朱奎玲，張超良，徐闖，楊威，沈泰鈺，于洪江，張子揚(yáng)，許秋實(shí)，高三思

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，大慶 163319；2.河北省遵化市畜牧水產(chǎn)局）

酮粉法和血酮儀診斷奶牛酮病的效果評(píng)價(jià)

朱奎玲1，張超良2，徐闖1，楊威1，沈泰鈺1，于洪江1，張子揚(yáng)1，許秋實(shí)1，高三思1

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，大慶 163319；2.河北省遵化市畜牧水產(chǎn)局）

評(píng)價(jià)酮粉法和血酮儀法診斷奶牛酮病的性能。于某集約化牛場(chǎng)選取1～6胎次，產(chǎn)后7～21 d泌乳奶牛291頭，分別用血酮儀檢測(cè)血液β-羥丁酸含量和酮粉法檢測(cè)乳液，診斷奶牛酮病。結(jié)果表明：血酮儀法具有檢測(cè)準(zhǔn)確，檢測(cè)率高，但費(fèi)用較高，易受環(huán)境因素影響等特點(diǎn)，不適合集約化牛場(chǎng)大批量使用。酮粉法具有樣品采集簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，且具有較理想的檢測(cè)靈敏度等特點(diǎn)，適合奶牛群體酮病篩查診斷。酮粉法更適合大型牧場(chǎng)泌乳初期奶牛酮病的群體檢測(cè)，血酮儀可用于對(duì)疑似牛的確診性檢測(cè)。關(guān)鍵詞：奶牛；酮病；酮粉法；血酮儀；診斷

酮病是泌乳初期奶牛常見的一種營(yíng)養(yǎng)代謝病，且以3～6胎次高產(chǎn)母牛發(fā)病率較高[1]。酮病的發(fā)病率有逐年升高的趨勢(shì)。酮病奶牛通常表現(xiàn)食欲減退、精神沉郁、產(chǎn)奶量下降、體重下降、嚴(yán)重的引起昏迷甚至死亡。該病以低血糖、高酮體為病理特征，依據(jù)血液β-羥丁酸（BHBA）含量分為臨床型酮?。˙HBA＞1.5 mmol·L-1）和亞臨床型酮?。˙HBA=1.2 mmol·L-1～ 1.5 mmol·L-1）[2]。亞臨床酮病通常不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，據(jù)報(bào)道亞臨床酮病發(fā)病高達(dá)40%～60%，臨床酮病為2%～15%[3]。亞臨床酮病通常導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降、乳成分變化、病牛在1個(gè)泌乳期要少產(chǎn)1 000～1 500 kg奶，生殖性能降低、奶牛出現(xiàn)產(chǎn)后發(fā)情延遲，屢配不孕、皺胃變位或者引發(fā)臨床酮病，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，已受到各國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)者的高度重視[4]。因此定期對(duì)泌乳初期牛群實(shí)施快速、靈敏的酮病診斷措施，對(duì)牛群的健康評(píng)價(jià)、及時(shí)制定防治方法尤為重要[5]。

