2017年7月12日—15日

新疆 石河子

中國解剖學會 第十五屆全國組織學與胚胎學青年學術(shù)研討會暨第十二屆組織學與胚胎學教學與科研技術(shù)研討會論文匯編

2017年7月12日—15日

新疆 石河子

1 成年大鼠周圍神經(jīng)損傷后機械痛異常慢性轉(zhuǎn)化中CD4+T細胞浸潤相應脊神經(jīng)背根柔膜丁有權(quán) 杜彬 肖霞 齊建國四川大學華西基礎(chǔ)醫(yī)學與法醫(yī)學院組織胚胎學與神經(jīng)生物學教研室 成都 610041 CD4+T細胞自身免疫在神經(jīng)損傷后病理性疼痛慢性轉(zhuǎn)化中至關(guān)重要。致病性CD4+T細胞浸潤神經(jīng)環(huán)路的位置目前尚未明確，因此阻礙了慢性神經(jīng)病理性疼痛自身免疫機理的深入研究。本研究以成年SD大鼠改良備用性神經(jīng)損傷(mSNI)為模型，利用脾臟或者淋巴結(jié)切除和疼痛行為學測試篩選致病性CD4+T細胞的起源局部淋巴結(jié)，再利用淋巴結(jié)切除和免疫熒光染色明確致病性CD4+T細胞浸潤神經(jīng)環(huán)路的位置。實驗結(jié)果表明，脾臟切除可特異性抑制大鼠mSNI術(shù)后機械痛異常（而非機械痛過敏、冷痛異常和熱痛異常）的慢性轉(zhuǎn)化。更為重要的是，腰部（而非腘窩、坐骨和頸部）淋巴結(jié)切除能抑制mSNI術(shù)后機械痛異常。致病性腰部淋巴結(jié)特異性引流腰段的脊髓背角、脊神經(jīng)背根和背根節(jié)。mSNI術(shù)后，CD4+T細胞選擇性浸潤相應腰段脊神經(jīng)背根柔膜（而非背根節(jié)和脊髓背角），而腰部淋巴結(jié)切除可顯著減少腰段背根柔膜CD4+T細胞的浸潤。腰部淋巴結(jié)切除會顯著抵消mSNI術(shù)后腰段脊髓背角中膠質(zhì)細胞的活化和PKCγ神經(jīng)元表達的增加。因此，成年SD大鼠mSNI術(shù)后，致病性CD4+T細胞來源于腰部淋巴結(jié)，選擇性浸潤腰部背根柔膜，特異性參與神經(jīng)損傷后機械痛異常的慢性轉(zhuǎn)化，提示背根柔膜CD4+T細胞浸潤在神經(jīng)損傷后機械痛異常慢性轉(zhuǎn)化中的重要性。

2 背根神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元前體細胞的來源及特征馬微 楊金偉 羅濤 王先斌 代云飛 郭建輝 李力燕 昆明醫(yī)科大學神經(jīng)科學研究所 昆明 650500 背根神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)細胞是軀體感覺的初級傳入神經(jīng)元，外周神經(jīng)疾病或者損傷可導致背根節(jié)神經(jīng)元減少、神經(jīng)元之間的連接出現(xiàn)紊亂、創(chuàng)傷性神經(jīng)瘤的形成等，造成感覺傳導異常，引起神經(jīng)病理性疼痛，同時也常常伴有神經(jīng)修復、再生，提示神經(jīng)病理性疼痛與神經(jīng)修復再生之間存在某種聯(lián)系。成年外周神經(jīng)系統(tǒng)中也存在神經(jīng)發(fā)生或神經(jīng)元數(shù)量增多現(xiàn)象，特別是在背根神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)中。新生的神經(jīng)元從何而來，又是什么因素促使了正常發(fā)育甚至是在外周神經(jīng)損傷情況下，背根節(jié)中神經(jīng)元數(shù)量的增加呢？本研究在SD孕鼠三個妊娠時間點(E9、E12、E19)腹腔注射細胞增殖標記物5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrU)，然后在其生后不同時間點 (P1、P3、P7、P14、P21、P28) 的仔鼠中利用抗BrU單克隆抗體，免疫熒光組織化學染色來顯示增殖細胞，并結(jié)合多種細胞標記物，雙重染色來判斷細胞的類型及特征。研究發(fā)現(xiàn)只有E19注射BrU的孕鼠，在其生后不同時間點（P1、P3、P7、P14、P21、P28）的仔鼠背根神經(jīng)節(jié)中能夠檢測到BrU陽性細胞，并且BrU陽性細胞表達衛(wèi)星膠質(zhì)細胞特異性標記物GS及神經(jīng)元前體細胞標記物Tuj1。提示這一類BrU陽性細胞可能是在E19左右從細胞周期進入到休眠期，進入休眠期的細胞屬于衛(wèi)星細胞的特殊亞群，可能是感覺神經(jīng)元前體細胞的來源。本研究追溯背根神經(jīng)節(jié)中休眠期感覺神經(jīng)元前體細胞的起源及特征，確定前體細胞從細胞周期進入休眠期的時期，進一步闡明外周神經(jīng)發(fā)生的方式，為外周神經(jīng)損傷后引起的神經(jīng)病理性疼痛的機制研究提供理論依據(jù)。

3 The role of BRE in ovarian follicle, neural tube and som ite developmentGuang Wang1, Kenneth Ka, Ho Lee2, Xuesong Yang11Division of Histology and Embryology, Medical College, Jinan University, Guangzhou 510632;2Key Laboratory for Regenerative Medicine of the Ministry of Education, School of Biomedical Sciences, Chinese University of Hong Kong, Shatin, Hong Kong Brain and reproductive expression (BRE) gene, highly expressed in nervous and reproductive system organs, plays an important role in modulating DNA damage repairment under stress response and pathological conditions. Folliculogenesis, a process that ovarian follicle develops into maturation, is closely associated w ith the interaction between somatic granulosa cell and oocyte. We found that BRE was normally expressed in the oocytes and granulosa cells from the primordial follicle stage. There was a reduction in follicles number of BRE mutant (BRE-/-) mice. It was attributed to increase the follicular atresia in ovaries, as a result of retarded follicular development. We established that cell proliferation was inhibited, while apoptosis was dramatically increased in the granulosa cells in absence of BRE. In addition, expressions of γ-H2AX (marker for show ing DNA double strand breaks) and DNA damage-relevant genes were both up-regulated in BRE-/-m ice. These results suggest that absence of BRE, def ciency in DNA damage repairment, causes increased apoptosis in granulosa cells, which in turn induces follicular atresia in BRE-/-mice. Furthermore, little is known where BRE is expressed in the developing embryo or its role in embryonic development. We used in situ hybridization to reveal the spatio-temporal expression pattern for BRE in chick embryo during development. We demonstrate that BRE plays an important role in regulating neurogenesis and som itogenesis, which are associated w ith changes of cell cycle of the neural crest cells and neural tube cells during early chick embryo development.

4 TLR4在大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用邢海會1丁曉慧2解輝2謝菊華2羅崟洲3陳豐洋31沈陽醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院人體解剖與組織胚胎學碩士研究生，2沈陽醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室，3沈陽醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)2015級2班 沈陽110034 Toll樣受體4（Toll-like receptor 4, TLR4）在缺血性腦血管疾病中發(fā)揮著重要作用，本研究旨在探討TLR4在腦缺血再灌注損傷中的作用和機制。實驗共分為3組：假手術(shù)組、缺血＋生理鹽水組（缺血組）、缺血＋TAK組。建立大鼠腦缺血模型，缺血1h后腹腔注射生理鹽水或TAK-242（TLR4拮抗劑），缺血2h后再灌注，各組動物術(shù)前術(shù)后采用Zealonga評分法進行神經(jīng)功能缺損體征評分，分別在術(shù)后1d、3d、7d、14d取材，進行HE染色觀察病理學改變，Western blot檢測TLR4及P-IKKα/β在缺血側(cè)腦組織的表達。神經(jīng)功能評分顯示，缺血組和缺血+TAK組顯著高于假手術(shù)組，缺血+TAK組低于缺血組。HE染色結(jié)果顯示，缺血組和缺血＋TAK組均出現(xiàn)不同程度的病理改變，缺血組14d時病理損傷最嚴重，1d時缺血＋TAK組病理損傷較缺血組明顯，其余時間點均為缺血組病理損傷更嚴重。TLR4在缺血側(cè)腦組織的表達：術(shù)后1d，缺血＋TAK組高于假手術(shù)組和缺血組，缺血組高于假手術(shù)組；術(shù)后3d和7d，缺血組高于假手術(shù)組和缺血＋TAK組，缺血＋TAK組高于假手術(shù)組；術(shù)后14d，缺血組和缺血＋TAK組高于假手術(shù)組。P-IKKα/β在缺血側(cè)腦組織的表達：術(shù)后1d，缺血＋TAK組高于假手術(shù)組和缺血組，缺血組高于假手術(shù)組；術(shù)后3d、7d和14d，缺血組高于假手術(shù)組和缺血＋TAK組，缺血＋TAK組高于假手術(shù)組。以上結(jié)果提示TLR4在再灌注早期（1d）可減輕腦缺血損傷，而后期（3d至14d）可加重腦缺血損傷。TLR4發(fā)揮作用的機制可能是由于影響了P-IKK a/β的表達。

5 紋狀體腺苷A2A受體神經(jīng)元通過支配外側(cè)蒼白球小清蛋白神經(jīng)元調(diào)控睡眠-覺醒行為袁向山1,2李瑞錫1黃志力2復旦大學1人體解剖與組織胚胎學系，2藥理學系 上海 200032 紋狀體功能障礙患者常出現(xiàn)睡眠-覺醒的異常，紋狀體實驗性毀損小鼠也出現(xiàn)嚴重的睡眠-覺醒紊亂，提示紋狀體參與睡眠-覺醒行為的調(diào)控。但紋狀體內(nèi)何種類型神經(jīng)元參與睡眠-覺醒行為調(diào)控，尚不清楚。紋狀體是腺苷A2A受體（A2AR）分布最高的核團之一。A2AR是內(nèi)源性促眠物質(zhì)腺苷發(fā)揮促眠作用的關(guān)鍵受體。因此，我們推測紋狀體內(nèi)腺苷A2AR陽性神經(jīng)元可能參與調(diào)控睡眠-覺醒行為。我們利用A2AR-Cre和A2AR/小清蛋白-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠、化學遺傳學和光遺傳學特異性神經(jīng)元操縱技術(shù)，結(jié)合特異性毀損、神經(jīng)示蹤、免疫電鏡和電生理記錄技術(shù)，解析紋狀體A2AR神經(jīng)元與睡眠-覺醒行為調(diào)控的關(guān)系。化學遺傳法特異性激活紋狀體頭端、中部的A2AR神經(jīng)元，顯著增加非快速動眼睡眠時間；但激活尾端A2AR神經(jīng)元不改變睡眠-覺醒時相。神經(jīng)示蹤顯示紋狀體A2AR神經(jīng)元軸突至外側(cè)蒼白球(GPe)三種投射方式，頭端A2AR神經(jīng)元軸突只投射至頭端GPe；中部A2AR神經(jīng)元軸突可同時投射至頭端和尾端GPe；尾端A2AR神經(jīng)元軸突僅投射至尾端GPe。免疫電鏡技術(shù)、電生理和光遺傳學技術(shù)證實，紋狀體頭端A 2AR神經(jīng)元主要和GPe中小清蛋白（PV）陽性神經(jīng)元形成抑制性突觸聯(lián)系。進而利用A2AR/PV-Cre小鼠，將GPe中PV神經(jīng)元特異性毀損后，可以抵消激活紋狀體A2AR神經(jīng)元引起的非快速動眼睡眠的增加。以上結(jié)果揭示紋狀體A2AR神經(jīng)元參與睡眠-覺醒行為的調(diào)控，是通過紋狀體A2AR神經(jīng)元至外側(cè)蒼白球PV神經(jīng)元通路得以實現(xiàn)，并可能為睡眠障礙治療提供新靶點。

6 Neu-P11對急性葡萄膜炎兔視網(wǎng)膜GFAP表達及眼內(nèi)炎癥的影響石金鳳 莫中成 謝遠杰 張瑤 龍治峰 賀鵬程 尹衛(wèi)東南華大學醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 衡陽 421001 褪黑素(Melatonin, MLT)是由大腦松果體腺、視交叉上核及周圍組織合成分泌的一種吲哚類神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、調(diào)節(jié)眼內(nèi)壓、抗炎及抗氧化等功能。Neu-P11(Piromelatine)則是一種新型褪黑素非選擇性受體激動劑，我們前期研究表明Neu-P11具有調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、調(diào)節(jié)眼內(nèi)壓、抗炎及抗氧化等功能。本實驗研究Neu-P11對急性葡萄膜炎兔視網(wǎng)膜GFAP表達的影響。本實驗將30只新西蘭白兔隨機分組，將其中的10只分為對照組，對其它20只進行玻璃體注射LPS，建立葡萄膜炎模型，術(shù)后將葡萄膜炎模型組新西蘭兔分成LPS組和LPS+ Neu-P11組，后者用Neu-P11滴眼(100 μmol/L，每天滴三次，連續(xù)滴7d)，在術(shù)后24h、36h、48h 觀察臨床癥狀，術(shù)后36h抽房水檢測炎癥細胞，在術(shù)后8d處死動物，取眼球做組織切片，免疫組織化學檢測視網(wǎng)膜GFAP表達情況。結(jié)果顯示用Neu-P11滴眼后可以減輕LPS引起的葡萄膜炎炎癥反應，其炎性細胞的數(shù)目下降。免疫組織化學檢測視網(wǎng)膜GFAP結(jié)果顯示，LPS組呈強陽性，而LPS+ Neu-P11組明顯減弱。Neu-P11能夠保護視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)，降低由LPS引起的視網(wǎng)膜損傷。故Neu-P11可以減輕兔實驗性葡萄膜炎的炎癥反應，保護視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)，是一種安全、有效的防治葡萄膜炎的藥物。

7 BDNF過表達干預海洛因成癮大鼠NAc腦區(qū)全基因組高通量分析李一欣 梁文妹 貴州醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 貴州550025 為了明確BDNF對海洛因成癮大鼠NAc腦區(qū)影響的下游靶基因，我們包裝了BNDF過表達慢病毒，并對大鼠NAc腦區(qū)進行微量注射轉(zhuǎn)染，之后構(gòu)建海洛因成癮大鼠模型，分為海洛因成癮組，BDNF過表達組和正常對照組。利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)檢測大鼠NAc內(nèi)的全基因組轉(zhuǎn)錄水平，篩選出BDNF可能作用的下游靶基因，之后利用RT-PCR和Western blotting對候選靶基因進行驗證。結(jié)果顯示海洛因成癮組檢測了41713條基因，BDNF過表達組檢測了41734條基因。海洛因成癮組與正常組大鼠比較共有256條差異表達基因表達上調(diào)倍值超過2倍，有202條差異表達基因表達下調(diào)倍值超過2倍；BDNF過表達組與正常組大鼠比較共有212條差異表達基因表達上調(diào)倍值超過2倍，有120條差異表達基因表達下調(diào)倍值超過2倍。海洛因成癮引起包括認知能力、軸突生長、突觸生長和對嗎啡的反應等生物功能的上調(diào)，表明海洛因通過增強突觸可塑性參與成癮的過程。BDNF過表達后，海洛因成癮大鼠NAc內(nèi)MAPK通路正向調(diào)節(jié)功能及突觸傳遞能力三種生物學過程較海洛因成癮組顯著上調(diào)。KEGG分析，海洛因成癮激活了NAc內(nèi)與成癮和突觸可塑性相關(guān)的信號通路；BDNF過表達后，激活的與成癮和突觸可塑性相關(guān)的信號通路較海洛因成癮組更多。結(jié)果提示NAc腦區(qū)BDNF過表達通過增強大鼠的神經(jīng)可塑性參與海洛因成癮的過程，為進一步深入研究BDNF在海洛因成癮中的分子機制提供了實驗基礎(chǔ)。

8 SIRT1對海洛因成癮大鼠伏隔核突觸可塑性的影響夏白娟 梁文妹 貴州醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 貴州550025 實驗通過包裝rAAV9-rSirt1和rAAV9-rSirt1 ShRNA腺相關(guān)病毒，并對大鼠NAc腦區(qū)進行微量轉(zhuǎn)染，建立生理鹽水對照組、海洛因成癮組、海洛因成癮+SIRT1過表達組、海洛因成癮+SIRT1沉默組大鼠模型；觀察各組大鼠納洛酮戒斷癥狀和條件位置偏愛（CPP）誘導情況；運用PCR基因芯片技術(shù)檢測各組NAc中與突觸可塑性相關(guān)基因的表達變化；應用免疫組織化學和Western blot技術(shù)檢測突觸可塑性相關(guān)蛋白的定位和表達；透射電鏡觀察突觸的超微結(jié)構(gòu)，探討突觸可塑性與成癮行為變化的可能關(guān)系。結(jié)果顯示經(jīng)海洛因處理的3組大鼠出現(xiàn)明顯的戒斷癥狀以過表達最為典型，沉默組戒斷癥狀有所減輕；CPP結(jié)果表明生理鹽水對照組大鼠在訓練前、后停留于伴藥箱內(nèi)的時間無明顯差異，而海洛因成癮組、SIRT1過表達組大鼠經(jīng)訓練后在伴藥箱停留時間明顯長于訓練前，SIRT1沉默組大鼠在伴藥箱停留時間長于訓練前，但較成癮和過表達組有明顯降低。免疫組織化學和Western blot結(jié)果顯示Cdk5、NF-κB、PSD95、Syn的表達在海洛因成癮組表達增強，SIRT1過表達時進一步升高，SIRT1沉默組表達有所下降；△FosB的表達在海洛因成癮組、SIRT1過表達組和SIRT1沉默組表達均升高，但3組之間差異不具有統(tǒng)計學意義。透射電鏡觀察經(jīng)海洛因處理的3組大鼠NAc區(qū)突觸前膜內(nèi)線粒體有腫脹，突觸數(shù)量有所增加，突觸間隙增寬，突觸后膜致密物增厚。結(jié)果提示NAc腦區(qū)SIRT1過表達可增強大鼠的行為敏化，而SIRT1沉默組減輕海洛因成癮大鼠的戒斷癥狀和CPP誘導，有助于為戒毒治療尋找新的有效靶點。

9 人骨髓來源的Muse細胞體外誘導分化為神經(jīng)組織細胞的研究趙雅玉2陳美美2張亞平2陳穎2陳雪11江南大學醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學系 無錫2141222南通大學醫(yī)學院組織學與胚胎學系 南通 226001 本研究主要利用多系分化持續(xù)應激（M use）細胞的多能分化特性，定向誘導其分化為神經(jīng)組織細胞，希望通過提高分化率來改善種子細胞移植修復神經(jīng)系統(tǒng)損傷的效果。首先利用長時間胰酶應激法從人骨髓基質(zhì)干細胞中分離得到M use細胞，體外通過神經(jīng)誘導培養(yǎng)基誘導M use細胞分化為神經(jīng)前體細胞（Muse-NPCs），利用神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞誘導培養(yǎng)基誘導Muse-NPCs分化。神經(jīng)誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)的M use細胞呈現(xiàn)干細胞球狀懸浮生長，免疫細胞化學技術(shù)檢測結(jié)果顯示其表達神經(jīng)干細胞標記物Nestin和NCAM，為Muse-NPCs；神經(jīng)元誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)的Muse-NPCs 細胞胞體透亮，突起逐漸伸長，類似神經(jīng)元形態(tài)。免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達神經(jīng)元特異性標記物β-Tubulin Ⅲ和NF200，Western-blot結(jié)果顯示其表達特異性運動神經(jīng)元標記物HB9；星形膠質(zhì)細胞誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)的Muse-NPCs胞體增大，有較粗而短的突起發(fā)出。免疫細胞化學染色結(jié)果顯示在3d和5d時均表達有星形膠質(zhì)細胞特異性標記物S100β和GFAP。ELISA檢測顯示誘導的星形膠質(zhì)細胞合成并分泌bFGF。少突膠質(zhì)細胞誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)的Muse-NPCs細胞胞體小而透亮，突起細長。免疫細胞化學技術(shù)檢測結(jié)果顯示7d和14d時細胞表達少突膠質(zhì)細胞特異性標記物O4和CNPase，同時誘導少突膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)兩種細胞隨著時間逐漸貼合，并有部分突起纏繞。經(jīng)體外誘導形成的Muse-NPCs具有神經(jīng)干細胞特性，經(jīng)誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)之后可以向3種神經(jīng)組織細胞分化，并具有一定的生物學功能，這為后期作為種子細胞應用于神經(jīng)損傷修復提供了一定的依據(jù)。

