yù)訂和運(yùn)輸時(shí)間長等問題，而且,在非奧運(yùn)會備戰(zhàn)周期沒有大量測試任務(wù)但又必須保證每日常規(guī)儀器間比對的嚴(yán)格質(zhì)量控制時(shí)，建立其他輔助的、可信賴的校準(zhǔn)方法顯得尤為迫切、重要。

綜合國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)新推薦指南和實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)踐探索，一般認(rèn)為，定值新鮮血是生化實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)多系統(tǒng)、多儀器的最佳輔助校準(zhǔn)品。因此，本研究擬通過使用運(yùn)動員定值新鮮血建立常規(guī)運(yùn)動生化血液分析儀的輔助校準(zhǔn)方法。

2 研究對象與方法

2.1 研究對象

健將級及以上級別運(yùn)動員，男155人，年齡23±3歲，身高176±4.28 cm，體重71±5.10 kg。女58人，年齡21±3歲，身高166.5±2.69 cm，體重61.4±4.98 kg(由于測試參數(shù)不同，各實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)樣本量并不完全一致)。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 儀器

貝克曼庫爾特公司DIFF2血細(xì)胞分析儀、貝克曼庫爾特公司GEN.S血細(xì)胞分析儀、日立公司7020生化分析儀、美國MD公司MD-100生化分析儀。

2.2.2 試劑

貝克曼庫爾特4C-ES細(xì)胞質(zhì)控品、上海榮盛公司BUN試劑、科華公司CK試劑、羅氏C.F.A.S質(zhì)控及校準(zhǔn)品、EDTAK2 4 mL和2 mL真空抗凝管、3ml真空促凝管。

2.2.3 質(zhì)量控制

1.操作規(guī)程

嚴(yán)格按照“質(zhì)控和校準(zhǔn)品準(zhǔn)備、開機(jī)前檢查、測試前保養(yǎng)、質(zhì)控和校準(zhǔn)、常規(guī)操作、測試后維護(hù)、關(guān)機(jī)程序”的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.測試人員

儀器固定人員，熟練掌握操作流程和評價(jià)規(guī)則，實(shí)驗(yàn)中任一校準(zhǔn)方法確保為同一人開展取血和上機(jī)操作。

3.EQA控制

參比儀器連續(xù)8年獲得衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評價(jià)證書以確保系統(tǒng)誤差可檢驗(yàn)。

4.時(shí)間控制

分為血細(xì)胞分析儀的時(shí)間控制和血生化分析儀的時(shí)間控制。

2.2.4 方法

1.常規(guī)血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

以參加全國室間質(zhì)評(external quality assessment，EQA)的DIFF2血細(xì)胞分析儀作為參考儀器，控制時(shí)間內(nèi)給運(yùn)動員抗凝新鮮全血定值，以新鮮全血輔助校準(zhǔn)GEN.S血細(xì)胞分析儀，并通過重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和離群值檢驗(yàn)與參考儀器比對白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、血小板(PLT)等5個血細(xì)胞參數(shù)。

DIFF2血細(xì)胞分析儀的質(zhì)控：選擇貝克曼DIFF2血細(xì)胞分析儀作為參考儀器，使用配套貝克曼4C-ES細(xì)胞質(zhì)控品進(jìn)行低、中、高3個水平的室內(nèi)質(zhì)量控制。定期參加衛(wèi)生部臨檢中心的血常規(guī)項(xiàng)目EQA工作，確保儀器測試結(jié)果的精密度。

血細(xì)胞分析儀的時(shí)間控制：取一份靜脈血4 mL置于EDTAK2真空抗凝管中并混勻，分別于采血后室溫0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h在血細(xì)胞分析上重復(fù)測定WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個參數(shù)，每個時(shí)間點(diǎn)重復(fù)5次，總計(jì)35次。觀察變化規(guī)律并結(jié)合文獻(xiàn)，確定下面血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)方法的各項(xiàng)各次實(shí)驗(yàn)均控制在采血后2 h內(nèi)完成。

