陳麗 廉姜芳 周建慶

前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9及其抑制劑的研究進(jìn)展

陳麗 廉姜芳 周建慶

前蛋白轉(zhuǎn)化酶（PCs）在維持人體的穩(wěn)態(tài)中起著重要作用，同時(shí)參與一系列病理生理過(guò)程。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（PCSK9）是PCs家族的重要成員之一，參與糖脂代謝,神經(jīng)系統(tǒng)的凋亡和分化，并在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用。同時(shí)，大量的基礎(chǔ)和臨床研究已證實(shí)，PCSK9抑制劑能明顯降低血LDL-C水平，從而減少心血管事件的發(fā)生?，F(xiàn)就PCSK9的研究成果，尤其在多種疾病中的功能作一綜述，并闡述PCSK9抑制劑的臨床研究進(jìn)展。

PCSK9 脂代謝 PCSK9抑制劑

前蛋白轉(zhuǎn)化酶（proproteinconvertases,PCs）是一類(lèi)鈣離子依賴(lài)的絲氨酸內(nèi)切酶，其基本功能是對(duì)前體蛋白的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)在位點(diǎn)進(jìn)行水解從而將其激活[1-3]。2003年Seidah等[3]首先發(fā)現(xiàn)了一種新的PCs成分，其主要在肝臟合成，前體由692個(gè)氨基酸組成，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裂變和自動(dòng)催化后合成可溶性酵素酶，繼而通過(guò)細(xì)胞的分泌通道被釋放到血液中，命名為神經(jīng)凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)換酶1（NARC1），是PCs家族新成員。同年Abifadel等[4]觀察到2例NARC1基因功能獲得性變異患者血膽固醇明顯升高和早發(fā)心血管死亡，發(fā)現(xiàn)這是除低密度脂蛋白受體(LDLR)、ApoB外，第三個(gè)與常染色體顯性家族性高膽固醇血癥相關(guān)的基因，此研究結(jié)果發(fā)表在Nature Genetics上，此后NARC1正式更名為前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（PCSK9）。已有大量研究證實(shí)PCSK9對(duì)血脂調(diào)節(jié)的影響，其與家族性高膽固醇血癥、冠心病、代謝綜合征等疾病密切相關(guān)。但近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9在神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腫瘤等疾病中也起到重要的作用。由此可見(jiàn)，對(duì)PCSK9的研究日趨深入和廣泛，因而有必要對(duì)PCSK9的研究進(jìn)展作一綜述。

1 PCSK9的結(jié)構(gòu)、分布及其表達(dá)調(diào)節(jié)

PCs家族在哺乳動(dòng)物中共有9個(gè)成員，它們是PC1/ 3、PC2、弗林蛋白酶（Furin）、PC4、PC5/6（含A和B兩個(gè)亞型）、PACE4和PC7以及兩個(gè)非堿性氨基酸特異性的轉(zhuǎn)化酶SK-1/S1P和NARC-1/PCSK9。NARC1/PCSK9是由PCSK9基因所編碼，由692個(gè)氨基酸構(gòu)成，屬于枯草蛋白酶中蛋白酶K亞家族的成員，基因定位于1p34.1-p32，全長(zhǎng)29kb，由12個(gè)外顯子構(gòu)成，編碼區(qū)約為2kb，其氨基酸序列可分為信號(hào)肽（1-30）、前片段（31-147）、催化域（148-425）、p2域和富含半胱氨酸的碳末端（526-692）幾個(gè)結(jié)構(gòu)域[5]。

PCSK9表達(dá)于肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、腎間質(zhì)細(xì)胞、小腸結(jié)腸上皮細(xì)胞和胚胎細(xì)胞等，其中對(duì)肝細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的增值、分化起到重要作用[6]。Labonte等[7]發(fā)現(xiàn)PCSK9可下調(diào)丙型病毒性肝炎受體，LDLR以及跨膜蛋白CD81。PCSK9對(duì)腎間質(zhì)細(xì)胞和腸細(xì)胞的調(diào)節(jié)缺乏相關(guān)報(bào)道。

2 PCSK9與脂質(zhì)代謝、動(dòng)脈粥樣硬化

已知冠心病與多種遺傳因素有關(guān)，尤其是參與脂代謝的多個(gè)基因在冠心病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，而血管內(nèi)皮下LDL-C的沉積是冠心病的主要病理基礎(chǔ)。近年研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9對(duì)膽固醇代謝有重要調(diào)節(jié)作用，并可能直接或間接的參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展[8]。Denis等[9]在高脂高膽固醇喂養(yǎng)的小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，PCSK9基因失活顯著降低主動(dòng)脈的膽固醇酯，PCSK9基因過(guò)表達(dá)促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。目前較為認(rèn)可的機(jī)制是PCSK9通過(guò)調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝進(jìn)而影響血脂從而間接參與動(dòng)脈粥樣硬化。正常代謝過(guò)程是LDL-C通過(guò)肝細(xì)胞LDLR的內(nèi)吞作用在溶酶體內(nèi)降解，LDLR重新循環(huán)至肝細(xì)胞表面再發(fā)揮降低LDL的作用。而PCSK9通過(guò)結(jié)合于肝細(xì)胞LDLR的表皮生長(zhǎng)因子（EGF）樣結(jié)構(gòu)域，與LDL共同內(nèi)化，抑制LDLR的釋放與返回細(xì)胞膜，誘導(dǎo)LDLR進(jìn)入溶酶體內(nèi)降解，導(dǎo)致細(xì)胞表面LDLR數(shù)量的減少，最終將導(dǎo)致血LDL-C的水平升高[10]。每個(gè)LDLR可再循環(huán)150次，因此PCSK9引起的LDLR的輕度下調(diào)可致LDL-C的巨大改變。

