黃 靈， 黃建敏， 李雪斌， 黃瑞雅， 蒙蘭青

雷公藤多甙對(duì)致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬Ng和PKC表達(dá)的影響

黃 靈， 黃建敏， 李雪斌， 黃瑞雅， 蒙蘭青

目的 研究雷公藤多甙(TWP)在戊四氮(PTZ)所致癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙中的干預(yù)作用及可能機(jī)制,探討神經(jīng)顆粒素(Ng)和蛋白激酶C(PKC)在癲癇大鼠海馬組織中的表達(dá)的影響。方法 通過(guò)水迷宮及Y迷宮篩選方式挑選學(xué)習(xí)記憶功能正常的SD大鼠90只，隨機(jī)分為PTZ致癇組、TWP低劑量組(TWP1)、TWP高劑量組(TWP2)、正常對(duì)照組，采用戊四氮(PTZ)腹腔注射慢性點(diǎn)燃癲癇。用水迷宮和Y迷宮對(duì)4組大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力檢測(cè)，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測(cè)其海馬組織Ng和PKC基因mRNA及相應(yīng)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 與PTZ組相比，TWP干預(yù)組大鼠在水迷宮中提高，其學(xué)習(xí)記憶能力接近NC組(P>0.05)；而4組逃避潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。在Y迷宮TWP干預(yù)組錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)比PTZ組明顯減少(P<0.05)，其行為能力接近NC組(P> 0.05)；但4組在全天總反應(yīng)時(shí)間上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)TWP干預(yù)后大鼠海馬Ng和PKC基因mRNA及相應(yīng)蛋白的表達(dá)上調(diào)，與PTZ組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，上調(diào)水平與NC組接近(P> 0.05)；而TWP1和TWP2兩組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 TWP可有效改善PTZ所致癲癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，這與上調(diào)大鼠海馬組織Ng及PKC表達(dá)水平密切相關(guān)。

戊四氮； 癲癇； 神經(jīng)顆粒素； 蛋白激酶C； 雷公藤多甙

反復(fù)癲癇發(fā)作患者常伴有學(xué)習(xí)及記憶能力等認(rèn)知功能的障礙，嚴(yán)重的影響了生活質(zhì)量。因此，研究反復(fù)癲癇發(fā)作致學(xué)習(xí)記憶障礙的發(fā)病機(jī)制和探索治療癲癇的新藥物及新方法成為目前癲癇研究中的熱點(diǎn)。Ng作為PKC磷酸化功能的作用底物，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、改變突觸可塑性并在學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用[1]。20世紀(jì)70年代以后，雷公藤多甙具有較強(qiáng)的抗炎、免疫抑制作用，且能通過(guò)血腦屏障，已成功用于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等自身免疫性炎癥性疾病,且已廣泛應(yīng)用于臨床，獲得了良好的療效，引起國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界的高度重視[2]。目前關(guān)于雷公藤多甙干預(yù)癲癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶是否有效尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬雷公藤多甙在戊四氮所致癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙中的干預(yù)作用及可能機(jī)制,及探討Ng和PKC在癲癇大鼠海馬組織中的表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠(n=105)購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，大鼠鼠齡為3個(gè)月，SPF等級(jí)，平均體重為(200±10)g，分籠飼養(yǎng)，條件為：12 hrs光亮/黑暗條件、20 ℃～25 ℃環(huán)境溫度。

1.1.2 主要試劑及儀器 雷公藤多甙(浙江得恩制藥有限公司)、DNTP(大連寶生物Takara)、引物(大連寶生物Takara)、總RNA抽提試劑盒(天根生化科技有限公司)、大鼠蛋白激酶C(PKC)試劑盒(武漢華美生物工程工程有限公司)、神經(jīng)顆粒素(Ng)試劑盒 (武漢華美生物工程工程有限公司)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI 7500)、紫外分光光度計(jì)(美國(guó)BIO-Rad)、Morris水迷宮(參照宿寶貴實(shí)驗(yàn)自制)、Y迷宮(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠)等。

