王克猛 魏世平

·論著·

Notch1及P16在軟骨肉瘤中的表達(dá)及臨床意義

王克猛 魏世平

目的 觀察軟骨肉瘤中Notch1蛋白及P16蛋白的表達(dá)情況，探討其在軟骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。方法 選取軟骨肉瘤46例，骨軟骨瘤18例及正常骨組織10例。以SP法檢測(cè)組織中Notch1及P16蛋白表達(dá)的情況。結(jié)果 Notch蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒。在骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中Notch1的陽性表達(dá)率明顯高于正常軟骨組織(P<0.05)，軟骨肉瘤中Notch1的陽性表達(dá)率明顯高于骨軟骨瘤(P<0.05)。Notch1蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 不同組織學(xué)分級(jí)的軟骨肉瘤中的陽性表達(dá)率隨分化程度降低逐漸增高(P<0.05)。P16蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞核或/和細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒出現(xiàn)。P16蛋白在正常軟骨組織及骨軟骨瘤中的均為陽性表達(dá)，在軟骨肉瘤中陽性表達(dá)率為39.1%(18/46)。軟骨肉瘤組織中P16蛋白陽性表達(dá)率明顯低于其他兩種組織(P<0.05)。不同組織學(xué)分級(jí)軟骨肉瘤中P16蛋白的陽性表達(dá)率分別為68.8%(11/16)、30%(6/20)和20%(1/10)，陽性表達(dá)率隨分化程度越低而降低(P<0.05)。Notch1及P16蛋白的表達(dá)情況與患者的性別、年齡、體積大小及腫瘤發(fā)生部位均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Notch1蛋白高表達(dá)、P16蛋白低表達(dá)可能協(xié)同促進(jìn)軟骨肉瘤的惡性細(xì)胞的增殖能力，在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展起著重要的作用，為進(jìn)一步的研究和臨床治療提供病理學(xué)依據(jù)。

Notch1蛋白；P16蛋白；軟骨肉瘤；免疫組織化學(xué)

軟骨肉瘤(chondrosarcoma，CHS)是一類起源于間質(zhì)細(xì)胞具有多分化潛能的惡性骨腫瘤，起源于軟骨組織的惡性腫瘤，以產(chǎn)生軟骨基質(zhì)為特征[1,2]。Evans等[3]根據(jù)軟骨肉瘤的惡性程度將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)三類，即惡性程度為低、中、高。軟骨肉瘤細(xì)胞對(duì)放療、化療等手段都不太敏感，在手術(shù)切除后非常復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[4]。本研究通過免疫組織化學(xué)SP 法研究Notch及P16蛋白在軟骨肉瘤中表達(dá)情況，探討其臨床意義，以期為軟骨肉瘤的分子靶向治療提供新的標(biāo)記物，改善患者預(yù)后。軟骨肉瘤的分子靶向治療具有特異性高、損傷小、毒副作用小的特點(diǎn)，已成為繼手術(shù)、放療和化療之后的新的治療手段。因此，尋找可用于治療軟骨肉瘤的靶點(diǎn)對(duì)于軟骨肉瘤的治療具有十分重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取邢臺(tái)醫(yī)專第一附屬醫(yī)院病理科2008年3月至2014年3月期間手術(shù)切除經(jīng)病理明確診斷為軟骨肉瘤的存檔病例，復(fù)習(xí)原切片及免疫組織化學(xué)資料，根據(jù)2002年WHO軟組織與骨腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)[5]，經(jīng)兩位資深骨病理醫(yī)師閱片確定，篩選出普通型軟骨肉瘤46例，其中男25例，女21例；患者年齡5～83歲，中位年齡43.7歲；發(fā)生部位：股骨27例，髖骨(髂骨、恥骨、坐骨)11例，其他部位8例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)16例、Ⅱ級(jí)20例、Ⅲ級(jí)10例；所有患者為散發(fā)病例，且為初次手術(shù)，術(shù)前均未經(jīng)放射治療或化療。另外選取骨軟骨瘤18例及正常軟骨組織10例作為對(duì)照。

