張繼才，和占星，李天平，金顯棟，楊凱，亐開興，詹靖璽，付美芬，王安奎，黃必志

(云南省草地動(dòng)物科學(xué)研究院，云南 昆明 650212)

[目的]為提高CIDR+PG法對(duì)云嶺牛的誘導(dǎo)發(fā)情效果。[方法]采用CIDR+PG法和CIDR+FSH+PG法分別對(duì)產(chǎn)后40～60 d帶犢云嶺牛母牛進(jìn)行了誘導(dǎo)發(fā)情的效果比較。[結(jié)果]CIDR+PG法的發(fā)情率和妊娠率分別為76.5%和58.8%，CIDR+FSH+PG法的發(fā)情率和妊娠率分別為90.0%和80.0%；且發(fā)情時(shí)間更集中，比CIDR+PG法提前19 h，F(xiàn)SH誘導(dǎo)發(fā)情效果極好，差異顯著(P<0.01)。[結(jié)論]利用FSH刺激靜止卵巢恢復(fù)正常機(jī)能，促進(jìn)卵泡發(fā)育的作用，能有效提高CIDR+PG法的誘導(dǎo)發(fā)情效果。

云嶺牛；誘導(dǎo)發(fā)情；CIDR+PG法；FSH

*通訊作者：黃必志(1964-)，云南騰沖人,研究員,主要從事草地畜牧業(yè)研究。

隨著人民生活水平的日益提高，牛肉、牛乳需求量逐漸增加，集約化、規(guī)?；娜馀！⒛膛?chǎng)發(fā)展迅速。在肉牛、奶牛養(yǎng)殖生產(chǎn)中，為追求高產(chǎn)、高效目標(biāo)，在一定程度上犧牲或限制了母牛繁殖性能的發(fā)揮，各種原因引起的不孕不育母牛數(shù)量增加，牛群的受胎率降低，養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益受到了一定的影響，因此，提高規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)母牛繁殖力就顯得尤為重要。

誘導(dǎo)發(fā)情通常指使用外源激素或采取物理措施，使處于休情期或生理乏情階段的母畜出現(xiàn)正常發(fā)情排卵的方法。誘導(dǎo)發(fā)情不僅可以延長(zhǎng)母畜的繁殖年限，還可以通過(guò)縮短產(chǎn)犢間隔和增加產(chǎn)仔(犢)數(shù)來(lái)提高母畜的繁殖力。所以，采用激素或藥物以促進(jìn)母牛發(fā)情的各種措施和方法，在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)中越來(lái)越得到重視。

上世紀(jì)70年代，科學(xué)家通過(guò)對(duì)母牛發(fā)情周期中內(nèi)源生殖激素和卵巢活動(dòng)的變化規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)，黃體產(chǎn)生的孕酮借助負(fù)反饋機(jī)制的抑制作用來(lái)控制母牛的發(fā)情和排卵，同期發(fā)情技術(shù)得到了快速發(fā)展和應(yīng)用，極大的提高了誘導(dǎo)發(fā)情的效果和效率，并由此產(chǎn)生了縮短黃體壽命和延長(zhǎng)黃體壽命兩種同期發(fā)情方法。盡管兩種方法所用的激素和作用不同，但處理結(jié)果完全相同，均能達(dá)到讓處理牛只在短期內(nèi)出現(xiàn)集中發(fā)情的目的。目前，以CIDR+PG法在同期發(fā)情中應(yīng)用最為廣泛，能夠獲得較高的發(fā)情率，但是受胎率偏低。為此，本試驗(yàn)在哺乳母牛的誘導(dǎo)發(fā)情過(guò)程中利用FSH刺激靜止卵巢恢復(fù)正常機(jī)能，促進(jìn)卵泡發(fā)育，以期提高牛群的受胎率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

根據(jù)母牛的檔案和產(chǎn)犢記錄，在云南省草地動(dòng)物科學(xué)研究院舍飼母牛群中共選出37頭泌乳(帶犢)母牛進(jìn)行試驗(yàn)，牛只及分組情況見表1。

1.2 藥物和器械

CUE-MATE孕酮陰道栓(CIDR)：由Bioniche Animal Health Pty. Ltd.生產(chǎn)，每支含1.56 g P4。

氯前列烯醉注射液：丹東綠丹和華動(dòng)物有限公司生產(chǎn)，規(guī)格2 mL，每支含PG 0.2 mg。

FSH：中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所生產(chǎn)，規(guī)格：10 mg/瓶。使用時(shí)用20 mL生理鹽水稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余藥物置于冰箱在0～4℃保鮮區(qū)保存，在下次優(yōu)先使用。