也有學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)低膽固醇激活細(xì)胞內(nèi)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2（SREBP-2），從而促進(jìn)LDLR基因的表達(dá)，使循環(huán)中的LDL-C減少。但與此同時(shí)SREBP-2也促進(jìn)PCSK9的表達(dá)，使LDLR下調(diào)，從而抑制肝膽固醇吸收并增加血循環(huán)中LDL-C[11-12]。然而B(niǎo)rown和Carious等[13-14]研究認(rèn)為PCSK9對(duì)血管壁的直接作用在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要影響，具體作用及機(jī)制仍不詳，有待于進(jìn)一步研究。有趣的是，在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中，PCSK9除調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝外，還可能參與炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮損傷、血流動(dòng)力學(xué)改變、糖代謝等病理生理過(guò)程[15-20]。

已發(fā)現(xiàn)PCSK9基因突變分為兩種類(lèi)型：功能缺失型和功能獲得型分別與低膽固醇血癥和高膽固醇血癥相關(guān)。功能獲得型突變可增強(qiáng)PCSK9上調(diào)LDL-C的能力，導(dǎo)致高膽固醇血癥，主要形式有S127R、D129G和E670G等[4,21]，功能缺失型突變可削弱或滅活PCSK9上調(diào)LDLC的能力，導(dǎo)致低膽固醇血癥，主要形式有R46L、G106R和C679X等,以攜帶Y142X和C679X的雜合子缺失型突變攜帶者為例，相比于非攜帶者，LDLC水平下降28%，冠心病的發(fā)生率下降88%[22]。以上發(fā)現(xiàn)提示，抑制PCSK9功能是一種降低LDL-C水平的有效策略。因此，PCSK9作為新的降脂靶點(diǎn)越來(lái)越受到關(guān)注。雖然臨床上他汀類(lèi)藥物的應(yīng)用極其廣泛，但它仍有一定的局限性。首先，他汀類(lèi)藥物的不良反應(yīng)有：肝臟、肌肉等損害；其次，他汀類(lèi)藥物對(duì)于治療家族性高膽固醇血癥效果不理想。最重要的是，他汀類(lèi)藥物的6%法則即單用他汀類(lèi)藥物的降脂效果不夠理想，但即使加大他汀類(lèi)藥物的使用劑量其降脂能力也只能增加6%左右[23]。Dubuc等[24]和Careskey等[25]研究顯示，他汀類(lèi)藥物在升高LDLR的過(guò)程中可能反饋性的使PCSK9的表達(dá)增加從而產(chǎn)生了一定的拮抗作用,這也在一定程度上解釋了他汀類(lèi)藥物的6%法則。

大量的基礎(chǔ)和臨床研究均已證實(shí)，PCSK9抑制劑能顯著降低血LDL-C水平，且耐受性和安全性良好。2007年，第一個(gè)PCSK9抑制劑誕生，之后多種不同途經(jīng)的PCSK9抑制劑相繼出現(xiàn)，主要包括：（1）抑制PCSK9的合成：反義寡核苷酸（ASOs）、小分子干擾RNA（siRNA）；（2）抑制PCSK9與LDL-R的結(jié)合：?jiǎn)慰寺】贵w、小分子多肽。其中單克隆抗體類(lèi)藥物發(fā)展最快，以PCSK9為靶標(biāo)的單克隆抗體可以與PCSK9發(fā)生特異性結(jié)合，阻斷PCSK9與LDLR的相互作用，減慢LDLR的降解過(guò)程從而發(fā)揮降低LDL-C水平的作用。目前熱門(mén)研究的藥物為Amgen公司的Evolocumab（AMG-145）和Regeneron/Sanofi公司 Alirocumab（REGN-727/SAR-236553），已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)[26]。

DESCARTES-2[27]研究隨訪52周納入901例接受大劑量他汀治療后LDL-C＞75mg/dl的非冠心病或冠心病患者，參與者隨機(jī)接受每4周1次的Evolocumab 420mg或安慰劑治療，參與者同時(shí)還分別接受單獨(dú)飲食調(diào)整、阿托伐他汀10mg及飲食調(diào)整、阿托伐他汀80mg或阿托伐他汀80mg+依折麥布10mg的基礎(chǔ)治療。到第52周，Evolocumab使低心血管風(fēng)險(xiǎn)和冠心病患者的LDL-C水平降低57%，超過(guò)安慰劑[27]。

