黃小紅，曹巖，江俊勇，馬貴華，孔紅興，李達(dá)

（1.江西生物科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，江西南昌330200；2.廣州市博仕奧生化技術(shù)研究有限公司，廣東廣州510663）

飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能、免疫器官指數(shù)和抗氧化性能的影響

黃小紅1，曹巖1，江俊勇1，馬貴華1，孔紅興2，李達(dá)1

（1.江西生物科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，江西南昌330200；2.廣州市博仕奧生化技術(shù)研究有限公司，廣東廣州510663）

本試驗(yàn)旨在探討飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能、免疫器官指數(shù)及血清抗氧化酶活性的影響，從而為納米硒在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。試驗(yàn)選擇健康、體重相近[（57.08±2.74)g]草魚(yú)420尾，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)35尾，在草魚(yú)基礎(chǔ)飼料中分別添加0、0.25、0.5、0.75 mg/kg納米硒。試驗(yàn)期49 d。試驗(yàn)結(jié)果表明：（1）與對(duì)照組相比，0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組末均重、增重率、肥滿(mǎn)度提高了10.7%、25.7%、1.89%及9.05%、25.67%、1.27%（P＜0.05），餌料系數(shù)降低了3.59%和3.13%（P＜0.05）；特定生長(zhǎng)率和成活率均有升高趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。（2）與對(duì)照組相比，0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組內(nèi)臟指數(shù)提高了13.79%和12.07%（P＜0.05），同時(shí)腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)都有升高趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。（3）相比對(duì)照組，0.5 mg/kg納米硒組血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、溶菌酶分別顯著提高了55.13%、114.62%、13.14%、10.41%；0.75mg/kg納米硒組上述指標(biāo)分別提高了22.58%、17.09%、11.89%、6.49%。與對(duì)照組相比，各納米硒組血清丙二醛（MDA）含量下降了21.65%、21.58%、23.59%（P＜0.05）。由此可見(jiàn)，納米硒具有促生長(zhǎng)、提高抗氧化性能及增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等作用，綜合各項(xiàng)指標(biāo)，建議草魚(yú)飼料中添加0.5 mg/kg納米硒為宜。

納米硒；草魚(yú)；生長(zhǎng)性能；免疫器官指數(shù)；抗氧化性

硒（Se）是人與動(dòng)物體必不可少的微量元素，因其具有促生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗氧化和抵抗病原菌等生物活性而廣受關(guān)注。但傳統(tǒng)硒源（無(wú)機(jī)硒）的最佳濃度與制毒濃度之間的安全限度狹窄，限制了硒的應(yīng)用。納米硒（nano-Selenium）采用納米技術(shù)，利用蛋白質(zhì)的酰胺平面吸引紅色元素硒，形成納米粒子，其具有吸收效率高、毒性小、生物活性強(qiáng)、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

研究表明，在異育銀鯽、中華絨螯蟹、鯉魚(yú)、團(tuán)頭魴、白鰱和鳙魚(yú)等飼料中添加納米硒具有促生長(zhǎng)、抗病力增強(qiáng)、餌料系數(shù)減少等作用。秦粉菊等（2011）對(duì)鎘脅迫下的吉富羅非魚(yú)添加納米硒發(fā)現(xiàn)，納米硒在一定程度上可改善鎘脅迫所造成的非特異性免疫功能和抗氧化能力的下降，具有一定的保護(hù)作用。陳劍杰等（2013）發(fā)現(xiàn)，納米硒在一定程度上可改善氟脅迫所造成的鯉魚(yú)抗氧化能力下降，預(yù)防組織結(jié)構(gòu)損傷。侍苗苗（2015）研究表明，納米硒可提高中華絨螯蟹在低氧脅迫下抵抗嗜水氣單胞菌感染的能力，并且蟹的存活率隨硒含量的升高呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。目前關(guān)于納米硒在草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）養(yǎng)殖上的應(yīng)用研究鮮有報(bào)道。

