裴銀輝 侯志宏 李 娟 劉亞楠

華北理工大學基礎醫(yī)學院 河北唐山 063000

免疫學實驗技術(shù)在生物醫(yī)學論文中的應用頻次分析

裴銀輝 侯志宏 李 娟 劉亞楠

華北理工大學基礎醫(yī)學院 河北唐山 063000

①目的 描述免疫學實驗技術(shù)在生物醫(yī)學論文中應用頻次，分析不同免疫學實驗技術(shù)的應用范圍。 ②方法 查閱2014～2016年發(fā)表的197種醫(yī)藥類期刊，每種期刊隨機選擇1期，對論文中應用的免疫技術(shù)進行分類，繪制使用頻數(shù)分布表。 ③結(jié)果 在查閱的6 286篇論文中，應用免疫學有關(guān)實驗技術(shù)的共2 017篇，占32.09%；其中以應用免疫分析的實驗技術(shù)最多；在應用的單項實驗技術(shù)中，以流式細胞術(shù)及酶免疫標記技術(shù)較為常見。④結(jié)論 流式細胞術(shù)及酶標記技術(shù)是目前免疫學技術(shù)應用頻次較多的方法。

免疫學 實驗技術(shù) 頻數(shù)分布

免疫學被譽為推動現(xiàn)代生物科學進步的三駕馬車之一， 其基本理論及實驗技術(shù)已逐漸滲透到基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學的各個學科。免疫學給疾病的預防、診斷和治療帶來了新的解釋和手段。近年來，隨著免疫學實驗手段的發(fā)展，免疫學實驗技術(shù)越來越多被應用于科研工作中。據(jù)統(tǒng)計，目前國內(nèi)外公開發(fā)表的醫(yī)藥類學術(shù)論文中應用免疫學技術(shù)者超過30%。本研究以2014版北京大學核心期刊目錄為依據(jù)，將2014

～2016年發(fā)表的197種醫(yī)藥類期刊納入檢索范圍，對論文中應用的免疫技術(shù)進行分類，并將在論文中應用的免疫學技術(shù)按照類型，繪制使用頻數(shù)分布表。

1 材料與方法

1.1 材料 本研究以2014版北京大學核心期刊目錄為依據(jù)，將2014～2016年發(fā)表的197種醫(yī)藥類期刊論文納入檢索范圍，每種期刊隨機抽取1期，將本期所有研究論文納入研究范圍，共查閱論文6 286篇。

1.2 免疫實驗技術(shù)分類 參照金伯泉主編《醫(yī)學免疫學》第六版(人民衛(wèi)生出版社)免疫學檢測技術(shù)中對免疫學實驗技術(shù)的分類，將常用免疫學實驗技術(shù)按照實驗原理，將固有免疫、適應性免疫及免疫分析技術(shù)分為沉淀反應、凝集反應、酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、化學發(fā)光免疫技術(shù)、流式細胞技術(shù)、溶血空斑實驗、中性粒細胞吞噬功能實驗、巨噬細胞吞噬功能實驗、T細胞殺傷活性實驗、B細胞增殖活性實驗、NK細胞殺傷活性實驗、親和層析、免疫磁珠等共15項技術(shù)[1]。

1.3 方法 按照免疫學實驗技術(shù)分類，將論文中涉及的免疫學技術(shù)歸類，統(tǒng)計后繪制免疫學技術(shù)應用分布的頻數(shù)表。

2 結(jié)果

2.1 免疫學技術(shù)在科研論文中應用分析 在查閱的6 286篇論文中，應用免疫學有關(guān)實驗技術(shù)的共2 017篇，占32.09%；其中應用1項免疫技術(shù)的論文1 485篇，應用2項免疫學技術(shù)的論文436篇，應用3項免疫學技術(shù)的論文96篇。應用固有免疫技術(shù)20篇，占1.0%；應用適應性免疫技術(shù)71篇，占3.5%；應用免疫分析1 926篇，占95.5%。