便攜式B超儀：日本本田電子產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)，型號(hào)：HS-101V。

1.3 試驗(yàn)方法

誘導(dǎo)發(fā)情方法：對(duì)照組試驗(yàn)牛的誘導(dǎo)發(fā)情采用CIDR+生理鹽水+PG法，試驗(yàn)組試驗(yàn)牛采用CIDR+FSH+PG法。具體操作方法：發(fā)情當(dāng)天除外，在母牛發(fā)情周期的任一天進(jìn)行CIDR陰道栓埋置，以埋置當(dāng)天按0 d計(jì)，于第5、6、7 d對(duì)試驗(yàn)牛每頭按3.5 mg劑量的FSH用遞減法，一天兩次肌肉注射給藥，對(duì)照組用與試驗(yàn)組等體積的生理鹽水一天兩次肌肉注射。所有牛只在第7 d的最后一針FSH或生理鹽水完成后，進(jìn)行撤栓和肌肉注射0.4 mg PG。在對(duì)牛只進(jìn)行肌肉注射給藥時(shí)盡量用小號(hào)長(zhǎng)針頭，在拔出針頭的同時(shí)用干燥無(wú)菌棉對(duì)針眼處緊按5 sec以上，防止藥物從針眼溢出。

發(fā)情觀察和人工輸精：撤栓12 h后對(duì)所有試驗(yàn)牛進(jìn)行發(fā)情觀察，每4 h進(jìn)行1次，每次不少于1 h，認(rèn)真記錄牛只發(fā)情表現(xiàn)。以牛只出現(xiàn)穩(wěn)定站立接受爬胯或在陰道內(nèi)流出大量清亮透明粘液(俗稱“吊線”)的時(shí)間為發(fā)情時(shí)間。對(duì)于在撤栓后72 h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情的牛只，分別在發(fā)情后12 h和24 h，進(jìn)行2次人工輸精。對(duì)于未見到發(fā)情的牛只在撤栓后72 h和84 h，進(jìn)行2次人工輸精。

妊娠檢查：人工輸精后40 d左右，用直腸檢查結(jié)合B超儀對(duì)試驗(yàn)牛進(jìn)行妊娠檢查，判定牛群的妊娠情況。

體況評(píng)分方法：按照英國(guó)5分制的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[1]執(zhí)行。

1.4 數(shù)據(jù)及處理

誘導(dǎo)發(fā)情效果主要根據(jù)有效同期發(fā)情率和妊娠率兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行判定，數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 13.0軟件對(duì)差異顯著性進(jìn)行分析。有效同期發(fā)情率是在撤栓后72h內(nèi)的發(fā)情牛數(shù)占試驗(yàn)牛數(shù)的百分比，妊娠率為妊娠母牛數(shù)占試驗(yàn)牛數(shù)的百分比。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)牛選擇及分組結(jié)果

影響母牛誘導(dǎo)發(fā)情效果的因素較為復(fù)雜。在本試驗(yàn)中，為盡量減少母畜年齡、體況和產(chǎn)后時(shí)間對(duì)本試驗(yàn)結(jié)果的影響，在云南省草地動(dòng)物科學(xué)研究院舍飼母牛群內(nèi)，根據(jù)母牛的檔案和產(chǎn)犢記錄，共選出37頭帶犢母牛進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)牛的條件進(jìn)行了一定的限制，要求供試牛只年齡在5～6歲，產(chǎn)后時(shí)間40～60 d，體況在2.5～4.0分。為此，選擇了帶犢母牛試驗(yàn)組20頭，對(duì)照組17頭。試驗(yàn)牛選擇的具體情況見表1。

表1 試驗(yàn)牛情況

2.2 誘導(dǎo)發(fā)情的處理效果

對(duì)照組17頭牛中，13頭觀察到靜止站立接受爬跨，3頭觀察到爬跨發(fā)情牛但不接受其它牛的爬跨，在牛只靜臥休息時(shí)見陰門流出少量粘液，1頭沒(méi)有觀察到任何發(fā)情表現(xiàn)。試驗(yàn)組20頭牛中，18頭出現(xiàn)靜止站立接受爬胯，1頭未見到發(fā)情表現(xiàn)，1頭見有粘液。由此可見，試驗(yàn)組的發(fā)情率和妊娠率均明顯優(yōu)于對(duì)照組(表2)。

表2 FSH對(duì)云嶺牛的誘導(dǎo)發(fā)情效果

注：同列上肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，未標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)；以下同。