1.2 方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)取材、脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，連續(xù)切片，貼于涂有APES的載玻片，用SP法進(jìn)行免疫組織化學(xué)法染色。兔抗人Notch1多克隆抗體試劑盒、鼠抗人P16單克隆抗體試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，免疫組化染色按試劑盒操作說明進(jìn)行，染色過程中設(shè)陽性和陰性對(duì)照，陽性對(duì)照用已知陽性切片，陰性對(duì)照采用PBS代替一抗。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) (1)Notch1蛋白陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿上，表現(xiàn)為細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒出現(xiàn)。顯微鏡下盲法閱片，400×高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野(向同一方向移動(dòng)切片，不重復(fù)，不重疊)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果按照文獻(xiàn)采用以下判斷標(biāo)準(zhǔn)。以各視野中陽性細(xì)胞的平均百分?jǐn)?shù)進(jìn)行計(jì)分。0～5%為0分；6%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分。(2)染色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特征為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分。細(xì)胞未著色為0分，染色呈淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。最后以陽性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度計(jì)分之和所得總分進(jìn)行結(jié)果判定。0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)， 4～5分以上為強(qiáng)陽性(++)[6]。(3)P16蛋白免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)為棕黃色和(或)棕褐色顆粒，陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核或(和)細(xì)胞漿上，400×高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野(向同一方向移動(dòng)切片，不重復(fù)，不重疊)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，觀察陽性細(xì)胞與細(xì)胞總數(shù)的比例關(guān)系。無陽性細(xì)胞為陰性(-)；表達(dá)≤50%為陽性(+)；>51%為強(qiáng)陽性(++)[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1Notch1蛋白免疫組化表達(dá)情況Notch蛋白陽性表達(dá)特征為細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒。在骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中Notch1的陽性表達(dá)率明顯高于正常軟骨組織(P<0.05)，軟骨肉瘤中Notch1的陽性表達(dá)率明顯高于骨軟骨瘤(P<0.05)。Notch1蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 不同組織學(xué)分級(jí)的軟骨肉瘤中的陽性表達(dá)率隨分化程度降低逐漸增高(P<0.05)。見圖1，表1、2。

圖1 Notch1在骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中的表達(dá)HE (IHC×400)

表1 Notch1在正常軟骨組織、骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中的表達(dá) 例

注：與正常軟骨組織比較,*P<0.05；與骨軟骨瘤比較，#P<0.05

表2 Notch1在不同分化程度的軟骨肉瘤中的表達(dá) 例

注：與Ⅰ級(jí)比較，*P<0.05；與Ⅱ級(jí)比較，#P<0.05

2.2P16蛋白免疫組化表達(dá)情況P16蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞核或(和)細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒出現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)中P16蛋白在正常軟骨組織及骨軟骨瘤中的均為陽性表達(dá)情，在軟骨肉瘤中陽性表達(dá)率為39.1%(18/46)。軟骨肉瘤組織中P16蛋白陽性表達(dá)率明顯低于其他兩種組織(P<0.05)。不同組織學(xué)分級(jí)軟骨肉瘤中P16蛋白的陽性表達(dá)率分別為68.8%(11/16)、30%(6/20)和20%(1/10)，陽性表達(dá)率隨分化程度越低而降低(P<0.05)。見圖2，表3、4。

2.3Notch1及P16蛋白與軟骨肉瘤主要臨床病理資料間的關(guān)系Notch1及P16蛋白的表達(dá)情況與患者的性別、年齡、體積大小及腫瘤發(fā)生部位均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

3 討論

Notch信號(hào)是一個(gè)進(jìn)化中高度保守的跨膜受體信號(hào)通路家族，其所編碼的單鏈跨膜受體蛋白，其所編碼的單鏈跨膜受體蛋白在細(xì)胞的分化、個(gè)體發(fā)育的中起著關(guān)鍵作用，從無脊椎動(dòng)物到脊椎動(dòng)物等多種物種的細(xì)胞中均有表達(dá)，廣泛分布和表達(dá)在多種組織中。其家族成員重要作用之一是調(diào)控細(xì)胞的發(fā)育和凋亡，以及調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、成人器官的干細(xì)胞，也可以被惡性腫瘤激活[8]。目前，在脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了Notch1、Notch2、Notch3和Notch4同源體，其中Notch1蛋白是主要的受體[9]。Notch1信號(hào)通路主要作用于細(xì)胞的分化發(fā)育、增殖凋亡等，而且某些腫瘤的發(fā)生和發(fā)展也與Notch1信號(hào)通路密切相關(guān)。

