吳 敏 陳相宇

(江蘇宿遷市農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，江蘇宿遷 223800)

高效液相色譜法測定豬肉中五種磺胺類藥物殘留量

吳 敏 陳相宇

(江蘇宿遷市農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，江蘇宿遷 223800)

建立了高效液相色譜法測定豬肉中的磺胺間甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲基嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺喹噁啉（SQ）五種磺胺類藥物殘留檢測方法，作者通過在實驗中反復(fù)操作，總結(jié)出五種磺胺類藥物殘留的提取、凈化和色譜條件。樣品經(jīng)乙腈提取和液-液萃取，以Eclipse XDB-C18為分離柱，乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）為流動相，于270nm波長處檢測，外標(biāo)法定量。實驗結(jié)果表明，五種磺胺類藥物能在20min內(nèi)得到有效分離，峰形對稱，最低檢出限為5μg/kg（3倍噪聲），樣品的加標(biāo)回收率為82.9%～97.9%。

高效液相 磺胺類 殘留量 檢測

磺胺類藥物是人工合成的具有氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類抗菌藥物，具有抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)和價廉易得等特點，在畜牧業(yè)和獸醫(yī)臨床上廣泛用于預(yù)防和治療畜禽細(xì)菌性疾病和球蟲病。人們一旦食用了磺胺類藥物殘留超標(biāo)的畜禽產(chǎn)品，在人體內(nèi)作用時間和代謝時間較長，易產(chǎn)生過敏反應(yīng)，造成尿和造血紊亂等，最終導(dǎo)致人體內(nèi)許多細(xì)菌對其產(chǎn)生耐藥性，危害身體健康。

目前中國、歐盟、美國等均將磺胺類藥物列為動物飼養(yǎng)過程中限制使用的藥物。我國規(guī)定豬肉中的磺胺間甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺喹噁啉五種磺胺類藥物殘留量限量為100μg/kg。作者在檢測過程中通過乙腈提取和簡單的液-液萃取，有效地實現(xiàn)了藥物的提取和凈化，樣品基質(zhì)干擾小，通過采用高效液相色譜法同時分離測定常見的五種磺胺類藥物，操作步驟簡便快捷。

1 實驗部分

1.1 儀器與藥品、試劑

安捷倫1260高效液相色譜儀，配熒光檢測器；高速勻漿機(jī)；氮吹儀；離心機(jī)；渦旋儀；振蕩器；電子天平。

SMM、SM2、SMZ、SDM、SQ標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%）；乙腈（色譜純）；甲醇；乙酸；正己烷；正丙醇；無水硫酸鈉。

1.2 樣品提取和純化步驟

（1）準(zhǔn)確稱取5.0g豬肉樣品，置于50ml離心管中。加入4.0g無水硫酸鈉。

（2）準(zhǔn)確加入15ml乙腈，渦旋儀上混合30s，振蕩器高速振蕩20min，以7000r/min的速度離心5min，倒出上清液備用。

（3）分離后的殘渣用按照（2）方法再提取一次，合并兩次的上清液備用。

（4）加入正己烷10ml，渦旋30s，振蕩10min，以7000r/min離心5min，準(zhǔn)確吸出下層液體，加入正丙醇5ml，于50℃條件下氮吹儀減壓濃縮至近干。用2ml流動相溶解殘留物，經(jīng)0.45μm濾膜打進(jìn)進(jìn)樣瓶，供HPLC測定。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液及流動相配制

1.3.1 流動相的配制

按照乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）比例配制，抽濾后備用。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

用流動相稀釋100μg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制系列濃度為：0.125、0.2、0.5、1、4μg/ml的混合工作標(biāo)準(zhǔn)液，每個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)液重復(fù)測定2次，取平均值，繪制色譜峰面積，采用外標(biāo)法對樣品進(jìn)行定量。

1.4 色譜條件

Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6x250mm，粒徑5μm）；柱溫：40℃；流動相：乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）；流速：1.0ml/ min；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：20μl。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

通過實驗發(fā)現(xiàn)，酸度過高，不易將五種磺胺類藥物完全分離；酸度過低，容易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。本文采用甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）為流動相，等強(qiáng)度洗脫，實現(xiàn)了五種磺胺類藥物分離，各峰間分離度大，峰形尖銳，峰對稱性好。

2.2 色譜分離

依照上述色譜條件下，測得的五種磺胺標(biāo)準(zhǔn)溶液、豬肉樣品和豬肉樣品加標(biāo)的色譜圖中目標(biāo)物得到很好的分離，并且峰形對稱，保留時間縮短。

圖1 五種磺胺標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

1、磺胺二甲基嘧啶2、磺胺間甲氧嘧啶3、磺胺甲噁唑4、磺胺二甲氧嘧啶5、磺胺喹噁啉

圖2 豬肉樣品色譜圖

2.3 樣品添加回收率

稱取豬肉樣品5.0g置于50ml離心管中，樣品添加濃度為10μg/ g?；靹蚝箪o置10min，按照上述實驗方法進(jìn)行處理和測定，五種磺胺類藥物的回收率為82.9%～97.9%。

3 實驗結(jié)論

通過上述實驗結(jié)果表明，用乙腈提取和液-液萃取，可以很好地實現(xiàn)。藥物的提取和凈化。本方法建立了同時分離檢測豬肉中五種磺胺類藥物的適宜色譜條件，方法簡便高效，準(zhǔn)確度高，可以適用于磺胺類藥物殘留的監(jiān)控。

[1]劉凱.豬肉中磺胺類藥物殘留檢測操作要點[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2008，（2）：21-22.

[2]王瑞深.肉品中殘留磺胺類藥的危害及其監(jiān)控[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010，（2）：50.

[3]羅成江，陳慧華，林仙軍，等.UPLC和HPLC法檢測豬肉中磺胺類藥物殘留的比較[J].中國獸藥雜志，2012，46（4）：25-28.

吳敏（1980-），女，本科，農(nóng)藝師、從事農(nóng)畜產(chǎn)品藥物殘留檢測。陳相宇（1986-），女，本科，農(nóng)藝師、從事農(nóng)畜產(chǎn)品藥物殘留檢測。