韓健，殷振華，李富航，張亞軍，陳軻，王煒，董輝輝，劉一海，李永恒，汪玉良

(1.蘭州大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院骨科，甘肅 蘭州 730030；2.陜西省咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院骨一科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

人自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨關(guān)節(jié)炎的臨床研究

韓健1，2，殷振華2，李富航2，張亞軍2，陳軻2，王煒2，董輝輝2，劉一海2，李永恒2，汪玉良1*

(1.蘭州大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院骨科，甘肅 蘭州 730030；2.陜西省咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院骨一科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

目的 探討人自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived stem cells，ADSCs)復(fù)合玻璃酸鈉、富血小板血漿(platelet rich plasma，PRP)注射治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的安全性和有效性。方法 取人腹部脂肪組織，分離獲取ADSCs，經(jīng)體外培養(yǎng)獲得足量的ADSCS，并以流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物，分析成軟骨細(xì)胞分化能力。選擇咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院骨科中心門診30例膝關(guān)節(jié)輕中度骨關(guān)節(jié)炎患者，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射人ADSCs復(fù)合玻璃酸鈉、富血小板血漿，評(píng)價(jià)觀察干預(yù)前、后的患者是否有不良反應(yīng)以及膝關(guān)節(jié)活動(dòng)度的評(píng)分、疼痛視覺(jué)模擬評(píng)分(visual analogue scale，VAS)、核磁共振下膝關(guān)節(jié)面。結(jié)果 人腹部脂肪組織分離出來(lái)的ADSCs均陽(yáng)性表達(dá)CD105、CD29，陰性表達(dá)CD45、CD34，體外具有良好的成骨、成脂、成軟骨能力；臨床治療干預(yù)后患者無(wú)不良反應(yīng)，膝疼痛減輕，關(guān)節(jié)活動(dòng)度較前增大，核磁共振可見(jiàn)關(guān)節(jié)面斑片狀影較治療前顯著減少，低信號(hào)區(qū)顯著減少，未見(jiàn)明顯關(guān)節(jié)腔積液，關(guān)節(jié)面厚度增加。結(jié)論 關(guān)節(jié)腔注射ADSCs復(fù)合玻璃酸鈉、富血小板血漿治療骨關(guān)節(jié)炎能有效改善患者膝關(guān)節(jié)活動(dòng)度，減少疼痛，提高生活質(zhì)量，通過(guò)核磁共振發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)面厚度增加，延緩關(guān)節(jié)退化。

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；軟骨細(xì)胞；OA

骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA))是一種退行性關(guān)節(jié)疾病，又稱退行性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)疾病，是一種中老年人群中的常見(jiàn)病?；颊邫C(jī)體軟骨組織蛻變中過(guò)程，常伴隨有免疫反應(yīng)產(chǎn)生的各種炎癥因子。該疾病在軟骨組織發(fā)生改變后，會(huì)導(dǎo)致患者關(guān)節(jié)疼痛，關(guān)節(jié)僵硬及功能喪失，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，并增加了生活負(fù)擔(dān)。研究表明，導(dǎo)致OA發(fā)生的因素有很多，包括年齡、職業(yè)、生活習(xí)慣、四頭肌薄弱、關(guān)節(jié)受力異常及穩(wěn)定性減弱、肥胖、遺傳、外傷、內(nèi)分泌紊亂、生長(zhǎng)因子及免疫因子缺乏等。疾病初期以保守治療為主，發(fā)展后期為關(guān)節(jié)置換[1]。

隨著再生醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞工程技術(shù)和組織工程技術(shù)已經(jīng)在軟骨缺損治療領(lǐng)域得到10多年安全性和有效性檢驗(yàn)，有些已經(jīng)通過(guò)FDA認(rèn)證，并且已經(jīng)初步開(kāi)始商業(yè)化，比如美國(guó)健贊公司的基質(zhì)誘導(dǎo)自體軟骨細(xì)胞移植等[2]。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived stem cells，ADSCs)取材來(lái)源方便，且具有多能性，已經(jīng)得到很多專家的關(guān)注[3]。但因體外培養(yǎng)ADSCs涉及到倫理學(xué)，因此本試驗(yàn)采用直接提取分離的方法來(lái)驗(yàn)證ADSCs治療OA臨床安全性和有效性。在實(shí)驗(yàn)室通過(guò)對(duì)人腹部脂肪進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，誘導(dǎo)成脂、成骨、成軟骨以及細(xì)胞表面標(biāo)記鑒定ADSCs，觀察其成軟骨活性。臨床抽取患者腹部脂肪組織，體外分離純化，復(fù)合玻璃酸鈉、自體富含血小板血漿(platelet rich plasma，PRP)，注射到患者患有OA的關(guān)節(jié)腔，初步探討患者自體ADSCs治療OA的安全性和有效性。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 本試驗(yàn)所用脂肪組織取自于人體腹部脂肪(患者來(lái)自咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院)，均取得知情同意。胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(杭州四季青)，四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)(南京建成)，達(dá)爾伯克必需基本培養(yǎng)基(dulbecco minimumessential medium，DMEM)粉劑(GIBCO，美國(guó))；I型膠原酶(Sigma，美國(guó))；玻璃酸鈉(景峰制藥)。