1.2 方 法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及制備動(dòng)物模型 挑選經(jīng)水迷宮和Y迷宮實(shí)驗(yàn)合格的大鼠90只進(jìn)入研究，將所選取的大鼠機(jī)隨分為4組：PTZ致癇組(PTZ組，n=25)、TWP低劑量組(TWP1組，n=25)、TWP高劑量組(TWP2組，n=25)及正常對(duì)照組(NC組，n=15)，其中前3組為癲癇模型，采用PTZ腹腔注射方式誘導(dǎo)，劑量為35 mg/kg·d，每日晨8：00-9：00一次性給藥，連續(xù)用藥28 d；在3組癲癇模型中，TWP1和TWP2組接受TWP干預(yù)處理，即在PTZ給藥前30 min，分別給予10 mol/kg·d和30 mmol/kg·d TWP(融于羧甲基纖維素鈉)進(jìn)行灌胃處理，共用28次。而NC組為非癲癇模型，僅進(jìn)行生理鹽水處理，劑量與給藥方式同癲癇模型組PTZ。

觀察所有大鼠在每次注射給藥后1 h內(nèi)的行為變化。根據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將其行為分為6級(jí)，具體如下：0級(jí)，無(wú)任何反應(yīng)，呈正常的行為狀態(tài)；Ⅰ級(jí)，濕狗樣抖動(dòng)、面肌痙攣如眨眼、動(dòng)須及節(jié)律性咀嚼；Ⅱ級(jí)，頸部肌肉痙攣表現(xiàn)為點(diǎn)頭和(或)甩尾；Ⅲ級(jí)，一側(cè)前肢陣攣；Ⅳ級(jí)，雙側(cè)前肢陣攣伴站立；Ⅴ級(jí)，全身陣攣，失去平衡，跌倒。在第29～33天和第34～35天，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相繼進(jìn)行水迷宮及Y迷宮測(cè)試以分析學(xué)習(xí)記憶能力；在第36天，通過(guò)手術(shù)取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的海馬組織以檢測(cè)和分析Ng與PKC的基因及蛋白表達(dá)情況。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Ng和PKC mRNA的表達(dá)水平 用Trizol提取大鼠海馬組織的總RNA,紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。 再以SYBR Green體系為熒光標(biāo)記物，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。以β肌動(dòng)蛋白(β-action)為內(nèi)參照mRNA。PKC上游引物5’-AAATCCGGGCTCCCACATC-3’,下游引物5’-CGGGATGAGCTTCAGTTTCACATA-3’,擴(kuò)增片段116 bp；Ng上游引物5’-CCTGAACTACCACCCAGCATTG-3’，下游引物5’-TAGAATATCGTCGTCTGGCTTGGA-3’，擴(kuò)增片段134 bp。50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min預(yù)變性后，95 ℃ 15 s 和60 ℃ 60 s共40個(gè)循環(huán)。用2-△△CT法進(jìn)行相對(duì)定量分析。

1.2.3 ELISA法檢測(cè)Ng和PKC的蛋白表達(dá)水平 取海馬組織稱(chēng)重，把海馬組織剪切成細(xì)小的碎片，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟檢測(cè)Ng和PKC的蛋白的表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 在5個(gè)訓(xùn)練日中各組平均潛伏期的差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PTZ組大鼠的平均運(yùn)行時(shí)間較NC組顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，而正確率卻明顯降低(P<0.05)，說(shuō)明癲癇致使大鼠學(xué)習(xí)記憶能力顯著受損。在給予TWP干預(yù)處理后，癲癇大鼠運(yùn)行時(shí)間出現(xiàn)縮短(P<0.05)，而正確率提高(P<0.05)，但這種作用無(wú)劑量依賴(lài)關(guān)系(P>0.05)(見(jiàn)表1)。

2.2 Y迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 PTZ組大鼠的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)與NC組比較明顯升高(P<0.05)；TWP1組和TWP2組的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)與PTZ組比較明顯下降(P<0.05)，TWP1組和TWP2組與NC組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；TWP1組和TWP2組也無(wú)顯著性差異(P>0.05)。全天總反應(yīng)時(shí)間(total reaction time,TRT)4組分別為：4組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果提示癲癇大鼠的記憶成績(jī)降低，雷公藤多甙可以改善其學(xué)習(xí)記憶成績(jī)(見(jiàn)表2)。