2.常規(guī)血生化分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

以參加全國室間質(zhì)評的7020生化分析儀作為參考儀器，控制時(shí)間內(nèi)把7020生化分析儀C.F.A.S校準(zhǔn)品的量值傳遞給1份混合運(yùn)動員血清(由10份運(yùn)動員新鮮血清等量混合而成)，以此輔助校準(zhǔn)MD-100生化分析儀，并通過重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和線性范圍檢驗(yàn)與參考儀器比對血清BUN、CK參數(shù)。

7020生化分析儀的校準(zhǔn)及質(zhì)控：按儀器操作程序進(jìn)行7020生化分析儀的維護(hù)、保養(yǎng)工作，開機(jī)自檢儀器處于良好狀態(tài)后，采用羅氏公司的C.F.A.S校準(zhǔn)品和質(zhì)控品進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)、質(zhì)控工作。定期參加衛(wèi)生部臨檢中心的血BUN、CK項(xiàng)目EQA工作，確保儀器測試結(jié)果的精密度。

血生化分析儀的時(shí)間控制：在血細(xì)胞分析儀時(shí)間控制的同時(shí)取一份靜脈血3 mL置于真空促凝管中并離心，分別于取血后室溫7個時(shí)間點(diǎn)在血生化分析上重復(fù)測定血尿素(BUN)和血肌酸激酶(CK)35次。觀察變化規(guī)律并結(jié)合文獻(xiàn)，確定以下血生化分析儀輔助校準(zhǔn)方法的各項(xiàng)、各次實(shí)驗(yàn)均控制在取血后4 h內(nèi)完成。

輔助校準(zhǔn)的線性范圍檢驗(yàn)：以7020測定結(jié)果為橫坐標(biāo)，MD-100測定結(jié)果為縱坐標(biāo)做散點(diǎn)圖和直線回歸，對運(yùn)動員特殊群體高值CK測定結(jié)果進(jìn)行線性范圍檢驗(yàn)。

2.2.5 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 常規(guī)血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

3.1.1 DIFF2血細(xì)胞分析儀參加EQA的結(jié)果

圖1顯示，2013年實(shí)驗(yàn)室DIFF2血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞項(xiàng)目參加室間質(zhì)評的性能評價(jià)為滿意和成功。

圖 1 DIFF2血細(xì)胞分析儀參加室間質(zhì)評的結(jié)果(2013)示意圖

3.1.2 血細(xì)胞分析儀的時(shí)間控制

圖2顯示，采血后7個時(shí)間點(diǎn)在血細(xì)胞分析上重復(fù)測定WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個參數(shù)，各參數(shù)變化規(guī)律不盡相同。有臨床文獻(xiàn)報(bào)道了時(shí)間溫度控制對血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的影響并闡述原因，因?qū)嶒?yàn)室條件迥異各研究結(jié)論不盡相同。由于沒有離心等步驟，以圖2并參考文獻(xiàn)，下文建立血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)方法的各項(xiàng)各次實(shí)驗(yàn)都嚴(yán)格控制在采血后2 h內(nèi)完成。

3.1.3 新鮮抗凝全血重復(fù)性檢驗(yàn)

DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定同一份新鮮抗凝全血的重復(fù)性檢驗(yàn)結(jié)果見圖3、表1。

圖 2 血細(xì)胞分析儀的時(shí)間控制結(jié)果曲線圖

圖 3 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定同一份新鮮抗凝全血5項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)的比較結(jié)果曲線圖

DIFF2GEN．SX±SDCV%X±SDCV%WBC(×109/L)5．60±0．101．05．70±0．101．4RBC(×1012/L)4．48±0．061．24．53±0．030．6HGB(g/L)140．00±1．000．8145．00±1．000．4HCT(%)42．30±0．601．442．60±0．300．6PLT(×109/L)141．00±4．003．0149．00±3．002．3