圖2 P16在骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中的表達(dá)HE (IHC×400)

表3 P16在正常軟骨組織、骨軟骨瘤及軟骨肉瘤中的表達(dá) 例

注：與軟骨肉瘤比較,*P<0.05

表4 P16在不同分化程度的軟骨肉瘤中的表達(dá) 例

注：與Ⅰ級(jí)比較，*P<0.05；與Ⅱ級(jí)比較，#P<0.05

表5 CDK4、P16的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 例

Notch1信號(hào)蛋白編碼一種膜蛋白受體，通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、增殖和分化多效性作用的信號(hào)途徑調(diào)節(jié)多細(xì)胞動(dòng)物的形態(tài)發(fā)育和形成?！叭降鞍踪|(zhì)水解模式”是Notch信號(hào)傳導(dǎo)通路中重要的分子事件，當(dāng)其配體與受體結(jié)合后誘導(dǎo)受體蛋白水解，Notch蛋白從膜上釋放的活化形式為NICD，NICD進(jìn)入核內(nèi)后，其RAM區(qū)以及CSL蛋白、MAml蛋白結(jié)合后形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，與下游su(H)/CBF1家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)它們的活性，在細(xì)胞分化的起始過程中發(fā)揮著精確調(diào)控作用。

P16基因定位于9p21，是一種抑癌基因，定位于9p21。P16的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物由外顯子1a、2、和3構(gòu)成，編碼P16(INK4A)蛋白，它與P15(INK4B)、P18(INK4C)及P19(ARF)共同組成INK4(細(xì)胞周期依賴性激酶抑制劑)家族，在正常細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用，與細(xì)胞分化及預(yù)后有關(guān)。P16作為細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制劑，它在細(xì)胞周期的許多調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)處起到一個(gè)閘的作用，P16蛋白與CyclinD競(jìng)爭(zhēng)性特異性結(jié)合細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK4及其相關(guān)激酶CDK6相互作用，抑制Rb磷酸化，在Gl期(DNA合成前期)阻止細(xì)胞分裂，從而抑制細(xì)胞周期從G1進(jìn)入S期，對(duì)細(xì)胞增殖周期起負(fù)性調(diào)節(jié)作用[10]。當(dāng)P16基因出現(xiàn)異常改變、缺失或突變以及功能喪失時(shí)，它可抑制CyclinD-CDK4的活性，使細(xì)胞周期加速，DNA在還沒修復(fù)前就迅速從G1期進(jìn)入S、G2、M期，細(xì)胞過度增殖從而導(dǎo)致細(xì)胞失控性生長(zhǎng)和腫瘤的形成[11]。

Notch1蛋白可以使許多實(shí)體瘤及血液系統(tǒng)腫瘤異常表達(dá)，促使正常細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化，已經(jīng)在很多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。在乳腺癌中低分化、分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腦轉(zhuǎn)移相關(guān)[12]都與Notch1蛋白的高表達(dá)密切相關(guān)。Notch蛋白信號(hào)通路過表達(dá)可能參與胃黏膜的癌變過程[13]，Notch1蛋白在胃癌中表達(dá)明顯高于正常胃組織，李大衛(wèi)等[14]研究發(fā)現(xiàn)，Notch1蛋白的高表達(dá)并與腫瘤的大小、分化程度、浸潤(rùn)深度、脈管浸潤(rùn)程度密切相關(guān)。在食管癌、舌癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌和非小細(xì)胞肺癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞中Notch1蛋白都呈高表達(dá)[15-17]。Notch1蛋白并不是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素，其作用與腫瘤及其他信號(hào)通路的影響有密切聯(lián)系[18]，在不同的腫瘤微環(huán)境中，可能會(huì)促進(jìn)或抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展。非浸潤(rùn)性膀胱癌中的患者的預(yù)后不良與Notch1的低表達(dá)密切相關(guān)[19]。在食管鱗癌中則可能是一種抑癌基因[20]。在食管癌、胃腸癌、肺癌、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞瘤、鼻咽癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤等多種惡性腫瘤中P16基因異常表達(dá)，P16蛋白的失活，與惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[21-25]。