1.1.2 臨床患者信息 患者為咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院骨科中心自2014年8月至2015年8月的門診患者，膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎30例，否認(rèn)高血壓、糖尿病、腦梗塞等慢性病，試驗(yàn)前同意參加臨床試驗(yàn)并簽署書(shū)面知情同意書(shū)，充分了解試驗(yàn)倫理批件。治療期間資料均完整。采用自體對(duì)照。女性21例，男性9例；年齡為40～65歲，平均約48.4歲；病程2～12年，平均5.6年。此臨床試驗(yàn)患者治療前患者膝關(guān)節(jié)無(wú)有創(chuàng)檢查及手術(shù)史。

1.1.3 臨床患者骨關(guān)節(jié)炎診斷參考標(biāo)準(zhǔn) a)發(fā)病年齡大于或等于40歲；b)膝關(guān)節(jié)輕度靜息痛，活動(dòng)后加重；c)晨僵小于30 min；d)關(guān)節(jié)彈響及關(guān)節(jié)壓痛；e)關(guān)節(jié)活動(dòng)度下降；f)X線片示膝關(guān)節(jié)非對(duì)稱性間隙變窄，軟骨下骨硬化；g)關(guān)節(jié)腫大。

1.2方法

1.2.1 人腹部ADSCs的分離培養(yǎng) 無(wú)菌條件下取人腹部脂肪組織，0.1%I型膠原酶、37℃消化45 min，終止消化，篩網(wǎng)過(guò)濾后1 200 rpm離心10 min收集沉淀。DMEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)重懸細(xì)胞，以2×104/cm2密度接種至培養(yǎng)皿中；在條件為37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48h后首次換液，棄去未貼壁細(xì)胞。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%融合時(shí)傳代，隔天更換培養(yǎng)液。

1.2.2 ADSCs定向誘導(dǎo)分化

1.2.2.1 成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo) a)取第3代的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，以4.0×104/mL密度接種于預(yù)先放置了細(xì)胞爬片的孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)。待細(xì)胞爬滿玻片后換成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基(高糖DMEM、10%胎牛血清、1 mmol/L地塞米松、10 mg/L胰島素、50 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(3-Isobutyl-1-methylanxthine，IBMX)、吲哚美辛0.2 mmol/L)。誘導(dǎo)分化2周，每3天換液1次，倒置相差顯微鏡觀察。b)組織學(xué)染色檢測(cè)：取成脂誘導(dǎo)2周后的爬片，10%甲醛溶液固定10 min后水洗，油紅O染液染色[4]10～15 min，純化水清洗后顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.2.2 成骨細(xì)胞誘導(dǎo) a)取第3代的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，以4.0×104/mL密度接種于預(yù)先放置了細(xì)胞爬片的孔板中，持續(xù)培養(yǎng)。待細(xì)胞爬滿玻片后用換成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(達(dá)氏修正依氏培養(yǎng)基、10% FBS、地塞米松1 mmol/L、Vc 50 μg/ mL、β-磷酸甘油10 mmol/L)。誘導(dǎo)分化2周，每3天換液1次，倒置相差顯微鏡觀察。b)組織學(xué)染色檢測(cè)：取成骨誘導(dǎo)2周后的爬片，10%甲醛溶液固定10 min后水洗，茜素紅染液染色[5]10～15 min，純化水清洗后顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.2.3 成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo) a)取第3代的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，以4.0×104/mL密度接種于預(yù)先放置了細(xì)胞爬片的孔板中。將分離培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞(第2代)培養(yǎng)上清(2 200 rpm離心)與新鮮DMEM(+10%FBS)1︰1混合成誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)加入誘導(dǎo)分化2周，倒置相差顯微鏡觀察。b)組織學(xué)染色檢測(cè)：10%甲醛溶液固定10 min后水洗，甲苯胺藍(lán)染色10～15 min，純化水清洗后顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.3 患者脂肪組織獲取及脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離 選擇患者腹部脂肪較膨隆處作為供區(qū)，采用標(biāo)準(zhǔn)腫脹麻醉法(2%利多卡因15 mL、1︰1 000鹽酸腎上腺素1 mL、生理鹽水210 mL)。選取長(zhǎng)度合適的吸脂針，應(yīng)用Lipokit技術(shù)的振蕩注射器負(fù)壓吸引抽吸脂肪約100 mL。抽脂后采用腹部多頭腹帶加壓包扎。超凈臺(tái)內(nèi)用PBS緩沖液清洗組織并去除肉眼可見(jiàn)血管組織，眼科剪剪碎后用0.1%Ⅰ型膠原酶37℃振蕩消化60 min。終止消化后用200目篩網(wǎng)過(guò)濾，去除未消化組織，1 200 rpm離心10 min后收集沉淀，重懸后臺(tái)酚藍(lán)染色法計(jì)數(shù)并行活性細(xì)胞計(jì)數(shù)，每例患者留取2×107個(gè)細(xì)胞備用。