血細(xì)胞分析儀廠家有規(guī)定的各血細(xì)胞參數(shù)精密度值(表2)。圖3、表1的結(jié)果和表2相比，DIFF2和校準(zhǔn)后的GEN.S各參數(shù)的變異系數(shù)均在廠家規(guī)定的范圍內(nèi)，表明輔助校準(zhǔn)后兩種儀器的測試準(zhǔn)確度一致，具備了進(jìn)行比對驗(yàn)證的必要條件。另外，PLT參數(shù)由于自動分析過程中受影響因素較多，因此變異系數(shù)范圍變化較大。

3.1.4 男子運(yùn)動員血細(xì)胞各參數(shù)偏差檢驗(yàn)

DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員血細(xì)胞各參數(shù)的偏差檢驗(yàn)結(jié)果見圖4～圖8、表3。

表 2 血細(xì)胞分析儀各參數(shù)精密度值

3.1.5 女子運(yùn)動員血細(xì)胞各參數(shù)偏差檢驗(yàn)

DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員血細(xì)胞各參數(shù)的偏差檢驗(yàn)結(jié)果見圖9～圖13、表4。

血細(xì)胞分析儀的美國CLIA'88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求，如表5所示。圖4～圖13、表3、表4的結(jié)果和表5相比，DIFF2和校準(zhǔn)后的GEN.S各血細(xì)胞參數(shù)的偏差值遠(yuǎn)低于規(guī)定的最大允許誤差范圍，表明輔助校準(zhǔn)后兩種儀器的測試正確度一致，滿足了比對驗(yàn)證的質(zhì)量要求。另外，PLT參數(shù)允許范圍變化較大，說明保證不同系列血液分析儀PLT測定結(jié)果一致性具有一定難度。

圖 4 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員白細(xì)胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 5 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員紅細(xì)胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 6 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員血紅蛋白的比對結(jié)果柱狀圖

圖 7 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員紅細(xì)胞壓積的比對結(jié)果柱狀圖

圖 8 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定男子運(yùn)動員血小板的比對結(jié)果

血細(xì)胞參數(shù)DIFF2(X±SD)GEN．S(X±SD)偏差%rWBC(×109/L)6．51±1．326．48±1．29-0．40．99RBC(×1012/L)4．95±0．314．93±0．33-0．50．98HGB(g/L)153．00±10．00155．00±9．001．80．97HCT(%)45．90±2．1045．60±2．30-0．70．96PLT(×109/L)222．00±44．00213．00±40．00-4．10．94

圖 9 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員白細(xì)胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 10 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員紅細(xì)胞的比對結(jié)果柱狀圖

圖 11 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員血紅蛋白的比對結(jié)果柱狀圖

圖 12 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員紅細(xì)胞壓積的比對結(jié)果柱狀圖

圖 13 DIFF2和輔助校準(zhǔn)后的GEN.S測定女子運(yùn)動員血小板的比對結(jié)果柱狀圖

血細(xì)胞參數(shù)DIFF2(X±SD)GEN．S(X±SD)偏差%rWBC(×109/L)5．73±1．285．81±1．301．30．99RBC(×1012/L)4．31±0．284．28±0．27-0．80．98HGB(g/L)131±8133±71．50．97HCT(%)39．9±2．539．6±2．3-0．80．98PLT(×109/L)218±45209±41-4．20．95

表 5 美國CLIA'88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求

3.1.6 運(yùn)動員5項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)離群檢驗(yàn)

表 6 兩種血細(xì)胞分析儀測定運(yùn)動員5項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)的離群值檢驗(yàn)

3.1.7 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采血2 h內(nèi)，使用定值的新鮮抗凝全血輔助校準(zhǔn)GEN.S血細(xì)胞分析儀后，重復(fù)性比對實(shí)驗(yàn)的5個血細(xì)胞參數(shù)的CV%值分別為1.4、0.6、0.4、0.6、2.3，符合測試精密度范圍要求。偏差比對實(shí)驗(yàn)的5個血細(xì)胞參數(shù)偏倚值(靶值±%)分別為：男子運(yùn)動員-0.4、-0.5、1.8、-0.7、-4.1；女子運(yùn)動員1.3、-0.8、1.5、-0.8、-4.2(女)，遠(yuǎn)小于血細(xì)胞分析儀的最大允許誤差范圍。離群值比對實(shí)驗(yàn)顯示，5個血細(xì)胞參數(shù)的異常高值離群值和異常低值離群值與參考儀器DIFF2相比，沒有出現(xiàn)顯著差異(P>0.01)和偏離正態(tài)分布。