通過(guò)妊娠檢查，對(duì)照組和試驗(yàn)組中未見明顯發(fā)情表現(xiàn)的各有1頭牛妊娠，這一結(jié)果說(shuō)明，在誘導(dǎo)發(fā)情過(guò)程中牛群中會(huì)存在發(fā)情表現(xiàn)不明顯，但仍會(huì)出現(xiàn)排卵情況的牛只。所以，對(duì)未見發(fā)情表現(xiàn)牛只進(jìn)行輸精(配種)，在一定程度上能幫助提高誘導(dǎo)發(fā)情的妊娠率。在實(shí)際生產(chǎn)上也是值得的，畢竟與犢牛價(jià)值相比，多浪費(fèi)點(diǎn)凍精是可以忽略不計(jì)的，同時(shí)還能降低犢牛生產(chǎn)成本，提高母牛繁殖力。

2.3 兩種處理方法的同期發(fā)情效果比較

對(duì)照組的13頭發(fā)情牛中，6頭是在撤栓后的24～48 h內(nèi)發(fā)情，7頭在48～72 h發(fā)情，有效同期率為76.5%。FSH處理組發(fā)情的18頭牛中，1頭在撤栓后的12～24 h內(nèi)發(fā)情，12頭在24～48 h內(nèi)發(fā)情，5頭是在48～72 h發(fā)情。試驗(yàn)表明，試驗(yàn)組的同期發(fā)情效果明顯優(yōu)于對(duì)照組，試驗(yàn)組牛群發(fā)情時(shí)間更集中，且較對(duì)照組提前19 h(P<0.05)。

表3 不同時(shí)間段云嶺牛的發(fā)情情況

2.4 誘導(dǎo)發(fā)情牛只排卵效果

在結(jié)束人工輸精后的40 d左右，通過(guò)直腸觸摸卵巢、結(jié)合B超儀檢查方法對(duì)妊娠母牛卵巢上的黃體分布情況進(jìn)行檢查，根據(jù)功能性黃體存在位置判斷每頭母牛左右卵巢的排卵情況，結(jié)果表明，對(duì)照組10頭妊娠母牛中，4頭在左側(cè)卵巢排卵，6頭在右側(cè)排卵，無(wú)兩側(cè)排雙卵的情況。試驗(yàn)組妊娠母牛中，11頭出現(xiàn)排1個(gè)卵，其中5頭是左側(cè)卵巢排卵，6頭是右側(cè)卵巢排卵，有4頭出現(xiàn)排雙卵和1頭出現(xiàn)排3卵的情況。僅從排單卵情況看，右側(cè)卵巢排卵的機(jī)率要高于左側(cè)卵巢，但兩側(cè)并沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。

3 討論

3.1 帶犢母牛乏情的原因

母牛產(chǎn)后乏情期的長(zhǎng)短直接影響母牛的繁殖率及養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益[2]。引起產(chǎn)后母牛乏情的原因復(fù)雜，其中哺乳是一個(gè)最重要因素。在產(chǎn)后早期，由于垂體前葉的LH貯存耗竭，導(dǎo)致LH脈沖性釋放的降低，雖與哺乳無(wú)關(guān)[3]，但隨LH貯存量的恢復(fù)，哺乳對(duì)LH的脈沖性釋放可產(chǎn)生抑制作用。哺乳行為對(duì)乳頭的刺激使乳頭的感受器興奮，沖動(dòng)信號(hào)通過(guò)傳入神經(jīng)傳遞到下丘腦，傳入神經(jīng)元末梢分泌神經(jīng)遞質(zhì)，使下丘腦神經(jīng)元對(duì)雌激素的負(fù)反饋?zhàn)饔玫拿舾行栽黾樱瑥亩档兔}沖發(fā)生器的功能，GnRH分泌受抑制，使FSH、LH處于低水平，卵泡發(fā)育受阻，造成母牛乏情[4]。