1.2.4 自體PRP制備 采集患者自體靜脈血約50 mL，血袋中臨時(shí)保存標(biāo)本，采用兩次離心法制備PRP，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 患者ADSCs復(fù)合透明質(zhì)酸鈉及PRP注射 將患者自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用10% PRP(約7.5 mL)重懸(CaCl2激活)，與2.5 mL玻璃酸鈉混勻，備用。患者平臥位，膝關(guān)節(jié)屈曲約45°，保持穩(wěn)定。皮膚表面消毒后，采用膝關(guān)節(jié)腔外側(cè)穿刺入路，10 mL注射針頭穿刺進(jìn)入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，回抽有少量關(guān)節(jié)液，無(wú)回血后注入治療劑量10 mL，無(wú)菌包扎。治療前1個(gè)月及治療后觀察期間均不使用其他任何治療藥物。

1.2.6 觀察指標(biāo) 分別于治療前及治療后第1、2、3個(gè)月評(píng)價(jià)以下指標(biāo)。a)使用視覺(jué)模擬評(píng)分(visual analogue scale，VAS)，記分1～10分；運(yùn)動(dòng)性疼痛評(píng)估平路行走、上下樓梯以及完全蹲立的疼痛，以此來(lái)評(píng)價(jià)VAS評(píng)分。b)關(guān)節(jié)活動(dòng)功能。記錄膝關(guān)節(jié)活動(dòng)時(shí)是否伴隨彈響、關(guān)節(jié)僵硬以及關(guān)節(jié)絞鎖，陽(yáng)性一項(xiàng)記1分。c)膝關(guān)節(jié)MRI檢查。于術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月、術(shù)后2個(gè)月以及術(shù)后3個(gè)月采用核磁共振儀器行膝關(guān)節(jié)MRI掃描，使用膝關(guān)節(jié)線圈，取矢狀面，采用脂肪抑制三維穩(wěn)態(tài)自由進(jìn)動(dòng)序列觀察，512×512矩陣，180 mm視野，1.5 mm層厚，28°翻轉(zhuǎn)角，38 ms重復(fù)激發(fā)時(shí)間，10 ms回波時(shí)間，1次激勵(lì)次數(shù)，觀察膝關(guān)節(jié)軟骨信號(hào)的改變及范圍變化，反復(fù)多次測(cè)量脛骨內(nèi)側(cè)平臺(tái)軟骨面厚度，取其均值。

1.2.7 療效評(píng)價(jià) 臨床癥狀改善率=(治療前分值-治療后分值)/治療前分值×100%。差：疼痛評(píng)分減小小于30%或疼痛無(wú)改善、關(guān)節(jié)活動(dòng)度無(wú)改觀。一般：疼痛評(píng)分減小約30%～50%，關(guān)節(jié)活動(dòng)度初步改觀。良：疼痛評(píng)分減小約50%～80%，關(guān)節(jié)活動(dòng)度得到顯著改觀。優(yōu)：疼痛評(píng)分減小約大于等于80%或完全改觀，關(guān)節(jié)活動(dòng)度無(wú)影響。