本試驗(yàn)以草魚(yú)為研究對(duì)象，探討在飼料中添加不同水平的納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)、免疫器官指數(shù)及抗氧化性能的影響，以期為納米硒在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器納米硒由廣州博仕奧提供；總超氧化物歧化酶（T-SOD）、總抗氧化能力（TAOC）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）、溶菌酶試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

試驗(yàn)儀器主要有723N可見(jiàn)分光光度計(jì)；TD5A高速冷凍離心機(jī)；HH-4恒溫水浴鍋；冰箱；解剖器具；水循環(huán)設(shè)備。

1.2 試驗(yàn)飼料飼料原料購(gòu)于江西巨仁科技集團(tuán)，飼料原料粉碎過(guò)40目篩，逐級(jí)混勻，加水制成粒徑2.0 mm顆粒后烘干，置于冰箱冷藏備用。試驗(yàn)分4組，空白對(duì)照組基礎(chǔ)飼料中不添加納米硒（0 mg/kg），試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組分別在基礎(chǔ)飼料中添加納米硒為0.25、0.5、0.75 mg/kg?；A(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1（干物質(zhì)基礎(chǔ)）。

表1 基礎(chǔ)飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 試驗(yàn)用魚(yú)試驗(yàn)在江西生物科技職業(yè)學(xué)院水循環(huán)實(shí)訓(xùn)中心進(jìn)行，草魚(yú)苗購(gòu)自南昌神龍漁業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，體重為（57.08±2.74）g/尾，選取個(gè)體活潑，無(wú)外傷的魚(yú)苗置于循環(huán)系統(tǒng)中暫養(yǎng)2周后，將試驗(yàn)魚(yú)分成4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)35尾，隨機(jī)放入12個(gè)0.785 m3的圓形水族箱中，整個(gè)試驗(yàn)在室內(nèi)循環(huán)水中進(jìn)行，水溫25℃左右，每天早、晚各投料1次，日投餌量根據(jù)魚(yú)采食情況試驗(yàn)魚(yú)總重量、天氣變化增減。每天精確記錄各組飼料投喂量以及魚(yú)的活動(dòng)情況、攝食情況、死亡情況等。每2 d換水1/3～1/2，以保證水質(zhì)干凈。每天24 h連續(xù)充氧、控溫。試驗(yàn)周期為49 d。

1.4 樣品采集和指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)測(cè)定試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)和試驗(yàn)結(jié)束后（禁食24 h）每組隨機(jī)選擇草魚(yú)15尾（每個(gè)重復(fù)5尾），進(jìn)行體尺測(cè)量（體長(zhǎng)、體高）和稱(chēng)重，計(jì)算增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）、餌料系數(shù)（FCR）、肥滿(mǎn)度（CF）及成活率（SR）。

增重率/%=（末均重-初均重）/初均重×100；

餌料系數(shù)=總投料量/（末體重-初體重）；

特定生長(zhǎng)率/（%/d）=（ln終末體重-ln初始體重）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

肥滿(mǎn)度/%=體重/體長(zhǎng)×100；

成活率/%=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)×100。

1.4.2 血清抗氧化酶活性指標(biāo)測(cè)定將生產(chǎn)性能指標(biāo)測(cè)定后，用紗布擦干固定，用2 mL無(wú)菌注射器進(jìn)行尾靜脈采血，分別置于2 mL離心管中，將血樣在4℃冰箱中靜置過(guò)夜，3500 r/min離心15 min制備血清，取上清液于1.5 mL離心管中，立即保存于-20℃冰箱備用。用于測(cè)定T-SOD、T-AOC、GSHPX、MDA、溶菌酶，測(cè)定方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4.3 免疫器官指數(shù)測(cè)定將采血之后的魚(yú)體置于冰袋上，立即解剖，分離腎臟、脾臟、肝胰臟、總內(nèi)臟，分別稱(chēng)重后置于離心管中-20℃保存?zhèn)溆谩Ｃ庖咂鞴僦笖?shù)計(jì)算公式如下：