10 周圍神經(jīng)損傷后感覺與運動神經(jīng)差異表達蛋白的研究賀倩茹1，2季煜華1吳啟運1仇嘉穎1丁斐1南通大學教育部，江蘇省神經(jīng)再生重點實驗室神經(jīng)再生協(xié)同創(chuàng)新中心2南通大學醫(yī)學院組織學與胚胎學系 南通226001 周圍神經(jīng)損傷后功能能否良好的恢復，主要取決于再生的神經(jīng)是否精確地再支配靶器官（感覺神經(jīng)末梢和運動終板）。因此，充分理解周圍神經(jīng)趨化性再生的細胞和分子生物學基礎(chǔ)，在臨床治療中加以運用，促進周圍神經(jīng)更好地恢復具有非常重要的意義。本研究利用同位素標記相對和絕對定量等量異位標簽 (iTRAQ) 偶聯(lián)在線二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 (2D LC-MS/MS) 的蛋白質(zhì)組學技術(shù)，建立成年大鼠運動與感覺神經(jīng)損傷后14d蛋白質(zhì)組表達譜，通過定量分析獲得176個差異表達蛋白，其中47個感覺神經(jīng)近側(cè)端高表達蛋白，27個運動神經(jīng)近側(cè)端高表達蛋白，49個感覺神經(jīng)遠側(cè)端高表達蛋白，53個運動神經(jīng)遠側(cè)端高表達蛋白。將以上差異表達蛋白進行生物學功能分類發(fā)現(xiàn)，涉及脂質(zhì)運輸、內(nèi)部信號級聯(lián)反應、蛋白復合物生物發(fā)生、大分子復合體裝配等生物學過程的蛋白在運動神經(jīng)近側(cè)端高表達；而涉及細胞粘附、細胞增殖、肌動蛋白骨架組織、循環(huán)系統(tǒng)過程、蛋白激酶級聯(lián)的正調(diào)節(jié)、氧化應激等生物學過程的蛋白在感覺神經(jīng)近側(cè)端高表達。涉及軸突髓鞘化、神經(jīng)沖動的傳播、神經(jīng)元凋亡、運動調(diào)節(jié)、神經(jīng)系統(tǒng)過程、氧化應激反應、蛋白質(zhì)運輸?shù)壬飳W功能的蛋白在運動神經(jīng)遠側(cè)端高表達；而涉及軸突發(fā)生、再生、軸突損傷后反應、氧化還原、組織重塑、血管發(fā)育、轉(zhuǎn)運、蛋白激酶級聯(lián)調(diào)控、神經(jīng)系統(tǒng)進程等生物學功能的蛋白在感覺神經(jīng)遠側(cè)端高表達。通過實時定量PCR和Western blot對部分差異表達蛋白進行驗證，驗證結(jié)果和蛋白質(zhì)組學檢測結(jié)果一致。以上結(jié)論提示在周圍神經(jīng)損傷后趨化性再生過程中損傷神經(jīng)近側(cè)端及遠側(cè)端蛋白具有不同的表達模式，可能在再生過程中發(fā)揮著重要作用。

11 DJ-1/PARK 7 m odulates Nurr1 activity both in vitro and in vivoJing Ren, Yi Li, Lingling Lu Department of Neurobiology, Capital Medical University, Center of Neural Regeneration and Repair, Key Laboratory for Neurodegenerative Diseases of the Ministry of Education, Beijing 100069 China Parkinson’s disease (PD) is one of the most common neurodegenerative diseases. DJ-1, also known as PARK7, is a multifunctional molecule which is initially identifed as a novel oncogene and has recently been found to be a causative gene for PD, w ith protecting dopaminergic neurons against oxidative damage and the biomarker value for the PD diagnosis. It is particular noteworthy that DJ-1 has been shown to directly regulate the transcription factors nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) and p53. Thus, it is possible that DJ-1 regulates the activity of other transcription factors in the central nervous system (CNS). Exam ining this possibility is more important for understanding the pathogenesis of PD because transcription factor defects are closely associated w ith this disease. The orphan nuclear receptor, NR4A2 (Nurr1) is the most important transcription factor involved in PD and is required for the development and survival of dopam inergic neurons in the CNS. In the present study, we investigated the regulatory ef ects of DJ-1 and its L166P mutant on Nurr1 transcriptional activity w ith their underlying molecular mechanisms. We found that exogenous application of DJ-1, but not its L166P mutant, signif cantly enhances the nuclear translocation and the transcriptional activity of Nurr1 both in vitro and in vivo. Moreover, overexpression of DJ-1 but not its L166P mutant can modulate the transcriptional activity of Nurr1 via the Raf/MEK/ERK m itogen activated protein kinase (MAPK) signaling pathway both in vitro and in vivo. Furthermore, knocking down of DJ-1 attenuates Nurr1 activity. Further investigation showed that signaling of Raf/MEK/ERK is involved in the regulatory process and that activation induced by exogenous DJ-1 is antagonized by U0126, an ERK pathway inhibitor, also indicating that DJ-1 modulates Nurr1 activity via the Raf/MEK/ERK pathway. Our fndings shed light on the novel function of DJ-1 to enhance Nurr1 activity and provided the f rst insight into the molecular mechanism by which DJ-1 increases Nurr1 activity.

12 RNA干擾EphB2的上調(diào)抑制膠質(zhì)-纖維疤痕形成并促進軸突生長李奕 談玲 強慧萍 王曉冬 南通大學醫(yī)學院組織學與胚胎學系 南通 226001 脊髓損傷后所形成的膠質(zhì)-纖維疤痕，是脊髓損傷后難以修復的一個重要因素，為此我們擬利用RNAi技術(shù)爭取從源頭開始阻止其形成。在改良的腔室載玻片系統(tǒng)中培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞和成纖維細胞，經(jīng)過特殊的劃痕損傷建立膠質(zhì)-纖維疤痕模型；并在此基礎(chǔ)上進行針對EphB2的RNAi和微流控芯片觀察神經(jīng)元軸突的生長情況。當兩種細胞共培養(yǎng)并劃痕后，光鏡及免疫細胞化學染色觀察發(fā)現(xiàn)兩種細胞交界處會出現(xiàn)成纖維細胞包裹星形膠質(zhì)細胞的特殊結(jié)構(gòu)；EphB2、ephrinB2、NG2、phosphacan和neurocan的免疫熒光強度明顯增強。而當對其進行EphB2的RNAi后，發(fā)現(xiàn)兩種細胞交界處細胞雖有交叉，但未能出現(xiàn)成纖維細胞包裹星形膠質(zhì)細胞的特殊結(jié)構(gòu)。Western blot顯示，EphB2、NG2和neurocan的表達量明顯下降；而ephrinB2、FN、GFAP和phosphacan的表達無顯著變化。當使用微流控芯片觀察對神經(jīng)元軸突生長的影響時，發(fā)現(xiàn)VSC4.1細胞能從胞體室伸出細長的突起，沿著微流控芯片的微通道進入疤痕室；當疤痕室中含有CSPGs或者星形膠質(zhì)細胞與成纖維細胞共培養(yǎng)并損傷時，軸突末端會出現(xiàn)膨大樣結(jié)構(gòu)，且軸突長度與相應對照組比較明顯縮短；而當星形膠質(zhì)細胞與成纖維細胞共培養(yǎng)并損傷，同時添加EphB2的siRNA后，軸突的生長狀態(tài)得到明顯好轉(zhuǎn)。這些結(jié)果提示針對EphB2的siRNA作用后，能適當?shù)匾种颇z質(zhì)-纖維疤痕的形成，尤其是對軸突生長產(chǎn)生抑制作用的NG2和neurocan表達量下降，使軸突再生的微環(huán)境得到一定程度的改善。

13 青春早期暴飲高濃度酒精對海馬的影響徐帥帥1劉向前2華中科技大學同濟醫(yī)學院1第二臨床學院2013級本科生，2組織學與胚胎學教研室 武漢 430030 暴飲（binge drinking）是指短時間（約2小時）內(nèi)大量飲酒，使血液酒精濃度≥80mg/100m L（與醉酒駕駛標準相同）的危險飲酒方式。對我國部分城市中學生飲酒行為的調(diào)查顯示，暴飲高濃度酒精在青少年中比較常見，并呈現(xiàn)低齡化趨勢。青春期是人體迅速生長發(fā)育的關(guān)鍵時期，濫用酒精可能會對機體產(chǎn)生破壞性和持久性的影響。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)：青春早期暴飲高濃度酒精對雄性大鼠脾指數(shù)（脾/體重比值）的影響具有明顯的個體差異，其中一個重要機制是不同個體對酒精（應激原）會產(chǎn)生不同的應激反應。海馬是下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）應激反應的負反饋調(diào)節(jié)中樞，也是應激反應的易損腦區(qū)，其形態(tài)改變和蛋白表達異常與學習記憶損害以及多種神經(jīng)精神疾病密切相關(guān)，因此我們隨后探討了青春早期暴飲高濃度酒精對海馬的影響。將青春早期雄性SD大鼠隨機分為酒精組（用濃度為50%的酒精灌胃，6 g/kg/d，每天一次，共3天）和對照組（蒸餾水灌胃），第4天取材，并根據(jù)脾指數(shù)將酒精組大鼠進一步分為酒精易感組（脾指數(shù)明顯下降，值最小的1/3大鼠）和非易感組（脾指數(shù)沒有顯著變化，值最大的1/3大鼠），然后檢測酒精對大鼠海馬形態(tài)和有關(guān)基因表達的影響。結(jié)果顯示：酒精沒有造成大鼠海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)的明顯改變，但可導致易感組大鼠海馬γ-微管蛋白（γ-tubulin）和突觸小泡蛋白synaptophysin水平的顯著下降（非易感組與對照組相比沒有顯著性差異）。這些結(jié)果表明青春早期暴飲高濃度酒精對雄性大鼠海馬的影響具有明顯的個體差異，并提示酒精對易感個體產(chǎn)生腦損害的機制可能包括影響海馬的囊泡轉(zhuǎn)運和突觸傳遞。

14 少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因高甲基化導致髓鞘丟失與小鼠精神分裂癥樣行為相關(guān)的實驗研究晉旭銳1李文英2黃南昕1牛建欽1劉淑寶1陳顯軍1陳興書3肖嵐21第三軍醫(yī)大學學員旅，2西南醫(yī)科大學人體解剖學教研室，3第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)部組織胚胎學教研室 重慶 400038 精神分裂癥是一種嚴重影響人類健康的精神疾病，其病理機制不清。精神分裂癥病人的腦中出現(xiàn)少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的表達異常和髓鞘的缺失，部分學者提出精神分裂癥的少突膠質(zhì)細胞異常學說，但該學說仍需進一步的論證，且導致少突膠質(zhì)細胞異常表達的原因也不清楚。DNA甲基化作為最早被發(fā)現(xiàn)的表觀遺傳調(diào)節(jié)因子之一，可能調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因啟動子的甲基化而影響基因的表達。因此，我們運用甲硫氨酸誘導小鼠腦高甲基化，觀察精神分裂癥樣的行為，詳細記錄少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的表達變化和髓鞘的缺失情況，以期為精神分裂癥的少突膠質(zhì)細胞異常學說提供實驗證據(jù)。甲硫氨酸（Met）皮下注射6周齡小鼠兩周，每天兩次。Western blot 和免疫細胞化學 (IHC)檢測總甲基化水平5mC的表達。MeDIP-ChIP, 硫化測序PCR(bisulf te sequencing PCR，BSP)檢測少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的甲基化變化。電鏡(EM)，快藍(Luxol fast blue，LFB) 和MBP的免疫細胞化學染色檢測髓鞘的變化。IHC 和qRT-PCR檢測少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的PDGFRα, Olig1, Olig2, Id2, Id4, Sox10和CC-1等的表達變化。Rota-rod，場實驗（Open-feld），社交和前脈沖抑制（prepulse inhibition, PPI)實驗檢測小鼠精神分裂癥樣行為。Aza去甲基化用來觀察能否逆轉(zhuǎn)精神分裂癥樣的行為缺陷和髓鞘的丟失。結(jié)果顯示Met誘導后5mC在整個腦內(nèi)呈現(xiàn)高表達的狀態(tài)，在前額葉皮質(zhì)和胼胝體表達顯著增強，而此區(qū)域髓鞘丟失明顯，Olig1、 Olig2、 Sox10、 CC-1和MBP的表達顯著下降，行為學的結(jié)果顯示探索能力顯著下降，社交和前脈沖抑制明顯減弱。運用Aza以后髓鞘丟失和行為學有明顯的好轉(zhuǎn)，少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的表達較Met組有所增強。這些結(jié)果顯示少突膠質(zhì)細胞相關(guān)基因的高甲基化導致基因表達下調(diào)和髓鞘丟失，且與小鼠出現(xiàn)精神分裂癥樣的行為密切相關(guān)。

15 Purα修復GGGGCC六核苷酸重復擴增非編碼RNA介導的神經(jīng)細胞毒性張瑜 李宏蓮 葉翠芳 汪薇曦 沈建英 華中科技大學同濟醫(yī)學院解剖學系組織胚胎學室 武漢 430030 肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥（Amyotrophic lateral sclerosis, ALS）和額顳葉癡呆（Frontotemporal dementia，F(xiàn)TD）均呈漸進性發(fā)展，兩種病患有相同的遺傳病因，其9號染色體開放閱讀框72基因（C9orf72）的非編碼區(qū)存在大量的GGGGCC六核苷酸重復擴增，已發(fā)現(xiàn)此擴增抑制下游基因轉(zhuǎn)錄，且其非編碼RNA (r(GGGGCC)n)可導致神經(jīng)退行性變。本研究擬進一步探討此突變的神經(jīng)毒性作用及可能的機制。構(gòu)建野生型質(zhì)粒pEGFP-(GGGGCC)3（3個六核苷酸重復片段）和突變型質(zhì)粒pEGFP-(GGGGCC)30 （30個六核苷酸重復片段），將pEGFP-N1（空載體）和以上兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染小鼠成神經(jīng)瘤細胞株（N2a）48 h， MTT結(jié)果顯示：突變組細胞活性最低，另兩組無明顯差異；采用免疫熒光技術(shù)顯示細胞內(nèi)生長相關(guān)蛋白（微管相關(guān)蛋白2 microtubule associated protein 2，MAP2）陽性表達，并對陽性細胞突起的數(shù)量及長度進行定量分析發(fā)現(xiàn)，突變組細胞突起最短，突起數(shù)量也最少，其余2組無明顯差異。免疫印跡顯示3組細胞的細胞周期依賴的蛋白激酶5（cell cyclin-dependent kinase 5，CDK5）和MAP2總蛋白水平無變化，而突變組CDK5活性（Phospho-Tyr15-cdk5）明顯增加， MAP2的Ser136 磷酸化水平（Phospho-Ser136-MAP2）也明顯增加。說明突變組可能通過激活CDK5，使MAP2磷酸化，導致細胞毒性。多種寡核苷酸重復擴增通過富集RNA結(jié)合蛋白（RBPs）介導神經(jīng)退行性變，且富集的RNA結(jié)合蛋白的主要成分是嘌呤豐富單鏈DNA結(jié)合蛋白alpha（purine-rich single-stranded DNA-binding protein alpha, Purα），從而干擾Purα的正常功能。為探討Purα對r(GGGGCC)n介導的神經(jīng)毒性的影響，在N2a細胞中過表達Purα，比較control（不轉(zhuǎn)染組），EV(Purα的空載pcDNA3.1)+pEGFP-N1，EV+ pEGFP-(GGGGCC)30，Purα+pEGFP-(GGGGCC)30 四組細胞活力，突起生長和MAP2蛋白含量，CDK5活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達Purα可明顯升高突變組細胞活力，抑制CDK5的活性，減少MAP2Ser136位點的磷酸化，說明過表達Purα可以修復該重復擴增序列介導的細胞毒性。本研究表明GGGGCC六核苷酸重復擴增可通過激活CDK5致N2a細胞的MAP2發(fā)生過度磷酸化，抑制細胞突起生長，過表達Purα可抑制此毒性作用。

16 未損傷L4 DRG神經(jīng)元活動誘發(fā)的脊髓膠質(zhì)細胞活化在成年大鼠L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后機械痛異常發(fā)生中的作用馮亞平 丁有權(quán) 齊建國 四川大學華西基礎(chǔ)醫(yī)學與法醫(yī)學院組織胚胎學與神經(jīng)生物學教研室 成都 610041 本研究采用成年SD大鼠L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)（SNL）模型，研究未損傷和損傷DRG神經(jīng)元活動誘發(fā)的脊髓膠質(zhì)細胞活化在外周性神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生中的具體作用。該疼痛模型中直接損傷的L5 DRG神經(jīng)元和鄰近未損傷的L4 DRG神經(jīng)元在解剖學上是分隔開的。我們發(fā)現(xiàn)： ①SNL同時顯著活化L4和L5脊髓節(jié)段的小膠質(zhì)/巨噬細胞和星形膠質(zhì)細胞；②對于預先接受L5背根切除手術(shù)和假手術(shù)的成年大鼠而言，SNL導致時間和強度特征基本相同的機械痛異常，而L5背根切除阻止脊神經(jīng)結(jié)扎誘發(fā)的L5（而非L4）脊髓節(jié)段背角小膠質(zhì)/巨噬細胞和星形膠質(zhì)細胞的顯著活化，這說明損傷的L5 DRG神經(jīng)元活動誘發(fā)的脊髓膠質(zhì)細胞活化對于SNL機械痛異常的發(fā)生不是必要的；③SNL導致未損傷L4 DRG神經(jīng)元Kv1.2和Kv1.4鉀通道的快速而持久的表達下調(diào)；④SNL術(shù)后，急性期L4 DRG選擇性阻滯（靶向性給予布比卡因）可特異性抑制L4脊髓節(jié)段背角小膠質(zhì)/巨噬細胞的快速活化，顯著延遲機械痛異常的急性誘發(fā)。而亞急性期L4 DRG選擇性阻滯可特異性抑制L4脊髓節(jié)段背角星形膠質(zhì)細胞的活化，阻礙機械痛異常的慢性轉(zhuǎn)化。我們的結(jié)果首次表明，未損傷L4 DRG神經(jīng)元活動誘發(fā)的脊髓膠質(zhì)細胞活化是SNL機械痛異常發(fā)生的必要因素。

17 RAS-Sirt3信號通路在小膠質(zhì)細胞介導的炎性反應中的作用及天麻素干預對其的影響劉順金1劉曉宇1李經(jīng)輝2李秀華1袁云1李娟娟1昆明醫(yī)科大學1人體解剖學與組織胚胎學系，2第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外二科 昆明 650500 缺血缺氧是誘發(fā)小膠質(zhì)細胞活化和增殖的重要因素，小膠質(zhì)細胞激活與其介導的炎癥反應在急性腦損傷和神經(jīng)退行性疾病中扮演著重要的作用。激活后的小膠質(zhì)細胞通過不同的信號通路促使多種炎性因子、蛋白酶、一氧化氮、氧自由基、興奮性氨基酸、谷氨酸鹽合成和釋放增多，引起神經(jīng)功能障礙。研究發(fā)現(xiàn)，天麻素可以有效的抑制脂多糖（LPS）激活的小膠質(zhì)細胞介導的炎性反應，但天麻素是否可以通過影響腎素血管緊張素系統(tǒng)（RAS）發(fā)揮腦保護作用還未見報導。因此，本實驗采用SD大鼠，將其分為假手術(shù)組、腦缺血缺氧組和腦缺血缺氧+天麻素組。體外使用BV-2小膠質(zhì)細胞系，分為正常對照組、LPS組和LPS+天麻素組。通過免疫熒光雙標、Western blot、細胞培養(yǎng)等方法，檢測新生大鼠缺血缺氧性腦損傷后大腦皮層、胼胝體及體外LPS激活的BV-2小膠質(zhì)細胞中RAS系統(tǒng)（ACE、 AT1、AT2），炎性介質(zhì)iNOS 和TNF-α，NOX-2以及Sirt3的表達變化。結(jié)果顯示，缺血缺氧性腦損傷后激活的小膠質(zhì)細胞以及LPS激活的BV-2小膠質(zhì)細胞ACE、AT1、NOX-2、iNOS與TNF-α表達均明顯增加，而天麻素干預能有效的抑制上述因子的表達。另一方面，體內(nèi)與體外激活的小膠質(zhì)細胞中AT2與Sirt3的表達有顯著增加，應用天麻素干預后其表達進一步上調(diào)。結(jié)果提示，天麻素可能通過RAS-Sirt3信號通路調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞的激活，為治療小膠質(zhì)細胞介導的神經(jīng)炎性反應提供了一個新的治療靶點。

18 燈盞乙素調(diào)節(jié)大鼠腦缺血模型激活的小膠質(zhì)細胞及BV-2小膠質(zhì)細胞MAPK信號通路的研究韓宏1賈文姬1李紅娥1李璠2袁云1吳春云1昆明醫(yī)科大學1人體解剖學與組織胚胎學系，2科研實驗中心 昆明650500 缺血性腦損傷后，常伴隨小膠質(zhì)細胞的激活。過度激活的小膠質(zhì)細胞可釋放大量的炎性介質(zhì)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）炎癥反應，進一步加重神經(jīng)元損傷。抑制小膠質(zhì)細胞的過度激活及其介導的炎癥反應被認為是治療CNS損傷疾病的重要策略。研究發(fā)現(xiàn)，燈盞乙素可以有效的抑制大鼠大腦中動脈閉塞模型（MCAO）激活的小膠質(zhì)細胞誘導的炎癥反應，但燈盞乙素對激活小膠質(zhì)細胞的作用機制還少見報導。因此，本研究力求闡明燈盞乙素是否能通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路影響腦缺血大鼠模型激活的小膠質(zhì)細胞以及脂多糖（LPS）激活的BV-2小膠質(zhì)細胞的功能活動。本實驗采用SD大鼠，將其分為假手術(shù)組、腦缺血組和腦缺血+燈盞乙素組。體外使用BV-2小膠質(zhì)細胞系，分為正常對照組、LPS組和LPS+燈盞乙素組。用蛋白質(zhì)印跡法及免疫熒光染色檢測MAPK信號通路中3個成員在激活小膠質(zhì)細胞的表達，即細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2( ERK1/2)及磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/ 2( p-ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶（JNK）及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和p38MAPK及磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）。結(jié)果顯示，大鼠腦缺血后及LPS誘導后激活的小膠質(zhì)細胞MAPK信號通路各成員JNK及p-JNK、p38MAPK及p-p38MAPK、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表達水平均出現(xiàn)明顯升高。燈盞乙素可減少體內(nèi)、外激活的小膠質(zhì)細胞的JNK及p-JNK、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白表達水平，但卻進一步增加了ERK1/2及p-ERK1/2表達水平。結(jié)果表明燈盞乙素可通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞的激活，這為治療小膠質(zhì)細胞介導的神經(jīng)炎性反應提供了一個新的治療思路。