2.3 各組大鼠海馬內(nèi)NgmRNA、PKC mRNA的表達(dá) 與NC組比較，PTZ組Ng與PKC基因的mRNA表達(dá)下調(diào)，但當(dāng)給予TWP干擾處理后，Ng與PKC表達(dá)開(kāi)始回升約50%～70%，接近正常，值得注意的是我們并沒(méi)發(fā)現(xiàn)TWP對(duì)PKC基因的mRNA表達(dá)調(diào)控的劑量依賴(lài)性(P>0.05)(見(jiàn)表3、表4)。

2.4 大鼠海馬Ng與PKC蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果 PTZ組較對(duì)照組Ng與PKC蛋白表達(dá)下調(diào)，在加入TWP后蛋白表達(dá)出現(xiàn)回調(diào)達(dá)1.5～1.7倍(P<0.05)，但TWP的上調(diào)Ng與PKC作用無(wú)劑量依賴(lài)性(P>0.05)(見(jiàn)表5)。

表1 水迷宮實(shí)驗(yàn)平均逃避潛伏期、平均運(yùn)行時(shí)間、正確率的比較(±s)

與NC組比較*P<0.05；TWP1及TWP2與PTZ組比較#P<0.05

表2 大鼠錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)和全天總反應(yīng)時(shí)間(±s)

與NC組比較*P<0.05；TWP1及TWP2與PTZ組比較#P<0.05

表3 各組大鼠海馬內(nèi)NgmRNA的相對(duì)含量比較(±s)

與NC組比較*P<0.05；TWP1及TWP2組與PTZ組比較#P<0.05

表4 各組大鼠海馬內(nèi)PKC mRNA的相對(duì)含量比較(±s)

與NC組比較*P<0.05；TWP1及TWP2組與PTZ組比較#P<0.05

表5 ELLSA檢測(cè)各組Ng與PKC含量(±s)

與NC組比較*P<0.05；TWP1及TWP2組與PTZ組比較#P<0.05

3 討 論

雷公藤多甙是從中藥雷公藤的根芯部分提取的有效成分，其主要含有雷公藤內(nèi)酯二醇(T8)、雷醇內(nèi)酯(T9)、雷公藤紅素及雷公藤氯內(nèi)酯醇(T4)，雷公藤多甙在保留了雷公藤生藥療效的同時(shí)安全性提高了一倍以上[3]。近年來(lái)，對(duì)雷公藤多甙的研究中，發(fā)現(xiàn)其可能具有改善學(xué)習(xí)記憶的作用。施麗艷等[4]發(fā)現(xiàn)在AD大鼠模型中，雷公藤紅素對(duì)認(rèn)知功能障礙具有明顯的保護(hù)作用。另外，研究已證實(shí)雷公藤多甙具有對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)損害的毒副作用，如抽搐和煩躁等。它的毒副作用的發(fā)生與損害的嚴(yán)重程度與雷公藤多甙提取物的劑量相關(guān)。鮑育華等[5]研究顯示,雷公藤紅素在60 μg/kg時(shí)具有神經(jīng)元保護(hù)作用,能夠改善手術(shù)創(chuàng)傷刺激引發(fā)的老年鼠認(rèn)知功能的降低。關(guān)于雷公藤提取物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)直接的毒理學(xué)研究目前尚無(wú)報(bào)道。但余昌胤[6]等研究發(fā)現(xiàn)雷公藤多甙能改善慢性腦低灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，這種作用在高劑量和低劑量間差異無(wú)顯著性意義。本實(shí)驗(yàn)采用檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶的理想方法水迷宮和Y迷宮，分別從空間學(xué)習(xí)記憶和逃避性記憶對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，結(jié)果表明在水迷宮中PTZ致癇組的學(xué)習(xí)記憶受損表現(xiàn)為運(yùn)行時(shí)間延長(zhǎng)、錯(cuò)誤次數(shù)增加，TWP1和TWP1較PTZ組運(yùn)行時(shí)間縮短、錯(cuò)誤次數(shù)減少，TWP1、TWP1之間無(wú)顯著性差異；在Y迷宮實(shí)驗(yàn)中PTZ致癇組錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)增多，雷公藤多甙干預(yù)各組較PTZ致癇組減少，TWP1和TWP1之間無(wú)明顯差異。行為學(xué)測(cè)試說(shuō)明結(jié)果戊四氮點(diǎn)燃慢性癲癇大鼠確實(shí)存在空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙，雷公藤多甙對(duì)大鼠腦組織損傷所造成的學(xué)習(xí)記憶障礙有保護(hù)作用，雷公藤多甙兩種劑量干預(yù)效果一致，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

