趙洪慶，韓遠(yuǎn)山，杜 青，楊 琴，王宇紅*，楊 蕙，孟 盼

(1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，長(zhǎng)沙 410208； 2. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410007)

不同時(shí)間點(diǎn)不同應(yīng)激方法致大鼠焦慮樣行為的研究

趙洪慶1，韓遠(yuǎn)山2，杜 青1，楊 琴2，王宇紅1*，楊 蕙2，孟 盼1

(1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，長(zhǎng)沙 410208； 2. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410007)

目的 從不同時(shí)間點(diǎn)比較幾種不同的應(yīng)激方法建立焦慮大鼠模型的生物學(xué)特點(diǎn)，為尋找最合適的造模方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 70只大鼠隨機(jī)分為正常組、空瓶應(yīng)激組、慢性情緒應(yīng)激(chronic emotional stress, CES)組、束縛應(yīng)激3 h組、束縛應(yīng)激6 h組，分別進(jìn)行造模，于實(shí)驗(yàn)第7 d、14 d、21 d分別采用高架十字迷宮和場(chǎng)景恐懼測(cè)試測(cè)定大鼠的焦慮樣行為，曠場(chǎng)測(cè)試考察大鼠的焦慮或抑郁樣行為，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠的抑郁樣行為，采用Elisa試劑盒檢測(cè)大鼠海馬組織中5-HT、DA含量。結(jié)果 焦慮樣行為學(xué)測(cè)試結(jié)果表明，第14天起，空瓶應(yīng)激組、CES組、束縛應(yīng)激6 h組大鼠開(kāi)始產(chǎn)生焦慮樣行為，此后焦慮樣行為愈發(fā)明顯，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，束縛6 h組大鼠的不動(dòng)時(shí)間于第7 d起即顯著增加(P< 0.05)。同時(shí)，與正常大鼠比較，空瓶應(yīng)激組和CES組大鼠海馬5-HT、DA含量于第14天開(kāi)始顯著上升(P< 0.05或P< 0.01)。結(jié)論 在上述幾種焦慮模型中，束縛應(yīng)激3 h焦慮樣行為不明顯；束縛應(yīng)激6 h可能由于應(yīng)激時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，表現(xiàn)出抑郁樣行為?？掌繎?yīng)激和CES能成功建立焦慮大鼠模型，且其焦慮行為表征有一定差異，可根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇對(duì)應(yīng)的模型方法。

焦慮模型；空瓶應(yīng)激；慢性情緒應(yīng)激；慢性束縛應(yīng)激

焦慮癥是以焦慮為主要特征的神經(jīng)癥，臨床表現(xiàn)為沒(méi)有事實(shí)根據(jù)也無(wú)明確客觀對(duì)象的緊張擔(dān)心、恐懼不安等情緒。隨著人們工作和生活節(jié)奏的加快，焦慮癥的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，已成為世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。流行病學(xué)調(diào)查顯示，焦慮癥的終生患病率為5%，而用于該病的費(fèi)用約占精神類疾病支出總費(fèi)用的30%[1]。對(duì)焦慮癥發(fā)病機(jī)制的研究已成為目前醫(yī)學(xué)關(guān)注的熱點(diǎn)，而尋找一種客觀、規(guī)范、重復(fù)性好的動(dòng)物模型，是研究疾病的重要基礎(chǔ)。目前，建立焦慮動(dòng)物模型多采用慢性心理應(yīng)激的方法，主要包括不確定性空瓶飲水應(yīng)激、慢性情緒應(yīng)激(chronic emotional stress, CES)、慢性束縛應(yīng)激三大類[2]。本研究旨在建立上述三類焦慮動(dòng)物模型，并基于不同時(shí)間點(diǎn)，從動(dòng)物行為學(xué)到腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量進(jìn)行比較研究，尋找最合適的焦慮動(dòng)物應(yīng)激模型。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠70只，雄性，200～220 g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[SCXK(湘)2013-0004]，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK(湘)2015-0003]。大鼠購(gòu)入后先適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，實(shí)驗(yàn)期間大鼠均在室溫(24±2)℃、相對(duì)濕度(50±5) %環(huán)境下喂養(yǎng)。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 試劑與儀器