19 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)染TGF-β1啟動心肌分化及與W nt/β-catenin信號通路的相關(guān)性呂洋1張雷2王海萍11河北北方學院組織胚胎學教研室 張家口 075000，2河北醫(yī)科大學組織胚胎學教研室 石家莊 050017 以慢病毒作為過表達載體將外源性基因TGF-β1轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)，探討其在體外誘導BMSCs心肌分化過程中與Wnt/β-catenin信號通路的相關(guān)性及機制。全骨髓貼壁法從SD大鼠四肢骨中分離、培養(yǎng)BMSCs，流式細胞術(shù)對培養(yǎng)的細胞進行鑒定。對第2代BMSCs進行轉(zhuǎn)染及分組：A組（Lenti-TGF-β1-GFP慢病毒轉(zhuǎn)染組）、B組（Lenti-對照-GFP慢病毒轉(zhuǎn)染組）、C組（BMSCs空白對照組）。C組細胞不進行基因轉(zhuǎn)染相關(guān)的操作。qRT-PCR檢測各組BMSCs經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染后β-catenin、cyclinD1及MMP-7基因的表達情況。Western blot檢測BMSCs經(jīng)轉(zhuǎn)染14d后β-catenin、cyclinD1及MMP-7蛋白的表達情況。結(jié)果顯示：①C組細胞在培養(yǎng)過程中無細胞死亡，未出現(xiàn)熒光。②qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，各組細胞在7d、14d及28d均可表達β-catenin、cyclinD1及MMP-7基因。以14d作為時間點，A組和B組β-catenin及cyclinD1基因的mRNA相對表達量均低于C組，A組β-catenin mRNA相對表達量是C組的0.60倍，cyclinD1 mRNA相對表達量是C組的0.68倍，但B組β-catenin及cyclinD1基因的相對表達量與C組間均無顯著性差異。A組和B組MMP-7基因的相對表達量均高于C組，但A組與B組MMP-7基因的相對表達量與C組之間均無顯著性差異。③ Western blot檢測結(jié)果顯示，A組細胞無β-catenin及cyclinD1蛋白的表達，與C組相比，差異均具有統(tǒng)計學意義。A組與C組均有MMP-7蛋白的表達，且A組MMP-7蛋白的表達顯著高于C組。以上結(jié)果說明，TGF-β1促進BMSCs向心肌細胞分化的過程可能通過抑制Wnt/β-catenin信號通路中的β-catenin以及下游轉(zhuǎn)錄活化靶基因cyclinD1的表達來實現(xiàn)，MMP-7亦參與由TGF-β1促進BMSCs分化的過程，且這種作用可能不是通過Wnt/β-catenin信號通路下游轉(zhuǎn)錄活化而產(chǎn)生的。

20 m iRNA-431-5p靶向IRS2抑制hM SCs成脂分化許曉源1,2汪濤2吳萍2熊建軍2李衛(wèi)東2曹玲玲31九江學院基礎(chǔ)醫(yī)學院組織胚胎學教研室，2江西省系統(tǒng)生物醫(yī)學重點實驗室，3南昌大學附屬九江醫(yī)院內(nèi)分泌科 九江 332000 為了篩選出人骨髓間充質(zhì)干細胞(human Mesenchymal Stem Cells，hMSCs)成脂分化過程中具有潛在價值的m iRNA及其靶基因，本研究收集hMSCs成脂分化過程中0d、7d、14d、21d的細胞樣品，應用miRNA 芯片和轉(zhuǎn)錄組測序 (mRNA-seq) 技術(shù)，分析四個時間點細胞中m iRNA和mRNA的表達水平，并將m iRNA與mRNA的表達趨勢進行關(guān)聯(lián)分析，聚焦具有研究價值的miRNA與mRNA相互調(diào)控關(guān)系，同時采用TargetScan、PicTar和miRanda等數(shù)據(jù)庫進行靶基因的預測，獲取呈現(xiàn)負調(diào)控對應關(guān)系的m iRNA及其預測靶基因。熒光定量PCR驗證發(fā)現(xiàn)m iR-431-5p在成脂分化中表達逐漸下降，而胰島素受體底物蛋白2(insulin receptor substrate 2, IRS2)表達逐漸升高，兩者表達趨勢呈現(xiàn)負相關(guān)；熒光素酶報告基因技術(shù)證實miR-431-5p能夠結(jié)合IRS2的3’-UTR而阻斷其表達。構(gòu)建過表達m iR-431慢病毒載體，感染hMSCs后顯示m iR-431-5p表達升高，繼續(xù)成脂誘導至7d、14d，熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)成脂分化過程相關(guān)因子過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）、脂蛋白脂酶（LPL）、脂肪酸結(jié)合蛋白（AP2）及IRS2表達顯著下調(diào)，油紅O組織化學染色發(fā)現(xiàn)，成脂分化過程受到抑制。以上結(jié)果提示miR-431-5p通過靶向IRS2抑制脂肪細胞分化，為深入分析miR-431-5p與肥胖、胰島素敏感性之間的關(guān)系提供了新的線索（本研究獲國家自然科學基金項目No.81460170資助）。

21 海洋海綿衍生生物礦化硅包被的絲蛋白復合支架對人間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響龍燦玲 常靜潔 成旭 衛(wèi)盛楠王秀麗 大連醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織胚胎學教研室 大連 116044 多能間充質(zhì)干細胞（MSCs）因其在有效擴增及分化成骨、軟骨、脂肪甚至肌原細胞方面具有潛力，在組織工程與再生醫(yī)學領(lǐng)域得到了越來越多的關(guān)注。然而，盡管誘導MSCs特異性成骨分化研究已經(jīng)取得諸多進展，目前仍需要更多具有形態(tài)發(fā)生活性的支架來獲得性狀更為穩(wěn)定的成骨細胞。本研究以六氟硅酸鈉為底物，通過酶介反應生成海洋海綿衍生生物礦化硅，并將其均勻包被于多孔絲蛋白支架，同時結(jié)合膠原基質(zhì)得到復合支架材料。實驗中利用掃描電子顯微鏡對生物礦化硅包被的絲蛋白復合支架進行表面超微結(jié)構(gòu)的表征，通過接種人骨髓間充質(zhì)干細胞（hBMSCs）對其生物相容性進行評價，同時，在體外借助成骨誘導培養(yǎng)基誘導分化21d后，采用活-死染色、免疫組織化學染色、實時熒光定量PCR等技術(shù)，分別對分化細胞的形態(tài)、活性、成骨特異性蛋白及基因進行評價。實驗結(jié)果顯示：培養(yǎng)于絲蛋白復合支架中的hBMSCs增值活性良好。相比于平面培養(yǎng)、三維培養(yǎng)的hBMSCs茜素紅S染色陽性程度高，礦化程度更為理想；BMP-2、ALP、collagen type-I基因顯著高表達；成骨特異性蛋白BMP-2、 OPN、 RUNX2表達陽性率高。以上實驗結(jié)果提示：海洋海綿衍生生物礦化硅包被的多孔絲蛋白復合支架能夠有效促進MSCs體外成骨分化，獲得活性及表型更為理想的成骨細胞。這將有利于生物工程獲得更多骨組織樣結(jié)構(gòu)，并啟發(fā)其未來在骨缺損替代療法中的應用。

22 人骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞的體外誘導分化研究常靜潔 衛(wèi)盛楠 龍燦玲 劉銘 王秀麗 大連醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織胚胎學教研室 遼寧 116044 種子細胞的數(shù)量與質(zhì)量問題是制約神經(jīng)組織工程研究工作的“瓶頸”。骨髓來源的間充質(zhì)干細胞（Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSCs）因兼具有自我更新能力和多項分化潛能而成為神經(jīng)組織工程理想的供體細胞。本研究擬對照傳統(tǒng)的平面誘導體系，在三維培養(yǎng)條件下以人源骨髓間充質(zhì)干細胞（hBMSCs）作為種子細胞，以膠原－納米纖維絲蛋白水凝膠為三維支架，分別通過添加小分子化合物（DMSO/BHA）和添加含有生長因子的生物誘導培養(yǎng)基（Cocktail）體外誘導hBMSCs向神經(jīng)元方向分化，以期建立優(yōu)化的誘導方法，并獲得表型和功能更為理想的神經(jīng)元樣細胞。實驗中利用倒置相差顯微鏡觀察不同誘導條件下（2D v.s 3D）細胞的形態(tài)變化；采用實時定量PCR技術(shù)檢測神經(jīng)元相關(guān)特異性基因（map-2、nf-m、tublin-Ⅲ）的表達；免疫組織化學技術(shù)檢測神經(jīng)核蛋白NeuN以及神經(jīng)膠質(zhì)細胞特異性蛋白GFAP的表達。實驗結(jié)果顯示：相差顯微鏡下可見3D培養(yǎng)條件下，hBMSCs呈伸展狀態(tài)，增殖活性理想，提示該支架體系可提供適宜hBMSCs生長、增殖的微環(huán)境。經(jīng)誘導后，各誘導組均有類神經(jīng)元形態(tài)的細胞出現(xiàn)，但2D培養(yǎng)條件下小分子誘導組內(nèi)的細胞形態(tài)改變最為快速、顯著，在5小時后細胞收縮成球，且折光率增加。與之對比，3D培養(yǎng)條件下，Cocktail誘導組和DMSO/BHA誘導組內(nèi)的細胞形態(tài)變化相對緩慢，且細胞突起更多、更細長。其中3D Cocktail誘導組內(nèi)細胞的突起更多且交織成網(wǎng)。基因檢測發(fā)現(xiàn)，對比2D培養(yǎng)，3D DMSO/BHA 組可顯著高表達nf-m、tublin-Ⅲ基因；3D Cocktail誘導組的map-2及tublin-Ⅲ基因在各誘導組中表達最高。免疫組化顯示，在兩種誘導方法中，3D誘導組的NeuN和GFAP的蛋白表達水平高于2D誘導組。以上實驗結(jié)果提示：基于膠原－納米纖維絲蛋白水凝膠的3D培養(yǎng)體系能夠促進hBMSCs向神經(jīng)細胞的誘導分化。該研究將可能為成體干細胞的定向誘導分化研究提供新技術(shù)、新方法，從而推進神經(jīng)組織工程種子細胞的獲取及優(yōu)化研究。

23 梓醇下調(diào)ERK 1/2信號通路抑制晚期少突膠質(zhì)前體細胞的缺氧性損傷蔡其燕 馬騰 李成仁 田衍平 李紅麗 第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)醫(yī)學部組織胚胎學教研室，發(fā)育生物學教研室 重慶 400038 晚期少突膠質(zhì)前體細胞（PreOLs）對缺氧損傷極其敏感，是新生兒缺氧性腦白質(zhì)損傷的關(guān)鍵性靶細胞，至今仍缺乏有效的防治方法。缺氧誘導的ERK1/2信號通路活化在調(diào)控少突膠質(zhì)細胞存活和死亡中發(fā)揮重要作用。本研究擬探討環(huán)烯醚萜類化合物梓醇（中藥地黃的主要有效成分）在缺氧條件下，對PreOLs的保護作用及其與ERK 1/2信號通路間的相關(guān)性。實驗將原代培養(yǎng)的PreOLs應用Na2S2O4和無糖培養(yǎng)基處理建立體外缺氧模型，同時應用梓醇或/和U0126（ERK1/2通路阻斷劑）進行處理，然后采用TUNEL染色法檢測細胞的凋亡情況，JC-1、DCFH-DA、Fluo-3 AM等熒光探針檢測細胞的氧化應激情況，免疫熒光染色和Western blot技術(shù)檢測細胞的分化成熟及p-ERK1/2表達情況。結(jié)果顯示：①PreOLs缺氧后TUNEL陽性的凋亡細胞數(shù)明顯增多，髓鞘蛋白CNPase和MBP的表達明顯降低，梓醇作用后能顯著地降低TUNEL陽性細胞數(shù)，增加CNPase和MBP的表達。②梓醇可明顯抑制缺氧誘導的PreOLs線粒體膜電位的下降、細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生及胞內(nèi)Ca2+水平升高。③PreOLs缺氧后p-ERK1/2表達明顯上調(diào)，梓醇或U0126處理均能顯著性的下調(diào)p-ERK1/2表達。④梓醇和U0126聯(lián)合用藥可進一步降低缺氧誘導的TUNEL陽性細胞數(shù)、細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生及提高細胞線粒體膜電位。這些結(jié)果表明梓醇能通過下調(diào)ERK1/2信號通路抑制缺氧誘導的PreOLs氧化應激反應、減少細胞凋亡及促進PreOLs分化成熟。因此，梓醇對缺氧損傷的PreOLs具有明顯的保護作用。

24 硫氧還蛋白對AGEs誘導Neuro 2A細胞自噬的作用王妮娜 劉俊麗 馬中平 孫玲敏 孔力 大連醫(yī)科大學組織胚胎學教研室 大連 116044 多種糖尿病性神經(jīng)退行性疾病中均有糖基化終末產(chǎn)物（Advanced Glycation End products，AGEs）的積累，并且AGEs的積累也成為多種神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的重要原因之一。硫氧還蛋白（thioredoxin，Trx）是一個在活性中心具有兩個氧化還原活性半胱氨酸（Cys）殘基的小分子（12kD）抗氧化蛋白，廣泛分布于哺乳動物的組織中，在細胞內(nèi)外發(fā)揮抗氧化、抗凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等重要生物學功能。自噬是真核細胞在不利環(huán)境中作出的適應性應答，是指胞質(zhì)內(nèi)的雙膜結(jié)構(gòu)包裹自身胞質(zhì)蛋白、損傷細胞器或侵入的病原體等形成自噬體。自噬體將所包裹的物質(zhì)運送至溶酶體后，其外膜與溶酶體外膜融合，內(nèi)囊泡及其內(nèi)容物隨后被降解，以實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和細胞器的更新。為探討Trx與AGEs誘導神經(jīng)細胞自噬的相關(guān)性，本研究選用Neuro 2A細胞，通過構(gòu)建Trx真核表達載體并轉(zhuǎn)染Neuro 2A細胞，經(jīng)G418篩選并經(jīng)RTPCR、Western blot進行鑒定，建立Trx高表達的Neuro 2A-Trx細胞株，進而研究Trx對AGEs誘導Neuro 2A細胞自噬的影響；以Neuro 2A-LacZ細胞株作為對照。實驗設(shè)計給予AGEs處理Neuro 2A、Neuro 2A-Trx、Neuro 2A-LacZ三組細胞，采用Western blot法檢測Beclin1、LC3B、p62及Trx的表達。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，經(jīng)AGEs處理后，Neuro 2A-Trx組與Neuro 2A組相比自噬起始相關(guān)蛋白Beclin1表達減少，自噬體形成標志LC3B表達明顯減少，自噬溶酶體降解標志p62表達也有所減少。以上研究結(jié)果表明，在AGEs作用下，高表達Trx的Neuro 2A細胞可明顯減少細胞自噬的發(fā)生，提高細胞對AGEs環(huán)境的耐受性。

25 胸腺素β4逆轉(zhuǎn)肝纖維化及分子機制研究洪宇桁1韓濤21天津醫(yī)科大學醫(yī)學影像學院 天津 300203，2天津醫(yī)科大學第三中心臨床學院 天津300170 由各種因素引起的急性肝損傷，若損傷持續(xù)存在可進展為肝纖維化（Liver Fibrosis, LF）及終末的肝硬化甚至肝衰竭。目前，臨床上尚無治療LF的特效藥物。肝星形細胞（Hepatic Stellate Cell, HSC）的激活及合成分泌過量的細胞外基質(zhì)被認為是LF的一個主要機制。胸腺素β4（Thymosin beta 4, Tβ4）是一種小分子酸性肽，研究表明當組織發(fā)生損傷時，Tβ4可啟動心臟等器官的組織修復，但是Tβ4對LF的作用尚無報道。本研究建立四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型并注射Tβ4以探討Tβ4治療LF的可行性。結(jié)果表明，Tβ4能夠逆轉(zhuǎn)LF并使肝功能恢復正常。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)，Tβ4能夠抑制HSC的增殖和激活，因此有可能成為治療LF的有效藥物，該機制的闡明為今后臨床推廣Tβ4奠定了基礎(chǔ)。

26 ω-3 多不飽和脂肪酸減輕肝纖維化并通過促進YAP/TAZ 降解而抑制肝星形細胞增殖和激活時哲敏 洪偉 天津醫(yī)科大學 天津 300070 肝纖維化是慢性肝病最常見的后果之一，它可以歸類為慢性肝損傷的傷口愈合反應，其特征是由于細胞外基質(zhì)（ECM）分子代謝不平衡或者通過增加ECM成分的合成或降解降低或兩者兼而有之，引起的ECM組分過度產(chǎn)生和沉積而導致的過度瘢痕形成。激活肝星狀細胞（HSC），是增加ECM蛋白合成的主要細胞類型，是纖維化發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，從而提供了一個重要的抗纖維化的潛在治療策略。ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA）的膳食攝入與許多健康獲益呈正相關(guān)，包括預防和減少心血管疾病、炎癥和癌癥。然而，ω-3 PUFA對肝纖維化的影響知之甚少。EPA和DHA在各種細胞系中發(fā)揮有力的抗氧化應激和抗炎活性，表明ω-3 PUFA可能在肝臟上具有抗纖維化作用。轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子YAP/TAZ水平升高，在控制肝細胞命運和肝星狀細胞活化中起重要作用。為了探討ω-3 PUFA對肝纖維化的影響及其機制，本研究采用CCl4誘導的肝纖維化小鼠模型，將動物分為對照組、CCl4組、魚油組、魚油/CCl4組，魚油組和魚油/ CCl4組飼喂含有10%（w t/w t）魚油的AIN93飲食。隨后收集肝臟用于WB、qRT-PCR、IHC分析；同時使用原代HSC細胞、LX-2細胞系和HSC-T6細胞系進行體外研究。本研究發(fā)現(xiàn)YAP/TAZ在纖維化肝臟和活化的HSC中過表達，魚油給予模型小鼠減輕CCl4誘導的肝纖維化。進一步研究表明，ω-3 PUFAs通過YAP介導下調(diào)激活的HSC和纖維化肝臟中的促纖維化基因的表達，從而將YAP作為ω-3 PUFA的靶標。此外，ω-3 PUFA以蛋白酶體依賴的方式促進YAP/TAZ降解。該研究結(jié)果揭示了ω-3 PUFA在改善肝纖維化中的作用，其可能機制是YAP和TAZ的表達在CCl4誘導的肝纖維化中上調(diào)，ω-3 PUFA通過促進YAP/TAZ降解來抑制肝星狀細胞系的增殖和活化。

27 RNAi介導的NRF2表達下調(diào)對亞砷酸鈉誘發(fā)人表皮細胞株HaCaT自噬性死亡的影響楊蓓 陳雪 林庚 中國醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織與胚胎學教研室 沈陽 110122 近年來自中國、美國、瑞典和孟加拉國的眾多流行病學研究顯示，環(huán)境砷暴露能導致多種類型的皮膚損害，但機制尚不清楚。最新研究發(fā)現(xiàn)，自噬性細胞死亡參與砷暴露對多種細胞的急性損傷過程。NRF2通過細胞內(nèi)抗氧化反應，參與多種皮膚疾病的病理生理過程。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，NRF2在急性砷暴露導致人表皮細胞株HaCaT毒性損傷和凋亡過程中發(fā)揮保護作用，但NRF2對急性砷暴露導致HaCaT自噬性細胞死亡的影響尚不清楚。因此，我們利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NRF2的表達，探討NRF2對亞砷酸鈉誘發(fā)的人表皮細胞株HaCaT自噬性細胞死亡的影響。首先，將針對NRF2和非針對陰性對照的shRNA慢病毒顆粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至人表皮細胞株HaCaT，利用Real-time PCR和Western Blot檢測細胞內(nèi)NRF2的表達，篩選NRF2基因沉默（NRF2-KD）和陰性對照（SCR）的細胞。其次，采用凋亡抑制劑10μM Z-VAD-FMK預處理NRF2-KD和SCR細胞2h，再經(jīng)20μM的亞砷酸鈉作用24h，通過光學顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和貼壁數(shù)量的改變，四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測細胞的存活率，電子顯微鏡技術(shù)檢測細胞中自噬小體，Western Blot技術(shù)檢測P62、LC3-II/LC3-I蛋白水平的表達。實驗結(jié)果顯示：成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NRF2基因沉默的人表皮細胞株HaCaT，與SCR細胞相比，NRF2-KD細胞的NRF2基因和蛋白表達水平顯著下降。經(jīng)凋亡抑制劑Z-VAD-FMK預處理后，再經(jīng)亞砷酸鈉作用，NRF2-KD和SCR細胞仍會出現(xiàn)細胞貼壁數(shù)量減少、細胞體積縮小、細胞存活率下降，且與SCR細胞相比，NRF2-KD細胞的貼壁數(shù)量、體積及存活率下降更為顯著；在SCR和NRF2-KD細胞中均可檢測出自噬小體的存在；與SCR細胞相比，NRF2-KD細胞內(nèi)P62、LC3-II/LC3-I蛋白表達明顯升高。上述實驗結(jié)果表明：自噬性細胞死亡參與亞砷酸鈉對人表皮細胞株HaCaT的急性損傷過程，且NRF2基因沉默的人表皮細胞株HaCaT對亞砷酸鈉急性暴露誘發(fā)的自噬性細胞死亡更敏感。