GLAGOV研究納入197個(gè)中心的968例癥狀性冠狀動(dòng)脈疾病患者，484例患者在他汀治療基礎(chǔ)上隨機(jī)接受Evolocumab（皮下注射420mg，每月1次）治療，484例患者應(yīng)用安慰劑治療，治療時(shí)間為76周。最終846例患者完成隨訪。采用血管內(nèi)超聲（IVUS）評(píng)估斑塊進(jìn)展或消退情況。主要終點(diǎn)是治療78周后相對(duì)基線(xiàn)的斑塊體積百分比（PAV）變化，次要終點(diǎn)包括斑塊總體積（TAV）變化、斑塊逆轉(zhuǎn)的患者百分比。試驗(yàn)結(jié)果顯示，治療78周后，安慰劑組達(dá)到的平均LDL-C水平為93.0mg/dl，相對(duì)于基線(xiàn)降低3.9%；Evolocumab組LDL-C水平則達(dá)到36.6mg/dl，較基線(xiàn)下降59.8%，差異十分顯著。Evolocumab組PAV減小0.95%，安慰劑組無(wú)明顯變化（P＜0.01）。Evolocumab組TAV縮小5.8mm3，安慰劑組縮小0.9mm3，兩組差異明顯（P＜0.01）。Evolocumab組64.3%的患者顯示出斑塊逆轉(zhuǎn)，安慰劑組的比例為47.3%。此外，研究尚未發(fā)現(xiàn)平均LDL-C達(dá)到36.6mg/dl水平時(shí)有安全性問(wèn)題；新發(fā)糖尿病、肌痛或神經(jīng)認(rèn)知不良反應(yīng)也未增加[28]。

Alirocumab成為第一個(gè)獲得FDA批準(zhǔn)的PCSK9抑制劑。16項(xiàng)Ⅲ期臨床試驗(yàn)來(lái)評(píng)估Alirocumab的安全性及有效性，部分試驗(yàn)已被注冊(cè)或完成。ODYSSEY COMBOⅡ研究評(píng)估720例心血管事件高危且使用了最大耐受劑量他汀的患者使用Alirocumab的有效性和安全性。Alirocumab用法為：75mg注射，每2周1次，如果8周時(shí)LDL-C水平＞70mg/dl劑量增加至150mg注射，每2周1次。對(duì)照組接受最大耐受劑量他汀和依折麥布10mg/d，及安慰劑。結(jié)果顯示，Alirocumab組患者LDL-C水平較基線(xiàn)降低了50.6%，依折麥布組患者降低了20.7%（P＜0.01）。24和52周時(shí)，Alirocumab組LDL-C水平分別為51.6、53.3mg/dl[29]。

ODYSSEY FHⅠ和Ⅱ研究共有735例雜合子家族性高膽固醇血癥患者，接受了最大耐受劑量他汀但LDL-C水平未達(dá)到＜70mg/dl（有心血管疾病史）或者＜100mg/dl（無(wú)心血管疾病史），將這些患者隨機(jī)分配到Alirocumab組（75mg每2周1次）或安慰劑組；如果8周時(shí)LDL-C水平＞70mg/dl劑量增加至150mg注射，每2周1次。結(jié)果表明，患者LDL-C水平較基線(xiàn)降低了近49%，接近40%的雜合子家族性高膽固醇血癥患者接受了150mg劑量的Alirocumab。24和52周時(shí)，患者的平均LDL-C水平為70mg/dl[30]。

ODYSSEY Long-Term研究評(píng)估2 341例家族性高膽固醇血癥患者或者心血管事件高?；颊呤褂肁lirocumab的有效性和安全性，這些患者接受了最大耐受劑量他汀治療但LDL-C水平＞70mg/dl?；颊弑浑S機(jī)分配到Alirocumab組（150mg，每2周1次）或安慰劑組。主要療效終點(diǎn)為24周時(shí)LDL-C水平的下降，次要終點(diǎn)為12和24周時(shí)LDL-C水平基線(xiàn)變化百分比及其他血脂水平。結(jié)果顯示，24周時(shí)Alirocumab組LDL-C水平下降61%，而安慰劑組升高0.8%。這結(jié)果與完整試驗(yàn)結(jié)果一致，78周時(shí)LDL-C下降58%。同時(shí)，Alirocumab組相比于安慰劑組血清TG水平和脂蛋白a水平明顯下降，HDL-C水平升高。Alirocumab組的心血管不良事件發(fā)生率低于安慰劑組[31]。

ODYSSEY OUTCOMES研究納入18 000例急性冠脈綜合征患者，將會(huì)被隨機(jī)分配到最佳藥物治療組或最佳藥物治療組+Alirocumab組，隨訪時(shí)間長(zhǎng)達(dá)2年，將在2017年底完成。若ODYSSEY OUTCOMES研究顯示心血管的獲益，Alirocumab的適應(yīng)證將進(jìn)一步擴(kuò)大[29]。