2 結(jié) 果

2.1 ADSCs形態(tài)學(xué)觀察 細(xì)胞接種后24 h開(kāi)始貼壁，初為小圓形，細(xì)胞大小不等。48 h后大部分細(xì)胞已貼壁生長(zhǎng)，多呈長(zhǎng)梭形(見(jiàn)圖1)。

2.2 ADSCs定向誘導(dǎo)分化

2.2.1 成脂誘導(dǎo)形態(tài)觀察及鑒定 細(xì)胞于誘導(dǎo)開(kāi)始后即停止分裂增殖，逐漸由長(zhǎng)梭形變?yōu)椴灰?guī)則圓形，體積變大，但大小不一。最早于誘導(dǎo)后4 d時(shí)可在細(xì)胞內(nèi)看到小脂滴，厚脂滴逐漸增多，可互相融合成較大的脂滴。誘導(dǎo)14 d時(shí)細(xì)胞分化至高峰，油紅O染色即可證實(shí)為脂滴(見(jiàn)圖2)。

2.2.2 成骨誘導(dǎo)形態(tài)觀察及鑒定 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)21 d，細(xì)胞形態(tài)由梭形改為多角形，細(xì)胞呈多層性、重疊排列，其間質(zhì)內(nèi)含大量礦鹽沉積的鈣化結(jié)節(jié)，茜素紅染色可呈現(xiàn)紅色(見(jiàn)圖3)。

2.2.3 成軟骨細(xì)胞形態(tài)觀察及鑒定 單個(gè)細(xì)胞形態(tài)未見(jiàn)明顯改變，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)，在細(xì)胞密度較大處細(xì)胞群逐漸簇集。誘導(dǎo)7 d后即可在簇集細(xì)胞的表面見(jiàn)到淡黃色的物質(zhì)沉積，后逐漸增多，到14 d時(shí)可達(dá)高峰。甲苯胺藍(lán)染色后細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，基質(zhì)呈藍(lán)色(見(jiàn)圖4)。

2.3 ADSCs表面標(biāo)記物的表達(dá) 取擴(kuò)增培養(yǎng)后第3代ADSCs，胰蛋白酶消化后，PBS清洗2遍，并制備成1.5×106/mL的細(xì)胞懸液。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，ADSCs均一地表達(dá)CD29、CD105，陽(yáng)性率分別為91.8%，和97.5%；而CD34、CD45，陽(yáng)性率分別為1.4%，1.8%(見(jiàn)圖5)。

2.4 安全性和有效性評(píng)價(jià)

2.4.1 VAS疼痛評(píng)分及關(guān)節(jié)功能評(píng)價(jià) 治療后疼痛評(píng)分較治療前明顯減小，治療后1個(gè)月VAS疼痛評(píng)分及關(guān)節(jié)活動(dòng)評(píng)分較治療前均未見(jiàn)明顯性差異(P>0.05)；疼痛評(píng)分在治療后第2個(gè)月、第3個(gè)月相較于治療前均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，關(guān)節(jié)活動(dòng)功能評(píng)分于治療后第2月、第3個(gè)月均較治療前有顯著性差異(P<0.05，見(jiàn)表1)。本實(shí)驗(yàn)30例患者治療效果：差2例(6.67%)，一般4例(13.33%)，良6例(20.00%)，優(yōu)18例(60.00%)。全體患者取脂肪處及關(guān)節(jié)穿刺部位均未見(jiàn)明顯出血、細(xì)菌感染、局部皮膚過(guò)敏等不良反應(yīng)，2例抽脂后感腹部不適，3d后癥狀消失，3例自覺(jué)穿刺部位稍疼痛，2d后緩解。

表1 治療前后VAS疼痛評(píng)分以及關(guān)節(jié)活動(dòng)功能比較±s)