28 褪黑素對幽門螺桿菌相關(guān)胃部疾病的免疫調(diào)節(jié)作用羅建華 周瑞祥 福建醫(yī)科大學 福州 350108 褪黑素是由哺乳動物松果體產(chǎn)生的一種胺類激素，通過與其受體特異性結(jié)合而在中樞和外周發(fā)揮生物學功能。既往研究證實，褪黑素在炎癥性疾病發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的免疫調(diào)控作用，但其在由幽門螺桿菌引起的胃部疾病免疫調(diào)節(jié)過程中的作用及其潛在機制尚不清楚。本研究建立由幽門螺桿菌感染誘導的小鼠胃部疾病實驗動物模型，采用ELISA、組織病理、Western blotting等技術(shù)檢測不同劑量、不同時間褪黑素干預后小鼠褪黑素受體MT1、MT2及RORβ、TGFβ1、Foxp3含量的變化，從而探究褪黑素對幽門螺桿菌誘導的胃部疾病的作用及其免疫調(diào)節(jié)機制。HE染色顯示，幽門螺桿菌感染的小鼠胃黏膜層和黏膜下層出現(xiàn)明顯的炎癥細胞，呈彌散性分布；小鼠胃組織勻漿涂板培養(yǎng)后，快速尿素酶檢測為陽性，表明造模成功。免疫組化顯示，在幽門螺桿菌感染的小鼠胃黏膜層可見MT1、MT2均有大量且廣泛表達。ELISA檢測顯示，經(jīng)25、50、100 mg/kg褪黑素干預2周后，幽門螺桿菌感染的小鼠肝臟中TGFβ1含量顯著低于未感染小鼠；經(jīng)25、50、100 mg/kg褪黑素干預4、6周后，幽門螺桿菌感染的小鼠肝臟中TGFβ1含量顯著高于未感染小鼠。Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)，經(jīng)25、50、100 mg/kg褪黑素干預2周后，幽門螺桿菌感染的小鼠脾組織中Foxp3表達量顯著下調(diào)；干預4周后50和100 mg/kg劑量組Foxp3表達量顯著上調(diào)；干預6周后全部褪黑素干預組小鼠Foxp3表達量均與未感染組小鼠接近。經(jīng)25、50、100 mg/kg褪黑素干預2周后，幽門螺桿菌感染的小鼠胃組織中RORβ表達量顯著下調(diào)，干預4周后小鼠胃組織中RORβ表達量顯著上調(diào)，干預6周后 25 mg/kg劑量組小鼠RORβ表達量顯著上調(diào)。經(jīng)25、50、100 mg/kg褪黑素干預2、4、6周后，幽門螺桿菌感染的小鼠肝臟組織中TGFβ1表達量均顯著高于未感染組。本研究結(jié)果顯示，褪黑素可能基于膜受體和核受體途徑，通過調(diào)節(jié)TGFβ1和Foxp3含量起到緩解幽門螺桿菌所致胃部疾病的作用。

29 SOAT1經(jīng)MAPK信號通路調(diào)節(jié)Ptgs2而減輕Aβ25-35誘導的SH-SY5Y細胞損傷陳穎 朱璐 吉磊 王曉冬 南通大學醫(yī)學院組織學與胚胎學系 南通 226001 聯(lián)合BXD RI小鼠海馬基因表達資料和基因型數(shù)據(jù)，應用基因表達數(shù)量性狀基因座定位（eQTL）分析Soat1和Ptgs2基因的表達調(diào)控位點，利用遺傳相關(guān)性分析和VENN分析篩選Soat1和Ptgs2高相關(guān)基因網(wǎng)絡(luò)的共同基因；利用Aβ25-35誘導SH-SY5Y構(gòu)建AD細胞模型，探討SOAT1和PTGS2協(xié)同參與AD的分子機制。在全基因組定位Soat1、Ptgs2基因的上游調(diào)控位點，Soat1（Chr1：158.36Mb）的eQTL位于Chr1：157.58Mb，Ptgs2（Chr1：151.95Mb）的eQTL位于Chr1：151.91Mb，與基因自身位置的距離在5 Mb 以內(nèi)，初步認為Soat1、Ptgs2均為cis-eQTL基因；遺傳相關(guān)性分析分別收集與Soat1、Ptgs2高相關(guān)的前2000個基因（Top2000），通過VENN分析顯示有712個基因為Soat1和Ptgs2共同的高相關(guān)基因；在BXD RI各品系小鼠海馬組織中Pearson相關(guān)性分析表明Soat1和Ptgs2的相關(guān)度r值為0.615，趨于線性分布，提示兩者的高度相關(guān)性；KEGG分析712個基因的功能聚類和參與的pathway，結(jié)果顯示712個基因被富集到17個KEGG通路，包括內(nèi)吞（mmu04144）、泛素化介導途徑（mmu04120）、MAPK信號通路（mmu04010）等，其中CACNA1b、CACNA2d1兩個鈣通道蛋白基因被富集到MAPK通路，提示SOAT1和PTGS2可能通過上述通路協(xié)同參與AD過程。SH-SY5Y細胞中抑制SOAT1，qPCR和Western blot結(jié)果表明PTGS2的表達量下降，過表達SOAT1后，PTGS2的表達量升高，進一步驗證了SOAT1表達變化對PTGS2的影響；SH-SY5Y細胞在Aβ25-35誘導下，SOAT1、PTGS2、CACNA 1b、CACNA2d1、CASPASE3的表達量均增加，PKC、pERK/ERK表達量下降；在敲低SOAT1的AD模型細胞中CACNA1b、CACNA2d1、CASPASE3的表達量下降，PKC、pERK/ERK表達量升高。上述結(jié)果表明抑制SOAT1后CACNA1b、CACNA2d1表達量下降，引起COX-2水平降低；同時pERK/ERK、PKC表達量升高，對Aβ25-35誘導的AD細胞模型起一定保護作用。

30 SCF/c-kit信號通路促進結(jié)直腸癌claudin-3表達的分子機制研究王亞希 孫婷怡 孫海梅 楊姝 周德山 首都醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院人體解剖與組織胚胎學系 北京 100069 結(jié)直腸癌（Colorectal cancer， CRC）是常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率逐年升高，分別占全球腫瘤發(fā)病率和死亡率的第三、 第四位。已知CRC發(fā)生機制極其復雜，與基因缺失、基因突變、飲食結(jié)構(gòu)、肥胖以及腸道炎癥等多種因素有關(guān)。近年研究表明，緊密連接蛋白claudins 在上皮來源的腫瘤表達異常，其增加或減少與腫瘤分期、患者預后和生存期等密切相關(guān)，提示claudins可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。以往研究報道緊密連接蛋白claudin-3在卵巢癌、前列腺癌、胃癌等腫瘤組織高表達， 且具有增強腫瘤細胞的增殖、侵襲、遷移等作用。我們利用臨床CRC患者手術(shù)標本，并結(jié)合小鼠CRC模型研究發(fā)現(xiàn)，claudin-3在CRC表達水平較瘤旁組織明顯增多，但其異常高表達的調(diào)控機制以及對CRC的影響目前尚不完全清楚。因此，本研究應用人和小鼠CRC標本, 結(jié)合人CRC細胞體外培養(yǎng)實驗，探究claudin-3 高表達對CRC細胞生物學特性的影響，包括增殖、侵襲、遷移等；同時，應用CRC細胞系培養(yǎng)，結(jié)合應用c-kit激活劑、特異性信號分子阻斷劑、慢病毒過表達c-kit以及分子生物學等技術(shù)方法，深入研究CRC細胞高表達claudin-3的分子調(diào)控機制；在此基礎(chǔ)上，利用c-kit基因功能缺失小鼠進一步驗證c-kit信號轉(zhuǎn)導分子上調(diào)claudin-3表達的作用與機制。初步結(jié)果表明：受體酪氨酸激酶（Receptor tyrosine kinase, RTK）超家族成員SCF/c-kit信號轉(zhuǎn)導分子在CRC組織和細胞異常高表達/活化，通過激活下游JNK/AP-1信號軸，上調(diào)claudin-3 的轉(zhuǎn)錄，導致claudin-3表達增加；進一步研究發(fā)現(xiàn)，CRC細胞高表達claudin-3 可通過上調(diào)細胞周期蛋白cyclin D1水平，提高腫瘤細胞的增殖能力，并可促進 CRC 細胞侵襲和遷移。由此可見，SCF/c-kit信號轉(zhuǎn)導分子亦可通過上調(diào) claudin-3表達促進CRC的發(fā)生發(fā)展；我們的結(jié)果將為臨床治療CRC尋找新的有效靶點提供重要理論和實驗依據(jù)。

31 Trx對HG 誘導Müller 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的影響劉俊麗 孔力 大連醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 大連 116044 Müller 細胞是視網(wǎng)膜重要的神經(jīng)膠質(zhì)細胞，具有提供神經(jīng)元營養(yǎng)物質(zhì)、排出代謝廢物、清除毒性物質(zhì)、保護神經(jīng)元的作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasm ic reticulum，ER)是真核細胞中重要的細胞器，產(chǎn)生機體所需的多數(shù)蛋白質(zhì)及部分固醇和脂質(zhì)。糖尿病時，機體細胞處于持續(xù)的高糖刺激，細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)遭到破壞，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能發(fā)生紊亂，從而引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的發(fā)生，進而激活相應的細胞凋亡途徑，導致糖尿病視網(wǎng)膜病變患者視網(wǎng)膜Müller 細胞的反應性增生，使其標志蛋白GFAP呈高表達狀態(tài)。由于硫氧還蛋白（Trx）在調(diào)節(jié)細胞生理功能中發(fā)揮著重要作用，因此本研究探討了Trx對高糖（HG）誘導Müller 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的影響。我們首先建立了Müller-LacZ和 Müller-Trx 細胞系，并通過CCK8法篩選HG的最終作用時間和濃度(48h，50mM)。實驗分為Müller-LacZ、 Müller-LacZ+HG、Müller-Trx和Müller-Trx+HG4組，通過細胞免疫熒光法檢測各組GFAP蛋白的表達情況，Real time-PCR檢測各組Trx基因表達水平，Western blot檢測各組Trx、GRP78、IRE1、ATF6、PERK及CHOP蛋白表達水平。結(jié)果顯示：①與Müller-LacZ組比較，Müller-Trx組GFAP蛋白表達水平明顯下調(diào)；高糖作用可使Müller-LacZ和Müller-Trx組GFAP表達水平上調(diào)，且Müller-LacZ+HG組上調(diào)最為顯著。②與Müller-LacZ組比較，Müller-Trx組Trx基因和蛋白表達水平顯著上調(diào)；而GRP78、IRE1、ATF6、PERK及CHOP蛋白表達均呈下調(diào)趨勢。③高糖作用可使Müller-LacZ和Müller-Trx組Trx表達水平下調(diào)，且Müller-LacZ+HG組下調(diào)最為顯著；而GRP78、IRE1、ATF6、PERK及CHOP蛋白表達則呈下調(diào)趨勢。這些結(jié)果提示，Trx能有效改善HG誘導的Müller細胞反應性增生，其機制可能與Trx抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號通路蛋白有關(guān)。

32 重組人硫氧還蛋白原核表達載體的構(gòu)建、表達和純化馬中平 劉俊麗 孫玲敏 王妮娜 孟憲毅 孔力 大連醫(yī)科大學組織與胚胎學教研室 大連 116044 硫氧還原蛋白(thioredoxin，Trx)是一種高度保守且廣泛表達的小分子蛋白，它和Trx還原酶(thioredoxin reductase，TrxR)及還原型輔酶Ⅱ(NADPH)組成Trx 氧化還原系統(tǒng)，其活性中心為-Cys-Gly-Pro-Cys-，具有抗氧化、促細胞生長、抗細胞凋亡和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子活性等作用。目前，臨床和實驗研究表明，氧化應激與神經(jīng)退行性病變、癌癥、艾滋病、糖尿病并發(fā)癥、肝和腎疾病的形成等多種人類疾病密切相關(guān)，并表現(xiàn)出Trx的異常表達，說明Trx在這些病變發(fā)病過程中占有重要地位。本研究旨在構(gòu)建Trx基因的原核表達載體，并在大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達，以獲取高產(chǎn)量、低成本、高純度的Trx蛋白用于后續(xù)研究。實驗以前期構(gòu)建的p IRES2-EGFP-hTrx質(zhì)粒為模板，利用PCR方法獲得人Trx基因，應用基因重組技術(shù)將hTrx基因克隆到原核質(zhì)粒pColdⅠ中，然后進行NdeⅠ和SalⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切和DNA測序鑒定。再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至表達菌株大腸桿菌 BL21(DE3)中，經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）低溫誘導表達后，獲取蛋白并用Ni-NTA 親和層析進行蛋白純化,用SDS-PAGE和Western blot進行分析鑒別。結(jié)果顯示Trx基因成功克隆入質(zhì)粒pColdⅠ中，經(jīng)雙酶切和DNA測序鑒定，得到了正確的重組表達載體。SDS-PAGE結(jié)果顯示，Trx在16℃時經(jīng)1 mM IPTG誘導24h表達量最高。經(jīng)Ni-NTA 親和層析純化后的Trx蛋白用考馬氏亮藍染色呈單一條帶。用抗Trx抗體進行Western blot分析，顯示具有很強的抗原性。以上結(jié)果表明，本方法可成功構(gòu)建重組人Trx原核表達載體，并在大腸桿菌中得以表達和純化，所獲基因重組蛋白hTrx具有較強的抗原性。

33 利拉魯肽對高糖誘導Müller細胞凋亡的作用及相關(guān)機制孫玲敏 孟憲毅 王妮娜 劉俊麗 孔力 大連醫(yī)科大學組織胚胎學教研室 大連 116044 利拉魯肽是胰高血糖素樣肽-1（glucagon-like peptide 1, GLP-1）類似物，與天然的GLP-1具有95%的同源性。研究表明在神經(jīng)退行性病變中利拉魯肽可以與胰高血糖素樣肽-1受體（GLP-1 receptor, GLP-1R）結(jié)合發(fā)揮保護作用，例如阿爾茨海默病、帕金森病、2型糖尿病周圍神經(jīng)病變等。 GLP-1可以與GLP-1R結(jié)合對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞發(fā)揮保護作用，包括上調(diào)抗凋亡相關(guān)蛋白表達、下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白表達；另一方面GLP-1也可以通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasm ic reticulum stress, ERS）的發(fā)生從而抑制細胞凋亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum, ER) 是蛋白質(zhì)合成與折疊的重要位置，ER的紊亂損傷蛋白質(zhì)的動態(tài)平衡導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生非折疊或錯誤折疊的堆積最終導致ERS。ERS的發(fā)生是導致視網(wǎng)膜細胞凋亡的重要因素之一，因此本課題旨在探討利拉魯肽對高糖誘導視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細胞--Müller 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的作用及相關(guān)機制。研究結(jié)果表明，利拉魯肽可以明顯降低細胞凋亡的百分率、減少活性氧的產(chǎn)生。蛋白印跡實驗表明，利拉魯肽可以減少膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白GRP78的表達；增加GLP-1R、磷酸化細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶p-Erk、核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2、硫氧還蛋白Trx的表達；而給予Erk抑制劑U0126后p-Erk、Nrf2、Trx 的表達下調(diào)。以上結(jié)果闡明，拉魯肽對高糖誘導的Müller細胞具有保護作用，其保護作用相關(guān)機制可能與上調(diào)GLP-1R表達、抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激有關(guān)；利拉魯肽可能通過Erk-Nrf2-Trx對高糖誘導Müller細胞凋亡起到保護作用。

34 整合素通過介導kind lin-2蛋白的泛素化和降解而抑制整合素激活魏瀟凡 王翔 陳雨晗 戰(zhàn)軍 方偉崗 張令強 張宏權(quán) 北京大學基礎(chǔ)醫(yī)學院人體解剖與組織胚胎學系 北京 100191 整合素是一種介導細胞與細胞外環(huán)境連接的跨膜粘附受體，參與調(diào)節(jié)諸多重要的細胞生物學功能。Kindlin-2蛋白是調(diào)節(jié)整合素激活以及雙向調(diào)控整合素信號通路的重要蛋白，但是kindlin-2蛋白的穩(wěn)定性調(diào)控以及降解機制完全不清楚。在本研究中，我們證實HECT家族的E3泛素連接酶Smurf1通過介導kindlin-2蛋白的泛素化和降解調(diào)控整合素激活以及相關(guān)的細胞功能。利用流式細胞術(shù)顯示CHO細胞中過表達Smurf1顯著抑制αIIbβ3整合素激活，伴隨著kindlin-2蛋白量的減少；而敲低Smurf1增強αIIbβ3整合素激活，伴隨著kindlin-2蛋白量的增加。并且發(fā)現(xiàn)Smurf1顯著抑制kindlin-2誘導的αIIbβ3整合素激活，同時會破壞kindlin-2與Talin在整合素激活中的協(xié)同作用，但并不影響Talin促進的整合素激活。在kindlin-2敲除的胚胎成纖維細胞中證實Smurf1調(diào)控β1整合素激活。證實Smurf1介導kindlin-2蛋白的降解，并且通過蛋白質(zhì)半衰期實驗證實Smurf1促進kindlin-2半衰期，但是Smurf1并不介導Talin的降解。免疫共沉淀、GST-pull down及共聚焦免疫熒光實驗證實Smurf1與kindlin-2直接相互作用并且在細胞粘著斑處具有共定位，確認Smurf1的 WW 2結(jié)構(gòu)域和kindlin-2的PY motif相互作用。體內(nèi)體外泛素化實驗證實Smurf1顯著促進kindlin-2蛋白的多聚泛素化。質(zhì)譜以及位點突變的方法確定了Smurf1介導kindlin-2蛋白泛素化的位點。Smurf1通過調(diào)節(jié)kindlin-2蛋白量和整合素的激活而抑制細胞鋪展、細胞粘附以及細胞黏著斑的形成。在體內(nèi)研究中利用免疫組化以及Western blot顯示Smurf1敲除小鼠中，多個重要器官的kindlin-2蛋白量上升，而且在結(jié)直腸癌患者標本中Smurf1與kindlin-2蛋白量呈現(xiàn)顯著的負相關(guān)，提示Smurf1在體內(nèi)介導kindlin-2蛋白的降解。本研究首次揭示Smurf1調(diào)控整合素激活的新功能并詳細闡述kindlin-2蛋白降解的分子機制，為整合素激活調(diào)控機制提供了新的觀點。

35 激光顯微切割聯(lián)合單細胞測序技術(shù)在神經(jīng)再生研究中的應用常欣 潘東艷 王越 第二軍醫(yī)大學組胚教研室 200433激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection，LCM)是一種可以從多種細胞組織中分離、純化出單個細胞甚至細胞亞結(jié)構(gòu)的較新技術(shù)，其可在基本不損傷細胞內(nèi)蛋白質(zhì)、DNA、RNA的基礎(chǔ)上與其他分子生物技術(shù)相結(jié)合進行基因轉(zhuǎn)錄組或其他組學研究。視神經(jīng)作為人體12對顱神經(jīng)中唯一可肉眼觀察到的神經(jīng)，其作為模型的研究對于認識中樞神經(jīng)損傷和修復機制意義重大。視神經(jīng)纖維由視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸索構(gòu)成，但是由于視網(wǎng)膜組織學上分為十層，細胞成分復雜，需要合適的技術(shù)精確獲取神經(jīng)節(jié)細胞胞體才能有效排除其他細胞成分的干擾，解決組織異質(zhì)性問題。本研究通過聯(lián)合LCM與單細胞測序技術(shù)，精確研究神經(jīng)節(jié)細胞的轉(zhuǎn)錄組改變，以探索視神經(jīng)損傷及治療后反應的分子機制。研究首先建立大鼠雙側(cè)視神經(jīng)部分損傷模型，24小時后給予模型大鼠玻璃體腔內(nèi)注射MSCs源性外泌體治療或給予磷酸緩沖鹽溶液對照。于處理后1周處死大鼠，取出視網(wǎng)膜及視神經(jīng)標本后固定，免疫組化觀察節(jié)細胞存活和神經(jīng)修復效果。同時對大鼠處死后取出視網(wǎng)膜標本后固定，冰凍切片并染色后，用LCM技術(shù)（Zeiss PALM系統(tǒng)）獲取節(jié)細胞胞體，經(jīng)總RNA提取和RNA擴增后，發(fā)現(xiàn)RNA質(zhì)量良好，可以建立文庫和用于單細胞測序分析。結(jié)論： LCM可以分離出純凈的神經(jīng)節(jié)細胞，滿足下游單細胞測序的要求，LCM聯(lián)合單細胞測序技術(shù)可能是研究神經(jīng)再生的有效的技術(shù)策略。