短期研究顯示，單克隆抗體藥物降低LDL-C的幅度超過(guò)50%，這一降幅相當(dāng)于大劑量的強(qiáng)效他汀類(lèi)藥物治療，且安全性和耐受性良好。但目前已公布的研究周期較短、樣本量小、缺乏長(zhǎng)期安全性和有效性的證據(jù)，因此有待于進(jìn)一步的大量臨床研究驗(yàn)證。有4項(xiàng)PCSK9抑制劑大規(guī)模臨床預(yù)后試驗(yàn)正在進(jìn)行中，包括ODYSSEY OUTCOME、FOURIER、SPIRE-1和SPIRE-2，共納入70 000研究對(duì)象，均為急性冠脈綜合征后LDL-C＞70mg/dl的高危心血管患者，觀察3～4年，大部分研究結(jié)果預(yù)計(jì)在2017年底前后公布。該研究結(jié)果的公布將進(jìn)一步明確PCSK9抑制劑對(duì)心血管事件的影響，并為新一代降脂藥物的研發(fā)提供充足的理論依據(jù)[32-34]。

此外，最新研究表明，inclisiran（ALN-PCSsc）是一種長(zhǎng)效的、RNA干擾（RNAi）方式抑制PCSK9合成進(jìn)而降低人體的LDL-C水平的制劑。Ⅰ期試驗(yàn)中，將LDL-L水平不低于100mg/dl的健康志愿者，按比例3∶1隨機(jī)分配至兩組。兩組參與者分別接受inclisiran或安慰劑皮下注射：劑量組分配至單次給藥劑量遞增階段（25、100、300、500或800mg）或多次給藥階段（每周1次125mg，給藥4次；隔周1次250 mg，給藥2次；或每月1次300或500mg，給藥2次，聯(lián)合或不聯(lián)合他汀類(lèi)藥物治療）；每個(gè)劑量組包括4～8例參與者。結(jié)果顯示，最常見(jiàn)的不良事件為咳嗽、肌肉骨骼疼痛、鼻咽炎、頭痛、背痛和腹瀉。所有不良事件均為輕或中度。未觀察到嚴(yán)重不良事件發(fā)生。給藥劑量達(dá)到300mg或更高（單次或多次給藥）時(shí)，inclisiran可顯著降低PCSK9和LDL-L至少6個(gè)月。inclisiran研究是小型Ⅰ期試驗(yàn)，其長(zhǎng)期安全性及有效性有待于進(jìn)一步研究[35]。

3 PCSK9/NARC-1與神經(jīng)系統(tǒng)疾病

隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)PCSK9就是與膽固醇代謝相關(guān)并與神經(jīng)細(xì)胞分化和凋亡相關(guān)的基因。PCSK9基因產(chǎn)物最初發(fā)現(xiàn)于神經(jīng)細(xì)胞，損傷引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡時(shí)該蛋白表達(dá)增多。目前研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9在胚胎發(fā)育中有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化的作用，而體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明PCSK9可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。Bingham等[36]研究發(fā)現(xiàn)NARC-1mRNA在小腦顆粒神經(jīng)元（CGNs）的表達(dá)發(fā)生在凋亡損傷后,而凋亡調(diào)節(jié)因子（caspase-3和死亡受體6）的共同調(diào)節(jié)增加了NARC-1參與神經(jīng)元凋亡信號(hào)傳遞的可能性。用野生型和突變型NARC-1/EGFP融合載體轉(zhuǎn)染CGNs，然后計(jì)算在轉(zhuǎn)染子中細(xì)胞死亡的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)野生型NARC-1有著強(qiáng)大的促凋亡效應(yīng)。而NARC-1/EGFP過(guò)表達(dá)從而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的機(jī)制仍然不清楚[37]。

PCSK9不僅僅與神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)，還與神經(jīng)細(xì)胞分化密切相關(guān)。Seidah等[6]取胚胎13.5d的端腦細(xì)胞培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染PCSK9可增加未分化干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化，認(rèn)為PCSK9參與大腦皮層細(xì)胞分化。Poirier等[38]分別建立小鼠胚胎癌細(xì)胞系細(xì)胞P19和斑馬魚(yú)模型,研究蛋白水解酶對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng) (CNS)分化的潛在作用。發(fā)現(xiàn)NARC-1/PCSK 9的mRNA水平在分化的第2天達(dá)到峰值,隨后出現(xiàn)下降,但是并沒(méi)有影響內(nèi)源性LDLR的蛋白水平。進(jìn)一步比較出生1天的小鼠中NARC-1/PCSK9和LDLRmRNA的表達(dá),發(fā)現(xiàn)NARC-1/PCSK9除了在肝臟和小腸等組織表達(dá)還在小腦神經(jīng)元有表達(dá),而LDLR卻不顯著。因此提示NARC-1/PCSK9在神經(jīng)系統(tǒng)中可能促進(jìn)其它受體在小腦和端腦發(fā)育過(guò)程中某些蛋白的降解[11,38]。這些研究揭示了PCSK9除了在肝臟中的作用外在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分化中又有新的作用,而NARC-1/ PCSK9對(duì)不同物種如哺乳動(dòng)物和魚(yú)類(lèi),神經(jīng)系統(tǒng)的作用是不同的,具體機(jī)制還有待研究。神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變是危害老年人健康和影響老年人生活質(zhì)量的一類(lèi)疾病，如帕金森病和阿爾茲海默病。促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化，抑制其凋亡是防治神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的重要環(huán)節(jié)。如何利用PCSK9的這種雙面性作用以更好地防治神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變有待于進(jìn)一步研究。