臨床常用奶牛酮病診斷方法主要是酮粉法、酮體試紙條、血酮儀檢測(cè)法、血液BHBA生化分析檢測(cè)法。目前公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)的、高靈敏的檢測(cè)方法是通過半自動(dòng)或全自動(dòng)生化分析儀血中BHBA含量確定酮病的嚴(yán)重程度，但檢測(cè)儀器及生化試劑盒價(jià)格昂貴，檢測(cè)程序復(fù)雜，而且血漿BHBA時(shí)效性強(qiáng)（BHBA有揮發(fā)性，要求采樣后2 h內(nèi)檢測(cè)完成），不利于生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用[6]。血酮儀檢測(cè)法主要通過檢測(cè)血液BHBA含量診斷酮病。該法具有靈敏度高，樣品需要量少，而且操作簡(jiǎn)便，且結(jié)果顯示快，可用于牛群的批量快速檢測(cè)。然而該法也具有檢測(cè)費(fèi)用高（約15元·樣本），且需要群體采血等不足。試紙條檢測(cè)法是通過檢測(cè)尿中或乳中的乙酰乙酸和β-羥基丁酸含量來作為判定奶牛是否患有酮病[7]。尿酮試紙條靈敏度在90%左右，但是，尿酮檢測(cè)的缺點(diǎn)是尿液采集困難，通過外陰刺激法只有40%左右的牛可以排尿。乳酮試紙條檢測(cè)與尿酮一樣，主要是檢測(cè)乳中乙酰乙酸，也可以檢測(cè)β-羥丁酸，但其敏感性和特異性均較低（60%左右），其優(yōu)點(diǎn)是采樣方便，且目前常用酮體試紙條多為進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格較昂貴，目前在國(guó)內(nèi)使用較少[8]。酮粉法檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、樣品需要量低，而且不必對(duì)檢驗(yàn)樣品進(jìn)行定量吸取，只需在少許粉劑上滴1～2滴被檢液即可，不需要使用試管等精密儀器。而且酮粉配置簡(jiǎn)單原料價(jià)格低，結(jié)果顯示快，便于攜帶使用簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，適用于規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)全群奶牛酮病檢驗(yàn)[9]。但目前普遍認(rèn)為酮粉法的檢測(cè)靈敏度低，然而未見酮粉法檢測(cè)奶牛酮病靈敏度評(píng)估的研究報(bào)告。因此，試驗(yàn)以血清BHBA含量作為檢測(cè)奶牛酮病的金標(biāo)準(zhǔn)，臨界值為血液中BHBA濃度在1.2～1.5 mmol·L-1之內(nèi)為亞臨床酮病，1.5 mmol·L-1以上為臨床型酮病[10]。對(duì)適用于集約化牛場(chǎng)的檢測(cè)方法血酮儀檢測(cè)法和酮粉檢測(cè)法進(jìn)行比較，以期在兩種檢測(cè)方法中篩選出一種準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單，在實(shí)際中可以廣泛應(yīng)用的酮病檢測(cè)方法。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)在黑龍江省某集約化牛場(chǎng)進(jìn)行，該牛場(chǎng)按照中國(guó)泌乳奶牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行規(guī)范管理，散欄式飼養(yǎng)，自由采食全混合日糧（TMR）。選取產(chǎn)后7～21 d，1～6胎次泌乳奶牛作為備選的試驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 試驗(yàn)儀器及試劑

北京雅培越佳（安妥）超越血酮儀（opium Exceed）。

配制酮粉所需材料：硫酸銨20 g、無水碳酸鈉10 g、亞硝基鐵氰化鈉0.5 g（研磨混勻，于棕色瓶中貯存，不宜過細(xì)）。均購自北京生化試劑有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的采集與處理對(duì)試驗(yàn)牛場(chǎng)產(chǎn)后7～21奶牛進(jìn)行全群采樣，于采集當(dāng)天中午榨乳時(shí)收集乳樣應(yīng)用酮粉法進(jìn)行檢測(cè)，中午采食時(shí)于尾根靜脈采集全血用于血酮儀檢測(cè)。

1.3.2 檢測(cè)血酮儀：血清樣品檢測(cè)時(shí)先將試紙條插入到血酮儀上，等待“進(jìn)血”字樣出現(xiàn)時(shí)，將抗凝管內(nèi)血樣觸碰到試紙條小口處，通過虹吸作用血樣進(jìn)入試紙條發(fā)生反應(yīng)，30 s后讀數(shù)。血酮儀檢測(cè)全血酮體含量（β-羥丁酸在1.2 mmol·L-1～1.4 mmol·L-1為亞臨床酮病，大于1.5 mmo·L-1為臨床酮?。┐_診酮病，結(jié)果如圖1所示。

圖1 血酮儀檢測(cè)結(jié)果Fig.1 The result of the blood ketone meter test

酮粉法檢測(cè)：取0.1 g已配好酮粉放到載波片上，加新鮮乳汁1～2滴，觀察顏色反應(yīng)并進(jìn)行判斷。如果呈現(xiàn)土褐色圖2a，則表示為陰性反應(yīng)；如果呈現(xiàn)紫色，則為陽性反應(yīng)，根據(jù)顏色深淺估算酮體含量，顏色越深含量越高（表1）。