36 定向誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化為組織樣結(jié)構(gòu)的實驗研究趙文婧 王慧豐 韋雅淑 劉紅靜 徐亦晨 陳維平 廣西醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 南寧 530022 骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）具有多向分化潛能及“環(huán)境依賴性”的特性，在特定的微環(huán)境可分化為多種類型的細胞，但其分化規(guī)律和機制尚不清楚。本課題設(shè)計兩個實驗組：①心肌組織裂解液誘導組：最終獲得具有自律性搏動的心肌樣細胞、含內(nèi)皮樣細胞的中空結(jié)構(gòu)、有典型結(jié)締組織包裹的“心肌組織樣結(jié)構(gòu)”。在誘導過程中，心肌樣細胞的分化發(fā)育呈現(xiàn)規(guī)律的形態(tài)變化過程：由“長梭形”的MSCs，逐漸呈現(xiàn)“短桿狀-突起形成-突起交錯相連呈網(wǎng)狀-細胞端端相連、胞膜增厚呈竹節(jié)狀-相鄰細胞融合形成肌管樣結(jié)構(gòu)”。細胞形態(tài)變化與相關(guān)基因GATA-4、Nkx2.5、α-MHC的表達、相應結(jié)構(gòu)蛋白心肌肌鈣蛋白T和間隙連接蛋白43的產(chǎn)生和增多有關(guān)聯(lián)性。②胰腺組織裂解液誘導組：誘導MSCs分化為α、β樣內(nèi)分泌細胞、含有結(jié)締組織樣被膜包繞的島狀結(jié)構(gòu)。MSCs發(fā)育形成胰島樣結(jié)構(gòu)經(jīng)歷細胞逐漸聚集成團，形成大小不一、形態(tài)不規(guī)則的“島”狀結(jié)構(gòu)，細胞周緣逐漸收攏形成完整包膜包裹，雙硫腙染色可見細胞團部分細胞呈棕紅色，免疫熒光染色方法檢測胰島素和胰高血糖素可見陽性細胞，透射電鏡觀察細胞內(nèi)含有發(fā)達的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和電子密度高的膜包顆粒。實驗結(jié)果表明：MSCs能夠定向分化形成組織樣結(jié)構(gòu)，在分化過程中細胞形態(tài)變化有典型的規(guī)律；在特定微環(huán)境下，干細胞分化趨勢是形成組織而非單一類型細胞，結(jié)構(gòu)的發(fā)育有賴于功能活動的促進。

37 JAM-A3’UTR維持毛乳頭細胞原始性及促進斑禿處毛發(fā)再生的機制研究仵敏娟 徐辰 王越 王斐 龐童方 劉厚奇第二軍醫(yī)大學組織胚胎學教研室 上海 200433 分離培養(yǎng)人毛乳頭細胞（dermal papilla cell，DPC）并鑒定其特異性versican（VCAN）和alkaline phosphatase（ALP），同時構(gòu)建junction adhesion molecule A 3’end untranslated regions(JAM-A3’UTR)的過表達載體及相關(guān)miRNA 位點突變載體并轉(zhuǎn)染至DPC，并合成相關(guān)miRNA成熟體及抑制劑。將修飾后的DPC接種到裸鼠皮膚組織，接種后不同時間點觀察毛發(fā)生成情況，石蠟切片H.E 染色觀察皮膚顯微結(jié)構(gòu)改變，熒光雙標實驗觀察人源性細胞歸巢及轉(zhuǎn)分化情況。制備直徑約1 厘米的斑禿模型并鑒定；將JAM-A3’UTR 的過表達載體及相關(guān)miRNA 位點突變載體、相關(guān)m iRNA 成熟體及抑制劑采用顯微注射的方式移植到斑禿處皮膚，不同時間點觀察斑禿區(qū)域毛發(fā)再生情況并采用圖像分析軟件分析毛發(fā)生成質(zhì)量。在機制研究方面，系統(tǒng)分析人DPC 中JAM-A 的3’UTR 影響的基因和miRNA。補償實驗驗證VCAN 是否參與JAM-A3’UTR 對DPC 的調(diào)控作用：對前期建立的JAM-A3’UTR 穩(wěn)定過表達的人DPC 進行VCAN 干擾，對JAM-A3’UTR 穩(wěn)定干擾的人DPC 進行VCAN 過表達，分別檢測DPC 生長狀態(tài)及ALP的改變。接下來，分析人DPC中JAM-A3’UTR 是否通過ceRNA 作用調(diào)控VCAN：篩選和分析JAM-A3’UTR 與VCAN 共享的調(diào)控性m icroRNA；補償實驗分析JAM-A3’UTR 調(diào)控VCAN 是否依賴于mir-221、 m ir-340 等；RNA pull down 實驗和雙熒光素酶報告基因競爭實驗證實JAM-A3’UTR 和VCAN互為ceRNA。人頭皮來源DPC在體外培養(yǎng)時呈現(xiàn)凝聚樣生長并表達標志分子ALP和VCAN，隨DPC 傳代次數(shù)增加，JAM-A，VCAN 和ALP 的表達逐漸降低。將修飾后的人DPC接種到裸鼠皮膚組織，可見p3 DPC-siJAM-A+JAM-A 3’UTR 促毛發(fā)生成效果優(yōu)于p3 DPC scr；p7 DPC +JAM-A3’UTR 促毛發(fā)生成效果優(yōu)于其他組；在促斑禿小鼠毛發(fā)再生實驗中，JAM-A 3’UTR 過表達慢病毒注射組毛發(fā)生成的質(zhì)量優(yōu)于saline，vector 及JAM-A 3’UTR Mut 組。miRNA-221-3P inhibitor 促毛發(fā)生成效果優(yōu)于m iRNA-221-3P m imcs 組。綜上，JAM-A3’UTR通過m iRNA221調(diào)控VCAN的表達，維持毛乳頭細胞的原始性，促進毛發(fā)再生。

38 CART聯(lián)合化療藥治療癌癥的Meta分析陳承曉 黃榮師 潘劍 郭晉宏 張堯瑤 羅國容 廣西醫(yī)科大學 南寧 530022對嵌合體抗原受體修飾T細胞（CART）聯(lián)合化療治療癌癥的相關(guān)文獻進行Meta分析，了解腫瘤免疫治療聯(lián)合化療治療癌癥的臨床療效。檢索Clinicaltrials.gov數(shù)據(jù)庫，查找聯(lián)合化療治療癌癥的臨床試驗。使用Jadad評分量表對納入文獻進行質(zhì)量評價，經(jīng)篩選后納入34篇隨機對照臨床試驗文獻，納入文獻質(zhì)量及格。采用Revman5軟件對臨床療效、生活質(zhì)量及免疫檢測指標CD4+/CD8+、CD3+、CD4+進行Meta統(tǒng)計分析。通過亞組分析和回歸分析研究異質(zhì)性，包括219例患者在內(nèi)的20項臨床試驗符合回應率評估標準，15項臨床試驗中有82例符合無進展生存期分析資格。治療后免疫學檢測指標CD3+的合并效應量OR為20.96，95%CI為13.03～19.62；CD4+的合并效應量OR為9.84，95%CI為7.06～8.03；CD4+/CD8+的合并效應量OR為0.80，95%CI為0.66～0.75。DC-CIK或CIK聯(lián)合化療治療NSCLC的臨床獲益率及生活質(zhì)量明顯優(yōu)于對照組，治療后免疫功能也優(yōu)于對照組；CART能明顯提高化療后患者免疫功能，CART細胞的總體回應率為53%（95%置信區(qū)間[CI]：56%-92%）；ALL患者比CLL（72%，95%CI：29%-92%）具有較高的應答率（92%，95%CI：62%-100%）；CART細胞免疫治療血液腫瘤的臨床反應率很高，但對實體瘤的反應率較低。

39 乳腺癌增殖活性K i-67精確評估的探討劉雨 第二軍醫(yī)大學 上海 200433 Ki67是2015年St. Gallen國際共識定義的乳腺癌分子分型指標之一，它是細胞周期相關(guān)細胞核抗原，在增殖活躍的細胞核中表達，與腫瘤生長速度及化療敏感性正相關(guān)。因此，評估Ki-67對于指導乳腺癌患者的治療意義重大。目前對于Ki-67的評估以病理醫(yī)生估測為主，該方法不精確，存在較大問題。本研究試圖利用在線軟件ImmunoRatio進行乳腺癌組織Ki-67評估，探索Ki-67定量分析新方法，以解決當前Ki-67人工目測評估存在的問題。本研究選擇2012年9月至2013年10月長海醫(yī)院所收集的145例乳腺癌患者的腫瘤組織Ki-67免疫組化染色切片，分別運用ImmunoRatio在線分析和顯微鏡下人工精確計數(shù)方法評估Ki-67表達，兩種方法評估結(jié)果分別與病理醫(yī)生目測結(jié)果比較。結(jié)果顯示，ImmunoRatio在線分析結(jié)果與人工精確計數(shù)結(jié)果的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.835（P＜0.0001）。ImmunoRatio在線分析與人工精確計數(shù)結(jié)果、病理醫(yī)生目測與人工精確計數(shù)結(jié)果分別進行Bland-Altman一致性檢驗，結(jié)果顯示ImmunoRatio在線分析與人工精確計數(shù)結(jié)果具有更好的統(tǒng)計學一致性。綜上所述，ImmunoRatio在線分析結(jié)果明顯優(yōu)于病理醫(yī)生目測結(jié)果，ImmunoRatio在線分析可以更好地運用于乳腺癌的Ki-67評估。然而ImmunoRatio在線分析為代表的自動分析尚未實現(xiàn)完全的自動化，我們期待未來有更完備的技術(shù)將圖片處理也納入自動分析中，從而達到真正、完全的自動分析。

40 蛋白質(zhì)組和磷酸化芯片分析褪黑素抑制胃癌細胞的分子機制宋軍 福建醫(yī)科大學 福州 350122 褪黑素又名N-乙酰基5-甲氧色胺，是主要由松果體合成并分泌的一種吲哚類神經(jīng)內(nèi)分泌激素。除松果體外，紋狀體、視網(wǎng)膜、脾、肝和胃腸道等其它組織和器官也可以合成褪黑素。褪黑素具有多種多樣的生理學作用，如：調(diào)節(jié)日夜節(jié)律、抑制生殖系統(tǒng)發(fā)育成熟、調(diào)節(jié)骨骼生長、調(diào)節(jié)免疫、清除自由基抗氧化及抑制腫瘤等。研究表明，褪黑素具有抗胃癌的作用，可以通過促進細胞凋亡、抑制細胞增殖、調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫等方式抑制胃癌，但褪黑素作用的細胞內(nèi)信號通路尚不十分明確。為了進一步探討褪黑素對胃癌作用的細胞內(nèi)分子機制，本研究選取胃癌細胞系SGC-7901，通過高通量篩選的方法，采用蛋白質(zhì)組和磷酸化芯片分析褪黑素作用胃癌細胞后蛋白質(zhì)表達及磷酸化水平的差異，來分析褪黑素的可能作用位點。褪黑素作用后將差異蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析結(jié)果分類，可以歸為三組：第一組為細胞代謝相關(guān)酶類，如乳酸脫氫酶B、異檸檬酸脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶等；第二組為細胞氧化還原酶類，如谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6、超氧化物歧化酶等；第三組為分子伴侶與細胞骨架等結(jié)構(gòu)蛋白，如HSP70蛋白家族、分子伴侶蛋白TCP1復合物、角蛋白8、蛋白酶體α6亞單位等。在磷酸化芯片中，差異磷酸化蛋白分析篩選出褪黑素作用后50個蛋白磷酸化水平上調(diào)以及15個蛋白磷酸化水平下調(diào)，DAVID在線數(shù)據(jù)庫信號通路富集分析提示數(shù)條腫瘤相關(guān)的信號通路參與到褪黑素對胃癌細胞的作用中，如MDM 2/p53、Jak1/STAT3、MEK/cJun等。本研究為進一步深入研究褪黑素抗胃癌作用的細胞內(nèi)分子機制提供了方向。

41 子宮內(nèi)膜癌中ERα調(diào)控lncRNA的鑒定及作用胡瀚洋 紀璐璐 陳志國 徐亞廷 汪琳 武漢大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織學與胚胎學系 武漢 430071 該研究為了鑒定子宮內(nèi)膜癌中受雌激素受體調(diào)控的lncRNA及其在腫瘤中的作用。內(nèi)容包括：分析雌激素刺激后子宮內(nèi)膜癌細胞中雌激素受體結(jié)合位點與lncRNA表達情況；分析受雌激素受體調(diào)控的lncRNA在子宮內(nèi)膜癌和癌旁組織中的表達；通過fulvestrant處理細胞，檢測在雌激素作用下受雌激素受體調(diào)控的lncRNA的表達水平；通過沉默候選lncRNA，檢測腫瘤細胞增殖、侵襲能力。研究鑒定出雌激素刺激后幾千個雌激素受體DNA結(jié)合事件以及幾百個雌激素誘導表達的lncRNA；這些lncRNA在癌組織中也呈現(xiàn)高表達，并且參與了一些與腫瘤發(fā)生相關(guān)的生物學過程和信號通路；通過fulvestrant處理能夠顯著抑制這些雌激素誘導的lncRNA的表達；最后，沉默雌激素誘導的lncRNA的表達能夠抑制細胞的增殖、侵襲能力。研究證實lncRNA通過雌激素受體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展，這些lncRNA可能成為未來治療子宮內(nèi)膜癌的潛在靶點。

42 上調(diào)CHD1L表達對肝癌細胞力學特征及生化組份的影響成煒 歐潔美 劉珊珊 陳娟 黃麗 劉玉榮 馬寧芳 廣州醫(yī)科大學基礎(chǔ)學院組織學與胚胎學教研室 廣州 511436 原子力顯微鏡（AFM）和共聚焦拉曼光譜儀（confocal raman spectroscopy, CRS）在研究細胞生物力學特征和生物化學組成方面有獨特的優(yōu)勢，可直觀地了解特定基因引起的細胞生物學特性變化，有望成為預估相關(guān)基因生物學功能的新方法。CHD1L（chromodomain helicase/adenosine triphosphatase DNA binding protein 1-Like）基因是多種實體瘤中異常擴增和表達的癌基因，其表達水平與腫瘤的惡性進展密切相關(guān)，是腫瘤細胞干性及侵襲能力的標志之一。本研究構(gòu)建了CHD1L穩(wěn)轉(zhuǎn)肝癌細胞株（CHD1L-7703），以空載體為對照（Vector-7703），聯(lián)合應用CRS和AFM表征并比較兩組細胞的力學特性及生物化學組成變化，結(jié)合已知的CHD1L生物學作用，綜合分析其與力學特性及生化指標間的對應關(guān)系。結(jié)果顯示CHD1L過表達增強肝癌細胞的粘附能力；與對照組相比，CHD1L-7703細胞的形貌發(fā)生明顯改變，其楊氏模量降低、細胞表面粗糙度及柔軟度增加，與基質(zhì)的粘附力顯著增強；免疫熒光染色結(jié)果顯示CHD1L過表達引起細胞骨架蛋白F-actin排列不規(guī)則，由細胞漿轉(zhuǎn)位于細胞膜下方，粘著斑蛋白Vinculin向細胞膜聚集，與力學參數(shù)的改變相吻合。CRS檢測結(jié)果顯示CHD1L高表達細胞出現(xiàn)特異性拉曼波譜，主成分分析結(jié)果顯示與對照組相比，CHD1L-7703細胞內(nèi)核酸含量增高，預示細胞分裂增殖能力增強；不飽和脂肪酸含量增高，預示細胞脂類堆積、脂代謝紊亂；蛋白質(zhì)主鏈出現(xiàn)共價鍵斷裂，提示主鏈結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，側(cè)鏈酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等組分含量增加，提示相關(guān)酶蛋白活性發(fā)生改變。上述生化組份的改變可能是CHD1L促進腫瘤惡性進展的生化基礎(chǔ)，可作為預估CHD1L高表達的生物學效應指標之一。

43 CXCL1上調(diào)CHD1L表達促進肝癌細胞惡性表型的作用研究陳娟 成煒 劉珊珊 黃麗 劉玉榮 馬寧芳 廣州醫(yī)科大學基礎(chǔ)學院組織學與胚胎學教研室 廣州511436 CHD1L（chromodomain helicase/adenosine triphosphatase DNA binding protein 1-Like）基因在多種實體瘤中異常表達，與腫瘤細胞惡性轉(zhuǎn)化、EMT、干性表型等有關(guān)，但腫瘤免疫微環(huán)境中哪些因子是CHD1L表達的誘導因子、其調(diào)控機制如何目前不清楚。本研究以M 2型巨噬細胞與肝癌細胞共培養(yǎng)體系模擬肝癌免疫微環(huán)境，應用細胞因子抗體芯片檢測并篩選M 2巨噬細胞共培養(yǎng)上清（實驗組）及肝癌細胞培養(yǎng)上清（對照組）中差異表達因子，驗證特異性因子對CHD1L表達及其促肝癌細胞表型的影響。篩選出差異表達因子30余種，其中CXCL1對CHD1L表達有明顯上調(diào)作用，阻斷CXCR2再給予CXCL1，不能回調(diào)CHD1L的表達；MTS結(jié)果顯示CXCL1作用下肝癌細胞增殖率無明顯變化，但細胞劃痕及Transwell實驗結(jié)果顯示細胞的遷移、侵襲能力明顯高于對照組，體外成球?qū)嶒灲Y(jié)果顯示CXCL1作用下細胞成球率明顯增高；qRT-PCR及Western blot檢測結(jié)果顯示CXCL1處理細胞后肝癌細胞中干性相關(guān)基因表達出現(xiàn)明顯上調(diào)，而阻斷CXCR2后再給予CXCL1，上述基因表達則下調(diào)。qRT-PCR、Western Blot及細胞表型實驗檢測結(jié)果顯示當敲除CHD1L后再給予CXCL1細胞遷移、侵襲及干性的促進作用明顯減弱。Western-blot結(jié)果顯示CXCL1作用后其下游信號通路中關(guān)鍵分子AKT、MEK、ERK的磷酸化水平有不同程度的升高，其中p-AKT的表達上調(diào)最明顯，而FAK磷酸化水平無明顯變化；經(jīng)中和抗體封閉CXCR2后p-AKT水平明顯下降，與對照組無明顯差異。阻斷PI3K/AKT信號通路后CXCL1對CHD1L的表達無明顯回調(diào)作用。結(jié)果表明M 2型巨噬細胞與肝癌細胞共培養(yǎng)體系中趨化因子CXCL1是上調(diào)CHD1L表達的主要因子；CXCL1通過活化PI3K/AKT信號通路上調(diào)CHD1L表達，進而促進肝癌細胞的惡性表型。

44 青蒿琥酯與溴隱亭聯(lián)合用藥通過m iR-200c/PTEN通路對GH 3和MMQ細胞抗腫瘤作用研究王欣1杜邱1毛志鋼2胡斌2王珍1陳志勇2王宗明2雷霓1王海軍2朱永紅11中山大學醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室，2中山大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科 廣州 510080 泌乳素腺瘤作為最常見的垂體腺瘤，約占所有垂體腺瘤的40%，可引起患者性功能下降、溢乳、不孕不育等癥狀。溴隱亭是治療泌乳素腺瘤的首選藥物，近年來藥物耐受和停藥復發(fā)現(xiàn)象逐年遞增，成為目前臨床治療的一大難題。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)青蒿素類衍生物青蒿琥酯能抑制垂體瘤腺瘤GH3和MMQ細胞增殖并誘導其凋亡，本實驗在此基礎(chǔ)上觀察聯(lián)合應用青蒿琥酯和溴隱亭能否協(xié)同增強溴隱亭的抗腫瘤效應。此外，進一步對聯(lián)合用藥的作用機制進行初步探討，提出其抗腫瘤作用中可能參與的調(diào)控機制，為臨床安全用藥提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。結(jié)果表明低劑量的青蒿琥酯聯(lián)合溴隱亭能夠協(xié)同抑制垂體腺瘤GH3和MMQ細胞的增殖，并對細胞運動遷移和侵襲，胞外PRL分泌水平有抑制作用，并通過核染色，Caspase-3的表達以及凋亡分析發(fā)現(xiàn)其抑制作用是通過誘導細胞凋亡實現(xiàn)。課題組在前期實驗中發(fā)現(xiàn)m iR-200c在垂體腺瘤中起促癌作用，本實驗發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥能明顯下調(diào)MMQ和GH3細胞中促癌因子miR-200c的表達，并且上調(diào)本來在垂體腺瘤中低表達的腫瘤抑癌因子PTEN的表達。本研究在垂體腺瘤細胞系GH3和MMQ細胞中轉(zhuǎn)染m iR-200c m im ic/inhibitor，發(fā)現(xiàn)通過轉(zhuǎn)染miR-200c m imic過表達m iR-200c能下調(diào)PTEN的表達，轉(zhuǎn)染miR-200c inhibitor部分阻斷miR-200c 表達后PTEN顯著上調(diào)，表明在垂體腺瘤細胞系中m iR-200c 呈負性調(diào)控PTEN，而上調(diào)PTEN表達后， m iR-200c的表達則降低。以上結(jié)果證明在垂體腺瘤細胞系中低劑量的青蒿琥酯聯(lián)合溴隱亭產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應是通過miR-200c與PTEN相互作用而實現(xiàn)。