2.2 免疫學技術(shù)應用的頻數(shù)分布

圖1 免疫學技術(shù)應用頻數(shù)分布

3 討論

免疫學及生物醫(yī)學在理論和實際應用上的迅速發(fā)展與免疫學技術(shù)的不斷發(fā)展及更新是密切相關(guān)的。從免疫學的發(fā)展歷史看，每當一種新的免疫學技術(shù)的應用，都會對免疫學理論的發(fā)展起到極大的推動作用。如俄國的Metchnikoff在巨噬細胞吞噬功能實驗基礎上提出并完善了細胞免疫學說，1890年Behring在研究抗毒素與外毒素中和實驗的基礎上提出了體液免疫學說，而細胞免疫學說及體液免疫學說的建立，使現(xiàn)代免疫學有了飛速發(fā)展。后來，隨著物理學和化學方法的建立，免疫學家不斷發(fā)展了新的免疫學實驗技術(shù)，如超速離心沉淀法、液相中電泳法、親和層析、放射性核素標記法、免疫熒光法、免疫酶標法等，這些實驗技術(shù)的應用為免疫學在各個研究領域取得長足進展提供了有力的技術(shù)支持。隨著技術(shù)的發(fā)展及新手段的應用，免疫學實驗技術(shù)不斷得到更新，它們在免疫學的研究上應用很廣，在不同的情況和不同的要求下分別選用，可取長補短，相互配合使用。Oudin和Ouchterlony等所創(chuàng)用的在瓊脂中沉淀反應已在免疫學及其他學科得到廣泛的應用，使抗原抗體反應有可能進行定量分析和檢測，也能用于抗原和抗體的定性分析，確定其數(shù)量和性質(zhì)。免疫電泳法則用于其進一步的分析，在免疫學及其他學科的應用亦甚廣泛[2]。1975年， Mi1stein和Kohler首創(chuàng)淋巴細胞雜交瘤制備單克隆抗體技術(shù)，這一技術(shù)己在醫(yī)學的各個領域中，如免疫學、微生物學、生物化學、寄生蟲學、傳染病學和流行病學、腫瘤學及其他臨床醫(yī)學方面都得到廣泛的應用。如用單克隆抗體可檢測免疫細胞上的表面分化抗原，區(qū)分不同細胞亞群的分化，了解免疫細胞的來源、分布和功能。

本研究以2014年版北京大學核心期刊目錄為依據(jù)，將2014～2016年發(fā)表的197種醫(yī)藥類期刊論文納入檢索范圍，核心期刊反映了目前研究的總體趨勢，代表了研究的方向，因此在這些論文中應用的研究手段代表了目前的先進研究方法。通過對查閱的6286篇論文分析，應用免疫學有關(guān)實驗技術(shù)的共2017篇，占32.09%，說明免疫學技術(shù)在生物醫(yī)學的研究中占據(jù)重要地位，是進行科學研究的主要手段。有些研究過程中甚至使用了多種免疫學實驗技術(shù)：應用2項免疫學技術(shù)的論文為436篇，應用3項免疫學技術(shù)的論文為96篇。按照實驗目的，將15項常用免疫學實驗技術(shù)分為固有免疫實驗技術(shù)、適應性免疫實驗技術(shù)及免疫分析技術(shù)等3種類型，其中沉淀反應、凝集反應、酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、化學發(fā)光免疫技術(shù)、親和層析、免疫磁珠、流式細胞技術(shù)屬免疫分析技術(shù)，中性粒細胞吞噬功能實驗、巨噬細胞吞噬功能實驗屬固有免疫實驗技術(shù)，T細胞殺傷活性實驗、溶血空斑實驗、B細胞增殖活性實驗、NK細胞殺傷活性實驗屬適應性免疫實驗技術(shù)。本次分析結(jié)果表明：免疫分析技術(shù)應用最為普遍，占95.5%，而固有免疫及適應性免疫技術(shù)應用較少。免疫學分析技術(shù)應用較多主要與其實驗目的有關(guān)，免疫分析技術(shù)可廣泛應用于生物醫(yī)學中各個研究領域，而固有免疫及適應性免疫技術(shù)應用范圍較為局限，主要應用于免疫功能的評價。