Ng是神經(jīng)元特異性的突觸后膜蛋白,在大腦內(nèi)表達(dá)豐富，廣泛分布于海馬、前額皮質(zhì)、紋狀體和杏仁核等重要腦區(qū)，這些部位是學(xué)習(xí)和記憶功能重要的腦結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Ng基因敲除小鼠在健康狀態(tài)、神經(jīng)反射、感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)方面表現(xiàn)正常，但在學(xué)習(xí)、記憶及PKC細(xì)胞信號(hào)系統(tǒng)等方面明顯受損[7]。徐天勇等[8]發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激致使皮質(zhì)、海馬、下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞Ng蛋白含量下降，進(jìn)而致使神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量減少伴突棘數(shù)量減少，突觸可塑性的損害造成大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期延長(zhǎng)，外顯為學(xué)習(xí)記憶能力的降低。

蛋白激酶C是一組具有單一肽鏈結(jié)構(gòu)的絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶，是機(jī)體細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié)，它廣泛分布于哺乳動(dòng)物各種組織中，其中以腦組織中含量最豐富[9]。PKC家族調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化、神經(jīng)發(fā)生和中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等一系列過(guò)程，己經(jīng)證實(shí)其在突觸可塑性、長(zhǎng)時(shí)程記憶增強(qiáng)和長(zhǎng)時(shí)程記憶減低過(guò)程中起重要作用[10]。Ng與PKC有密切的關(guān)系。Ng作為PKC的天然作用底物，生理狀態(tài)下，Ng與CaM結(jié)合形成復(fù)合體，當(dāng)神經(jīng)沖動(dòng)引起NMDAR活化，使與受體偶聯(lián)的Ca2+通道開(kāi)放時(shí)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，Ng與CaM復(fù)合體解離，游離的Ng被PKC磷酸化，磷酸化的Ng與CaM的親和力降低，使細(xì)胞內(nèi)的Ca2+與CaM復(fù)合體濃度增加，進(jìn)而激活Ca2+和CaM依賴(lài)性酶，如CaMKII等，而這些酶大都參與LTP的誘導(dǎo)和維持[11]。

我們用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的方法，從觀察癲癇后海馬Ng及PKC的mRNA和蛋白表達(dá)變化入手，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癲癇后PTZ組海馬區(qū)Ng和PKC的mRNA水平下降，蛋白表達(dá)減少，Ng的結(jié)果與國(guó)內(nèi)研究一致[12]。推測(cè)癲癇發(fā)作后導(dǎo)致缺血、缺氧、水腫以及興奮性氨基酸毒性等，鈣泵功能受損，不能泵出胞漿內(nèi)過(guò)多Ca2+，導(dǎo)致神經(jīng)元鈣超載。鈣超載在癲癇腦損傷中起著關(guān)鍵性作用[13]，病理狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)鈣超載可造成一系列代謝紊亂[14]。鈣穩(wěn)態(tài)的失衡導(dǎo)致PKC的活性降低，PKC的水平也降低，使Ng的磷酸化和去磷酸化失衡，胞內(nèi)游離CaM減少，進(jìn)而影響CaM與Ca2+的結(jié)合，這樣也影響了包括LTP形成的重要蛋白激酶-CaMKⅡ；Ng表達(dá)的降低也影響了與之結(jié)合的CaM，CaMKⅡ的活性也可能受到影響；而CaMKⅡ的表達(dá)降低會(huì)直接影響CaMKⅡ的活性。由此推測(cè)這些因素有可能引起CaMKⅡ的活性下降，抑制了LTP的形成，從而造成學(xué)習(xí)記憶功能的障礙。為更深入了解雷公藤多甙對(duì)Ng和PKC基因的mRNA和蛋白表達(dá)調(diào)控的有無(wú)劑量依賴(lài)性，本實(shí)驗(yàn)用雷公藤多甙干預(yù)癲癇大鼠采用低劑[10 mmol/(kg·d)]和高劑量[30mmol/(kg·d)]兩種劑量。結(jié)果顯示TWP1和TWP2 Ng和PKC的mRNA及蛋白表達(dá)較PTZ組升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在TWP1組和TWP2組間差異無(wú)顯著性意義，且水平接近NC組。推測(cè)其機(jī)制可能是雷公藤多甙降低TNF-α、核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)的釋放，阻止鈣超載，保護(hù)海馬[Ca2+]i水平，增強(qiáng)Ng和PKC的mRNA及蛋白表達(dá)水平，LTP得以形成，促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶功能好轉(zhuǎn)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TWP1組和TWP2組大鼠的Ng和PKC的mRNA及蛋白表達(dá)差異無(wú)顯著性，推測(cè)雷公藤多甙10 mmol/(kg·d)已達(dá)到改善癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的最大劑量。觀察其治療效果，探討雷公藤多甙改善癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的最佳有效劑量，并進(jìn)一步完善相關(guān)作用機(jī)制的研究，為雷公藤多甙治療反復(fù)癲癇后認(rèn)知功能障礙提供理論基礎(chǔ)。另外，實(shí)驗(yàn)中觀察到，TWP1組和TWP2組并不能抑制癲癇大鼠的發(fā)作，且高劑量組大鼠癲癇發(fā)作數(shù)較低劑量高，推測(cè)這可能與雷公藤多甙的神經(jīng)系統(tǒng)毒副作用有關(guān)，也說(shuō)明雷公藤多甙10 mmol/(kg·d)已達(dá)到改善癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的最大劑量。