45 Cu-Cy介導的X-PDT抗結(jié)直腸腫瘤效應及藥物安全性研究熊璐 林良武 黃河 中南大學湘雅醫(yī)學院組織學與胚胎學系 長沙 410013 為研究新型光敏劑Cu-Cy在X-射線的激發(fā)下對結(jié)直腸腫瘤的抑制作用，并初步探討其作用機制、藥物代謝及安全性評價。本文測定Cu-Cy微粒熒光光譜和X-射線激發(fā)光譜，CCK-8、細胞染色以及克隆形成實驗研究Cu-Cy對結(jié)腸癌細胞的增殖抑制效應，單態(tài)氧檢測，細胞凋亡/壞死/健康檢測分析，Western blot檢測腫瘤相關(guān)蛋白表達，血液生化指標檢，主要組織H&E染色，ICP-OES分析銅元素在各組織、糞便和尿液中的含量。發(fā)現(xiàn)Cu-Cy分子式為Cu3Cl(SR)2，在580nm和630nm處有強烈的光致發(fā)光和X-射線激發(fā)光， Cu-Cy在低劑量無X-射線激發(fā)條件下無細胞毒性，當有X-射線激發(fā)時能有效殺傷腫瘤細胞，并初步探討了最佳濃度和光照劑量（20μg/m l，5 Gy），在X-射線的激發(fā)下Cu-Cy可誘導產(chǎn)生大量的單態(tài)氧，Cu-Cy介導的X-PDT主要通過細胞壞死途徑誘導結(jié)直腸腫瘤細胞的死亡， 血液生化指標AST和ALT在PBS對照組和Cu-Cy組中無統(tǒng)計學差異，H&E染色也表明Cu-Cy不會損傷正常組織，ICP-OES分析表明Cu-Cy給藥組的小鼠糞便中的銅離子含量最高。提示Cu-Cy作為一種新型光敏劑，在X-射線的激發(fā)下可對腫瘤細胞產(chǎn)生顯著的殺傷效果，其腫瘤殺傷途徑主要為誘導細胞壞死而非凋亡，在體內(nèi)主要通過胃腸道代謝，無組織聚集毒性，生物安全性高。

46 PLD2 regulates m icrotubule stability and spind le m igration in mouse oocytes during meiotic divisionSimin Wang, Xiaoyu Liu, Xiuying Jiang, Qing Zhou, Qian Wang, Juan Du, Wei Ma Department of Histology and Embryology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University, Beijing, 100069 Phospholipase D2 (PLD2) is involved in cytoskeletal reorganization, cell m igration, cell cycle progression, transcriptional control and vesicle traf cking. There is no study about the function of PLD2 in oocytes during meiosis. Herein, we analyzed PLD2 expression and its relationship w ith spindle formation and positioning in mouse oocyte meiosis. High level of PLD2 protein was revealed in oocytes by Western blot, which remained consistently stable from prophase I w ith intact germinal vesicle (GV) up to metaphase II (M II) stage. Immunofuorescence staining showed that PLD2 emerged as f laments after germ inal vesicle breakdown (GVBD), and co-localized w ith spindle from pro-metaphase I (pro-M I) to metaphase I (M I) and at M II stage. During anaphase I (Ana I) to telophase I (Tel I) transition, PLD2 was concentrated in spindle polar area but absent from midbody. In oocytes incubated w ith NFOT, an allosteric and catalytic inhibitor to PLD2, the spindle was enlarged and center-positioned, m icrotubules were resistant to cold-induced depolymerization, and additionally, the meiotic progression was arrested at M I stage. However, these changes were not detected in oocytes treated w ith PLD2 catalytic inhibitors, FIPI and 1-butanol, implying PLD2 regulation of spindle is independent of its ability to catalyze the hydrolysis of phosphatidylcholine. NFOT-induced defects in spindle confguration and positioning may be contributed to altered expression and distribution of RhoA, phosphatidylinosital 4, 5- biphosphate (PIP2), phosphorylated Colifn, and consequently, unordered F-actin dynamics. Taken together, these data indicate PLD2 is required for the regulation of m icrotubule dynam ics and spindle m igration toward the cortex in mammalian oocytes during meiotic progression.

47 NQO2 inhibition relieves ROS ef ects on mouse oocyte meiotic m aturation and embryo developmentXiuying Jiang, Dandan Chen, Simin Wang, Qing Zhou, Juan Du, Qian Wang, Wei Ma Department of Histology and Embryology, School of BasicMedical Sciences, Capital Medical University, Beijing 100069 NRH: quinone oxidoreductase 2 (NQO2) is a cytosolic and ubiquitously expressed favoprotein that catalyzes the two-electron reduction of quinone to hydroquinones. Herein, we assessed the protein expression, subcellular localization and possible functions of NQO2 in mouse oocyte meiotic maturation and embryo development. Western blot analysis detected high and stable protein expression of NQO2 in mouse oocytes during meiotic progression. Immunofuorescence staining illustrated NQO2 distribution on nuclear membrane, chromosomes and meiotic spindles. M icrotubule poisons treatment (nocodazole and taxol) showed that f lamentous assembly of NQO2 and its co-localization w ith microtubules require microtubule integrity and normal dynam ics. Increased levels of NQO2, reactive oxygen species (ROS), malondialdehyde (MDA) and autophagy protein Beclin1 expression were detected in oocytes cultured w ith ROS stimulator Vitamin K3 (VK3), combined w ith decreased antioxidant glutathione (GSH). These oocytes were arrested at metaphase I w ith abnormal spindle structure and chromosome confguration.

48 Pak1 activity is associated w ith meiotic progression and chromosome segregation in mouse oocyte meiosisQing Zhou, Xiaoyun Liu, Xiuying Jiang, Simin Wang, Qian Wang, Juan Du, Wei Ma Department of Histology and Embryology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University, Beijing 100069 p21-activated-kinase 1 (Pak1) plays a key role in the regulation of cytoskeleton organization, cell survival and cell proliferation. Pak1 phosphorylation on Ser204 induces its conformational change and full activation. Up to now, it is still unknown about the protein expression, sub-cellular localization of activated Pak1 and its potential function during meiosis in mouse oocytes. In the present study, Western blot analysis detected the protein expression of activated PAK 1 (phosphorylated PAK 1 at Ser204, pPak1Ser204) only after germ inal vesicle breakdown (GVBD) in mouse oocytes, implying PAK1 activation occurs as the the resumption of meiotic progression. pPak1Ser204level increased along w ith the meiotic progression and reached the peak at metaphase I (M I), remaining stable up to metaphase II (M II). Immunofuorescence staining showed that pPak1Ser204was co-localized w ith MTOC key components, pericentrin and tubulin on spindle poles from pro-metaphase I (pro-M I) to M I and at M II stage, and detached from spindle poles, mainly concentrated on the cleavage furrow during anaphase I (AI) to telophase I (Tel I) progression. In addition, pPak1Ser204was also constantly concentrated on centromeres and dynamically distributed in the space between chromosome arms, overlapping w ith protein phosphatase 2 A (PP2A). The spindle structure and m icrotubule stability were destroyed when Pak1 activity was blocked w ith the ATP-competitive inhibitor PF3758309, Pak1 inhibition also suppressed the recruitment of Mad1, a key component of spindle assembly checkpoint (SAC), to centromeres, inducing premature onset of anaphase and chromosome separation. In summary, pPak1Ser204is expressed upon meiotic resumption in oocytes, it is a MTOC-associated protein, associated w ith spindle formation and maintenance, as well as SAC functional setup and timely meiotic progression in oocytes.

49 Smad3 Promotes Cancer Progression by Inhibiting E4BP4-mediated NK Cell Developm entShuang Zhou Department of Histology and Embryology, Tongji University School of Medicine, Shanghai 200092 Smad3 contributes to tumor progression by multiple means. Here we report an additional crucial role of Smad3 in the tumor m icroenvironment for cancer progression. Deletion or inhibition of Smad3 in microenvionment suppressed tumor grow th, invasion, and metastasis, in two syngeneic mouse tumor models. Smad3-/-bone marrow gave rise to expanded NK cell population w ith enhanced tumor-suppressive activities in vivo, and promoted dif erentiation of NK cells ex-vivo. We identifed E4BP4/NFIL3 as a direct Smad3 target gene critical for NK cell dif erentiation. Smad3 suppressed transcription of IFN-γ via E4BP4 in a T-bet independent manner. Therefore disruption of Smad3 enhanced both the E4BP4-mediated NK cell dif erentiation and anti-cancer ef ector functions in vivo and in vitro. Furthermore, system ic treatment w ith a Smad3 inhibitor SIS3 ef ectively suppressed cancer progression. In summary, suppression of NK cell-mediated immunosurveillance via the Smad3-E4BP4 axis contributes to cancer progression. Thus, targeting Smad3-dependent tumor microenvironment may represent an ef ective cancer therapeutic strategy.

50 RhoA調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細胞遷移的信號機制研究王雪兒 張琳 南方醫(yī)科大學組織胚胎學教研室 廣州510515 骨髓間充質(zhì)干細胞( Bone mesenchymal stem cells，BMSCs )是參與創(chuàng)傷修復的重要種子細胞，在機體損傷組織修復和再生中起重要作用。RhoA是小G蛋白Rho家族成員，具有GTP酶活性，在細胞骨架重組中起重要調(diào)控作用。本研究利用Pull down檢測發(fā)現(xiàn)，Activin B誘導15m in和30m in，BMSCs 中RhoA活性顯著增強。利用RhoA顯性負效突變體RhoA (N19)和組成型激活突變體RhoA (L63)慢病毒感染BMSCs，鬼筆環(huán)肽染色、transwell小室遷移、細胞劃痕實驗表明抑制RhoA活性時，Activin B誘導的BMSCs肌動蛋白骨架和細胞遷移被抑制，而激活RhoA可以促進Activin B誘導的BMSCs肌動蛋白骨架重組和細胞遷移。RhoA有兩個主要的效應子：ROCK(Rho associated coiled-coil forming kinase)和mDia(mammalian homolog of Drosophila diaphanous)。利用ROCK抑制劑Y-27632處理BMSCs，發(fā)現(xiàn)：Activin B通過RhoA/ROCK/LIMK2/Cof lin通路介導BMSCs肌動蛋白骨架重組，然而，ROCK在Activin B誘導的BMSCs遷移中與RhoA發(fā)揮不同作用。提示，RhoA可能通過其他下游信號介導Activin B誘導的BMSCs遷移。利用siRNA干擾mDia發(fā)現(xiàn)，干擾mDia可以抑制Rac1，影響遷移細胞前端片狀偽足的形成，抑制Activin B誘導的BMSCs遷移。我們的研究表明，Activin B通過RhoA介導BMSCs遷移和肌動蛋白骨架重組；RhoA的下游效應子ROCK和mDia在BMSCs遷移中發(fā)揮拮抗作用；R hoA-ROCK-LIMK-Cof lin介導Activin B誘導的應激纖維生成；RhoA-mDia介導Activin B調(diào)控的BMSCs遷移。

51 基于去細胞化肺支架體外構(gòu)建乳腺癌肺轉(zhuǎn)移三維模型的初探成旭 常靜潔 龍燦玲 張秀珍 衛(wèi)盛楠 王秀麗 大連醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組胚教研室 大連 116044 侵襲性乳腺癌是威脅女性健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)上升化及年輕化；其中最常見的轉(zhuǎn)移部位為肺器官。近年來有研究表明腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移與腫瘤所處的微環(huán)境密切相關(guān)，但受限于傳統(tǒng)的平面（2D）培養(yǎng)體系在模擬微環(huán)境方面存在巨大缺陷，而動物模型由于種屬差異，影響因素多，不利于單因素分析等原因，在乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的研究中并不理想，因此有關(guān)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的相關(guān)作用機制仍遠未被揭示。隨著組織工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，研究者們利用生物支架材料復合腫瘤細胞，在體外構(gòu)建腫瘤細胞三維培養(yǎng)模型，以期模擬在體微環(huán)境，來研究乳腺癌肺轉(zhuǎn)移。本研究擬采用三維（3D）培養(yǎng)技術(shù)，以去細胞化肺為三維支架材料，侵襲性乳腺癌MDA-MB-231細胞為細胞模型，體外構(gòu)建乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型，部分模擬在體微環(huán)境；并對其進行表型和功能學評價，以期建立理想的乳腺癌肺轉(zhuǎn)移體外研究模型。通過對3D培養(yǎng)條件下（靜態(tài)培養(yǎng)和動態(tài)培養(yǎng)組）的乳腺癌細胞進行細胞活性評價和形態(tài)學表征（活性染色，HE）；對照2D培養(yǎng)組，對3D培養(yǎng)條件下的乳腺癌細胞進行熒光定量PCR檢測侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（MMPs家族，Vimentin，E-cadherin，N-cadherin等）的表達，并采用免疫組織化學染色檢測侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果表明：對照靜態(tài)培養(yǎng)組，動態(tài)培養(yǎng)組內(nèi)細胞的增殖能力和活性更為理想。對比2D培養(yǎng)組，經(jīng)3D培養(yǎng)后，其侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達水平顯著上調(diào)，且培養(yǎng)至第8天時表達最高。免疫組織化學染色結(jié)果顯示，乳腺癌細胞在3D培養(yǎng)條件下，其侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達水平均顯著提高。綜上，我們初步成功構(gòu)建了基于去細胞化肺支架的人乳腺癌肺轉(zhuǎn)移體外模型。該模型將可能為深入闡明乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生和發(fā)展機制提供理想的研究工具，也可能為乳腺癌的臨床治療提供理論指導。

52 妊娠期糖尿病狀態(tài)下胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中的自噬研究紀璐璐 陳志國 徐亞廷 胡瀚洋 汪琳 武漢大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織學與胚胎學系 武漢 430071 該研究為探討自噬在妊娠期糖尿病中的作用及其對胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞功能的影響，取自足月妊娠的正常（normal pregnancy, NP）及妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus, GDM）患者的胎盤組織，透射電鏡觀察滋養(yǎng)層細胞超微結(jié)構(gòu)的改變，qPCR檢測胎盤滋養(yǎng)層細胞中ATG5、ATG7、BECN2的mRNA表達；Western blotting檢測ATG5、LC3-II、P62的蛋白表達。DNA羥甲基化測序來分析NP組、GDM組和先兆子癇組（Preeclampsia, preE）的臍帶組織中5-hmC修飾模式及調(diào)控的信號通路。用人絨毛膜滋養(yǎng)層細胞系-HTR8/SVneo構(gòu)建GDM模型，檢測細胞自噬水平及細胞的凋亡、增殖、侵襲能力；在構(gòu)建的GDM模型中，干擾自噬基因ATG5， 進行轉(zhuǎn)錄組測序。顯示GDM患者胎盤組織的滋養(yǎng)層細胞的微絨毛結(jié)構(gòu)及細胞器形態(tài)發(fā)生改變，自噬小體顯著增多，自噬水平顯著增高；臍帶組織的DNA羥甲基化測序的分析結(jié)果表明，GDM組5hmC在ATG5基因的啟動子區(qū)域富集，并且特異性調(diào)控自噬、凋亡和胰島素相關(guān)信號通路；GDM細胞模型中，自噬水平顯著增高，且抑制HTR8/SVneo細胞增殖和侵襲能力，增加細胞凋亡率，但是干擾ATG5能夠降低高糖誘導的自噬水平、減少細胞凋亡率、改善細胞的侵襲能力；轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果提示，干擾ATG5使細胞內(nèi)自噬、凋亡等重要信號通路發(fā)生改變。該研究結(jié)果證實，高糖能增強胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞的自噬水平，抑制細胞的增殖和侵襲能力，增加細胞凋亡率，靶向敲除ATG5能減弱自噬引起的細胞不良改變。

53 多標記染色及多光譜成像技術(shù)在組織學研究中的應用錢邦國 焦磊 珀金埃爾默（PerkinElmer）企業(yè)管理（上海）有限公司 上海 201203 免疫組織化學染色及成像分析是研究組織形態(tài)和組織原位抗原表達不可或缺的檢測技術(shù)，廣泛應用于臨床病理診斷和醫(yī)學及生物學研究的各個領(lǐng)域。組織切片樣本中蘊含著豐富的信息，但是受制于傳統(tǒng)單標記免疫組化染色方法的限制，通常只能對組織中的一到兩種靶標進行染色分析，而且定量結(jié)果的判讀往往依賴于肉眼觀測，缺乏客觀標準。隨著蛋白組學的發(fā)展，對現(xiàn)代組織學分析提出了更高的要求，例如不同的蛋白共表達和共定位分析、低豐度分子的檢測、異質(zhì)性分析、細胞表型統(tǒng)計乃至復雜組織微環(huán)境的描繪等，都需要在同一張組織切片樣本上同時檢測多種靶標分子。這對于理解組織微環(huán)境中各種細胞間的關(guān)系，推演信號通路上下游蛋白表達的關(guān)系，制定臨床診斷和治療方案都有著非常重要的意義。本文介紹了一種基于酪胺信號放大（TSA）技術(shù)衍生而來的多標記免疫熒光染色方法，能夠在同一組織切片樣本上復染七種以上抗原并進行區(qū)別標記，配合光譜成像技術(shù)和定量分析軟件，能夠?qū)⒔M織中蘊含的豐富信息準確的呈現(xiàn)出來。這套流程化的分析方案為臨床診斷和基礎(chǔ)科研提供了更高精度和更可靠的組織學數(shù)據(jù)，將免疫組化分析的技術(shù)水平提升到一個新的高度。

54 用石蠟包埋法制作小鼠眼球切片的技術(shù)探討李莉 柳潔 饒利兵 湖南醫(yī)藥學院 懷化 418000 取正常成年小鼠20只，斷頸處死，迅速取其眼球，清理眼球周邊組織并保留約5mm的一段視神經(jīng)，保持眼球正常形態(tài)；沿角膜鞏膜緣及眼球壁相對稱的兩側(cè)分點徐徐注入少量Susa固定液封閉式固定2h，再在眼球壁相對稱的兩側(cè)開孔，使固定液緩緩進入眼球，充分固定24h。從固定液中取出小鼠眼球，嚴格控制脫水、透明和浸蠟時間。脫水依次在40%乙醇→100%乙醇中梯度進行，再經(jīng)香柏油及二甲苯透明，透明后的的組織在二甲苯和石蠟1:1混合液(石蠟熔點52℃～54℃ ）中浸30min→蠟I（石蠟熔點54℃～56℃）浸1h→蠟Ⅱ（石蠟熔點56℃～58℃）浸2h，繼而用硬蠟（石蠟熔點60～62℃ ）包埋 （包埋時置眼球標本水平位）。浸蠟烤箱溫度控制58℃。組織蠟塊經(jīng)修塊、整理后沿視神經(jīng)上下方向放置在輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機上，連續(xù)勻速切出 4μm 厚的組織蠟片；將蠟片投入到4 8℃的溫水浴中，自然展平，撈取，探針使蠟片貼附在載玻片合適位置后，置40～50 ℃烤箱內(nèi)2～3h 。取出組織進行脫蠟、溶蠟、去汞、脫碘和 H E 染色等步驟；染色步驟:蘇木精浸染 15m in →自來水水洗去浮色 → 1%鹽酸乙醇分色 → 自來水水洗藍化30m in → 浸染伊紅乙醇 3min → 70%乙醇2min(分色) → 80%乙醇2m in(分色) → 95%乙醇 2m in(分色兼脫水) → 95%乙醇 2m in(分色兼脫水) → 100%乙醇2m in脫水) → 100%乙醇2m i n(脫水)→ 二甲苯I 30min（透明）→ 二甲苯Ⅱ 1h透明，中性樹膠封片。通過以上方法，制作的切片厚薄均勻，沒有脫片現(xiàn)象。顯微鏡下觀察小鼠眼球大體結(jié)構(gòu)收縮和變形不明顯，眼球壁層次清晰;視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整，各層細胞排列緊密形態(tài)正常；染色良好，細胞核清晰，顏色對比明顯。采用石蠟包埋制作小鼠眼球的方法取材來源容易，操作方法簡單、省時、試劑常用，所制切片完整，結(jié)構(gòu)清楚，細胞形態(tài)正常，是制作眼球教學切片的好方法，值得推廣。

55 骨骼肌偶氮熒光桃紅法染色的探討陳大堤 中山大學中山醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學實驗教學中心形態(tài)學實驗室 廣州510080骨骼肌偶氮熒光桃紅染色是組織學重要的染色方法之一，也是組織學實驗教學的重要切片，在病理學上有重要的診斷意義。由于固定液用10%甲醛液染色效果稍差，我們用Bouin氏液固定，并在染色前先把黃色固定液洗凈，效果較好。具體染色操作如下：取人或動物骨骼肌，10%甲醛溶液（甲醛10m l+蒸溜水90m l）或Bouin氏溶液（苦味酸飽和溶液75 m l+甲醛25m l+冰醋酸5m l）24h。60%酒精12h、70%酒精30h、80%酒精30min、90%酒精30min、95%酒精30h、100%酒精30h、100%酒精30h脫水。二甲苯I 30m in、二甲苯II 30m in透明。石蠟I 30m in、石蠟II 30m in包埋。切片機連續(xù)切片5μm裱平后45℃烤片，恒溫箱48℃ 12h。染色：常規(guī)脫蠟至水，Mayer氏蘇木素溶液10min，自來水沖10min，蒸溜水1min，5%鞣酸溶液10m in，自來水沖1m in，蒸溜水1m in，1%磷鉬酸溶液10m in，自來水沖1m in，蒸溜水1m in，0.5%偶氮熒光桃紅溶液10min，甲醇9份：1份冰醋酸分色3～5s，無水酒精I脫水 5min，無水酒精II脫水 5min，無水酒精III脫水 5m in，二甲苯I透明5m in，二甲苯II透明5m in，中性樹膠封片。鏡下觀察：骨骼肌纖維呈粉紅色，肌纖維之間的疏松結(jié)締組織呈黃色。染色成功的關(guān)鍵在于取材組織要正常、新鮮；所用藥品亦需新鮮配置；染色分化要適當。當機體發(fā)生某種疾病時，肌纖維可能會發(fā)生變性、壞死、肥大、萎縮等，因此，此種染色方法亦可便于病理學中肌纖維各種病變的鑒別診斷。