4 PCSK9與腫瘤

研究發(fā)現(xiàn)PCSK9過(guò)表達(dá)可引起細(xì)胞的凋亡、炎癥及應(yīng)激反應(yīng)等多條通路失調(diào)。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展涉及到細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等一系列生物效應(yīng)，因此推斷PCSK9在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用[16,39-40]。Demidyuk等[41]利用qRT-PCR檢測(cè)PCs家族在30例病理分型尚不明確的肺癌組織及正常癌旁肺組織的mRNA，發(fā)現(xiàn)PCSK9在29例正常組織中均表達(dá)，而只在18例肺癌組織中表達(dá)。分析PCSK9在腫瘤和正常組織之間mRNA水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。由此可見(jiàn)，PCSK9在肺癌中呈低表達(dá)，而其在肺癌中的具體作用機(jī)制尚不明確。Lan等[39]證實(shí)PCSK9誘導(dǎo)膽固醇合成基因上調(diào)從而導(dǎo)致體內(nèi)膽固醇減少，此外還發(fā)現(xiàn)PCSK9在肝癌Hep G2細(xì)胞內(nèi)除影響膽固醇代謝還可作用其他基因表達(dá)通路，而這些通路與膽固醇的代謝是無(wú)關(guān)，包括蛋白質(zhì)泛素化、異物質(zhì)新陳代謝、細(xì)胞周期、炎癥及應(yīng)激反應(yīng)。這些細(xì)胞的基因表達(dá)通路與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定關(guān)系，可見(jiàn)PCSK9在多種腫瘤表達(dá)及與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的多種細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9可影響核因子B（NF-κB）途徑、p53、轉(zhuǎn)錄因子3、腫瘤壞死因子超家族成員4基因相關(guān)通路[41]。NF-κB是一種轉(zhuǎn)錄因子，異常激活的NF-κB與細(xì)胞炎癥、惡性腫瘤生長(zhǎng)、惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)[42]。TNF-α水平在胃癌明顯增高，其增高程度與臨床分期有關(guān)[43]，而PCSK9與p62、NF-ΚB及TNF-α均有聯(lián)系，這些通路與PCSK9蛋白在胃癌的病理分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中有著密切關(guān)系。因此，PCSK9可能與胃癌發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。因此，PCSK9可作為新的篩選指標(biāo)及預(yù)后指標(biāo)，并為靶向藥物的研究提供新的思路。

5 PCSK9與其他

PCSK9參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。Burkart等[44]研究表明，PCSK9可通過(guò)增加膽固醇水平，進(jìn)而促進(jìn)慢性阻塞性肺炎的發(fā)生，因而PCSK9對(duì)慢性阻塞性肺炎具有潛在的診斷價(jià)值。此外，Persson等[45]研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠中高水平的內(nèi)源性雌激素可降低血漿PCSK9水平，表明內(nèi)源性雌激素可增加肝細(xì)胞表面LDLR數(shù)量。這在一定程度上可以解釋絕經(jīng)前后婦女的血脂改變[46]。不久的將來(lái)，PCSK9的更多功能將被揭曉。

6 小結(jié)與展望

綜上所述，已經(jīng)明確PCSK9通過(guò)降解LDLR從而在膽固醇代謝中發(fā)揮重要作用。同時(shí)PCSK9抑制劑如單克隆抗體、RNA干擾的基礎(chǔ)和臨床研究均顯示出令人欣喜的進(jìn)展，有望成為新的革命性降脂藥物，為高膽固醇血癥的聯(lián)合治療開(kāi)辟新的途徑。PCSK9在帕金森病、肝癌、慢性阻塞性肺炎等疾病的發(fā)生、發(fā)展中能否起著重要作用，能否作為這些疾病早期診斷的分子標(biāo)志，以及能否作為肝癌等腫瘤靶向治療的有效靶標(biāo)，這些都是我們?nèi)沃囟肋h(yuǎn)的研究任務(wù)。因而，深入研究PCSK9在神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤、呼吸系統(tǒng)疾病中的功能并分析其具體的分子機(jī)制，將為探索PCSK9調(diào)控人類(lèi)疾病的研究奠定基礎(chǔ)，為臨床靶向治療疾病提供新的靶點(diǎn)。

[1]Couture F,D'Anjou F,Day R.On the cutting edge of p rop rotein convertase pharmacology:from m olecular concep ts to c linical app lications[J].Biom olConcep ts,2011,2(5):421-438.

[2]Creemers JW,Khatib A M.Knock-outmouse m odels of p rop rotein convertases:unique functions or redundancy?[J].Front Biosc i,2008,13:4960-4971.

[3]Seidah NG.The p rop rotein convertases,20 years later[J].Methods Mo lBio l,2011,768:23-57.doi:10.1007/978-1-61779-204-5_3.

[4]AbifadelM,VarretM,Rabes JP,etal.Mutations in PCSK9 cause autosom al dom inant hypercholesterolem ia[J].Nat Genet,2003, 34(2):154-156.doi:10.1038/ng1161.

[5]Elagoz A,Benjannet S,MammarbassiA,et al.Biosynthesis and cellular tra fficking of the convertase SKI-1/S1P:ectodom ain shedd ing requires SKI-1 ac tivity[J].J BiolChem,2002,277(13): 11265-11275.doi:10.1074/jbc.M 109011200.