3.2 FSH功能

卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)是由動(dòng)物垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，它能促進(jìn)顆粒細(xì)胞增生，刺激類固醇生成，調(diào)節(jié)配子細(xì)胞的發(fā)育和成熟，是下丘腦-垂體-性腺軸中的主要激素之一[12]。FSH在雌性動(dòng)物可促進(jìn)子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)、排卵、刺激多卵泡發(fā)育。FSH還可直接作用于卵巢，刺激卵巢生長(zhǎng)，增加卵巢重量。FSH對(duì)雄性動(dòng)物可刺激精子的發(fā)生，能刺激曲細(xì)精管上皮和次級(jí)精母細(xì)胞的發(fā)育，在LH和雄激素的協(xié)同下使精子發(fā)育成熟。同時(shí)，F(xiàn)SH還能促進(jìn)其它糖蛋白激素的合成，并可反饋調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸，調(diào)節(jié)性腺激素的合成和分泌，維持動(dòng)物正常的繁殖性能；成為在動(dòng)物繁殖，特別是在胚胎移植和超數(shù)排卵中應(yīng)用較為廣泛的外源生殖激素之一，有效提高動(dòng)物繁殖效率。在采用活體采卵進(jìn)行體外胚胎生產(chǎn)中，用外源生殖激素FSH對(duì)供體牛處理，可獲得較高的卵泡數(shù)和胚胎數(shù)，效果優(yōu)于PMSG[12]。在超數(shù)排卵中，郭志勤用FSH對(duì)553頭供體牛進(jìn)行處理生產(chǎn)體內(nèi)胚胎，獲得頭均生產(chǎn)可用胚胎6.15枚的滿意效果[13]。

3.3 CIDR+PG誘導(dǎo)發(fā)情的效果

CIDR+PG法的原理是利用埋置CIDR內(nèi)持續(xù)性釋放黃體酮(P4)，有效促進(jìn)母牛卵巢上的小卵泡快速發(fā)育，同時(shí)抑制大卵泡成熟，使處理牛的卵巢保持在相對(duì)一致的生理期。撤出CIDR后使血液中的外源P4水平迅速降低，同時(shí)肌注的外源PG使功能性黃體快速溶解，進(jìn)一步降低血液中內(nèi)源P4的釋放，卵泡成熟的抑制因子作用減弱，卵泡快速進(jìn)入成熟排卵期，從而實(shí)現(xiàn)處理牛在短時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情。CIDR和律胎素(PGF2α類似物)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)患有卵巢靜止和卵巢囊腫的奶牛有較好的療效，能獲得50%和60%受孕率[4]。王昆等利用該方法對(duì)胚胎移植的受體黃牛進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情，發(fā)情時(shí)間集中在CIDR取出后的40～50 h，與2次PG法[5]相比較，發(fā)情時(shí)間更集中，同期發(fā)情率為76.7%，黃體合格率為76.1%，受體移植的妊娠率為45.7%[6]。該方法對(duì)不同地區(qū)、不同品種的母牛誘導(dǎo)發(fā)情效果確實(shí)[7-11]。不同品種、不同季節(jié)、不同藥品、不同處理時(shí)間和母牛體況的差異是造成上述誘導(dǎo)發(fā)情效果差異的主要原因[12]。

3.4 FSH對(duì)泌乳母牛誘導(dǎo)發(fā)情的效果

在本試驗(yàn)對(duì)供試動(dòng)物的品種、年齡、體況等方面進(jìn)行了嚴(yán)格篩選，均采用同一批次的材料，由專人負(fù)責(zé)操作，基本保持試驗(yàn)條件的一致性，減少因材料、方法、應(yīng)激等因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成的影響。雖然對(duì)試驗(yàn)牛的條件進(jìn)行了嚴(yán)格限制，牛只數(shù)量偏少，但試驗(yàn)結(jié)果足以反映出FSH對(duì)帶犢母牛進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情中的作用和影響。對(duì)照組的同期發(fā)情率和妊娠率分別為76.5%和58.8%，略低于其它科研工作者的試驗(yàn)結(jié)果，但無(wú)明顯差異[7-11]。在試驗(yàn)中所選用的牛只是產(chǎn)后40～60 d內(nèi)帶犢的云嶺母牛，受帶犢哺乳的影響，多數(shù)母牛的卵巢處于靜止?fàn)顟B(tài)，是造成誘導(dǎo)發(fā)情效果差的主要原因[12,13]；而試驗(yàn)組對(duì)母牛處理過(guò)程中使用的外源激素FSH激活了試驗(yàn)牛卵巢的正常機(jī)能，使誘導(dǎo)發(fā)情效果顯著高于對(duì)照組，也還增加了母牛懷雙胎(多胎)的幾率，在很大程度上能提高母牛繁殖力[14]。采用PVP包埋FSH能有效減少因多次驅(qū)趕牛群和多次注射引起的應(yīng)激，提高超排和誘導(dǎo)發(fā)情效果[15]，有待今后試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié)論

利用FSH刺激靜止卵巢恢復(fù)正常機(jī)能，促進(jìn)卵泡發(fā)育的作用，能有效提高CIDR+PG法的誘導(dǎo)發(fā)情效果。

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