大鼠5-HT、DA酶聯(lián)免疫分析(Elisa)試劑盒購(gòu)自Sigma公司；DL-1高架十字迷宮購(gòu)自長(zhǎng)沙肯基科技發(fā)展有限公司；5417R低溫高速離心機(jī)購(gòu)自Eppendorf公司；MultiskanMK3型酶標(biāo)儀購(gòu)自Thermo公司；斯金納箱購(gòu)自Panlab公司；大鼠束縛器購(gòu)自安徽正華生物儀器公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組與造模

70只SD大鼠共分為5個(gè)組，包括正常組、空瓶應(yīng)激組、CES組、束縛應(yīng)激3 h組，束縛應(yīng)激6 h組，每組14只。除正常組外，各模型組均按各自造模方法進(jìn)行造模(具體造模方法如下)，分別于實(shí)驗(yàn)第7 d、14 d、21 d進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，并于行為學(xué)測(cè)試完成后麻醉部分大鼠，斷頭取腦，在冰盤上迅速剝離雙側(cè)海馬，液氮中速凍保存，待測(cè)單胺類遞質(zhì)5-HT、DA含量。

空瓶應(yīng)激組：采用不確定性空瓶飲水應(yīng)激模型，進(jìn)行定時(shí)喂水訓(xùn)練7 d。定時(shí)喂水訓(xùn)練為每日2次，時(shí)間分別為8:00～8:10和18:00～18:10，此兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)給動(dòng)物飲水，其他時(shí)間不再給水。7 d后開(kāi)始進(jìn)行應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，在上述兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)隨機(jī)選取一個(gè)作為空瓶應(yīng)激時(shí)間點(diǎn)，給動(dòng)物以空水瓶誘發(fā)其情緒應(yīng)激，另一個(gè)時(shí)間段給動(dòng)物飲水[3]。

CES組：采用慢性應(yīng)激的方法，動(dòng)物每籠4只，應(yīng)激方法包括光照或黑暗24 h，擁擠24 h，孤養(yǎng)24 h，每天下午3:00～6:00禁食或禁水1 h，電擊(20次，持續(xù)5 s，10 mA，間隔30 s)，45°傾籠24 h，每天采用1種應(yīng)激，同種應(yīng)激不連續(xù)出現(xiàn)[4]。

慢性束縛應(yīng)激3 h組：將動(dòng)物束縛于特制的束縛器上，每日上午束縛1次，每次3 h[5]。

慢性束縛應(yīng)激6 h組：將動(dòng)物束縛于特制的束縛器上，每天9:00～15:00進(jìn)行束縛，共6 h[6]。

1.3.2 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

將大鼠放入迷宮的中央平臺(tái)處，使其頭部正對(duì)封閉臂，釋放后記錄以下指標(biāo)：① 進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)(OE)；② 進(jìn)入封閉臂次數(shù)(CE)③ 進(jìn)入開(kāi)放臂時(shí)間(OT)；④ 進(jìn)入封閉臂時(shí)間(CT)。由上述指標(biāo)計(jì)算出：① 進(jìn)入開(kāi)放臂的比例(OE%)：OE/(OE+CE)×100%；② 開(kāi)放臂停留時(shí)間比例(OT%)：OT/(OT+CT)×100%。每只大鼠測(cè)試5 min。

1.3.3 曠場(chǎng)測(cè)試

將大鼠放入到一個(gè)長(zhǎng)寬高為80 cm×80 cm×40 cm的黑色敞箱中，敞箱底面平均劃分為25個(gè)小方格。實(shí)驗(yàn)前30 min將待測(cè)大鼠放入測(cè)試房間，大鼠從敞箱中央放入，觀察記錄大鼠4 min內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)格數(shù)以及垂直豎立次數(shù)，計(jì)算水平和垂直得分的總和。

1.3.4 場(chǎng)景恐懼測(cè)試

測(cè)試前1 d對(duì)大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，大鼠在斯金納箱適應(yīng)2 min后，給予30 s的噪音(5 kHz, 75 dB)，在噪音結(jié)束最后2 s同時(shí)給予電擊(50 V)，大鼠繼續(xù)呆在箱內(nèi)30 s，然后取出放回籠內(nèi)，24 h后進(jìn)行測(cè)試，將大鼠放入斯金納箱，2 min后給予60 s的噪音，記錄60 s內(nèi)大鼠的不動(dòng)(freezing)時(shí)間百分比[7]。