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 2007進(jìn)行初步處理后，用SPSS 16.0（one-way ANOVA）進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s進(jìn)行顯著性比較，差異顯著為P＜0.05，差異極顯著為P＜0.01。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響由表2可知，飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)的特定生長(zhǎng)率和成活率未產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05），但與對(duì)照組相比，納米硒組均有升高趨勢(shì)。飼料中添加0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組末均重、增重率、餌料系數(shù)、肥滿(mǎn)度均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其中0.5 mg/kg組分別提高了10.7%、25.7%和1.89%，而餌料系數(shù)則下降了3.59%；0.75 mg/kg組各指標(biāo)與對(duì)照組相比分別提高了9.05%、25.67%、1.27%，餌料系數(shù)降低了3.13%，納米硒0.25 mg/kg組與對(duì)照組相比，末均重、增重率、肥滿(mǎn)度、特定生長(zhǎng)率差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)免疫器官指數(shù)的影響由表3可見(jiàn)，飼料中添加納米硒對(duì)腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)沒(méi)有顯著影響（P＞0.05），但0.5 mg/kg和0.75mg/kg納米硒組腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)相比對(duì)照組都有升高趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。添加0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組內(nèi)臟指數(shù)比對(duì)照組分別提高了13.79%和12.07%（P＜0.05）。

表3 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)免疫器官指數(shù)的影響‰

2.3 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)血清抗氧化酶活性的影響由表4可知，相比對(duì)照組，飼料中添加0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒后，草魚(yú)血清GSH-PX活性提高了55.13%和114.62%（P＜0.01），T-AOC提高了22.58%（P＜0.01）和17.09%（P＜0.05）。0.5 mk/kg納米硒組T-SOD和溶菌酶提高了13.14%、11.89%（P＜0.05），0.75 mk/kg納米硒組T-SOD和溶菌酶提高了10.41%和6.49%（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，各納米硒組血清MDA顯著下降了21.65%、21.58%、23.59%（P＜0.05），而組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)血清抗氧化酶活性的影響

3 討論

納米硒是一種納米級(jí)離子硒，其以蛋白質(zhì)為分散劑，具有毒性低、生物活性高等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已成為硒營(yíng)養(yǎng)研究的熱點(diǎn)。動(dòng)物對(duì)硒需要有劑量需求，在一定范圍內(nèi)，硒對(duì)動(dòng)物具有營(yíng)養(yǎng)作用，超出范圍則會(huì)引起硒的缺乏癥或者急性、慢性中毒，硒在致毒濃度與最佳濃度之間的安全限度狹窄，相比之下納米硒的安全范圍則較寬泛。

3.1 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響硒可以提高消化酶活性和食物的消化吸收率，從而促進(jìn)生長(zhǎng)（蘇傳福，2008），不同硒源吸收情況不同且劑量要求也不同。侍苗苗（2015）研究發(fā)現(xiàn)，在中華絨鰲蟹飼料中添加0.2 mg/kg納米硒時(shí)，可顯著提高其特定生長(zhǎng)率、存活率（P＜0.05），餌料系數(shù)最低，結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，0.2 mg/kg納米硒組與1.0 mg/kg酵母硒組的養(yǎng)殖效果相近；田文靜（2014）研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.4～0.6 mg/kg酵母硒可顯著改善中華絨鰲蟹的生長(zhǎng)狀況和抗氧化能力；鄧岳松等在飼料中添加0.3 mg/kg的納米硒可極顯著促進(jìn)羅非魚(yú)的生長(zhǎng)。楊原志等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，硒水平對(duì)軍曹魚(yú)幼魚(yú)特定生長(zhǎng)率和增重率有極顯著影響（P＜0.01），對(duì)成活率和飼料系數(shù)無(wú)顯著影響。龍萌等（2015）發(fā)現(xiàn)，在團(tuán)頭魴飼料中添加酵母硒可顯著提高其增重率、特定生長(zhǎng)率，降低餌料系數(shù)。本研究在飼料中添加納米硒發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組提高了草魚(yú)末均重、增重率、肥滿(mǎn)度、特定生長(zhǎng)率以及成活率，降低了餌料系數(shù)，促進(jìn)了草魚(yú)生長(zhǎng)，這與蘇傳福（2008）研究結(jié)果一致。