進一步對免疫分析技術(shù)的單項技術(shù)應用分布分析，流式細胞術(shù)及三大免疫標記技術(shù)應用最為普遍。流式細胞在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞，具有速度快、精度高、準確性好的優(yōu)點，是當代最先進的細胞定量分析技術(shù)之一。流式細胞術(shù)在臨床醫(yī)學中應用最早領域是腫瘤診斷。通過把實體瘤分散制備為單個細胞懸液，用碘化吡啶染色后對細胞的DNA含量進行分析，將細胞分成三個亞群：G1期、S期和G2期，通過分析細胞DNA含量，分析細胞周期，發(fā)現(xiàn)癌前病變，協(xié)助腫瘤早期診斷。流式細胞術(shù)分析病理細胞具有速度快、信息量大、敏感度高等優(yōu)點，已被用在常規(guī)工作中。此外，流式細胞術(shù)不僅可對惡性腫瘤DNA含量進行分析，還可根據(jù)化療過程中腫瘤DNA分布直方圖的變化評估療效，了解細胞動力學變化，對腫瘤化療具有重要的意義。臨床醫(yī)師可以根據(jù)細胞周期各時相的分布情況，設計最佳的治療方案，從DNA直方圖直接地看到瘤細胞的殺傷變化，及時選用有效的藥物。流式細胞術(shù)還被應用于細胞凋亡和多藥耐藥基因的研究中。通過對細胞體積、光散射、DNA含量及特異性抗原基因測定分析出細胞凋亡情況。臨床細胞免疫中，流式細胞術(shù)可通過熒光標記抗體檢測技術(shù)對細胞表面抗原分析，進行細胞分類和亞群分析。這一技術(shù)對于人體細胞免疫功能的評估以及各種血液病及腫瘤的診斷和治療有重要作用。流式細胞術(shù)還可以通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測分析，對各種血液病的診斷、預后判斷和治療發(fā)揮重要作用[3]。借助于各種熒光染料(如異硫氰基熒光素、藻紅蛋白等)測定一個細胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細胞的屬性，并根據(jù)這一屬性，對形態(tài)學檢查難以區(qū)別的細胞通過免疫表型參數(shù)進行特異性診斷。免疫標記技術(shù)包括免疫熒光技術(shù)、放射免疫測定、酶標免疫技術(shù)是目前常用的檢測手段，可用于定性或定量分析。熒光免疫技術(shù)易發(fā)生非特異干擾，放射免疫技術(shù)存在放射性污染，而酶免疫技術(shù)則因其敏感、快速、簡便、不需特殊設備等優(yōu)點，在免疫標記技術(shù)中應用較廣。酶聯(lián)免疫標記技術(shù)是以酶標記的抗體或抗原作為主要試劑，將抗原-抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性和專一性結(jié)合起來的一種免疫標記技術(shù)。酶免疫技術(shù)一般分成酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定技術(shù)兩大類。酶免疫組化技術(shù)與熒光抗體技術(shù)相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產(chǎn)物電子密度發(fā)生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術(shù)。酶免疫測定根據(jù)抗原抗體反應后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標記物而分為均相和異相兩種類型。均相法的原理是抗原抗體反應后，標記的酶即失去活性，因而不需要分離游離酶和結(jié)合酶。而異相法主要利用競爭性結(jié)合的原理，抗原和抗體反應后，通過一定的手段分離游離和結(jié)合的標記物。常用的酶免疫測定法為固相酶免疫測定，其特點是將抗原或抗體制成固相制劑，這樣在與標本中抗體或抗原反應后，只需經(jīng)過固相的洗滌，就可以達到抗原抗體復合物與其他物質(zhì)的分離，大大簡化了操作步驟。這種被稱為ELISA的檢測技術(shù)成為目前臨床檢驗中應用較廣的免疫測定方法。酶免疫實驗技術(shù)具有高度敏感性和特異性的優(yōu)勢，其最小測定值可達ng甚至更小的pg水平[4]。與放射免疫分析相比，酶免疫測定的優(yōu)點是標記試劑比較穩(wěn)定，且無放射性危害；與熒光免疫標記技術(shù)相比，它可以避免環(huán)境及背景中的非特異干擾因素。因此，酶免疫測定技術(shù)在生物醫(yī)學中的應用日新月異，酶免疫測定的新方法、新技術(shù)也不斷發(fā)展。此外，隨著商品化試劑盒、自動或半自動檢測儀器的問世及應用，酶免疫測定在生物醫(yī)學中的應用也越來越廣泛。先進的試劑盒不僅提供全部試劑成分，商品化ELISA試劑盒中包含包被好的固相載體、酶結(jié)合物底物和洗滌液等，而且所有試劑均已配制成應用液，并在各種試劑中加色素，使之呈現(xiàn)不同的顏色。既可以進行定性分析，又可以通過酶標儀進行定量分析[5]。

[1] 金伯泉,曹雪濤，主編.醫(yī)學免疫學[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013.193

[2] 馬斌榮，主編.醫(yī)學統(tǒng)計[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004.9

[3] 趙嬋娟,童 煜,袁粒星.流式細胞儀及其在醫(yī)學研究中的應用[J].中外醫(yī)學研究.2016,14(22):160-162

[4] 劉 向,習 瑤,王少毅,等.免疫標記技術(shù)的現(xiàn)狀及應用[J]. 醫(yī)學信息.2015,12(17):208-209

[5] 李 軍,法 瓊,張永霞, 等.臨床標記免疫定量分析的質(zhì)量控制[J]. 檢驗醫(yī)學與臨床.2015,20(2):212-214

(2016-11-29 收稿)(張愛國 編輯)

The frequency distribution of immunological experimental technique applied in biomedical papers

PEIYinhui,HOUZhihong,LIJuan,etal

(NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

Objective To describe the frequency distribution of immunological experimental techniques applied in biomedical papers,so to analysis the application scope of different immomological experimental techniques.Methods All papers of 197 kinds of medical journals were read from 2014 to 2016,and the distribution frequency were drawed accoring to the types of immunological technique.Results There were 2017 articles(32.09%)involved immological techniques among the 6286 articles,the application of the most were immunological analysis technique,furthmore,flow cytometry and enzyme labelled immunoassay were the most popular used in the single experimental technique.Conclusion Flow cytometry and enzyme labelled immunoassay are the most frequency used immunological techniques in biological medical study.

Immunology.Experimental technology.Frequency distribution

裴銀輝(1970-)，男，碩士，教授。研究方向：免疫學防治。

R 392.3

A

2095-2694(2017)02-090-4