1.3.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

將大鼠放入高、直徑為50 cm×20 cm的圓柱形水缸中，水深約40 cm，水溫保持在(25±2)℃。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后1 min為適應(yīng)時(shí)間，適應(yīng)結(jié)束后記錄5 min內(nèi)大鼠的不動(dòng)時(shí)間(大鼠兩前爪停止游動(dòng)，身體呈漂浮狀態(tài)記為不動(dòng))。

1.3.6 Elisa檢測(cè)

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被5-HT、DA抗體的微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間差異比較采用單因素方差分析，兩兩比較方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn)法，方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3進(jìn)行兩兩比較，P< 0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1。從第14天開(kāi)始，空瓶應(yīng)激組、CES組、束縛應(yīng)激6 h組大鼠的OE%值、OT%值均顯著下降，差異都統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01或P< 0.05)。其中，CES組大鼠在開(kāi)臂中的次數(shù)及停留時(shí)間均明顯比其他組少，大鼠爬到封閉臂后即進(jìn)入不動(dòng)狀態(tài)。

2.2 曠場(chǎng)測(cè)試結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表2。與正常組比較，空瓶應(yīng)激組、CES組、束縛應(yīng)激6 h組大鼠的自主活動(dòng)次數(shù)均在14 d開(kāi)始顯著下降，其中，CES組下降的最為顯著，其活動(dòng)次數(shù)類似于抑郁模型大鼠。此外，束縛應(yīng)激3 h組大鼠活動(dòng)次數(shù)有所下降，但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 各組大鼠高架十字迷宮結(jié)果比較(±s，n=8, %)

注：與正常組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note. Compared with control group，*P< 0.05，**P< 0.01.

表2 各組大鼠自主活動(dòng)情況(±s，n=8, num)

Tab.2 Comparison of thelocomotor activity results in each group

表2 各組大鼠自主活動(dòng)情況(±s，n=8, num)

組別Groups7d14d21d正常組Controlgroup817±16．2573±26．7520±16．3空瓶組Emptybottlegroup475±15．6265±12．1?246±9．3?CES組CESgroup820±21．834±1．5??31±0．8??束縛3h組3hrestraintgroup848±18．0447±22．8460±15．7束縛6h組6hrestraintgroup775±23．8378±19．8?177±10．8?

注：與正常組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note. Compared with control group，*P< 0.05，**P< 0.01.

表3 各組大鼠場(chǎng)景恐懼freezing時(shí)間比(±s，n=8, %)

注：與正常組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note. Compared with control group，*P< 0.05，**P< 0.01.

表4 各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較(±s，n=8, s)

Tab.4 Comparison of immobile time in forced swimming testin each group

表4 各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較(±s，n=8, s)

組別Groups7d14d21d正常組Controlgroup53±2．5105±2．1185±7．8空瓶組Emptybottlegroup100±2．185±3．4197±13．4CES組CESgroup95±2．5177±6．6216±9．3束縛3h組3hrestraintgroup81±3．0183±7．7190±13．5束縛6h組6hrestraintgroup147±7．5?416±11．9??620±25．6??

注：與正常組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note. Compared with control group，*P< 0.05，**P< 0.01.

表5 各組大鼠腦海馬組織5-HT、DA含量(±s, n=6, pg/mg)

注：與正常組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note. Compared with control group，*P< 0.05，**P< 0.01.