表 7 血細(xì)胞參數(shù)的臨床參考區(qū)間

3.2 常規(guī)血生化分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

3.2.1 7020血生化分析儀參加EQA的結(jié)果

圖14顯示，2013年測試中心7020血生化分析儀尿素和肌酸激酶項(xiàng)目參加室間質(zhì)評的性能評價(jià)為通過。

圖 14 7020血生化分析儀參加室間質(zhì)評的結(jié)果(2013)示意圖

3.2.2 血生化分析儀的時(shí)間控制

圖15顯示，取血后7個時(shí)間點(diǎn)在血生化分析上重復(fù)測定BUN/CK參數(shù)，8 h后CK活性呈現(xiàn)明顯下降趨勢。血樣本放置時(shí)間和方式對不同生化指標(biāo)檢測結(jié)果的影響也有大樣本臨床報(bào)道和原因分析，雖然測試儀器不同不利于統(tǒng)一評定，但一般傾向于審慎觀點(diǎn)，本文不在此重點(diǎn)討論。由于增加離心等步驟，以圖15并結(jié)合文獻(xiàn)，建立血生化分析儀輔助校準(zhǔn)方法的各項(xiàng)、各次實(shí)驗(yàn)都嚴(yán)格控制在取血后4 h內(nèi)完成。

3.2.3 新鮮混合血清重復(fù)性檢驗(yàn)

7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定同一份新鮮混合血清的重復(fù)性檢驗(yàn)結(jié)果見圖16、表8。

圖 15 本研究血生化分析儀的時(shí)間控制結(jié)果曲線圖

圖 16 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定同一份新鮮混合血清BUN、CK的比較結(jié)果曲線圖

7020MD-100X±SDCV%X±SDCV%BUN(mmol/L)6．16±0．060．986．19±0．060．92CK(U/L)164±2．121．29168±2．041．22

血生化分析儀廠家有規(guī)定的血清BUN、CK參數(shù)精密度值(表9)。表8的結(jié)果和表9相比，7020和校準(zhǔn)后的MD-100血清BUN、CK的變異系數(shù)均在廠家規(guī)定的范圍內(nèi)，表明輔助校準(zhǔn)后兩種儀器的測試準(zhǔn)確度一致，具備了進(jìn)行比對驗(yàn)證的必要條件。

3.2.4 運(yùn)動員血清尿素氮偏差檢驗(yàn)

7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定運(yùn)動員血清BUN的偏差檢驗(yàn)結(jié)果見圖17、表10。

3.2.5 男、女運(yùn)動員血清肌酸激酶偏差檢驗(yàn)

7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定男、女運(yùn)動員血清CK的偏差檢驗(yàn)結(jié)果見圖18、圖19和表10。

表 9 血生化分析儀BUN、CK參數(shù)精密度值

圖 17 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定運(yùn)動員血清BUN的比對結(jié)果柱狀圖

7020(X±SD)MD?100(X±SD)偏差%rBUN(mmol/L)5．89±1．575．90±1．610．20．9967CK(U/L，男)485．82±380．06490．19±379．280．90．9981CK(U/L，女)200．31±199．66207．36±200．443．50．9992

圖 18 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定男子運(yùn)動員血清CK的比對結(jié)果柱狀圖

圖 19 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定女子運(yùn)動員血清CK的比對結(jié)果柱狀圖

血生化分析儀的美國CLIA'88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求如表11所示。圖17～圖19、表10的結(jié)果和表11相比，7020和校準(zhǔn)后的MD-100 測定血清BUN、CK的偏差值遠(yuǎn)低于規(guī)定的最大允許誤差范圍，表明輔助校準(zhǔn)后兩種儀器的測試正確度一致，滿足了比對驗(yàn)證的質(zhì)量要求。

