王先友，郭 石

1. 河南大學藥學院 分析化學教研室，河南 開封 475004； 2.開封市兒童醫(yī)院 藥學部，河南 開封 475002

保心寧片由丹參、當歸、枳殼、三七等多味藥材組成。具有活血化瘀，行氣止痛的功效，臨床上用于心絞痛，心律失常，改善冠心病癥狀[1]等。處方中三七為名貴藥材，質(zhì)量標準中沒有其成分的含量測定[2]。人參皂苷Rg1是三七的主要成分之一，李海泉[3]曾采用HPLC方法測定了其中三個皂苷含量，但通過驗證我們所用的方法簡單、分離度等指標稍好，為保心寧片的質(zhì)量控制提供一更合適途徑。

1 儀器與試藥

LC-10AT型高效液相色譜儀(日本島津)；N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學智達信息有限公司)；人參皂苷Rg1對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號：0703- 200221，供含量測定用)；保心寧片(市售)；甲醇(色譜純)；水為重蒸餾水;其他所用試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇∶水(45∶55)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：203 nm。在此色譜條件下，得到保心寧片對照品溶液及供試品溶液的HPLC圖譜(見圖1)，理論塔板數(shù)不低于4 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1對照品69.70 mg，加流動相溶解，定容至25 mL，混勻，即得2.788 g/L的人參皂苷Rg1對照品溶液。

圖1 HPLC圖譜(A 對照品，B 樣品)

2.2.2 供試品溶液的制備 取保心寧片，除去糖衣，研碎，精密稱取約0.5 g置10 mL容量瓶中，加流動相適量，浸漬2 h，超聲30分鐘使之充分溶解，冷卻至室溫，加流動相至刻度，搖勻，靜置，吸取上清液，轉移到另一干燥潔凈容量瓶中；加石油醚適量，振搖，除去石油醚，重復3次，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系 精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液(2.788 g/L)0.5、1.0、1.5、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5 μL，按上述色譜條件分別進樣，記錄色譜圖。每種濃度進樣3次，取峰面積的平均值。以峰面積A對進樣量a進行線性回歸，得回歸方程為：A=231 896 a+44 038(r=0.999 4)。結果表明，人參皂苷Rg1在1.39 ～ 48.79μg范圍內(nèi)具有良好的線性關系。

2.3.2 精密度實驗 精密吸取線性關系項下的對照品溶液10μL，重復進樣5次，記錄峰面積，計算RSD為0.86%(n=5)，結果表明該法精密度較好。

2.3.3 穩(wěn)定性實驗 供試品溶液配置后分別于1、2、4、8、12、24、48h進樣15μL，記錄峰面積，計算RSD為0.74%(n=7)，結果表明供試品在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復性實驗 取同一批供試品,按上述方法配制供試品溶液5份，進樣，記錄峰面積，測得RSD為1.09%，結果表明該法重復性較好。

2.3.5 加樣回收率實驗 精稱同一批號已知含量的供試品約0.5g，5份，分別加入2.788g/L的對照品溶液1mL，按2.2項操作制備5份溶液，進樣量15μL，記錄峰面積，測得平均回收率為100.9%，RSD為0.87%(n=5)，結果顯示加樣回收率良好。

2.3.6 含量測定 按擬定的含量測定方法,測定三批供試品中人參皂苷Rg1的含量,結果見表1。

表1 樣品含量測定結果(n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

參閱大量文獻[4-7],人參皂苷Rg1在203nm的波長處有最大吸收。

3.2 提取溶劑的選擇

參閱其他文獻[4-7]，提取人參皂苷Rg1以用流動相的居多，經(jīng)實驗證明選擇流動相作為提取溶媒不僅提取完全且提出干擾成分較少，Rg1得到了很好的分離,且峰形良好，故采用流動相作為其提取溶劑；又因為保心寧片含有大量極性較小的成分，若不預先采用石油醚處理，將大大延長分析周期，且對色譜柱造成嚴重污染。

[1] 陳曉莉,陳建宗,呂召學. 心寧片治療冠心病心絞痛的臨床研究[J].廣東藥學院學報,2002,18(3):233-236.

[2] 王曉燕,張廣宏,張秋紅,等.保心寧膠囊的質(zhì)量標準研究[J].時珍國醫(yī)國藥, 2002,13(7):F004-F004.

[3] 陳剛,張金垂,徐連明.高效液相色譜法測保心寧軟膠囊中丹參素量[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(4):579-580.

[4] 周安,段賢春,王效山,等.高效液相色譜法測定三七及三七片中人參皂苷Rg1的含量[J].安徽中醫(yī)學院學報,2007,26(5):41-43.

[5] 徐維平,姜玲,蔣磊,等.高效液相色譜法測定復方三七片中人參皂苷Rg1含量[J].中國藥業(yè),2005,14(10):35-36.

[6] 代廣會,周卿,尚京川.HPLC法測定維參鋅膠囊中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J].中國藥房,2007,18(30):2365-2367.

[7] 王健,李海燕.HPLC測定參杞杜仲丸中人參皂苷Rg1，Re的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2007,13(8):6-7.