該研究結(jié)果顯示，Notch1蛋白的陽性表達(dá)率在軟骨肉瘤、骨軟骨瘤及正常軟骨組織3組間逐漸增高，組間差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。軟骨肉瘤中Notch1蛋白陽性表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，軟骨肉瘤分級(jí)的升高，Notch1的陽性表達(dá)率越高，提示其增高可能促進(jìn)軟骨肉瘤的惡性增殖能力提高。P16蛋白在本實(shí)驗(yàn)正常軟骨組織及骨軟骨瘤標(biāo)本均是陽性表達(dá)，而在軟骨肉瘤中的陽性表達(dá)率為39.1%，且分化程度越低P16蛋白陽性表達(dá)率也隨之降低(P<0.05)。提示P16蛋白失活、Notch1過表達(dá)與軟骨肉瘤的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)，使細(xì)胞獲得無限增殖能力，向惡變發(fā)展，為軟骨肉瘤進(jìn)一步的研究和臨床治療提供病理學(xué)依據(jù)。

1ChowWA.Updateonchondrosareomas.CurrOpinOncol,2007,19:371-376．

2RozemanLB,HogendoomPC,BoveeJV.Diagnosisandprognosisofchondrosarcomaofbone.ExpertRevMolDiagn,2002,2:461-472.

3EvansHL,AyalaAG,RomsdahlMM.Prognosticfactorsinchondrosareomaofbone:aclinicopathologicanalysiswithemphasisonhistologicgrading.Cancer,1977,40:818-831.

4SakimuraR,TanakaK,YamamotoS,etal.Theeffectsofhistonedeacetylaseinhibitorsontheinductionofdifferentiationinchondrosarcomacells.ClinCancerRes,2007,13:275-282.

5LeethanakulC,PatelV,GillespieJ,etal.Distinctpatternofexpressionofdifferentiationandgrowth-relatedgenesinsquamouscellcarcinomasoftheheadandneckrevealedbytheuseoflasercapturemicrodissectionandcDNAarrays.Oncogene,2000,19:3220-3224.

6 姜昕,周建華.鄧征浩非小細(xì)胞肺癌中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1mRNA的表達(dá)及意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2008,7,24:276-279.

7 郭成學(xué).P16蛋白與軟骨肉瘤臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系.中原醫(yī)刊,2006,9,33:84-85.

8IzrailitJ,ReediikM.Developmentalpathwaysinbreastcancerandbreasttumor-initiatingcells:therapeuticimplications.CancerLett,2012,317:115-126.

9MaD,DongX,ZangS,etal.AberrantexpressionandclinicalcorrelationofNotchsignalingmoleculesinbreastcancerofChinesepopulation.AsiaPacJClinOncol,2011,7:385-391.

10ZavoralM,MinarikovaP,ZavadaF,etal.Molecularbiologyofpancreaticcancer.WorldJGastroenterol,2011,17:2897-2908.

11LiJ,PoiMJ,TsaiMD.RegulatorymechanismsoftumorsuppressorP16(INK4A)andtheirrelevancetocancer.Biochemistry,2011,50:5566-5582.

12IzrailitJ,BermanHK,DattiA,etal.HighthroughputkinaseinhibitorscreensrevealTRB3andMAPK-ERK/TGFpathwaysasfundamentalNotchregulatorsinbreastcancer.ProcNatlAcadSci,2013,110:1714-1719.

13 楊曉東,張輝,白志剛.Notch信號(hào)通路在胃癌組織中的表達(dá)及其意義,中華普通外科雜志,2009,24:146-148.

14 李大衛(wèi),吳晴,彭志海,等.組織芯片研究Notch1與NF-κB在胃癌中的表達(dá)和意義.腫瘤,2007,27:458-461.

15SriuranpongV,BorgesMW,RaviRKetal.Notchsignalinginducescellcyclearrestinsmallcelllungcancercells.CancerRes,2001,61:3200-3205.

16TaloraC,CialfiS,SegattoO,etal.ConstitutivelyactiveNotch1inducesgrowtharrestofHPV-positivecervicalcancercellsviaseparatesignalingpathways.ExpCellRes,2005,305:343-354.