表 11 美國CLIA'88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求

3.2.6 男、女運(yùn)動員血清肌酸激酶線性范圍檢驗(yàn)

7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定男、女運(yùn)動員血清CK的線性范圍檢驗(yàn)結(jié)果見圖20、21。血清酶比色法BUN和CK的線性范圍及相關(guān)系數(shù)要求如表12所示。表10的結(jié)果和表12相比，BUN測定范圍在線性范圍內(nèi)，不再作散點(diǎn)圖和線性回歸分析。如圖20、圖21顯示，7020和校準(zhǔn)后的MD-100測定運(yùn)動員血清CK在1 000 U/L左右有偏離線性關(guān)系的趨勢，這可能和CK>1 000 U/L以上的測定數(shù)值例數(shù)較少(男6例，女1例)有關(guān)，但也可初步看出，輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定CK的線性范圍較窄。

圖 20 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定男子運(yùn)動員血清CK的線性范圍檢驗(yàn)示意圖

圖 21 7020和輔助校準(zhǔn)后的MD-100測定女子運(yùn)動員血清CK的線性范圍檢驗(yàn)示意圖

血清參數(shù)線性范圍相關(guān)系數(shù)BUN(mmol/L)0～50．0≥0．990CK(U/L，37℃)0～2000≥0．990

3.2.7 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，取血4 h內(nèi)，使用賦值的新鮮混合血清輔助校準(zhǔn)MD-100血生化分析儀后，重復(fù)性比對實(shí)驗(yàn)的血清BUN、CK參數(shù)的CV%值分別為0.92、1.22，符合測試精密度范圍要求。偏差比對實(shí)驗(yàn)的血清BUN參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.2，血清CK參數(shù)的偏倚值(靶值±%)為0.9(男)、3.5(女)，遠(yuǎn)小于血生化分析儀的最大允許誤差范圍。線性范圍比對實(shí)驗(yàn)顯示，與參考儀器7020相比，血清CK高值的非線性拐點(diǎn)在1 000 U/L附近。

4 討論

運(yùn)動生化血液分析儀的校準(zhǔn)品是用于校準(zhǔn)血液分析儀的物質(zhì)，應(yīng)具有穩(wěn)定且可溯源的特點(diǎn)，以保證檢測結(jié)果的正確性，通常使用與儀器配套的商品化校準(zhǔn)品。對于校準(zhǔn)品定值的來源，應(yīng)由新鮮血經(jīng)參考測量系統(tǒng)傳遞賦值，而且，最好是使用有溯源性的國際公認(rèn)參考方法標(biāo)定的健康人新鮮血，或按說明書要求用廠家的配套標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)，不應(yīng)由前批號的校準(zhǔn)品或其他廠商的校準(zhǔn)品傳遞。不同廠家或型號不配套的非新鮮血校準(zhǔn)物不能混用，更不能用全血質(zhì)控物校準(zhǔn)儀器。

4.1 常規(guī)血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

血細(xì)胞分析儀具有操作簡單、測定迅速、重復(fù)性高的特點(diǎn)而得到廣泛應(yīng)用。但有研究表明，在我國血細(xì)胞分析儀校準(zhǔn)方面存在的問題仍很突出，許多血細(xì)胞分析儀因沒有配套校準(zhǔn)物，而無法保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。為保證檢驗(yàn)質(zhì)量，ICSH對血細(xì)胞分析儀的考核，在細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定方面，要評價(jià)儀器測試樣本的變異率、可比性和準(zhǔn)確性等；在白細(xì)胞方面，要評價(jià)重復(fù)性、準(zhǔn)確性和對異常細(xì)胞的靈敏度；而血小板自動化分析過程中受影響因素較多，保證不同血細(xì)胞分析儀血小板測試結(jié)果一致相對具有難度。DIFF2血細(xì)胞分析儀配套校準(zhǔn)品4C-CAL和質(zhì)控品4C-ES，用該儀器定值的新鮮全血可以對其他血細(xì)胞分析儀進(jìn)行輔助校準(zhǔn)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，輔助校準(zhǔn)后的血細(xì)胞分析儀，WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5個常規(guī)血細(xì)胞參數(shù)符合重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和離群值檢驗(yàn)的比對要求，使用控制時(shí)間的運(yùn)動員定值新鮮抗凝全血是建立血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法。