2 結(jié)果

試驗(yàn)期間共檢測(cè)了產(chǎn)后7～21 d的奶牛291頭，每頭牛分別用血酮儀和酮粉法檢測(cè)，如表2所示，2014年12月份應(yīng)用血酮儀未檢測(cè)出酮病，而用酮粉法檢測(cè)出23頭患有酮病的奶牛；2015年1～2月份檢測(cè)的結(jié)果顯示血酮儀檢測(cè)結(jié)果酮病牛仍低于酮粉法檢測(cè)結(jié)果；2015年4～5月份血酮儀檢測(cè)酮病牛數(shù)量均高于酮粉法檢測(cè)。血酮儀與酮粉法對(duì)比結(jié)果如表3和圖2所示，其中血酮儀檢測(cè)BHBA大于1.5 mmol·L-1的臨床酮病牛（編號(hào)1024、1472、3109）酮粉法檢測(cè)均為陽性，但血酮儀檢測(cè)BHBA=1.4 mmol·L-1的兩頭亞臨床酮病牛（編號(hào)2063、2078）只有編號(hào)2063奶牛經(jīng)酮粉法檢測(cè)為弱陽性。4～5月份檢測(cè)結(jié)果顯示血酮儀共檢測(cè)亞臨床酮病11頭，其中4頭牛酮粉法檢測(cè)結(jié)果為陽性，表明酮粉法對(duì)亞臨床酮病的檢出率為36.4%。

表1 酮粉法檢測(cè)酮體結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 The judgement standard of the ketone powder method test result

表2 血酮儀與酮粉法檢測(cè)結(jié)果Table 2 The result of the ketone powder method and blood ketone meter test

表3 血酮儀檢測(cè)結(jié)果Table 3 The result of the blood ketone meter test

圖2 酮粉法檢測(cè)結(jié)果Fig.2 The result of the ketone powder method test

3 討論

泌乳初期奶牛酮病發(fā)病率的定期普查對(duì)規(guī)?；?chǎng)飼養(yǎng)管理尤為重要，目前酮粉法和血酮儀依然是規(guī)模化牛場(chǎng)普遍應(yīng)用的診斷酮病的方法。然而酮粉檢測(cè)靈敏度較低，但血酮儀檢測(cè)費(fèi)用高的思想一直制約牛群酮病定期普查的實(shí)施，為客觀評(píng)價(jià)上述兩種檢測(cè)方法的性能，試驗(yàn)共檢測(cè)產(chǎn)后7～21 d泌乳奶牛291頭，其中12～2月份檢測(cè)結(jié)果均為酮粉法檢出率高，而4～5月份為血酮儀檢出率高于酮粉法，其原因?yàn)闇囟葘?duì)血酮儀的影響。研究血酮儀均在牛舍中使用檢測(cè)，而試驗(yàn)牛場(chǎng)該季節(jié)牛舍4度左右，顯著影響血酮儀檢測(cè)性能。且試驗(yàn)期間通過對(duì)血酮儀進(jìn)行加溫處理后對(duì)同一份血樣的檢測(cè)結(jié)果明顯高于舍溫檢測(cè)值。因此建議血酮儀的溫度應(yīng)在10度以上，且采集的血液應(yīng)立即檢測(cè)，但研究未進(jìn)行高溫對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響的研究。試驗(yàn)于2015年春季檢測(cè)結(jié)果表明血酮儀檢測(cè)靈敏度高于酮粉法。血液BHBA含量大于1.5 mmol·L-1時(shí)酮粉法檢測(cè)均為陽性結(jié)果。研究結(jié)果顯示酮粉法對(duì)亞臨床酮病的檢出率為36.4%，然而該結(jié)果存在樣本量小等不足仍需進(jìn)行大量樣本檢測(cè)結(jié)果確證酮粉的檢測(cè)性能。

4 結(jié)論

綜上所述，酮粉法檢測(cè)乳樣酮體具有較高的靈敏度，取樣方便等優(yōu)點(diǎn)，可用于現(xiàn)場(chǎng)牛群酮病篩查。血酮儀檢測(cè)酮病的靈敏度高，但其檢測(cè)費(fèi)用大，易受外界因素影響。故酮粉法更適合大型牧場(chǎng)泌乳初期奶牛酮病的群體檢測(cè)，血酮儀可用于疑似牛的確診性檢測(cè)。

［1］T F Duffield，K D Lissemore，B W McBride，et al.Impact of hyperketonemia in early lactation dairy cows on health and production［J］.J.Dairy Sci.，2009，92（2）：571-580.