56 介紹一種改良的Masson染色法張賽霞 張瑞琳 周映云 廣州中醫(yī)藥大學實驗教學中心 廣州 510006膠原纖維由成纖維細胞產(chǎn)生，是結(jié)締組織中的主要纖維成分，其主要化學成分為纖維蛋白，易被酸性染料染色。常用的有Van Gieson、Mallory染色法以及由Mallory改良而成的多種Masson染色法。我們對各種染色方法的反復對比，發(fā)現(xiàn)以下方法效果較滿意。取大鼠皮膚， 4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，切片厚度2μm，行改良Masson法染色。切片脫蠟至蒸餾水，Bouin氏固定液媒染30m in，流水沖洗至黃色退去（約10m in），蒸餾水洗1次，Weigert鐵蘇木素染液染細胞核20m in，流水沖洗5～10min，蒸餾水洗1次，擦干組織周圍水分，滴染麗春紅-酸性品紅-橘黃G染液2～5min，洗去染液，0.2%冰醋酸略洗，甩干，1%磷鉬酸媒染2m in，阿爾新藍染液染色2m in，0.2%冰醋酸分色2次，每次1m in，直接用95%、100%酒精脫水，二甲苯透明，封片，鏡檢?？梢娔z原纖維藍色，肌肉紅色，紅細胞桔黃色，胞核藍黑色。本改良法的關(guān)鍵為：切片要薄，以2μm為佳；用Weigert蘇木素染細胞核著色牢固，在后續(xù)染色中不易退去；低濃度醋酸分色有利于操作；染色時間要短。該法的優(yōu)點是：既保持Masson原染色方法的特點，又增強了染液對肌纖維等的親和力，經(jīng)磷鉬酸分化后肌纖維仍能保持鮮艷的顏色，膠原纖維藍色鮮艷；染色完成后切片背景清晰、干凈，著色鮮艷；染色后切片可長時間存放不退色；操作簡單、易控制，且方法穩(wěn)定；采用滴染法節(jié)省染液。

57 視網(wǎng)膜組織不同處理方法對激光顯微切割提取單細胞RNA質(zhì)量的影響潘東艷 夏懋 常欣 王越 第二軍醫(yī)大學 上海200433 激光捕獲顯微切割是一種可以從多種細胞組織中分離、純化出單個細胞甚至細胞亞結(jié)構(gòu)的較新技術(shù)，基本不損傷細胞內(nèi)蛋白質(zhì)、DNA、RNA，可與其他分子生物技術(shù)相結(jié)合進行基因轉(zhuǎn)錄組或其他組學研究。樣本組織的處理對提高切割效率和獲得可靠的RNA結(jié)果至關(guān)重要。本實驗方法比較了解視網(wǎng)膜組織不同處理后，對激光顯微切割獲得的節(jié)細胞RNA質(zhì)量的影響。取正常W ISTAR大鼠眼球，分離眼后節(jié)，分別采用30%蔗糖脫水或不脫水方法，行冰凍切片HE染色，使用ZEISS PALM M icroBeam激光顯微切割儀，獲取同樣數(shù)量視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞，置于裂解液中，進行逆轉(zhuǎn)錄擴增，產(chǎn)物cDNA純化后，取1μl檢測RNA質(zhì)量。每種方法重復4次結(jié)果。判定結(jié)果分A～C三級：A，樣品合格，符合建庫要求；B，部分指標符合建庫要求，可嘗試進行建庫； C，樣品不合格，建議重新送樣。結(jié)果表明脫水和未脫水的視網(wǎng)膜冰凍切片，經(jīng)HE染色后，均可見各視網(wǎng)膜層次，節(jié)細胞層分界清楚，節(jié)細胞胞體清晰可見。脫水處理的標本，RNA質(zhì)量合格率75%（3個A，1個C），平均濃度1.34±0.59ng/μl，未脫水處理的標本RNA質(zhì)量合格率100%（3個A，1個B），平均濃度4.01±1.39 ng/μl。使用激光顯微切割提取節(jié)細胞RNA時，可采用不脫水的方法，減少因時間和中間環(huán)節(jié)對RNA的影響，提高RNA提取的質(zhì)量。

58 利用分選流式細胞儀分離大鼠施萬細胞的實驗方法沈宓1,2陳罡 顧蕓 于彬 丁斐1南通大學教育部江蘇省神經(jīng)再生重點實驗室神經(jīng)再生協(xié)同創(chuàng)新中心，2南通大學醫(yī)學院組織學與胚胎學系 南通 226001 本研究提出了一種新的快速的從大鼠神經(jīng)中分離獲得高純度施萬細胞的方法。取新生1-3d的大鼠坐骨神經(jīng)，消化得到坐骨神經(jīng)細胞混合物，使用施萬細胞膜表面特異表達的神經(jīng)生長因子低親和力受體（p75）和少突膠質(zhì)細胞標志物4（O4）的抗體直接標記神經(jīng)細胞混合物中的施萬細胞，利用分選型流式細胞儀（FACS）分選標記后p75陽性和O4陽性的細胞，獲得可直接培養(yǎng)和增殖的施萬細胞，并進行了細胞純度和表型鑒定。分選純化后的施萬細胞種植在多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿上，在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基、1%青霉素/鏈霉素、2μM forskolin和10ng/m l HRG的培養(yǎng)液中培養(yǎng)和傳代。通過流式細胞儀檢測施萬細胞細胞特異性標志物S100β，發(fā)現(xiàn)分選后施萬細胞純度達到98%以上。免疫細胞化學標記分選純化的施萬細胞標志物S100β和GFAP的表達，結(jié)果顯示分選后施萬細胞純度高。RT-qPCR結(jié)果顯示分選出的施萬細胞表達Sox10（SOX轉(zhuǎn)錄因子10）、P0（髓鞘蛋白）、Krox-20（早期生長應答基因2）、Pmp22（外周髓鞘蛋白22）、Necl-4（粘連蛋白樣蛋白4）、Tubb3（β-微管蛋白III型）mRNA。免疫細胞化學染色顯示分選后的施萬細胞也表達Tubb3，并和S100β共定位在細胞質(zhì)中。這種基于流式細胞分選技術(shù)來分離和純化施萬細胞的方法為今后施萬細胞的生物學提供了新的策略。

59 漂片型厚組織切片免疫熒光染色與成像技術(shù)的優(yōu)化杜彬 丁有權(quán) 肖霞 齊建國 四川大學華西基礎(chǔ)醫(yī)學與法醫(yī)學院組織胚胎學與神經(jīng)生物學教研室 成都 610041 漂片型厚組織切片(50～60μm)的免疫熒光染色與成像，操作相對簡單，適用于無偏差體視學或3D重建與定量分析，被廣泛用于3D原位定量生物學。然而，目前的厚組織切片免疫熒光染色與成像標準流程的質(zhì)量、效率和規(guī)范化差強人意。本研究旨在優(yōu)化當前的標準流程。首先，我們以PGP 9.5免疫熒光標記的成年大鼠足底厚皮膚切片(40μm)為例評估厚組織切片寬場熒光顯微成像的合理性。我們發(fā)現(xiàn)：染色前純DMSO孵育(15min)和染色后梯度甘油浸潤的光學透明的聯(lián)合處理，明顯降低彌漫性背景信號，顯著增加神經(jīng)纖維和朗格漢斯細胞的特異性標記，大大提高成像深度（甚至為切片厚度全層）。這種光學透明輔助的寬場熒光顯微成像和3D盲法消卷積處理可達到與共聚焦成像相當?shù)?、高質(zhì)量厚皮膚切片3D顯示。該成像流程適用于不同組織和抗原特征的免疫熒光染色厚組織切片(50μm)，可簡化厚組織切片3D成像。接著，我們發(fā)現(xiàn)：染色前有效組織松解后，與4℃和21℃孵育相比， 37℃抗體孵育能顯著增強厚組織切片(50μm)免疫熒光染色的質(zhì)量（染色靈敏性、特異性和均勻性）和效率（抗體濃度和孵育時間）；此溫度效應不依賴組織、抗原和抗體特征。最后，我們發(fā)現(xiàn)：染色前檸檬酸鈉熱抗原修復和染色后硫酸銅處理能特異地消除厚組織切片(以50μm成年大鼠脊髓切片為例)的自發(fā)熒光。這些優(yōu)化措施使3D原位定量生物學更為簡便可行。

60 從系統(tǒng)整合教學商榷組織學與胚胎學教材內(nèi)容蘇中靜 陳海濱 汕頭大學醫(yī)學院 組織學與胚胎學教研室 汕頭515041 自2002年開始，汕頭大學醫(yī)學院采用系統(tǒng)模塊整合教學，人體組織學與胚胎學課程整合至各個人體功能系統(tǒng)模塊，從而與其他學科如解剖、生理、病理和臨床存在較多的交叉整合，在教學過程中我們發(fā)現(xiàn)人體組織學與胚胎學與其他學科教材之間存在的一些分歧，提出來與各位專業(yè)同行交流商榷。①肌球蛋白ATP分解的時間：關(guān)于肌肉的收縮過程，組織學教材認為粗肌絲的頭部與細肌絲肌動蛋白接觸時，肌球蛋白ATP酶被激活釋放能量，粗肌絲拉動細肌絲向肌節(jié)中間滑動。生理學認為肌球蛋白在結(jié)合細肌絲肌動蛋白之前，肌球蛋白的橫橋ATP酶就可以將結(jié)合的ATP分解，使橫橋豎起保持高勢能狀態(tài)。在肌節(jié)滑動的這50毫秒的極其短時間內(nèi)，到底是ATP酶先被激活分解出ADP，然后橫橋結(jié)合細肌絲？還是粗肌絲的頭部先結(jié)合細肌絲，然后分解ATP？②腎臟皮質(zhì)與髓質(zhì)的顏色：人體組織學描述腎皮質(zhì)紅褐色，髓質(zhì)色淡，但插圖和解剖新鮮及福爾馬林固定標本均顯示髓質(zhì)顏色深而皮質(zhì)色淡，但組織學教材卻沒有表明描述與圖片顏色不一致的原因。③前腎小管的開口方向：腎臟發(fā)生分為前腎、中腎和后腎三個時期和階段，胚胎學教材描述前腎小管內(nèi)側(cè)開口于胚內(nèi)體腔，外側(cè)端向尾部延伸連成縱行的前腎管。但教材配圖卻并非如此：八年制及七年制以及英文胚胎學配圖都是前腎小管內(nèi)側(cè)端向尾部延伸連成縱行而形成前腎管。④甲狀腺上皮與被覆上皮：甲狀腺濾泡上皮是以分泌功能為主的腺上皮，但包括英文版Basic Histology在文字描述被覆上皮（單層立方上皮）的分布中卻列舉了甲狀腺。我們希望通過交流和探討，解決老師教學和學生學習中的困惑，促進人體組織學與胚胎學教學的內(nèi)容改進。

61 “以能力為本”的組織學與胚胎學教學研究秦麗娜 中山醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 廣州 510080 醫(yī)學教育是我國高等教育體系的重要組成部分，而基礎(chǔ)醫(yī)學教育又是醫(yī)學教育的重要組成部分。面對全球化、網(wǎng)絡(luò)化、高新技術(shù)和知識化的新經(jīng)濟時代，醫(yī)療工作環(huán)境將發(fā)生巨大變化，而且這種變化將會給醫(yī)學高等院校的基礎(chǔ)醫(yī)學教育帶來前所未有的影響。組織學與胚胎學是研究人體的微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能和個體的發(fā)生發(fā)育規(guī)律的一門微觀形態(tài)學科，是醫(yī)學院校一門重要的醫(yī)學基礎(chǔ)課程。內(nèi)容抽象。學生學起來極易感覺到枯燥乏味、晦澀難懂，尤其對于剛剛跨入醫(yī)學院的學生來說，有一定難度。本文從近三年組織學與胚胎學教學實踐狀況入手，總結(jié)出目前組織學與胚胎學教學中主要存在著三方面的問題：一是教學管理上的問題，在教學管理上，存在著教學目標不明確；對不同專業(yè)、層次的課程設(shè)置缺乏針對性，課程設(shè)計脫離臨床實際。二是教學方法脫離實際的問題，在教師教學上，存在著教學方法和教學手段單一；偏重理論性教學，實踐技能的培養(yǎng)訓練不足。三是學生自主學習不強的問題，學生在學習上，存在著學習缺乏自主性、靈活性和拓展性等方面的問題。針對組織學與胚胎學教學中現(xiàn)今存在的問題，借鑒國外高校教學的成功經(jīng)驗，特別是澳大利亞、德國和美國等發(fā)達國家醫(yī)學教育的教學理念，吸取國內(nèi)醫(yī)學教育專家學者的研究成果以及自己在教學實踐中總結(jié)出的經(jīng)驗，提出了構(gòu)建“以能力為本位”的組織胚胎學教學模式，闡述了如何準確定位組織學與胚胎學教學的培養(yǎng)目標，如何設(shè)置適合不同專業(yè)，不同層次學生和使用醫(yī)學發(fā)展需求的教學課程模塊，教師教學中可以采取多種靈活多樣的教學方法以及如何打造高素質(zhì)的教師隊伍。要將“以能力為本位”的組織學與胚胎學教學模式真正落到實處，必須在課堂教學中貫徹“以學生活動為中心”的教學法，并示例了“以學生為中心”的教學思路，同時以《組織學》課程為實例，分析了“以學生為中心”的教學法的具體運用。

62 顯微形態(tài)學實驗技術(shù)綜合探索性教學的經(jīng)驗探討鄭翔 潘倩 周雪 四川大學華西基礎(chǔ)醫(yī)學與法醫(yī)學院 成都 610041顯微形態(tài)學實驗技術(shù)是現(xiàn)代生物醫(yī)學的基礎(chǔ)性技術(shù)。由于技術(shù)環(huán)節(jié)較多，耗時較長，需要具備一定操作經(jīng)驗才能獲得優(yōu)良的圖像，因此在本科階段常規(guī)開展教學活動，不僅課程安排存在困難，教學效果往往也不理想。顯微技術(shù)培訓的滯后，使該技術(shù)逐漸由科研院所向公司轉(zhuǎn)移，呈現(xiàn)技術(shù)壟斷、外包服務依賴性和整體技術(shù)水平的下降。我校自2004年在基礎(chǔ)醫(yī)學專業(yè)本科開設(shè)顯微制片、細胞培養(yǎng)和組織化學分析的教學項目以來，長期停留在體驗式、驗證性操作的初級階段。為了培養(yǎng)學生掌握完整的顯微形態(tài)學技術(shù)，并能夠在研究中靈活應用，從2011年起，依托具體科研問題，逐步開展了綜合性、探索性實驗訓練的改革實踐。首先，將培訓課程分成關(guān)鍵技術(shù)操作、全程實驗和探索性實驗3階段，分散在3個學期，逐步提高訓練水平，并按教學需求改裝了實驗室。同時，建設(shè)網(wǎng)絡(luò)課程資源，擴展學生課外學習和復習的空間。經(jīng)過教學實踐，進一步采用視頻示教、講播結(jié)合等方式，提高操作示范的效率。在此基礎(chǔ)上，改進并完善了實驗技能考核的規(guī)范程序，嚴把出口關(guān)。改革后，在學時并未增加的情況下，顯微形態(tài)學實驗技術(shù)培訓內(nèi)容由3項共4個操作，增加到4項共10個操作，學生人均課堂實際動手操作的時間由原來的12m in/學時上升到32m in/學時。經(jīng)過3階段培訓后，學生能夠獨立進行顯微形態(tài)學主要實驗操作的準備和實施，并熟悉各項技術(shù)的適用條件和結(jié)果分析的方法，為進一步自學其他技術(shù)操作奠定堅實基礎(chǔ)。已有多名學生在培訓期間不僅熟練掌握操作技巧，還做出了能寫入操作規(guī)程的改進。實踐證明，綜合探索性教學模式是提高顯微形態(tài)學實驗技術(shù)培訓水平的一個可行的辦法，在實驗研究相關(guān)專業(yè)的能力培訓活動中值得借鑒推廣。

63 動物組織學與胚胎學立體化教材建設(shè)與應用彭克美 劉華珍 宋卉 華中農(nóng)業(yè)大學 武漢 430070 “動物組織學與胚胎學”是畜牧學、獸醫(yī)學、動物學、動物檢疫、野生動物資源保護等專業(yè)的重要專業(yè)基礎(chǔ)課。它是以顯微鏡觀察組織切片為基本方法，研究動物機體的微細結(jié)構(gòu)及相關(guān)功能的科學，具有很強的直觀性和實踐性。教材是教學的重要組成部分。隨著生命科學的飛速發(fā)展和高等教育教學改革的繼續(xù)深入，動物組織胚胎學教材也在不斷地改進。為了應對全國執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師資格考試的穩(wěn)步推行并與國際畜牧獸醫(yī)教育接軌，創(chuàng)建立體化教材具有重要意義。我們制定了教材建設(shè)新目標，加大了投入，力求出精品，使精品課程教材向多層次立體化教材體系發(fā)展，通過精品課程帶動立體化精品教材建設(shè)。在教育部和高等教育出版社的規(guī)劃教材項目支持下，由彭克美牽頭，在華中農(nóng)業(yè)大學“動物解剖學和組織胚胎學”榮獲首批國家精品課程、國家精品資源共享課程和國家精品教材獎的成果基礎(chǔ)上，組織全國48位專家、教授編寫了我國第一套全彩色版《動物組織學與胚胎學》理論教材和《動物組織學與胚胎學實驗》國家規(guī)劃教材。這套彩色教材博采眾長，集成了作者30多年的教學和科研成果的600多幅彩色顯微照片，其內(nèi)容循序漸進、深入淺出、通俗易懂，彩色圖像結(jié)構(gòu)典型、高度清晰、色彩亮麗。新版教材都建有數(shù)字課程網(wǎng)站，并納入國家iCourse網(wǎng)站，每章配有二維碼和視頻、課件、習題、答案、圖片庫等電子資源，極大地豐富了教材內(nèi)容，實現(xiàn)了真正的立體化教材和網(wǎng)絡(luò)教學，徹底解決了長期以來手繪黑白插圖脫離動物組織實際形態(tài)結(jié)構(gòu)的尷尬局面，填補了我國該領(lǐng)域的空白；極大地方便了讀者的學習。新教材對于加深學生對基本理論的認識和理解，加強學生實踐操作技能訓練，培養(yǎng)學生的科學精神、科學態(tài)度、科學作風以及分析問題、解決問題的能力，促進高素質(zhì)創(chuàng)新人才的培養(yǎng)具有重要作用。已被吉林大學、揚州大學、中國農(nóng)業(yè)大學、南京農(nóng)業(yè)大學、華中農(nóng)業(yè)大學等50多所院校廣泛采用，深受普遍好評并榮獲國家精品教材獎。通過編寫教材，促進了教師們的業(yè)務素質(zhì)，提高了教學質(zhì)量，帶動了全國一批青年學者，擴大了本教材在國內(nèi)外的影響。

64 以TBL為主的“組織學與胚胎學”多元實驗教學新模式的探索鄭慧媛 王蘭 崔媛媛 趙璇 王曉龍 西安醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學部組織學與胚胎學教研室 西安 710021 按照醫(yī)學人才培養(yǎng)目標的要求，結(jié)合“組織學與胚胎學”課程的特點，我們在堅持以往傳統(tǒng)實驗教學成功經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，采用多種教學手段，深化教學改革。嘗試構(gòu)建以TBL（基于團隊的學習方法）為主，與傳統(tǒng)講授式教學（LBL）和互助式教學相結(jié)合的多元化實驗教學新模式，同時利用基于微信的新型教學平臺--對分易教學平臺作為輔助教學手段引入到教學中，取得了好的教學效果。通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同學們非常認可這種多元化的教學模式，較之傳統(tǒng)的填鴨式、灌輸式的教學方式更能激發(fā)學習興趣，培養(yǎng)主動學習能力，由以往的“要我學”轉(zhuǎn)變?yōu)椤拔乙獙W”,活躍了課堂氣氛；同時鍛煉了自身的膽識、口才和團結(jié)協(xié)作的意識及溝通交流的能力，增強了團隊凝聚力和競爭意識，受益匪淺。尤其是對分易教學平臺，將教學中許多細致而繁瑣的工作簡便化，讓教學變得輕松、愉快、高效。該平臺為師生提供考勤統(tǒng)計、分組、在線練習、作業(yè)、討論、成績冊、課程資源等教學功能服務，支持電腦和手機同步使用，在時間和空間上擴展了教學的范圍，有利于學生課外學習、自主學習，可進一步加深學生對正常人體鏡下結(jié)構(gòu)特點的認識與理解，為今后學習疾病的病理變化打下堅實的基礎(chǔ)，從而達到提高教學效率和質(zhì)量的目的。TBL+LBL+互助式教學的多元實驗教學新模式，將課堂的焦點由傳統(tǒng)的“以教師為主體、以講課為中心”轉(zhuǎn)變?yōu)椤耙詫W生為主體、以團隊和小組為中心”，實現(xiàn)了思考性、討論式學習和互學互教的拓展性學習。同時還可以向“后進生”提供幫助與支持，使其在獲得知識的同時也贏得了自信。教師在進行新模式的教學過程中自身的業(yè)務能力也在不斷的提升，從而為更好的達到課程教學目標和人才培養(yǎng)目標奠定基礎(chǔ)。