2.3 場(chǎng)景恐懼測(cè)試結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表3。與正常組比較，各模型組大鼠從第14天開(kāi)始freezing時(shí)間顯著增加，并且趨于穩(wěn)定。各模型組之間freezing時(shí)間差別不大，無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。

2.4 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表4。與正常組比較，束縛應(yīng)激6 h組大鼠從第7天開(kāi)始不動(dòng)時(shí)間顯著增加，并隨著造模時(shí)間的增加，不動(dòng)時(shí)間增加。其余組與正常組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明該組大鼠無(wú)明顯的抑郁樣行為。

2.5 Elisa檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表5。與正常組比較，21 d時(shí)空瓶應(yīng)激組和CES組大鼠腦海馬組織5-HT、DA含量明顯上升，其中CES組上升最為顯著。同時(shí)，與正常組比較，束縛應(yīng)激3 h和6 h組大鼠腦內(nèi)的5-HT、DA含量與正常組差別不大，其中束縛應(yīng)激6 h組5-HT、DA含量均有逐漸下降趨勢(shì)。

3 討論

慢性應(yīng)激是焦慮抑郁等情緒疾病的重要發(fā)病因素之一，也是建立情緒類疾病動(dòng)物模型的常用方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比分析三類不同的焦慮動(dòng)物模型應(yīng)激方法，通過(guò)不同時(shí)間點(diǎn)摸索各應(yīng)激模型的特點(diǎn)，從動(dòng)物行為學(xué)及腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)改變兩方面，尋找一種模擬臨床疾病特征的焦慮動(dòng)物模型。

高架十字迷宮是以動(dòng)物在新環(huán)境下的探究特性和對(duì)高懸空曠環(huán)境的恐懼特性之間形成的矛盾心理來(lái)模仿人類的焦慮狀態(tài)，是經(jīng)典的動(dòng)物焦慮行為測(cè)試儀器。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，除束縛3 h組外，各模型組自14 d開(kāi)始OE%、OT%值顯著下降，顯示各組動(dòng)物均表現(xiàn)出明顯的焦慮行為。場(chǎng)景恐懼測(cè)試是用于研究嚙齒類動(dòng)物環(huán)境相關(guān)條件性恐懼的實(shí)驗(yàn)。嚙齒類動(dòng)物在恐懼時(shí)會(huì)表現(xiàn)出特有的不動(dòng)狀態(tài)(freezing)，保持靜止不動(dòng)的防御姿勢(shì)，常用于研究焦慮樣行為[8]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，各焦慮模型組的freezing時(shí)間均顯著上升。巧合的是，和高架十字迷宮測(cè)試結(jié)果類似，CES組大鼠的freezing時(shí)間也是各模型組中最長(zhǎng)的，說(shuō)明此兩種焦慮樣行為測(cè)試結(jié)果可能具有一定的關(guān)聯(lián)性。

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種常用行為學(xué)方法，常用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的焦慮或抑郁樣行為[9]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，相比于正常組，空瓶應(yīng)激組、CES組、束縛應(yīng)激3 h和6 h組大鼠的自主活動(dòng)次數(shù)均下降，與文獻(xiàn)報(bào)道相符合[10]。然而，令人驚奇的發(fā)現(xiàn)是CES組大鼠在第14、21天的測(cè)試中都是直接躲到敞箱角落不動(dòng)，與以往課題組研究的抑郁大鼠表現(xiàn)相類似，而該組大鼠在籠內(nèi)時(shí)十分活潑，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，在絕望狀態(tài)下該組大鼠的不動(dòng)時(shí)間很短，與正常組無(wú)差異，說(shuō)明無(wú)明顯抑郁樣行為。為了探索大鼠的這一行為，將籠內(nèi)其余大鼠放入敞箱，發(fā)現(xiàn)原來(lái)躲在角落的大鼠開(kāi)始有探索行為，并最終四只大鼠各占據(jù)敞箱一角。經(jīng)查閱書籍文獻(xiàn)并聯(lián)系其他行為學(xué)結(jié)果，本課題組確定該行為也屬于焦慮障礙的一種，急性焦慮或者稱之為驚恐障礙，表現(xiàn)出反復(fù)強(qiáng)烈的驚恐狀態(tài)。

強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是使動(dòng)物處于絕望狀態(tài)，是最常用的研究動(dòng)物抑郁樣行為的測(cè)試方法，廣泛用于抗抑郁藥物的研究[11]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，除慢性束縛應(yīng)激6 h外，其余組與正常組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明其余模型組動(dòng)物并不表現(xiàn)出抑郁樣行為。綜合行為學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，束縛應(yīng)激6 h能同時(shí)誘導(dǎo)出焦慮和抑郁樣行為，而焦慮和抑郁是關(guān)聯(lián)性很強(qiáng)的兩種疾病，因此應(yīng)激造模過(guò)程中可能由焦慮逐漸向抑郁行為過(guò)渡，兩種疾病伴隨著發(fā)生。然而，由于表現(xiàn)出抑郁行為，因此束縛應(yīng)激6 h不能作為焦慮動(dòng)物模型的最優(yōu)選擇。

