王淼，王艷，吳艷云，方曉燕

（成都市動物疫病預(yù)防控制中心，成都市農(nóng)業(yè)質(zhì)量監(jiān)測中心，四川成都610041）

水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留分析方法研究進(jìn)展

王淼*，王艷，吳艷云，方曉燕

（成都市動物疫病預(yù)防控制中心，成都市農(nóng)業(yè)質(zhì)量監(jiān)測中心，四川成都610041）

水產(chǎn)品中的氯霉素類藥物殘留會嚴(yán)重威脅人類健康，由此引發(fā)的食品安全問題受到人們的重視。本文對水產(chǎn)品中氯霉素類藥物主要檢測方法的使用范圍、檢測靈敏度、優(yōu)缺點進(jìn)行分析，同時展望了未來氯霉素類藥物殘留檢測方法的發(fā)展趨勢，以期為水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留的檢測提供參考。

氯霉素類；水產(chǎn)品；殘留檢測方法

氯霉素類（CAPs）藥物屬酰胺醇類廣譜抗生素，常用藥物有氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）和氟苯尼考（FF），其對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有抑制作用（姚宜林等，2010），被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中細(xì)菌性疾病的預(yù)防和治療。由于氯霉素苯環(huán)上有硝基，會抑制人體骨髓的造血功能，引發(fā)再生障礙性貧血（Turton等，2000），美國、歐盟、日本等很多國家均禁止使用氯霉素。甲砜霉素雖不會產(chǎn)生再生障礙性貧血，但會抑制紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的生成（張偉偉等，2012）；氟苯尼考毒性較低，但具有胚胎毒性，用藥后會出現(xiàn)厭食、腹瀉等不良反應(yīng)，低濃度氯霉素類藥物殘留會誘發(fā)致病菌的耐藥性，對人類健康形成潛在威脅（胡頂飛等，2001）。由于氯霉素類藥物價格低廉、抑菌效果好，仍有違規(guī)使用的現(xiàn)象。目前，氯霉素類藥物殘留檢測方法主要有微生物法、色譜法、色譜-質(zhì)譜法、免疫分析法、生物傳感器法等。本文就水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留的檢測方法進(jìn)行了綜述，并對不同方法的特點及靈敏度進(jìn)行了比較。

1 氯霉素類藥物檢測方法

1.1 發(fā)光細(xì)菌法發(fā)光細(xì)菌是一類在正常生理條件下，生長過程中伴隨有可見熒光發(fā)射（450～490 nm）的細(xì)菌，熒光黑暗處肉眼可見。當(dāng)細(xì)菌活性受抑制時，呼吸速率降低，發(fā)光率降低，且熒光強(qiáng)度變化程度與受試物的濃度在一定范圍內(nèi)呈相關(guān)關(guān)系。Shakila等（2007）采用杯碟法測定蝦體內(nèi)的氯霉素殘留，檢出限為1 ng/g，所使用的發(fā)光細(xì)菌類型為Photobacterium leiognathi（L2-strain），杯碟法操作比較復(fù)雜，對檢測人員技術(shù)要求較高。王亞群等（2009）利用青島近海分離得到的鰒發(fā)光桿菌Photobacterium leiognathi YL，構(gòu)建的水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測方法，在0.1～1.0 ng/mL線性范圍內(nèi)，氯霉素濃度與細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度抑制率呈良好線性關(guān)系，檢測靈敏度可達(dá)0.1 ng/mL。雖然發(fā)光細(xì)菌法能直觀反映水產(chǎn)品中氯霉素的殘留狀況，實現(xiàn)方便、快速、高靈敏度的檢測，但是該法無法對氯霉素殘留量進(jìn)行準(zhǔn)確定量。如果待測樣品中含有其他抗生類藥品，也會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此發(fā)光細(xì)菌法主要用于氯霉素殘留的初步篩選和基層檢測。

1.2 色譜與色譜-質(zhì)譜法氯霉素類藥物的殘留分析方法中，使用最多的是色譜法和色譜-質(zhì)譜法，主要包括氣相色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法和液質(zhì)聯(lián)用法。