[6]Seidah NG,BenjannetS,Wickham L,etal.The secretory p rop rotein convertase neural apop tosis-regulated convertase 1(NARC-1): liver regeneration and neuronal d ifferentiation[J].Proc Natl Acad SciUSA,2003,100(3):928-933.doi:10.1073/pnas.0335507100.

[7]Labonte P,Beg ley S,Guevin C,et al.PCSK9 impedes hep-atitis C virus infection in vitro and m odulates liver CD81 exp ression[J].Hepatology,2009,50(1):17-24.doi:10.1002/hep.22911.

[8]Urban D,Poss J,Bohm M,et a l.Targeting the p rop rotein convertase sub tilisin/kexin type 9 for the treatm ent of dyslip idem ia and atherosc lerosis[J].J Am Coll Card io l,2013,62(16): 1401-1408.doi:10.1016/j.jacc.2013.07.056.

[9]Denis M,Marcinkiewicz J,Zaid A,etal.Gene inactivation of p rop rotein convertase sub tilisin/kexin type 9 reduces atherosc lerosis in m ice[J].Circu lation,2012,125(7):894-901.doi:10.1161/CIRCULATIONAHA.111.057406.

[10]Kwon H J,Lagace T A,McNutt M C,et al.Molecular basis for LDL recep tor recognition by PCSK9[J].Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(6):1820-1825.doi:10.1073/pnas.0712064105.

[11]Maxwell K N,Soccio R E,Duncan E M,et al.Novel putative SREBP and LXR target genes identified by m icroarray analysis in liver o f cholesterol-fed m ice[J].J Lip id Res,2003,44(11): 2109-2119.doi:10.1194/jlr.M 300203-JLR200.

[12]Horton JD,Shah N A,Warring ton JA,etal.Comb ined ana lysis of o ligonuc leotide m icroarray data from transgenic and knockout m ice identifies d irec t SREBP target genes[J].Proc Natl Acad SciUSA,2003,100(21):12027-12032.doi:10.1073/pnas. 1534923100.

[13]Brown M S,Goldstein JL.Biomed icine.Lowering LDL--noton ly how low,buthow long?[J].Science,2006,311(5768):1721-1723. doi:10.1126/science.1125884.

[14]Cariou B,Le May C,Costet P.Clinical aspec ts of PCSK9[J]. Atherosc lerosis,2011,216(2):258-265.doi:10.1016/j.atherosc lerosis.2011.04.018.

[15]Feingold K R,Moser A H,Shigenaga J K,et al.Inflammation stimulates the exp ression of PCSK9[J].Biochem Biophys Res Commun,2008,374(2):341-344.doi:10.1016/j.bbrc.2008.07.023.

[16]Ranheim T,MattingsdalM,Lindvall J M,et al.Genome-w ide exp ression analysis of cells exp ressing gain of function mutant D374Y-PCSK9[J].J Cell Physiol,2008,217(2):459-467.doi: 10.1002/jcp.21519.

[17]Mbikay M,Sirois F,Mayne J,et a l.PCSK9-deficientm ice exhibit impaired g lucose tolerance and pancreatic islet abnorm alities[J].FEBS Lett,2010,584(4):701-706.doi:10.1016/j. febslet.2009.12.018.

[18]SharotriV,Collier D M,Olson D R,et al.Regulation of ep ithelial sod ium channeltraffickingbyp rop roteinconvertasesub tilisin/kexin type 9(PCSK9)[J].JBiolChem,2012,287(23):19266-19274.doi: 10.1074/jbc.M 112.363382.

[19]Tang Z,Jiang L,Peng J,et al.PCSK9 siRNA supp resses the inflammatory response induced by oxLDL through inhibition o f NF-kappaB activation in THP-1-derived m acrophages[J].Int JMolMed,2012,30(4):931-938.doi:10.3892/ijmm.2012.1072.

[20]Wu C Y,Tang Z H,Jiang L,et al.PCSK9 siRNA inhibits HUVEC apop tosis induced by ox-LDL via Bc l/Bax-caspase9-caspase3 pathway[J].MolCellBiochem,2012,359(1-2):347-358. doi:10.1007/s11010-011-1028-6.

[21]Wu NQ,LiJ J.PCSK9 genemutations and low-density lipop rotein cholesterol[J].Clin Chim Acta,2014,431:148-153.doi:10. 1016/j.cca.2014.01.043.

[22]Cohen JC,Boerwinkle E,Mosley TH Jr,et al.Sequence variations in PCSK9,low LDL,and p rotec tion against coronary heart d isease[J].N Eng l JMed,2006,354(12):1264-1272.doi: 10.1056/NEJMoa054013.

[23]Pincus J.Comparative dose efficacy study of atorvastatin versus simvastatin,p ravastatin,lovastatin,and fluvastatin in patients with hypercholesterolem ia (the CURVES study)[J].Am J Card iol,1998,82(3):406-407.

[24]Dubuc G,Chamberland A,Wassef H,et al.Statins up regulate PCSK9,the gene encod ing the p rop rotein convertase neural apop tosis-regulated convertase-1 imp licated in fam ilial hypercholesterolem ia[J].Arteriosc ler Thromb Vasc Biol,2004,24 (8):1454-1459.doi:10.1161/01.ATV.0000134621.14315.43.