單胺神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)是關(guān)于焦慮癥發(fā)病機(jī)制的一種經(jīng)典假說(shuō)，假說(shuō)認(rèn)為，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的改變?cè)诮箲]癥的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[12]。研究表明，焦慮癥患者及焦慮模型大鼠都存在腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量升高的現(xiàn)象[13-14]。本實(shí)驗(yàn)觀察的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA均是與焦慮發(fā)生有密切關(guān)系的神經(jīng)遞質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常組比較，21 d時(shí)空瓶應(yīng)激組大鼠海馬5-HT、DA含量顯著升高，CES組則從第14天起即顯著上升，而慢性束縛3 h和6 h組并未有明顯的改變，甚至還有下降的趨勢(shì)。此外，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在各模型組中，CES組單胺遞質(zhì)含量上升最為顯著，表明在驚恐狀態(tài)下腦內(nèi)單胺遞質(zhì)可能會(huì)有明顯的上升，該結(jié)論需要進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在幾種常用的慢性應(yīng)激焦慮模型方法中，空瓶應(yīng)激和CES均能成功建立焦慮模型，其中空瓶應(yīng)激建立焦慮模型時(shí)程以21 d最佳，CES模型則以14 d為最佳。

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Research of different methods of stress-induced anxiety-like behavior in rats at different time points

ZHAO Hong-qing1, HAN Yuan-shan2, DU Qing1, YANG Qin2,WANG Yu-hong1*, YANG Hui2, MENG Pan1

(1. Hunan University of Chinese Medicine, Training Bases, Hunan Key Laboratory of Chinese Materia Medica Powder and Innovative Drugs Established by Provincial and Ministry, Changsha 410208, China; 2.First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410007, China)

Objective To compare the biological characteristics of several different anxiety rat models established by different methods of stress at different time points and provide experimental basis for the most appropriate modeling methods. Methods 60 rats were randomly divided into normal, empty bottle stress, chronic emotional stress (CES) group, restraint stress for 3h, 6h, and modeling respectively. In the experimental 7 d, 14 d, 21 d, elevated plus maze and fear condition system was used to test anxiety-like behavior in rats, open field test to study anxiety or depression-like behavior, forced swimming test was used to detect depression-like behavior in rats, and using the Elisa test kit to detect the contents of 5-HT, DA in the hippocampus in rats. Results Anxiety-like behavioral test results showed that rats in empty bottle stress, CES, 6 h restraint stress group started to have anxiety-like behavior since 14 d, then anxiety-like behavior was becoming increasingly apparent. Forced swimming test results showed that immobility time in 6 h restraint rats was significantly increased in the first 7 d(P< 0.05). Meanwhile, compared with control group, hippocampal 5-HT, DA contents in empty bottle stress and CES rats increased significantly since 14 d. Conclusions Among several stress methods established anxiety model, anxiety-like behavior in 3 h restraint stress was not obvious; 6 h restraint stress exhibited a depression-like behavior in the forced swimming test might be due to prolonged stress. Empty bottle stress and CES can successfully establish the anxiety rat model, and the anxiety behavior of the rats have some differences. Corresponding model methods can be selected according to different experimental purposes.

Anxiety model; Empty bottle stress; Chronic emotional stress; Chronic restraint stress

湖南省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目(2015DK3003)；湖南省研究生創(chuàng)新課題(CX2016B371,2016CX14)。

趙洪慶(1992-)，男，碩士研究生，研究方向：中藥神經(jīng)藥理。E-mail：516005398@qq.com

王宇紅(1965-)，女，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥神經(jīng)藥理。E-mail：wyh107@126.com

研究報(bào)告

R-332

A

1671-7856(2017) 01-0022-05

10.3969.j.issn.1671-7856.2017.01.005

2016-06-15