［2］何生虎，晁向陽，王明成.奶牛酮病的發(fā)病機(jī)理研究現(xiàn)狀及進(jìn)展［J］.草食家畜，2004，124（3）：15-17.

［3］Gordon J L，LeBlanc S J，Duffield TF.Ketosis treatment in lactating dairy cattle［J］.Vet Clin North Am Food Anim Pract，2013，29：433-445.

［4］McArt J A，Nydam D V，Oetzel G R.Epidemiology of subclinical ketosis in early lactation dairy cattle［J］.J.Dairy Sci.，2012（95）：5056-5066.

［5］Zhang Z G，Liu G W，Li X B，et al.β-hydroxybutyrate，glucose，calcium，phosphorus and vitamin C concentration in blood of dairy cows with subclinical ketosis during the early lactation［J］.Bull Vet Inst Pulawy，2009（53）：1-74.

［6］夏成，孫恒，武瑞，等.改良的水楊醛比色法檢測(cè)奶牛血酮，尿酮的研究［J］.吉林畜牧獸醫(yī)，2004（12）：13-15.

［7］劉仕軍，劉振華，王贊江，等.乳酮癥試紙條對(duì)奶牛酮病檢測(cè)的使用效果評(píng)價(jià)分析［J］.乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2011（3）：135-136.

［8］曹斌斌，曹希亮，曹杰.奶牛酮病的檢測(cè)，治療及預(yù)防措施淺談［J］.中國(guó)奶牛，2013（9）：29-32.

［9］邢思毅，倪宏波，周玉龍，等.牛群爆發(fā)口腔黏膜潰瘍類疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷［J］.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，27（4）：46-49.

［10］Ospina P A，Nydam D V，Stokol T，et al.Evaluation of nonesterified fatty acids and β-hydroxybutyrate in transition dairy cattle in the northeastern United States：critical thresholds for prediction of clinical diseases［J］.J.Dairy Sci.，2010（93）：546-554.

Effect Evaluation of Diagnose of Ketosis in Dairy Cattle by Ketone Powder Method and Blood Ketone Meter

Zhu Kuiling1，Zhang Chaoliang2，Xu Chuang1，Yang Wei1，Shen Taiyu1，Yu Hongjiang1，Zhang Ziyang1，Xu Qiushi1，Gao Sansi1
（1.College of Animal Science and Technology，Heilongjiang Bayi Agricultural University，Daqing 163319；
2.Zunhua Aquatic Animal Husbandry Bureauof Hebei Province）

The performance of ketone powder method and blood ketone meter for ketosis in dairy cows were evaluated.The tests used ketone powder method to test milk and ketone meter to test blood samples，respectively.1-6 parties，7-21 postpartum，291 cows were sampled for milk and blood in one intensive dairy farms.The results showed that accuracy diagnosis rate with blood ketone meter was high，but the fee in test would be large，influenced by outside factors easily，it did not suit for intensive farms used to detect ketosis.Ketone powder method testing was preferred，because of the easy obtainability of milk combined with the overall better test and cheaper than others，and ideal detection sensitivity characteristics.It suited for screening and diagnosis of ketosis in dairy cattle. So ketone powder method was more suitable for large ranch detection in early lactation，and blood ketone meter could be used to diagnose suspected cattle testing.

dairy cattle；ketosis；ketone powder method；blood ketone meter；diagnose

S858.23

A

1002-2090（2016）06-0039-04

10.3969/j.issn.1002-2090.2016.06.008

2015-10-20

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金（31372625、31001094）；黑龍江省教育廳黑龍江省高校新世紀(jì)優(yōu)秀人才項(xiàng)目（1252-NCET-003）；科技部科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2013BAD21B01）；科技部星火計(jì)劃（2012GA670001）。

朱奎玲（1989-）女，黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院2013級(jí)碩士研究生。

徐闖，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：xuchuang7175@163.com。