黃潔，李承紅，陳實(shí)，劉敏，石奕

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院，武漢430025)

重疊綜合征患者血漿血小板微顆粒及內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒水平變化及意義

黃潔，李承紅，陳實(shí)，劉敏，石奕

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院，武漢430025)

目的 探討重疊綜合征患者血漿血小板微顆粒(PMP)、內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(EMP)水平變化及其臨床意義。方法 選取重疊綜合征患者58例(重疊綜合征組)、單純慢性阻塞性肺疾病患者72例(慢阻肺組)、單純阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征患者60例(呼吸暫停綜合征組)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組血漿PMP、EMP，分析重疊綜合征組血漿PMP、EMP與氧合指數(shù)(PO2/FiO2)、乳酸、FEV1、FEV1/FVC的關(guān)系。結(jié)果 重疊綜合征組入院時(shí)血漿PMP、EMP水平均高于呼吸暫停綜合征組和慢阻肺組，呼吸暫停綜合征組血漿EMP水平高于慢阻肺組，組間比較P均<0.05。重疊綜合征組睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)>30次/h者入院時(shí)血漿EMP、PMP水平均高于AHI >5～≤15次/h者和>15～≤30次/h者(P均<0.05)，AHI>15～≤30次/h者血漿EMP、PMP水平均高于AHI>5～≤15次/h者(P均<0.05)。重疊綜合征組治療后血漿EMP、PMP水平均明顯低于治療前(P均<0.01)。Pearson相關(guān)分析顯示，重疊綜合征組血漿EMP、PMP水平與PO2/FiO2、FEV1、FEV1/FVC均呈負(fù)相關(guān)(P均<0.01)，與乳酸水平均呈正相關(guān)(P均<0.01)。結(jié)論 血漿EMP、PMP水平升高可促進(jìn)重疊綜合征的發(fā)生、發(fā)展，二者聯(lián)合檢測可判斷重疊綜合征患者病情和治療效果。

重疊綜合征；血小板微顆粒；內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒

慢性阻塞性肺疾病(以下稱慢阻肺)和阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(以下稱呼吸暫停綜合征)同時(shí)存在稱為重疊綜合征。重疊綜合征的主要癥狀為嚴(yán)重低氧血癥，易引發(fā)肺動(dòng)脈高壓、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病等。研究表明，微顆粒具有促凝、促炎、收縮血管、調(diào)節(jié)免疫等生物學(xué)功能，與血管性疾病、癌癥、糖尿病等疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[1]。本研究探討了重疊綜合征患者血漿血小板微顆粒(PMP)和內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(EMP)水平變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年1月江漢大學(xué)附屬醫(yī)院收治的重疊綜合征患者58例(重疊綜合征組)，男45例、女13例，年齡46～63(54.25±7.12)歲，睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)>5～≤15次/h 28例、>15～≤30次/h 20例、>30次/h 10例，氧合指數(shù)(PO2/FiO2)為(253.2±47.8)mmHg，乳酸為(1.51±1.05)mmol/L，肺功能：FEV1為(61.83±7.28)%、FEV1/FVC為(60.31±9.85)%。入院后常規(guī)給予低流量吸氧、補(bǔ)液、抗感染、平喘、祛痰及BiPAP呼吸機(jī)治療3個(gè)月。同期選取我院收治的單純慢阻肺患者72例(慢阻肺組)，男53例、女19例，年齡47～62(54.90±7.18)歲。單純呼吸暫停綜合征患者60例(呼吸暫停綜合征組)，男44例、女16例，年齡46～64(55.64±8.06)歲。三組性別、年齡具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①慢阻肺診斷符合2013年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《慢性阻塞性肺疾病診治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；②呼吸暫停綜合征診斷符合2011年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，其中AHI>5～≤15次/h為輕度、>15～≤30次/h為中度、>30次/h為重度；③重疊綜合征同時(shí)符合慢阻肺和呼吸暫停綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)；④能配合完成肺功能檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個(gè)月內(nèi)使用激素治療；②合并其他肺部疾病，如支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張癥、肺纖維化、肺結(jié)核和胸腔積液等；③合并心肌病、心力衰竭、急慢性腎病、高血壓、肝臟疾病和代謝性疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 血漿PMP、EMP檢測 慢阻肺組、呼吸暫停綜合征組于入院時(shí)，重疊綜合征組于入院時(shí)及治療3個(gè)月結(jié)束時(shí)分別抽取清晨空腹肘靜脈血6 mL，EDTA抗凝后，分別加入前列腺素E1(PGE1)11 μL和三磷酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase，Sigma公司)5 μL，400 g離心15 min收集富血小板血漿，以1 800 g離心15 min獲得無血小板血漿(PPP)，吸取上層血漿置于-80 ℃冰箱凍存。凍存后的PPP在0 ℃解凍，每管加入PPP 40 μL，分別與10 μL PE標(biāo)記的抗CD31抗體和抗CD41a抗體充分混合，避光孵育20 min，分別加入420 μL結(jié)合緩沖液及5 μL Annexin V抗體，充分混勻。流式細(xì)胞術(shù)測定血漿PMP、EMP。對(duì)照管選用5 μL鼠抗人IgG-PE，加入462 μL結(jié)合緩沖液、5 μL Annexin V抗體、1.5 μL 0.3 μm及1.5 μL 0.8 μm的標(biāo)準(zhǔn)微球，再加入5 μL絕對(duì)計(jì)數(shù)微球，混合后流式細(xì)胞術(shù)檢測。PMP、EMP的界定直徑為0.3～0.8 μm，表面標(biāo)記CD41a、Annexin V雙陽性或CD31、Annexin V雙陽性。讀取10 000個(gè)微粒數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)熒光微球計(jì)數(shù)PMP、EMP水平，單位為個(gè)/μL。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿PMP、EMP水平比較 重疊綜合征組入院時(shí)血漿PMP、EMP水平均高于呼吸暫停綜合征組和慢阻肺組(P均<0.05)，呼吸暫停綜合征組血漿EMP水平高于慢阻肺組(P<0.05)。見表1。重疊綜合征組AHI>30次/h者入院時(shí)血漿EMP、PMP水平均高于AHI>5～≤15次/h和AHI>15～≤30次/h者(P均<0.05)，AHI>15～≤30次/h者血漿EMP、PMP水平均高于AHI>5～≤15次/h者(P均<0.05)。見表2。重疊綜合征組治療后血漿EMP、PMP水平均低于治療前(P均<0.01)。見表3。