1.2.1 色譜法氯霉素類藥物的分子中含有強(qiáng)極性的羥基、氨基、硫?；蛠啺坊然鶊F(tuán)，具有高熱穩(wěn)定性和難揮發(fā)性，氣相色譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析前，需將氯霉素類藥物衍生為可揮發(fā)的物質(zhì)。吳明媛等（2009）利用毛細(xì)管電子捕獲氣相色譜法測定魚肉中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素殘留量，氯霉素在1.0～200 μg/L，氟甲砜霉素和甲砜霉素在5.0～200 μg/L時，相關(guān)系數(shù)均大于0.996，氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素檢出限分別為0.1、0.2、0.2 μg/kg。王峰等（2010）通過改變前處理條件，建立的檢測蝦肉中氯霉素殘留的方法GC-ECD，最低檢測限可達(dá)0.1 μg/kg。楊方等（2008）采用堿性乙酸乙酯-乙腈提取，凝膠色譜凈化（GPC），高效液相色譜-熒光檢測水產(chǎn)品中甲砜霉素、氟甲砜霉素及其代謝產(chǎn)物氟甲砜霉素胺的含量，檢測限分別為0.020、0.020、0.010 mg/kg。

1.2.2 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用與色譜法相比，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有更高的靈敏度、選擇性、分離速度和更低的檢出限。Lu等（2012）將C18硅膠柱樣品凈化設(shè)備和GS-MS聯(lián)用，MRM模式下測定海龜體內(nèi)的氯霉素含量，在0.01～100 ng/mL線性范圍內(nèi)，添加回收率為92.05%～98.07%（RSD≤4.20%）。液質(zhì)聯(lián)用方法無需對氯霉素類藥物進(jìn)行衍生化，方法靈敏度、分辨率和分析速度都優(yōu)于氣質(zhì)聯(lián)用方法。張小軍等（2010）用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法，測定水產(chǎn)品中氯霉素含量，同位素內(nèi)標(biāo)法定量，0.05～1.0 μg/kg的添加范圍內(nèi)平均回收率為84.9%～103.3%（RSD為3.2%～5.2%），定量檢測限為0.02 μg/kg。藯慧等（2010）利用UPLC-MS/MS法測定蝦組織中殘留的氯霉素含量，最低檢測限為0.1 μg/kg。

1.3 免疫分析法免疫分析法是一種以抗原抗體特異性結(jié)合為基礎(chǔ)的分析方法，主要包括酶聯(lián)免疫法（ELISA）、放射性免疫法（RIA）和固相免疫傳感器等方法。放射性免疫法（RIA）采用放射性同位素標(biāo)記，制備簡單、省時，但因同位素半衰期短、存在放射性污染及需要復(fù)雜儀器設(shè)備等缺點，應(yīng)用范圍受到限制。

1.3.1 酶聯(lián)免疫法ELISA法以酶作標(biāo)記物，具有專一性強(qiáng)、操作簡便、靈敏度高、樣品容量大、分析成本低等優(yōu)點。譚慧等（2010）利用間接酶生物監(jiān)測法檢測魚蝦中殘留的氯霉素，方法檢測限為0.01 μg/kg，回收添加水平為0.5、2.0 μg/kg時，回收率分別為72%～116%和86%～108%。為進(jìn)一步提高檢測速度，縮短檢測時間，馬玲等（2011）在常規(guī)兩步法化學(xué)發(fā)光酶免疫法（CLEIA）基礎(chǔ)上，同時加入一抗和二抗，優(yōu)化抗包被條件、抗體工作濃度、競爭反應(yīng)時間等參數(shù)，建立了檢測氯霉素殘留的一步式CLEIA，該方法最佳檢測范圍為0.045～128 μg/L，靈敏度達(dá)3.16 μg/L，最低檢出限為0.01 μg/L。與常規(guī)ELISA法相比，該法可縮短反應(yīng)時間1.5 h。酶聯(lián)免疫法的不足在于影響因素較多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，抗體批次不同，測定結(jié)果也會出現(xiàn)差異。武會娟等（2010）應(yīng)用Molecular Probe的F1300作為熒光探針，檢測色素體的質(zhì)子跨膜運轉(zhuǎn)活性，依據(jù)負(fù)載不同、活性不同的性質(zhì)建立了免疫生物傳感器檢測方法，氯霉素檢測限可達(dá)0.01 ng/L。