2.4.2 MRI下膝關(guān)節(jié)軟骨面信號(hào)及厚度變化 治療前，于核磁共振序列中關(guān)節(jié)面體現(xiàn)為中信號(hào)強(qiáng)度的斑片狀影，環(huán)繞脛骨平臺(tái)及股骨內(nèi)外髁骨皮質(zhì)。治療后1個(gè)月可見(jiàn)關(guān)節(jié)面斑片狀影無(wú)顯著變化，局部可見(jiàn)凹陷形成、信號(hào)減低，關(guān)節(jié)腔可見(jiàn)少量積液；治療后2個(gè)月可見(jiàn)關(guān)節(jié)面斑片狀影相較于治療前及1個(gè)月時(shí)減少，低表達(dá)信號(hào)區(qū)較前有所減少，關(guān)節(jié)腔積液較前有所減少。治療后3個(gè)月關(guān)節(jié)面斑片狀影較治療前顯著減少，大致接近正常，低信號(hào)區(qū)顯著減少，未見(jiàn)明顯關(guān)節(jié)腔積液(見(jiàn)圖6)，可見(jiàn)脛骨平臺(tái)輕度水腫，脛骨平臺(tái)及股骨髁輪廓示厚度大致正常。本試驗(yàn)即觀察核磁共振下軟骨面的T2值來(lái)檢測(cè)軟骨面厚度。治療前T2值(84.65±1.68)，治療后1個(gè)月T2值(79.83±0.85)，治療后2個(gè)月T2值(76.79±1.32)，治療后3個(gè)月T2值(66.37±1.18)。治療后3個(gè)月T2測(cè)量值較治療前明顯減少(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 原代人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察×40 圖2 誘導(dǎo)成脂細(xì)胞油紅染色×100

圖3 誘導(dǎo)成骨細(xì)胞茜素紅染色×40 圖4 甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果×40

a CD29 b CD105 c CD34 d CD45

圖5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代ADSCs免疫表型

a 治療前 b 治療后1個(gè)月 c 治療后2個(gè)月 d 治療后3個(gè)月

圖6 MRI掃描觀察軟骨厚度及信號(hào)(T2)改變

3 討 論

研究表明個(gè)體因素以及關(guān)節(jié)活動(dòng)是引起骨關(guān)節(jié)炎的主要因素。其可導(dǎo)致關(guān)節(jié)面軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)以及軟骨下骨的降解與失平衡。目前臨床上，針對(duì)骨關(guān)節(jié)炎現(xiàn)有的治療方法包括非藥物治療、藥物治療及手術(shù)治療。其中輕中度、年輕患者，主要給予理療、口服非甾體類消炎止痛藥等治療，只能達(dá)到短暫的緩解疼痛的目的，無(wú)法延緩病情的進(jìn)展乃至“根治”，且此類藥物的不良反應(yīng)屢見(jiàn)報(bào)道。最近再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展為治療OA帶來(lái)一線希望。

1994年Brittberg等[6]研究表明，使用自體軟骨細(xì)胞移植技術(shù)治療23例膝關(guān)節(jié)軟骨缺損患者。術(shù)后隨訪16～66個(gè)月(平均39個(gè)月)，所有患者的臨床癥狀包括關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、骨擦音均得到改善，并且組織學(xué)研究表明生成的是透明軟骨組織。研究表明ADSCs具有多能性能，具有成脂肪、成骨以及成軟骨的能力。2012年有學(xué)者研究表明關(guān)節(jié)腔注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠使OA動(dòng)物模型得關(guān)節(jié)軟骨再生[7]。2012年有研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stem cells，BMSCs)能延遲羊骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展以及改善關(guān)節(jié)軟骨組織[8]。以上研究表明關(guān)節(jié)內(nèi)微環(huán)境能夠促使BMSCs向軟骨方向分化，延遲關(guān)節(jié)退化。但是BMSCs取材不方便，以及鑒于目前體外培養(yǎng)的倫理學(xué)要求，我們選用取材方便，且具有多能性的ADSCs作為種子細(xì)胞來(lái)研究它對(duì)OA的治療作用。我們?cè)谲浌侨睋p動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞可以生成透明軟骨組織。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞源于自體脂肪組織，相較于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其具有無(wú)免疫排斥性、創(chuàng)傷小、取材便利并可反復(fù)取材、來(lái)源廣泛等特點(diǎn)，且其同樣具有多向誘導(dǎo)分化潛能，成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞等[9-11]。另外PRP來(lái)源于自體，具有多種生長(zhǎng)因子，不存在免疫排斥反應(yīng)，取材方便、制作簡(jiǎn)單。為了模擬體內(nèi)環(huán)境，我們旨在使用人自體脂肪干細(xì)胞ADSCs提供種子細(xì)胞，利用PRP中多種生長(zhǎng)因子和關(guān)節(jié)腔內(nèi)微環(huán)境促進(jìn)人自體脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)分化成軟骨細(xì)胞進(jìn)而生成透明軟骨組織，聯(lián)合治療骨關(guān)節(jié)炎，改善患者生活質(zhì)量，期待能有部分逆轉(zhuǎn)退化速度的作用。