表1 三組入院時(shí)血漿PMP、EMP水平比較(個(gè)

注：與呼吸暫停綜合征組比較，△P<0.05;與慢阻肺組比較，*P<0.05。

2.2 重疊綜合征組血漿PMP、EMP水平與PO2/FiO2、乳酸、FEV1、FEV1/FVC的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，重疊綜合征組血漿EMP、PMP水平與PO2/FiO2均呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.734、-0.699，P均<0.01)，與乳酸水平均呈正相關(guān)(r分別為0.789、0.707，P均<0.01)；血漿EMP水平與FEV1、FEV1/FVC均呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.812、-0.766，P均<0.01)；血漿PMP水平與FEV1、FEV1/FVC均呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.749、-0.692，P均<0.01)。

表2 重疊綜合征組不同AHI者入院時(shí)血漿PMP、EMP水平比較(個(gè)

注：與AHI>5～≤15次/h者比較，*P<0.05；與AHI>15～≤30次/h者比較，△P<0.05。

表3 重疊綜合征組治療前后血漿PMP、EMP水平比較(個(gè)

注：與治療前比較，*P<0.01。

3 討論

循環(huán)微顆粒是細(xì)胞受到刺激后從胞質(zhì)膜表面脫落的顆粒，其含有的親本細(xì)胞抗原可反映親本細(xì)胞的狀態(tài)和特性；還可通過調(diào)節(jié)NO和產(chǎn)生前列環(huán)素對(duì)血管內(nèi)皮功能和炎癥反應(yīng)起重要作用，并通過刺激細(xì)胞因子的釋放及誘導(dǎo)細(xì)胞因子在內(nèi)皮細(xì)胞中的基因表達(dá)，來調(diào)節(jié)單核細(xì)胞趨化性與內(nèi)皮細(xì)胞黏附[4]。目前認(rèn)為，循環(huán)微顆粒的生物學(xué)活性(如細(xì)胞間生物信號(hào)傳導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)、血管生成和組織修復(fù)等)與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[5]。EMP主要通過內(nèi)皮細(xì)胞的活化或凋亡產(chǎn)生，其表面表達(dá)的相關(guān)分子受體使其具有不同的生物學(xué)活性，在血栓形成、血管生成、炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)血管張力等方面具有重要作用[6]。有研究表明，注射EMP可引起大鼠急性肺損傷，其作用機(jī)制可能為促進(jìn)炎癥因子、過氧化物酶釋放，上調(diào)IL-1β、TNF-α等表達(dá)，使中性粒細(xì)胞聚集和激活，加重炎癥反應(yīng)[7]。此外，在惡性腫瘤、膿毒癥、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等患者體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)PMP水平顯著升高[8]。研究發(fā)現(xiàn)，不管是血漿分離還是血小板刺激產(chǎn)生的PMP，均可作用于不同的細(xì)胞，促使其產(chǎn)生黏附分子、釋放細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)血管反應(yīng)性、誘導(dǎo)血管生成、促進(jìn)腫瘤生長，亦可促使內(nèi)皮細(xì)胞及單核細(xì)胞黏附，增加環(huán)氧合酶2表達(dá)，從而加重炎癥反應(yīng)[9]。