1.3.2 膠體金免疫層析法膠體金免疫層析法（GICA）是基于免疫層析技術(shù)和膠體金標(biāo)記技術(shù)建立的分析方法，以膠體金作為著色物，應(yīng)用于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)。膠體金法比酶聯(lián)免疫法更簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)，適于現(xiàn)場大量樣品的初步篩選。張燕等（2009）建立的滲濾式和側(cè)流式兩種金標(biāo)記免疫競爭快速篩選方法，靈敏度分別為0.8、1 μg/L，在4℃下保存，6個月內(nèi)均可保持檢測結(jié)果的可靠性。桑麗雅等（2013）研制的氯霉素免疫膠體金快速檢測試劑條檢測限為0.3 μg/kg，假陽性率為4%，假陰性率為2%，常溫保質(zhì)期可達(dá)6個月以上。

1.4 其他檢測方法結(jié)合分子印跡技術(shù)和傳感器技術(shù)，張麗君等（2011）利用電化學(xué)聚合法制備了氯霉素分子印跡聚合膜電極，對氯霉素分子具有良好的的選擇性、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。檢測的線性范圍為4.33×10-8～3.09×10-6mol/L，檢出限為2.5×10-8mol/L，具有良好的應(yīng)用前景。Yang等（2012）利用免疫磁珠磁減量檢測法對蝦類產(chǎn)品中氯霉素的含量進(jìn)行了測定，方法靈敏度為0.1 μg/L，能有效避免基質(zhì)對靈敏度的干擾。

生物芯片是近年發(fā)展起來的熱門方法，具有快速、高通量等優(yōu)勢，其種類較多，是未來發(fā)展的主要趨勢之一。液體芯片技術(shù)和固相生物芯片相比，更利于保持生物活性物質(zhì)的天然構(gòu)象和活性，從而保證探針和被檢測物的特異性分子識別。以懸浮芯片技術(shù)為平臺，劉楠等（2009）建立的高通量懸浮芯片檢測方法，可實現(xiàn)氯霉素和克倫特羅的同時測定，且懸浮芯片的特異度測試良好，與其他藥物無明顯交叉反應(yīng)，檢測區(qū)間分別為40～6.25×105ng/L和50×105～.81×105ng/L；最低檢出限分別為40、50 ng/L。趙晨等（2016）將磁性表面分子印跡技術(shù)與壓電傳感器相結(jié)合，制備出新型的壓電磁性表面分子印跡傳感器，可對氯霉素殘留進(jìn)行高效、精確、快速的檢測，檢測限為6 μg/L。

吳彩葉等（2016）構(gòu)建了基于磁性金屬有機(jī)框架化合物（MOF）-適配體探針的仿真比色傳感器，最佳反應(yīng)條件下，氯霉素的檢測范圍為0.001～10 ng/mL，最低檢出限為0.3 pg/mL，加標(biāo)回收率為86.9%～93.5%，且不易受其他抗生素干擾。該方法用Fe-MOF代替酶標(biāo)記，分析成本大幅降低，探針制備過程簡單并對環(huán)境無污染，該方法在食品安全分析領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

2 小結(jié)

隨著氯霉素類藥物殘留的檢測方法不斷增多，檢測靈敏度和精確度也不斷提高。酶聯(lián)免疫法耗時短，方法靈敏適合大批量樣品的初步篩查，膠體金法操作十分便捷，所需儀器較少，適合現(xiàn)場快速檢測。目前，色譜與色譜-質(zhì)譜法定量準(zhǔn)確，方法靈敏度高，應(yīng)用十分廣泛。伴隨著新技術(shù)的發(fā)展，如磁減量法、生物芯片等技術(shù)的問世，未來氯霉素類藥物及其代謝產(chǎn)物的殘留檢測會更加便捷、快速、準(zhǔn)確。參考文獻(xiàn)

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The chloramphenicols residues in aquatic products can seriously threaten human health.Food safety issues caused by the chloramphenicol（CAPs）residues have

attention.The range of application，the detection sensitivity，together with advantages and disadvantages of the main detection technology of chloramphenicols residues in aquatic products were widely discussed in this paper.In addition，we forecast the trends of the detection technology of chloramphenicols residues for the future，which can provide references for the detection technology of chloramphenicols residues in aquatic products.

chloramphenicols；aquatic products；detection of residual

S816.17

A

1004-3314（2017）16-0040-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171610

*通訊作者