綜上所述，雷公藤多甙對(duì)改善癲癇所致學(xué)習(xí)記憶能力的障礙具有一定的防治作用，其機(jī)制可能雷公藤多甙與增強(qiáng)Ng和PKC的mRNA及蛋白表達(dá)水平，LTP得以形成，進(jìn)而促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力好轉(zhuǎn)。

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HUANGLing,HUANGJianmin,LIXuebin,etal.

(DepartmentofInternalNeurology,AffiliatedHospitalOfYoujiangMedicalUniwersityForNationalities,Guangxi533000,China)

Objective To investigate the roles of Tripterygium Wilfordii Polyglycoside (TWP) in the learning and memory of rats having epileptisy induced by pentylenetetrazole (PTZ) and the effects of Neurogranin (Ng) and Protein Kinase C (PKC) expression and to explore the possible association among TWP,PTZ,and epileptisy.Methods Through the water maze and Y maze were selected with normal learning and memory function of 90 SD rats were randomly divided into PTZ group,TWP of epilepsy induced by low dose group(TWP1),high dose of TWP group(TWP2) and normal control group,and with four nitrogen (PTZ) by intraperitoneal injection of chronic model epilepsy.Water maze and Y maze learning and memory ability of detection of 4 groups of rats by using real-time fluorescence quantitative PCR and enzyme-linked immunosorbent assay for the expression levels of Ng and PKC gene mRNA in the hippocampus and the corresponding protein were detected respectively.Results Compared with the PTZ group,the rats in the TWP intervention group improved their learning and memory ability close to the NC group (P>0.05),while the groups had no significant difference between the four groups(P>0.05).In the Y maze,the TWP intervention group was significantly less than the PTZ group (P<0.05),and its behavioral ability was close to the NC group (P>0.05),but the difference was not statistically significant (P>0.05) in the total response time of the four groups.The expression of Ng and mRNA in hippocampus of rat PKC gene and corresponding protein TWP after the intervention,compared with PTZ group,the difference was statistically significant (P<0.05),raised the level and close to group NC (P>0.05);while there was no significant difference in TWP1 and TWP2 between the two groups (P>0.05).Conclusion These results suggested that TWP might be able to effectveily improve the learning and memory abiligy of rats featuring epileptisy,possibly correlated with the up-regulation of Ng and PKC gene in the hippocampuse tissues.

PTZ; Epilepsy; Ng; PKC; TWP

1003-2754(2017)02-0122-04

2016-10-11；

2016-11-28

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No. 81160165)；右江民族醫(yī)學(xué)院院級(jí)課題(No.200958);廣西桂西高發(fā)病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目資助(桂教科研2014)6號(hào)；廣西臨床重點(diǎn)專(zhuān)科項(xiàng)目資助(桂教科研2013)16號(hào)

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西 百色 533000)

黃建敏，E-mail：bshuangjianmin@126.com

R742.1

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