[25]Careskey H E,Davis R A,Alborn W E,et al.Atorvastatin inc reases human serum leve ls of p rop rotein convertase sub tilisin/kexin type 9[J].J Lip id Res,2008,49(2):394-398.doi: 10.1194/jlr.M700437-JLR200.

[26]DiTaranto M D,D'Agostino M N,Fortunato G.Func tionalcharacterization ofm utant genes associated w ith autosomal dom inant fam ilial hypercholesterolem ia:integ ration and evo lution of genetic d iagnosis[J].NutrMetab Cardiovasc Dis,2015,25(11): 979-987.doi:10.1016/j.numecd.2015.06.007.

[27]Blom D J,Ha la T,Bolognese M,et a l.A 52-week p lacebo-controlled tria lof evolocum ab in hyperlip idem ia[J].N Eng l J Med,2014,370(19):1809-1819.doi:10.1056/NEJMoa1316222.

[28]Nicho lls S J,PuriR,Anderson T,et al.Effect of evo locumab on p rog ression of coronary d isease in statin-treated patients:the GLAGOV random ized c linical trial[J].JAMA,2016,316(22): 2373-2384.doi:10.1001/jama.2016.16951.

[29]Roth E M.Alirocumab for hyperlip idem ia:ODYSSEY Phase III c linica l tria l results and US FDA app roval ind ications[J].Future Card iol,2016,12(2):115–128.doi:10.2217/fca.15.78.

[30]Kastelein J J,Ginsberg H N,Langslet G,et al.ODYSSEY FH I and FH II:78 week results w ith alirocum ab treatm ent in 735 patients w ith heterozygous fam ilial hypercholesterolaem ia[J]. Eur Heart J,2015,36(43):2996-3003.doi:10.1093/eurheartj/ehv370.

[31]Hassan M.OSLER and ODYSSEY LONG TERM:PCSK9 inhib itors on the right track o f reducing card iovascular events[J]. G lob Card iolSc iPract,2015,2015(2):20.doi:10.5339/gcsp.2015. 20.

[32]LangsletG,Emery M,Wasserman SM.Evolocumab(AMG 145) for p rim ary hypercholesterolem ia[J].Expert Rev Card iovasc Ther,2015,13(5):477-488.doi:10.1586/14779072.2015.1030395.

[33]Shimada Y J,Cannon C P.PCSK9(p rop rotein convertase subtilisin/kexin type 9)inhibitors:past,p resent,and the future[J]. Eur Heart J,2015,36(36):2415-2424.doi:10.1093/eurheartj/ehv174.

[34]Bays H,Gaudet D,Weiss R,et al.Alirocumab as add-on to atorvastatin versus other lip id treatm ent strategies:ODYSSEY OPTIONS Irandom ized tria l[J].JClin EndocrinolMetab,2015, 100(8):3140-3148.doi:10.1210/jc.2015-1520.

[35]Fitzgerald K,White S,Borodovsky A,et al.A highly durab le RNAi therapeutic inhibitor of PCSK9[J].N Eng l JMed,2017, 376(1):41-51.doi:10.1056/NEJMoa1609243.

[36]Bingham B,Shen R,Kotnis S,et al.Proapo`p totic effects of NARC 1(=PCSK9),the gene encod ing a novelserine p roteinase [J].Cytom etry A,2006,69(11):1123-1131.doi:10.1002/cyto.a. 20346.

[37]Rousselet E,Marcinkiewicz J,Kriz J,et al.PCSK9 reduces the p rotein levels o f the LDL recep tor in mouse b rain during deve lopm ent and after ischem ic stroke[J].J Lip id Res,2011,52(7): 1383-1391.doi:10.1194/jlr.M 014118.

[38]Poirier S,Prat A,Marc inkiew icz E,et al.Imp lication o f the p rop rotein convertase NARC-1/PCSK9 in the developm ent o f the nervous system[J].JNeurochem,2006,98(3):838-850.doi:10. 1111/j.1471-4159.2006.03928.x.

[39]Lan H,Pang L,Sm ith M M,et al.Prop rotein convertase sub tilisin/kexin type 9(PCSK9)affects gene exp ression pathways beyond cho lestero lmetabolism in liver cells[J].J Cell Physiol, 2010,224(1):273-281.doi:10.1002/jcp.22130.

[40]Seidah N G,Prat A.The biology and therapeutic targeting of the p rop rotein convertases[J].Nat Rev Drug Discov,2012,11 (5):367-383.

[41]Dem idyuk IV,Shubin A V,Gasanov E V,et a l.Alterations in gene exp ression of p rop rotein convertases in human lung cancer have a lim ited number o f scenarios[J].PLoS One,2013,8 (2):e55752.doi:10.1371/journal.pone.0055752.

[42]Xia J T,Chen L Z,Jian W H,et al.M icroRNA-362 induces cell p roliferation and apop tosis resistance in gastric cancer by activation of NF-kappaB signaling[J].JTranslMed,2014,12:33. doi:10.1186/1479-5876-12-33.