本研究結(jié)果證眀患者無(wú)不良反應(yīng)，通過(guò)患者疼痛VAS評(píng)分以及關(guān)節(jié)活動(dòng)評(píng)分可知，2個(gè)月以及3個(gè)月后相較于治療前，兩個(gè)評(píng)分結(jié)果都有所改善，說(shuō)明人自體腹部ADSCs復(fù)合玻璃酸鈉、PRP注射治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎有明顯的改善癥狀作用。當(dāng)然遠(yuǎn)期效果需要更多樣本、更長(zhǎng)時(shí)間的隨訪。本研究還采用核磁共振來(lái)檢測(cè)軟骨面厚度。治療后2個(gè)月及3個(gè)月相較于治療前關(guān)節(jié)軟骨厚度均有所改善，而T2測(cè)量值于治療后3個(gè)月較治療前明顯減少。說(shuō)明該方法對(duì)膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎軟骨退變具有一定治療效果。故此推斷本實(shí)驗(yàn)療效原理：治療前期玻璃酸鈉潤(rùn)滑應(yīng)用關(guān)節(jié)面，然后脂肪干細(xì)胞貼附關(guān)節(jié)面，在PRP營(yíng)養(yǎng)和微環(huán)境共同作用誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞，后軟骨細(xì)胞增生、傳代，從而達(dá)到關(guān)節(jié)軟骨治療與修復(fù)的可能。

綜上所述，人自體ADSCs復(fù)合玻璃酸鈉和富血小板血漿注射治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎能有效改善關(guān)節(jié)活動(dòng)度，減輕疼痛，提高患者生活質(zhì)量，延緩關(guān)節(jié)退化。但其遠(yuǎn)期效果及具體機(jī)制需要更深入一步的組織學(xué)研究。

致謝：感謝西安市中心醫(yī)院燒傷整形科陶諫主任醫(yī)師、田智泉碩士、張明濤碩士的技術(shù)指導(dǎo)。

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Clinical Study of Autologous Adipose Derived Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Osteoarthritis

Han jian1，2，Yin Zhenhua2，Li Fuhang2，et al

(1.Department of Orthopedics，the Second Clinical Medical College of Lanzhou University，Lanzhou 730030，China；2.The Orthopedics of The First People’s Hospital of Xianyang City，Xianyang 712000，China)

Objective To discusses the safety and effectiveness of the treatment injection for knee osteoarthritis by using a utologous ADSCS composite sodium hyaluronate，platelet rich plasma (PRP).Methods Take the abdominal adipose tissue，get hADSCs separation，plenty of ADSCS obtained with in vitro culture，and by flow cytometry instrument to detect the surface markers and analysis into cartilage cells differentiation ability.30 patients with mild-to-moderate of knee joint osteoarthritis were selected from the orthopedic outpatient service center in the first people’s hospital of Xianyang city.ADSCs composite sodium hyaluronate，platelet rich plasma were injected into patient’s articular cavity.The indicators such as patients with adverse reactions，knee activity score，pain visual analogue scale (VAS) score as well as the surface of knee join under MRI were evaluated before and after the intervention.Results Abdominal adipose tissue separated hADSCs were positive expression of CD105 and CD29，CD45，CD34 negative expression，in vitro with good osteogenesis，into fat，cartilage capacity；There was no adverse reaction in the patients who suffered clinical intervention.And patient’s knee pain relief，activity range was improved compared with before treatment.MRI imaging showed that the patchy shadow in the area of the joint surface and low signal area were significantly reduced.There was no obvious joint effusion，and the thickness of articular surface was increased.Conclusion The articular cavity injection therapy with ADSCs compound sodium hyaluronate，platelet rich plasma (PRP) for patients who suffered with osteoarthritis can effectively improved the knee joint motion，to reduce pain and improve the quality of life.The thickness of the joint surface was increased and the joint degeneration was delayed by MRI imaging.

adipose derived stem cells；chondrocytes；osteoarthritis

閆斌(1978- )，男，主治醫(yī)師，新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院外二科，830063。

1008-5572(2017)03-0235-05

咸陽(yáng)市2014年科學(xué)技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2014K04-13)；*本文通訊作者：汪玉良

R684.3

A

2016-12-15

韓健，殷振華，李富航，等.人自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨關(guān)節(jié)炎的臨床研究[J].實(shí)用骨科雜志，2017，23(3)：235-239.