3.2 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)免疫器官指數(shù)的影響硒對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有重要的作用，一是可影響淋巴細(xì)胞核胸腺細(xì)胞的發(fā)生，影響免疫應(yīng)答，二是可刺激免疫球蛋白的生成，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，提高機(jī)體免疫功能，三是可促進(jìn)抗體、補(bǔ)體的合成，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫能力。華雪銘等（2001）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平的酵母硒均使異育銀鯽對(duì)嗜水氣單胞菌的半致死量極顯著提高，且隨著酵母硒的添加量的增加而增大。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加納米硒對(duì)腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)沒(méi)有顯著影響（P＞0.05），但0.5 mg/kg納米硒組腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)相比對(duì)照組都有升高趨勢(shì)。添加0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組內(nèi)臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組13.79%、12.07%（P＜0.05）。免疫器官指數(shù)是反映免疫器官發(fā)育程度的重要指標(biāo)，一般來(lái)說(shuō)免疫器官指數(shù)越大，免疫器官發(fā)育越完善，機(jī)體的免疫力相對(duì)就越強(qiáng)。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組草魚(yú)腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝胰臟指數(shù)均有升高趨勢(shì)，表明納米硒可在一定程度上起到增強(qiáng)免疫的效果。

3.3 飼料中添加納米硒對(duì)草魚(yú)血清抗氧化酶活性的影響SOD、GSH-PX是細(xì)胞內(nèi)的主要抗氧化酶，T-AOC可反映體內(nèi)總抗氧化能力的大小。GSH-PX的活性中心是硒代半胱氨酸，硒的抗氧化作用通過(guò)該酶來(lái)實(shí)現(xiàn)，其酶活力大小可以反映機(jī)體硒水平。血液中SOD、GSH-PX活力高低可間接反映機(jī)體清除體內(nèi)不飽和脂肪酸脂質(zhì)過(guò)氧化作用產(chǎn)生自由基、超氧陰離子、H2O2等的能力。在本試驗(yàn)中，飼料中添加納米硒能提高草魚(yú)血清GSH-PX、T-AOC、T-SOD和溶菌酶活性，且隨著納米硒添加水平的增加而逐漸升高后趨于穩(wěn)定。這表明飼料中添加納米硒可以提高草魚(yú)血清抗氧化酶活性，Zhu等（2012）發(fā)現(xiàn)，大口黑鱸肝臟GSH-PX活性隨著硒水平的升高而逐漸升高，當(dāng)飼料中硒水平達(dá)到1.85 mg/kg后達(dá)到穩(wěn)定。有機(jī)硒更能有效提高肝臟和血清的GSH-PX活性（楊原志，2016），可能與不同硒源吸收利用途徑不同有關(guān)（Zhou，2009）。

MDA是脂質(zhì)氧化產(chǎn)物（Dotan Y等，2004），會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等大分子的交聯(lián)聚合，可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物生成速率和強(qiáng)度，也可間接反映組織脂質(zhì)過(guò)氧化損傷程度。機(jī)體抗氧化作用增強(qiáng)，可以減少自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物對(duì)機(jī)體生物膜完整性的破壞，從而提高機(jī)體免疫力和抗病能力。秦粉菊等（2011)研究發(fā)現(xiàn)，納米硒可降低吉富羅非魚(yú)血清MDA含量。陳劍杰等（2013）研究表明，在鯉魚(yú)的飼料中添加納米硒可增強(qiáng)鯉魚(yú)肝組織中SOD和GSH-PX活性，降低MDA含量，緩解了氟脅迫對(duì)鯉魚(yú)肝臟組織結(jié)構(gòu)的損傷。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加各水平納米硒均顯著降低了血清MDA活性（P＜0.05），各添加組之間差異不顯著（P＞0.05）。總體來(lái)說(shuō)納米硒可以提高抗氧化酶活力，清除體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物和自由基。