17 李鈺泉,周天駿,張惠忠.Notch1和Notch3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其意義.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2013,30:2714-2716.

18LiY,BumsJA,CheneyCA,etal.DistinctexpressionprofilesofNotch1proteininhumansolidtumors:Implicationsfordevelopmentoftargetedtherapeuticmonoclonalantibodies.Biologies,2010,4:163-171.

19 史濤坪,馬鑫.付斌.Notch信號(hào)通路基因在膀胱癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2010,27：1305-1307.

20 魯照明,劉紅濤,許培榮,等.Notch1信號(hào)途徑在食管鱗癌細(xì)胞株EC9706的作用研究.中國(guó)腫瘤臨床,2007,34:740-743.

21 陳新,平育敏,白世祥,等.P16和p53在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.實(shí)用腫瘤雜志,2004,19:23-27.

22 盧艷麗,范偉.癌基因c-myc和抑癌基因P16在大腸癌中的表達(dá).中國(guó)誤診學(xué)雜志,2004,4:1383-1385.

23 王慶國(guó),王峰,劉晶,等.p16蛋白在胃癌組織中的異常表達(dá)及其意義.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2005,31:921-923.

24 馮蓓,楊衛(wèi)衛(wèi),楊小平,等.p16基因在不同非小細(xì)胞肺癌之間的表達(dá)比較.陜西醫(yī)學(xué)雜志,2015,40:618-620.

25 劉嗣超,鄔晉芳.Survivin、MMP-2及p16蛋白在卵巢上皮癌中的表達(dá)及臨床意義.陜西醫(yī)學(xué)雜志,2015,44:497-499.

Expression and clinical significance of Notch1 and P16 in chondrosarcoma

WANGKemeng*,WEIShiping.

*DepartmentofOrthopedics,TheFirstAffiliatedHospitalofXingtaiMedicalCollege,Hebei,Xingtai054000,China

Objective To observe the expressions of Notch1 protein and P16 protein in chondrosarcoma in order to explore their action mechanism in the pathogenesis and and development of chondrosarcoma.Methods The expression levels of Notch1 protein and P16 protein were detected by immunohistochemistry (SP) in 46 cases of chondrosarcoma,18 cases of osteochondroma and 10 cases of normal cartilage tissues.Results The positive expression rate of Notch1 protein in osteochondroma and chondrosarcoma was significantly higher than that in normal cartilage tissues (P<0.05),moreover,thepositiveexpressionratesofNotch1proteininchondrosarcomawassignificantlyhigherthanthatinosteochondroma(P<0.05).ThepositiveexpressionrateofNotch1proteinwasgraduallyincreasedindifferenthistologicalgradesofchondrosarcoma(gradeⅠ,gradeⅡ,gradeⅢ),withthedecreaseofdifferentiationdegree(P<0.05).ThepositiveexpressionsofP16proteinwereobservedinnormalcartilagetissuesandinosteochondromatissues.ThepositiveexpressionrateofP16proteininchondrosarcomawas39.1% (18/46),whichwassignificantlylowerthanthatinosteochondromatissuesandinnormalcartilagetissues(P<0.05).ThepositiveexpressionrateofP16proteinindifferenthistologicalgradesofchondrosarcoma(gradeⅠ,gradeⅡ,gradeⅢ)was68.8% (11/16),30% (6/20),20% (1/10),respectively,whichwasgraduallydecreasedwiththedecreaseofdifferentiationdegree(P<0.05).TheexpressionsofNotch1proteinandP16proteinwerenotcorrelatedtopatient’sage,sex,tumorsize,tumorposition(P>0.05). Conclusion The high-expression of Notch1 protein and low-expression of P16 protein may synergistically promote the proliferation ability of chondrosarcomatous malignant cells,which may play an important role in the pathogenesis and development of chondrosarcoma,and the research results provide pathological basis for clinical treatment and further research.

Notch1 protein; P16 protein; chondrosarcoma; immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.06.005

054000 河北省邢臺(tái)市，邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院骨科(王克猛)；邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校(魏世平)

魏世平,054000 河北省邢臺(tái)市，邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校；

E-mail:weishiping2003@163.com

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1002-7386(2017)06-0822-04

2016-10-11)