4.2 常規(guī)血生化分析儀輔助校準(zhǔn)方法的建立

檢測準(zhǔn)確度是ICSH評價(jià)血生化分析儀最重要的性能指標(biāo)，包含正確度和精密度，由檢測儀器、試劑、校準(zhǔn)品等共同組成的檢測系統(tǒng)決定。7020生化分析儀，吸樣、吸試劑、混合、去干擾物、保溫、比色、檢測、結(jié)果計(jì)算和報(bào)告等實(shí)驗(yàn)操作步驟全部由儀器獨(dú)立完成，實(shí)現(xiàn)自動化，只需預(yù)先裝入樣品和試劑，通知儀器要檢測的項(xiàng)目即可。而MD-100生化儀，在比色之前的步驟(吸樣、吸試劑、混和)必須由人工完成，由于存有樣品和試劑的流動比色池難以清洗，導(dǎo)致檢測的準(zhǔn)確性和精密度可能不如前者高，在測試結(jié)果上可能會產(chǎn)生一定差異。在使用多臺分析設(shè)備的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，ICSH推薦可指定其中一臺儀器為“校準(zhǔn)器”或參比儀器，并用其對人新鮮血樣本進(jìn)行定值，再利用定值后的人血樣本校準(zhǔn)其他儀器，以保證結(jié)果的一致性和溯源性。

7020儀器配套羅氏校準(zhǔn)品的組合，測定結(jié)果具有可溯源性，是目前公認(rèn)較好的血生化檢測系統(tǒng)之一。用該系統(tǒng)量值傳遞后的新鮮血清的結(jié)果再去校準(zhǔn)其他檢測系統(tǒng)，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，能明顯改善某些酶的測定結(jié)果差異。一般認(rèn)為，新鮮混合血清是校準(zhǔn)系統(tǒng)的最佳校準(zhǔn)品。但是，新鮮混合血清作為臨時(shí)酶校準(zhǔn)品基質(zhì)效應(yīng)雖然最小，但并非完全沒有。特別是多項(xiàng)酶類測定時(shí)，由于影響因素眾多，最好在使用前先進(jìn)行臨時(shí)校準(zhǔn)品的多項(xiàng)檢驗(yàn)，避免盲目應(yīng)用影響測定的準(zhǔn)確度和正確度。同時(shí)在酶類測定時(shí)，還應(yīng)充分認(rèn)識校準(zhǔn)品與檢測系統(tǒng)配套的重要性，才能真正獲得滿意的測定結(jié)果。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，輔助校準(zhǔn)后的血生化分析儀，BUN和CK兩個常規(guī)運(yùn)動生化血清參數(shù)符合重復(fù)性檢驗(yàn)、偏差檢驗(yàn)和離群值檢驗(yàn)的比對要求。因此，使用控制時(shí)間的運(yùn)動員定值新鮮混合血清是建立血生化分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法。

5 結(jié)論與建議

從室間質(zhì)評到重復(fù)性檢驗(yàn)、再到偏差檢驗(yàn)，完成儀器輔助校準(zhǔn)的同時(shí)證明了測試數(shù)據(jù)的可溯源性、可比對性。其中，室間質(zhì)評的高性能是輔助校準(zhǔn)方法的充分條件；重復(fù)性準(zhǔn)確度檢驗(yàn)的高性能是輔助校準(zhǔn)方法的必要條件；而偏差正確度檢驗(yàn)的高性能滿足了輔助校準(zhǔn)方法的質(zhì)量要求；并且離群值和線性范圍檢驗(yàn)的高性能，滿足了輔助校準(zhǔn)方法對于測試運(yùn)動員特殊群體參數(shù)異常高、低值的質(zhì)量要求。