溶菌酶具有殺菌作用，是魚(yú)類(lèi)非特異性檢疫系統(tǒng)的主要成分，在魚(yú)類(lèi)免疫中起到重要的作用，是吞噬細(xì)胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，可清除其他抗菌因子作用后所殘余的細(xì)菌細(xì)胞壁并增強(qiáng)其他免疫因子的抗菌敏感性，協(xié)同其他免疫因子共同抵御外來(lái)病原的入侵。目前，常用血清溶菌酶活性來(lái)考察水生動(dòng)物的非特異性免疫功能（張倩倩等，2015；王自蕊等，2014）。血清溶菌酶活性高，其免疫能力也相應(yīng)提高。本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飼料中添加0.5 mg/kg和0.75 mg/kg納米硒組血清溶菌酶活性顯著升高（P＜0.05)，曹丹等（2002）發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.3%硒酵母和100 ppm有機(jī)鉻可以極顯著的增加暗紋東方鲀脾臟的溶菌酶活力（P＜0.01），劉振興等（2015）報(bào)道，與對(duì)照組相比，飼料中添加益生菌和有機(jī)硒可以顯著提高血清溶菌酶活力（P＜0.05）。這些研究表明，納米硒能提高水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的非特異性免疫力。由此可推測(cè)，飼料中添加納米硒能改善草魚(yú)的生長(zhǎng)性能與增強(qiáng)魚(yú)的非特異性免疫有關(guān)。

4 結(jié)論

飼料中添加納米硒可促進(jìn)草魚(yú)的生長(zhǎng)，提高增重率、特定生長(zhǎng)率，降低餌料系數(shù)，并能提高草魚(yú)各免疫器官指數(shù)和血清抗氧化酶活性，降低丙二醛含量，進(jìn)而減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷，提高草魚(yú)抗感染能力，綜合各項(xiàng)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)飼料中以0.5 mg/kg添加組效果最佳。

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This experiment was conducted to investigate the effects of nano-Selenium（Nano-Se）in diets on growth peiformance，immune organ indexes，serum antioxidase of grass carp（Ctenopharyngodon idellus）.A total of 420 tails healthy grass carp with similar body weight[（57.08±2.74）g]were randomly assigned to 4 groups with 3 replicates per group and 35 fish per replicate.Nano-Se as additives was added to the basal diet with 0，0.25，0.5 and 0.75 mg/kg.Whole feeding experiment lasted for 49 days.The results showed as follows：（1）Compared with control group，the final body weight（FBW），weight gain rate（WGR），condition factor（CF）were increased 10.7%，25.7%，1.89%in 0.5 mg/kg group and 9.05%，25.67%，1.27%in 0.75 mg/kg Nano-Se group（P＜0.05），the feed conversion ratio（FCR）were decreased 3.59% and 3.13%（P＜0.05），special growth rate（SGR）and survival rate（SR）were not significantly increased（P＞0.05）.（2）Compared with control group，the visceral index in 0.5 mg/kg and 0.75 mg/kg groups were significantly increased 13.79% and 12.07%（P＜0.05），and the renal index，spleen index，hepatopancreas index were not significantly increased（P＞0.05）.（3）Activities of glutathione peroxidase（GSH-PX），total antioxidant enzymes（T-AOC），total superoxide dismutase（T-SOD）and lysozyme in serum were increased 55.13%，114.62%，13.14%，10.41%in 0.5 mg/kg group and increased 22.58%，17.09%，11.89%，6.49%in 0.75 mg/kg group（P＜0.05）.While malondialdehyde（MDA）content in all groups were significantly decreased（P＜0.05）.The results indicated that diets supplemented with Nano-Se could improve grass carp growth performance，and the effects of 0.5 mg/kg Nano-Se was better，which improved oxidation resistance and immune function.

Nano-Se；Ctenopharyngodon idellus；growth performance；immune organ indexes；oxidation resistance

S816.7

A

1004-3314（2017）16-0030-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171608

江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（GJJ151465）；2015年江西省農(nóng)牧漁業(yè)科研指導(dǎo)性計(jì)劃項(xiàng)目（NY201510）