研究發(fā)現(xiàn)，重疊綜合征患者病情進(jìn)展較單純慢阻肺或呼吸暫停綜合征患者更快[10]。重疊綜合征與慢阻肺、呼吸暫停綜合征有共同的發(fā)病誘因，如吸煙。吸煙不僅是慢阻肺發(fā)病的高危因素，亦與呼吸暫停綜合征的病情嚴(yán)重程度有關(guān)[11]。低氧血癥是慢阻肺和呼吸暫停綜合征共同的病變基礎(chǔ)，重疊綜合征患者肺動(dòng)脈高壓、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病等并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較單純慢阻肺或呼吸暫停綜合征者顯著增加，其主要死因?yàn)樾难芗膊12]。Li等[13]研究發(fā)現(xiàn)，香煙提取物不僅可誘導(dǎo)微粒釋放，還能促使具有促微粒蛋白水解活性的MMP14從巨噬細(xì)胞釋放。Gordon等[14]研究發(fā)現(xiàn)，煙草可增加循環(huán)微顆粒水平，吸煙的健康者循環(huán)系統(tǒng)EMP輕度增加，早期肺氣腫可能與血漿EMP水平升高密切相關(guān)。EMP水平與肺組織破壞程度及氣流受限明顯相關(guān)。內(nèi)皮損傷是慢阻肺重要的病理生理過程，微顆粒特別是EMP可作為慢阻肺內(nèi)皮損傷的生物學(xué)標(biāo)記物[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，EMP與肺動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度呈正相關(guān)，二者均可作為肺動(dòng)脈高壓患者隨訪評(píng)估的非入侵性檢查[16]。Maruyama等[17]報(bào)道，重度呼吸暫停綜合征患者血漿PMP水平較健康者及輕中度呼吸暫停綜合征者明顯升高，且可能與重度呼吸暫停綜合征者心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高相關(guān)，在應(yīng)用持續(xù)氣道正壓通氣治療后，血漿PMP水平會(huì)隨之下降。本研究重疊綜合征組血漿EMP、PMP水平均明顯高于呼吸暫停綜合征組和慢阻肺組，且呼吸暫停綜合征組血漿EMP水平明顯高于慢阻肺組；重疊綜合征組AHI>30次/h者血漿EMP、PMP水平均高于AHI>5～≤15次/h和AHI>15～≤30次/h者；提示血漿EMP、PMP水平升高可促進(jìn)重疊綜合征的發(fā)生、發(fā)展。本研究重疊綜合征患者治療后血漿EMP、PMP水平明顯低于治療前，提示隨著機(jī)體缺氧狀態(tài)的改善，血漿EMP、PMP水平即隨之下降，二者水平變化可反映機(jī)體缺氧情況。重疊綜合征患者往往存在低灌注狀態(tài)，嚴(yán)重供氧不足導(dǎo)致組織細(xì)胞缺氧，代謝產(chǎn)物乳酸濃度升高。乳酸是反映組織灌注和氧供不足的早期敏感生化指標(biāo)，而PO2/FiO2可反映肺換氣功能[18]。本研究重疊綜合征組血漿EMP、PMP水平與乳酸水平呈正相關(guān)，與肺功能FEV1、FEV1/FVC及PO2/FiO2呈負(fù)相關(guān)，提示機(jī)體缺氧越嚴(yán)重，血漿EMP、PMP水平越高，即EMP、PMP水平與氣流受限明顯相關(guān)。

綜上所述，血漿EMP、PMP水平升高可促進(jìn)重疊綜合征的發(fā)生、發(fā)展，二者聯(lián)合檢測可判斷重疊綜合征患者病情和治療效果。

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武漢市醫(yī)療衛(wèi)生科研項(xiàng)目(WX15D57)。

李承紅(E-mail: 15827636399@163.com)

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1002-266X(2017)08-0086-03

2016-05-26)