結(jié)論1：使用控制時(shí)間的定值新鮮抗凝全血是建立運(yùn)動生化常規(guī)血細(xì)胞分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法。

結(jié)論2：使用控制時(shí)間的運(yùn)動員新鮮混合血清是建立常規(guī)血生化分析儀輔助校準(zhǔn)的可靠方法。

建議1：在GEN.S輔助校準(zhǔn)后，對高水平運(yùn)動員血細(xì)胞參數(shù)離群值的甄別還需擴(kuò)大檢測范圍，并結(jié)合個體運(yùn)動訓(xùn)練背景進(jìn)行綜合判斷。

建議2：對MD-100輔助校準(zhǔn)后，對高水平運(yùn)動員大于1 000 U/L的血清CK高值的檢測可以采用樣本倍比稀釋使數(shù)值回落在線性范圍內(nèi)的方法。

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The Building of an Aided Calibration Method for Routine Sports Biochemistry Blood Analyzers

LI Peng-fei，F(xiàn)ENG Bao-xin，ZHANG Wei-ying，YANG Xing-ya

Objective：To build an aided calibration method for routine hematology analyzers and biochemistry analyzers by fresh blood specimens from athletes.Methods：1) Sample of fresh whole blood from athlete was measured in 2 hours by DIFF2 hematology analyzer,an reference instrument participating the EQA program,then used to calibrate GEN.S hematology analyzer.The RBC,HGB,HCT,MCV and PLT counting of 155 male athletes and 58 female athletes were compared between the two hematology analyzers on repeatability test,bias test and outlier test.2) A pooled serum from balanced mix of ten athletes fresh serum was measured in 4 hours by 7020 biochemistry analyzer,an reference instrument participating the EQA program,then used to calibrate MD-100 biochemistry analyzer.The serum level of BUN & CK of 100 male athletes and 26 female athletes were compared between the two biochemistry analyzers on repeatability test,bias test and linearity range test.Results：1) After the aided calibration for DIFF2 hematology analyzer,the repeatability test showed that the coefficients of variation (CV)% of five hematological parameters were 1.4,0.6,0.4,0.6 and 2.3,beyond the degree of precision.The bias test showed that the bias value of five hematological parameters were respectively 0.4 minus,0.5,1.8,0.7 minus and 4.1 minus in male group and 1.3,0.8,1.5,0.8 minus,4.2 minus in female group，lower than the maximum permissible error.The outlier test showed that there was no significant difference in abnormally low or high value of five hematological parameters between the two hematology analyzers.2) After the aided calibration for MD-100 biochemistry analyzer,the repeatability test showed that the CV% of the serum level of BUN & CK were 0.92 and 1.22,beyond the degree of precision.The bias test showed that the bias value of the serum level of BUN was 0.2,and that of the serum level of CK was respectively 0.9 in male group and 3.5 in female group,lower than the maximum permissible error.The linearity range test showed that inflection point of the serum level of CK was 1000U/L.Conclusion：1) Application of athletes fresh whole blood for aided calibration of hematology analyzers is a reliable method.2) Application of athletes fresh pooled serum for aided calibration of biochemistry analyzers is a reliable method.It is proposed that the calibration method for hematology analyzers may be more helpful for the detecting athlete outliers in consideration of individual training background and that the calibration method for biochemistry analyzers can be more feasible to test the serum level of CK from athletes with sample dilution.

sportsbiochemistry；bloodanalyzer；calibrationmethod

1002-9826(2016)05-0136-10

10.16470/j.csst.201605019

2015-10-19；

2016-06-21

國家體育總局體育科學(xué)研究所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(基本13-27)。

李鵬飛(1977-)，男，山西晉城人，高級實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要研究方向?yàn)轶w育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室測試,Tel：(010)87182539，E-mail：lipengfei@ciss.cn。

國家體育總局體育科學(xué)研究所，北京 100061 China Institute of Sport Science，Beijing 100061，China.

G804.7

A