65 運用藍墨云班課對組織學與胚胎學進行考試改革的探索與思考許曉源 江和 陳雄林 周師潔 九江學院基礎(chǔ)醫(yī)學院組織胚胎學教研室 九江 332000 醫(yī)學類專科學生的組織學與胚胎學學時少，教學內(nèi)容多，為了提高教學質(zhì)量，減輕學生負擔，我們借助移動教學助手APP——藍墨云班課平臺，在教學和考試改革方面做了有益的嘗試。在2016級口腔醫(yī)學專科和醫(yī)學檢驗技術(shù)?？苾蓚€班級開展課程考試改革，增加平時測驗，加強實驗教學，提高平時成績和實驗成績的總評權(quán)重，期末考試采取開卷，綜合考察學生對于知識的融會貫通及自主學習能力。利用藍墨云班課作為輔助教學手段引入教學中，有效避免開卷考試對學生學習積極性的影響。通過手機云班課，可以實現(xiàn)課堂簽到，嚴格考勤管理；提前上傳教學課件讓學生預習和課后復習；發(fā)送各章節(jié)復習題給學生自測；學習完每兩個章節(jié)在線進行一次選擇題小測驗，自動評分和分析；同時在云班課長期開放答疑討論窗口，學生隨時隨地在手機上可以提問、討論，加強了師生之間的互動和交流；云班課還可以輕松獲得學生對教學情況的反饋，通過進行第一周教學反饋、藍墨云班課使用反饋、期末教學問卷調(diào)查和反饋、考試改革反饋，隨時掌握學生對教學過程的意見和感受，從而及時對教學過程予以調(diào)整。問卷調(diào)查顯示，98%的學生很喜歡或比較喜歡這種教學方式，91%的學生認為開卷考試沒有影響學習興趣，100%的學生認為加強平時測驗促進了平時的學習?；谒{墨云班課的組織學與胚胎學教學與考試改革順應了信息化時代背景下的基礎(chǔ)醫(yī)學教育模式探索，獲得了良好的教學效果。

66 論微課程在組織學與胚胎學教學中的應用林庚 翟效月 鄭瑋 中國醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 沈陽110122 組織學與胚胎學是重要的醫(yī)學基礎(chǔ)課程之一。傳統(tǒng)的組織學與胚胎學教學是以理論課和實習課相結(jié)合的形式進行，近年來，隨著網(wǎng)絡(luò)信息與數(shù)字課程的發(fā)展，理論課的學習有了多種多樣的形式，網(wǎng)絡(luò)課程、視頻課程等。微課是以闡述某一知識點為目標，以短小精悍的視頻形式進行授課。這種靈活的授課方式使學習更加個性化和多元化，滿足同學們的個性要求，同時也更加直觀的展示了形態(tài)課程理論教學和實習教學的特點。這種輔助的教學模式無論從理論課教學還是實習課教學都有很好的效果。微課在理論課教學中的應用：1.教學時間靈活，同學們可以利用零散的短時間進行學習，比起傳統(tǒng)的授課形式，授課時間在十分鐘以內(nèi)，短時間內(nèi)交待一個完整的知識點，使學生更加容易集中精力將內(nèi)容消化學會，只需要利用視頻載體方便靈活。2.教學內(nèi)容精練，從知識點的角度進行講授，將理論教學中的知識點進行精選和提練，更方便同學們記憶。3.教學資源靈活，視頻容量小，只需要一部手機就可以在線進行學習。微課在實習教學中的應用：①使實驗教學更加生動，形象直觀的把切片制備等實驗教學過程呈現(xiàn)在同學面前，例如，組織學常用的實驗技術(shù)石蠟切片和HE染色方法，通過微課視頻讓同學們了解整個過程和制備方法。②幫助同學們更好了解對不同染色方式對結(jié)構(gòu)特點的側(cè)重，更方便同學們的觀察。③對理論教學有直觀的補充作用，促進理論教學的理解。微課教學需要教師精練講授內(nèi)容，重點突出，將一章節(jié)的內(nèi)容分成若干知識點，將重點內(nèi)容以一節(jié)微課的形式進行講授。在理論微課的設(shè)計過程中，要將現(xiàn)實生活中的一些病例和醫(yī)療手段做為情景，引出所要講授的內(nèi)容，而實習課微課將實驗教學過程情景再現(xiàn)，這種方式大大激發(fā)的學生學習的興趣和熱情，提高教學的效率和效果。

67 數(shù)字人體胚胎學建設(shè)的體會劉向前 王小麗 李和 華中科技大學同濟醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 武漢 430030 人體胚胎學是研究個體發(fā)生過程及其規(guī)律的科學，其中受精卵在發(fā)育成胎兒的過程中外形和體內(nèi)各器官如何發(fā)生時空演變一直都是教師教學和學生學習的難點。目前，各醫(yī)學院校通過模式圖、胚胎模型和實物標本、以及平面動畫等資源來進行人體胚胎學的教學，能夠比較好地完成教師對各知識點的講解，但學生仍然反映理解上存在諸多困難，特別是演變中的局部結(jié)構(gòu)與胚胎整體外形的空間位置關(guān)系，為此我們與山東數(shù)字人科技股份有限公司一起進行了數(shù)字胚胎學的建設(shè)工作。經(jīng)過近一年的實踐，我們探索出了一套比較成熟的建設(shè)經(jīng)驗。第一，教師需要具備非常好的解剖學知識，或者直接讓解剖學教師加入建設(shè)團隊；第二，教師要有深厚的胚胎學功底，要有充足的時間去搜索、獲取和理解國外相關(guān)資源，要形成教師專家團隊，隨時能討論和解決遇到的問題，特別是不同參考書存在爭議時的解決方案；第三，教師團隊與電腦端開發(fā)人員密切配合，將胚胎學各知識點，包括每個微小細節(jié)傳授給開發(fā)人員，撰寫好開發(fā)腳本，并隨時指導、解答開發(fā)人員的疑問。除了教師方，開發(fā)人員的組成也至關(guān)重要，開發(fā)人員需要具備3D模型和動畫制作、美工、網(wǎng)站運行方式等多種技能，并能相互密切配合。此外，為了將數(shù)字胚胎與實物相對應，需要收集不同時期的胚胎標本和實現(xiàn)標本的數(shù)字化。

68 “組織學與胚胎學”課程開放共享的探索與實踐羅彬 謝小薰 馬步國 莫發(fā)榮 農(nóng)蔚霞 張慶梅 葛盈盈 陳維平 羅國容 何少健 廣西醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室 南寧 530021 2011年，我?！敖M織學與胚胎學”在“國家級雙語示范課程”和“國家級精品課程”基礎(chǔ)上，為了從廣度、深度、精度和共享度提升課程，促進課程的國際化，對課程進行了一系列的改革，于 2016年，經(jīng)教育部審核，本課程成為第一批“國家級精品資源共享課”和第二批“來華留學英語授課品牌課程”。課程的主要特色有：第一，因材施教，設(shè)計以學習者為本的個性化學習模塊。針對不同的學習者，我們精心設(shè)計了三個學習模塊：①“按章逐節(jié)”模塊，該模塊遵循傳統(tǒng)的教科書內(nèi)容，便于學習者尤其是初學者循序漸進地學習，系統(tǒng)地掌握學科知識；②“系統(tǒng)整合”模塊，該模塊破除傳統(tǒng)章節(jié)界限，優(yōu)化整合為大單元，便于引導學習者對知識點的縱向把握和橫向比較；③“知識點檢索”模塊，將課程的核心內(nèi)容、重點和難點進行分解，形成短小精悍的“微課”，便于學習者的回顧性學習和碎片化學習。第二，廣開門路，完善課程特色鮮明的立體化教學資源。個性化學習模塊的實施需配套的教學資源支持，為此我們集思廣益、雙管齊下。一方面，我們完善針對不同學習模塊的教學視頻和與之相配套的“導、學、練、測”基本資源；另一方面，我們建設(shè)了課程特色鮮明、利于開放共享的拓展資源：如全英課程網(wǎng)站、中英文雙版的組織切片庫、自主學習動畫庫、學術(shù)前沿講座和學生個性化作品展示等，以支持課程教學和方便自主學習。第三，整合優(yōu)勢，構(gòu)建共享精品教學資源的開放網(wǎng)絡(luò)平臺。為實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)教學資源的開放共享，我們整合專業(yè)教師和教育技術(shù)人員，深入探索將信息技術(shù)融合課程資源的建設(shè)中，構(gòu)建了基于“互聯(lián)網(wǎng)+”的教學互動平臺，為學習者提供便捷的數(shù)字化環(huán)境，使“線上線下”混合式學習，“隨時隨地”互動交流成為可能，滿足了個性化學習之需求。第四，完善評價體系，引導自主學習和終身學習。在保持原有定時定點的紙質(zhì)考試基礎(chǔ)上，我們增加了網(wǎng)絡(luò)考試測驗、實時互動評價、數(shù)字化切片考核和電子化實驗報告等線上考評形式，完善終結(jié)性和形成性、線上和線下結(jié)合的評價體系，使學習者可以隨時隨地隨意的進行學習評價，以評促學，更好地引導學生自主學習和終身學習。

69 組織學數(shù)字切片解讀視頻的制作體會及應用探討耿世佳 崔珈銜 任明姬 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 呼和浩特 010110 組織學是研究正常機體微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的形態(tài)學科，是醫(yī)學生最早接觸到的基礎(chǔ)醫(yī)學課程之一，學生普遍反映難以理解和記憶，更無法與后續(xù)相關(guān)課程相聯(lián)系?；谏鲜鎏攸c，組織學與胚胎學教研室建設(shè)了組織學數(shù)字切片庫及數(shù)字切片瀏覽系統(tǒng)。為了進一步完善這一網(wǎng)絡(luò)平臺的功能，使學生們的學習變得更直觀、有效，本教研室結(jié)合微課的制作方法，錄制了組織學數(shù)字切片解讀視頻。使用與數(shù)字切片瀏覽系統(tǒng)相同的圖像瀏覽軟件進行觀察，按照讀片順序，從肉眼可見組織塊形態(tài)，進一步轉(zhuǎn)換低倍鏡觀察器官結(jié)構(gòu)，再到更大放大倍數(shù)觀察組織結(jié)構(gòu)，最后在高倍鏡下觀察特征性細胞，依次進行講解錄制。分章節(jié)上傳，按照課程中心平臺MOOC教學計劃，讓學生觀看數(shù)字切片解讀視頻，針對每個視頻提出問題，讓學生預習；同時提供配套的數(shù)字切片供學生在觀看解讀視頻后，自行練習看片步驟及尋找相關(guān)結(jié)構(gòu)，回答問題。在見面課上學生進行分組討論，實際操作顯微鏡完成讀片過程，并由代表發(fā)言，其他學生補充，教師給出問題的標準答案并做客觀評價，對學生回答的問題進行指導。這種教學方式將實驗課納入了MOOC化進程，讓學生先行自學而后虛擬實踐，再帶著問題實際操作進行討論，節(jié)省了更多的時間用于學生間及師生間的交流，可以充分調(diào)動學生學習的積極性，提高學生的思維能力和表達能力。將數(shù)字切片解讀視頻推廣至病理學等形態(tài)學科有利于其數(shù)字化資源的豐富性，實用性。其便捷性非常適合學科之間的資源整合，尤其適用于“系統(tǒng)教學法”模式，可進行對比教學，實現(xiàn)知識的無縫銜接。我們相信通過注重網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)與傳統(tǒng)教學方法的有效結(jié)合，能加強師生之間的交流，取得更好的教學效果。

70 淺談微課制作及學校課程中心平臺在組織學教學中的應用田云鵬 耿世佳 武玲 崔珈銜 任明姬 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院 呼和浩特 010110 隨著科技的進步和計算機技術(shù)的發(fā)展，給傳統(tǒng)教學帶來了挑戰(zhàn)，同時也是機遇。組織學是借助顯微鏡研究機體微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學，是重要的基礎(chǔ)醫(yī)學課程，該課程學習內(nèi)容抽象，枯燥，如何激發(fā)學生對本課的學習興趣和提高綜合能力，是從事組織學教學工作者要解決的問題。針對我校學生情況，借助我校課程中心平臺將組織學教學內(nèi)容選擇性進行了SPOC（Small Private Course），即“微課”教學模式探索。我們選取組織學中重點、難點，以PPT為藍本進行屏幕錄制，在制作中尚需注意以下幾點：① 每個章節(jié)知識點的選取，以教學大綱為準，選取重點、難點知識。②微課制作要設(shè)計合理、生動，稿本細致，言簡意賅，主題明確，重點突出，思路清晰時間把握準確。③ PPT制作清晰，精選圖片，每頁字數(shù)精、準、少，顏色搭配合理，適當添加動畫等動態(tài)元素，提高觀賞性。將微課與傳統(tǒng)教學科學結(jié)合，提高學生學習效率，為教改提供新思路。

71 組織學與胚胎學實驗教學中形成性考核辦法的實踐周爽 楊耀琴 真智偉 趙培林 陶惠紅 杜逸峰 同濟大學醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 上海 200092 終結(jié)性考核不能真實地反映學生整體學習情況，這種教學評價只看教學結(jié)果，忽略了教學過程，只看教學成果的顯現(xiàn)性而忽略教學成果的遲效性。基于此，我們嘗試建立一種能反映學生綜合學習能力的考核評價體系，除終結(jié)性考核外，在臨床醫(yī)學專業(yè)“組織胚胎學”實驗教學中實行形成性考核辦法。形成性考核是對學生學習過程的全方位考核，包括課堂提問、互動交流、小組討論、血涂片的制作和觀察、階段性測驗、實驗報告和實驗技能考核等基本形式，體現(xiàn)于組織學與胚胎學實驗教學過程的各個環(huán)節(jié)，更加注重學生平時的學習效果。我們在2014～2016學年度連續(xù)三年分別確立臨床醫(yī)學專業(yè)教學班為實驗組或?qū)φ战M，在實驗組班級實施形成性考核方案。利用同濟大學試卷分析系統(tǒng)，對連續(xù)三年實驗組班級和對照組班級組織學與胚胎學考試成績統(tǒng)計分析表明，實行形成性考核的實驗組班級學生成績明顯優(yōu)于對照組班級，特別是優(yōu)秀率和良好率大幅度提升，平均值由原來的3.0提高到3.85（五分制）。通過形成性考核，學生由被動學習變?yōu)樽灾鲗W習，更注重平時的學習過程，提高了學習效果，減輕了考試壓力，夯實了基本知識；在教學過程中培養(yǎng)了學生的語言表達能力、創(chuàng)新意識、團隊合作精神、實踐操作能力和知識的綜合運用能力，做到了對學生綜合素質(zhì)的培養(yǎng)，使考試效果最佳化。教師可以及時獲得教學信息反饋，針對學生學習中的問題不斷進行改進，調(diào)整教學策略，檢查教學效果。教學過程中的形成性評價，可使教學效果得到及時的強化和矯正，體現(xiàn)“以學生為中心，以能力為導向”的宗旨。

72 改良的基于課題需求的TBL教學模式促進研究生科研能力的提高田衍平 李成仁 王嘉麗 蔡其燕 肖嵐 蹇銳 李紅麗 第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)醫(yī)學部組織學與胚胎學教研室發(fā)育生物學教研室 重慶 400038 “免疫組織化學”是培養(yǎng)醫(yī)學碩士研究生形態(tài)學技術(shù)的必修課程之一，其教學活動多采用傳統(tǒng)的講授式教學法 (lecture based learning, LBL)，通過理論講解并結(jié)合實驗的方式進行教學。此教學模式盡管對原理技術(shù)講解詳細但通常技術(shù)應用的針對性不強，導致研究生不能將所學技術(shù)靈活地應用于課題研究中?；谌蝿盏慕虒W法(task based learning, TBL)是一種將知識、技術(shù)和能力綜合培訓的教學方法，能有效提高學生的綜合運用能力；在國外是一種比較流行的教學方法，但在國內(nèi)應用不多。本研究通過改良的基于課題需求的TBL教學方法在我校醫(yī)學研究生免疫組織化學教學中的應用來評估該教學模式對學生科研能力培養(yǎng)的作用。在免疫組化課程的教學活動中，將我校228名一年級研究生平均分為兩組：TBL教學組和LBL組。TBL組教學分為五個階段：教師對課程知識點進行設(shè)計，學生對自己的課題任務進行分析；學生根據(jù)自己的研究課題需求進行分組并在教師指導下自主學習；學生實驗操作；不同小組間學生進行討論；教師對學科“三基”知識進行總結(jié)。LBL組采用傳統(tǒng)的LBL教學法。課程后我們對學習成績進行評估并對兩種教學模式的滿意度進行問卷調(diào)查。結(jié)果顯示在課程考試中TBL組平均得分率顯著高于LBL組；進一步分析顯示得分率差異主要集中在實訓考核中，而理論考核兩組間沒有實質(zhì)性差異。問卷調(diào)查結(jié)果表明：學生對TBL教學模式的滿意度比LBL組高。TBL提高學生學習興趣，有利于學生將所學組化技術(shù)靈活運用于科研課題研究中，并提高他們的科研設(shè)計能力、分析解決問題能力、合作創(chuàng)新和溝通能力。因此，我們認為改良的基于課題需求的TBL教學法不僅能傳授基礎(chǔ)知識而且更有效地在課題研究中熟練運用組化技術(shù)，提高科研能力，為研究生的課題研究和臨床工作打下良好基礎(chǔ)。

73 數(shù)字切片考試系統(tǒng)在組織學切片考試中的應用牛建欽 田衍平 劉運來 陳興書 李紅麗 肖嵐 李成仁 第三軍醫(yī)大學組胚教研室 重慶 400038 組織胚胎學是一門重要的醫(yī)學基礎(chǔ)課程,實驗教學在整個組織學教學中占有相當重要的地位，課時幾乎占總學時的一半。實驗教學測評是評價組織學知識掌握程度的重要環(huán)節(jié)，而傳統(tǒng)的測評方法存在諸多的弊端。隨著顯微數(shù)碼互動系統(tǒng)的廣泛應用，如何針對傳統(tǒng)的組織學切片考試的弊端進行改革，以適應現(xiàn)代醫(yī)學教育的要求，一直是組織胚胎學教學工作者努力的方向。我們在顯微數(shù)碼互動形態(tài)學實驗室基礎(chǔ)上，應用數(shù)字切片掃描與應用系統(tǒng)，將傳統(tǒng)的玻璃組織切片轉(zhuǎn)換為數(shù)字切片，并與虛擬顯微數(shù)碼互動系統(tǒng)相結(jié)合，構(gòu)建了一個組織學數(shù)字切片考試系統(tǒng)。經(jīng)過與傳統(tǒng)考試方法的運用比較，新的系統(tǒng)不僅能豐富考試模式和題型，更客觀全面地考核學生，也便于學生進行考前復習。而且這種考試模式既考察學生對知識的了解程度，也考察他們的動手能力和實踐技能，體現(xiàn)了實驗課的實踐性。此外，新的考試模式也為嚴肅考風考紀提供了堅實的保障。因此，該考試系統(tǒng)可能在醫(yī)學院校中有較好的推廣性。

74 沒有顯微鏡的組織學與胚胎學實驗教學—超高清顯微形態(tài)教學演示系統(tǒng)與全景數(shù)字切片的應用夏潮涌 暨南大學基礎(chǔ)醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室 廣州 510632 在IT、數(shù)字成像和信息通訊等現(xiàn)代高新技術(shù)不可阻擋的強力推動下，顯微形態(tài)實驗教學正在發(fā)生著前所未有的巨變。相對于超高清的演示系統(tǒng)和全景數(shù)字切片，現(xiàn)有基于顯微鏡的互動教學系統(tǒng)，沒有從根本上改變組織學與胚胎學傳統(tǒng)的實驗教學模式和增加學生接受到的信息量，其顯示的圖像和視頻的清晰程度、色彩的還原度被遠遠的甩出幾個層級，其視頻、動畫和鏡下圖像實時演示的同步性、流暢性亦永遠無法企及。為此，我們采用市面上通用的4K大屏幕電視機、HDM I分屏器和線纜，在原有互動教學系統(tǒng)的監(jiān)控、課室管理，互動操作系統(tǒng)軟件的基礎(chǔ)上，組建成超高清顯微形態(tài)互動教學演示系統(tǒng)實驗課室，各專業(yè)的學生在電腦屏幕前，模仿顯微鏡鏡下視野，移動鼠標，可觀察600余張種類齊全、超高清晰度的組織學與胚胎學全景數(shù)字切片，完成全部實驗教學內(nèi)容、課堂討論和實驗考試，極大地改變了組織學與胚胎學傳統(tǒng)的實驗教學模式，學生能接受到的器官、組織和細胞微細結(jié)構(gòu)的信息量數(shù)倍于傳統(tǒng)的組織學與胚胎學實驗課，教學效率和效益極大提高，亦為開展學生主導的課堂討論或其它形式的教學贏得大量時間。全景數(shù)字切片正是現(xiàn)代高新技術(shù)的產(chǎn)物，已經(jīng)走進了我們的校園和實驗課室，走進了顯微形態(tài)教學。我們當今的形態(tài)學教師、技術(shù)人員、管理者對這一生命力極其旺盛的新生事物有多少了解，做好了接納它的思想準備和技術(shù)儲備了嗎？知道如何應用它的現(xiàn)有功能和開發(fā)它的應用潛能了嗎？我們的校園和實驗課室做好了相應的硬件和軟件的準備了嗎？本文將從以下幾方面淺析全景數(shù)字切片與顯微形態(tài)實驗課室建設(shè)中可能出現(xiàn)的問題和出路，以期引起形態(tài)學教師、技術(shù)人員、管理者對上述問題的思考：①全景數(shù)字切片的理想狀態(tài)；②顯微形態(tài)實驗課室建設(shè)；③全景數(shù)字切片的制備。