[43]Rokkas T,Sechopoulos P,Pistiolas D,et a l.Population d ifferences concerning TNF-a lpha gene polymorphism s in gastric carcinogenesis based on m eta-analysis[J].Ann Gastroenterol, 2014,27(2):139-148.

[44]Burkart K M,Manichaiku l A,Wilk J B,et a l.APOM and high-density lipop rotein cho lestero l are associated w ith lung func tion and per centemphysema[J].Eur Resp ir J,2014,43(4): 1003-1017.doi:10.1183/09031936.00147612.

[45]Persson L,Galman C,Angelin B,etal.Im portance of p rop rotein convertase sub tilisin/kexin type 9 in the horm onal and d ietary regulation o f rat liver low-density lipop rotein recep tors[J].Endocrinology,2009,150(3):1140-1146.doi:10.1210/en.2008-1281.

[46]LakoskiSG,Lagace TA,Cohen JC,etal.Genetic and metabolic determ inants of p lasma PCSK9 levels[J].J Clin Endocrinol Metab,2009,94(7):2537-2543.doi:10.1210/jc.2009-0141.

（本文編輯：沈昱平）

中國(guó)科協(xié)印發(fā)科技工作者自律規(guī)范：堅(jiān)持四個(gè)“自覺(jué)”堅(jiān)守四條“底線(xiàn)”

為弘揚(yáng)科學(xué)精神，中國(guó)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì)2017年7月13日印發(fā)《科技工作者道德行為自律規(guī)范》。近年來(lái)，我國(guó)科技發(fā)展取得舉世矚目的成就，也暴露出一些問(wèn)題。2015年以來(lái)，我國(guó)科技界接連遭遇國(guó)外出版集團(tuán)較大規(guī)模的集中撤稿，造成惡劣社會(huì)影響，國(guó)際聲譽(yù)受到直接沖擊。撤稿事件反映出我國(guó)少數(shù)科技工作者缺乏自律意識(shí)，底線(xiàn)意識(shí)不強(qiáng)，在名利誘惑面前心態(tài)失衡。

自律規(guī)范要求廣大科技工作者嚴(yán)于自律，堅(jiān)持自覺(jué)擔(dān)當(dāng)科技報(bào)國(guó)使命、自覺(jué)恪盡創(chuàng)新?tīng)?zhēng)先職責(zé)、自覺(jué)履行造福人民義務(wù)、自覺(jué)遵守科學(xué)道德規(guī)范，堅(jiān)守反對(duì)科研數(shù)據(jù)成果造假、反對(duì)抄襲剽竊科研成果、反對(duì)委托代寫(xiě)代發(fā)論文、反對(duì)庸俗化學(xué)術(shù)評(píng)價(jià)等四條“底線(xiàn)”，肩負(fù)起推動(dòng)創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)發(fā)展、建設(shè)世界科技強(qiáng)國(guó)的歷史重任。

自律規(guī)范明確反對(duì)委托代寫(xiě)代發(fā)論文。要求科技工作者遵循論文撰寫(xiě)和發(fā)表規(guī)范。反對(duì)以粗制濫造和低水平重復(fù)論文擠占浪費(fèi)學(xué)術(shù)資源，共同抵制學(xué)術(shù)論文發(fā)表中第三方中介機(jī)構(gòu)投機(jī)取巧謀取利益的不端行為，反對(duì)委托“第三方”代寫(xiě)代投論文、對(duì)論文內(nèi)容進(jìn)行實(shí)質(zhì)性修改、提供虛假同行評(píng)審人信息或評(píng)審意見(jiàn)，維護(hù)好中國(guó)科技工作者的社會(huì)形象和學(xué)術(shù)尊嚴(yán)，提升中國(guó)科學(xué)家的國(guó)際聲譽(yù)。

自律規(guī)范明確反對(duì)壓制學(xué)術(shù)民主和學(xué)術(shù)自由，反對(duì)濫用學(xué)術(shù)權(quán)力徇私舞弊利益尋租，反對(duì)學(xué)術(shù)評(píng)價(jià)中唯論文數(shù)量、唯S CI等不良傾向，反對(duì)行政化官本位等非學(xué)術(shù)因素影響評(píng)價(jià)，反對(duì)拉關(guān)系送人情，暗箱操作，褻瀆學(xué)術(shù)尊嚴(yán)。

中國(guó)科協(xié)要求各全國(guó)學(xué)會(huì)、地方科協(xié)和高校科協(xié)、企業(yè)科協(xié)組織科技工作者深入學(xué)習(xí)自律規(guī)范，加強(qiáng)自律監(jiān)督；進(jìn)一步改革完善科技評(píng)價(jià)體系，為科技工作者創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)提供良好的政策和環(huán)境保障；積極指導(dǎo)推動(dòng)高校、科研院所、醫(yī)院等建立學(xué)術(shù)道德委員會(huì)等內(nèi)設(shè)機(jī)構(gòu)，健全科研誠(chéng)信制度規(guī)范，加大學(xué)術(shù)不端行為調(diào)查處理力度。

2017-02-06）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.16.2017-215

浙江省自然科學(xué)基金(L Y13H 020009)

315211 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院（陳麗）；寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬李惠利醫(yī)院心血管內(nèi)科（廉姜芳、周建慶）

周建慶，E-mail：zh o u jian q in g8701@163.com