張新龍，劉海英

（阿克蘇地區(qū)中心血站，新疆 阿克蘇 843000）

少數(shù)民族地區(qū)RhD（-）血液冰凍保存洗滌復(fù)蘇技術(shù)及臨床應(yīng)用

張新龍，劉海英

（阿克蘇地區(qū)中心血站，新疆 阿克蘇 843000）

目的 探討少數(shù)民族地區(qū)RhD（-）血液冰凍解凍紅細(xì)胞的制備方法，并對(duì)臨床輸注效果進(jìn)行分析。方法 使用美國(guó)血液技術(shù)公司提供的ACP215全自動(dòng)細(xì)胞洗滌儀和全密閉式成套耗材，先甘油化紅細(xì)胞懸液，后置-65℃以下深低溫保存，需要時(shí)去甘油復(fù)蘇，采用9%NaCl和0.9%NaCl滲透壓梯度遞減方法洗滌，制備成冰凍解凍紅細(xì)胞，按照國(guó)家衛(wèi)生部規(guī)定的檢測(cè)方法對(duì)該制品進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，并對(duì)臨床上RhD（-）患者的輸注效果進(jìn)行跟蹤調(diào)查。結(jié)果 應(yīng)用該方法冰凍解凍RhD（-）血紅細(xì)胞，其質(zhì)量符合國(guó)家規(guī)定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)臨床輸注后效果良好。結(jié)論 使用ACP215制備冰凍紅細(xì)胞，低溫保存后洗滌去甘油，操作安全快捷，回收率高，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，將為少數(shù)民族地區(qū)稀有血型血液的長(zhǎng)期保存、及時(shí)有效供給以及自身儲(chǔ)血、突發(fā)公共事件緊急大量用血?jiǎng)?chuàng)造有力條件。

RhD（-）血液；冰凍紅細(xì)胞；冰凍解凍紅細(xì)胞；洗滌；臨床應(yīng)用

新疆阿克蘇地區(qū)是一個(gè)以維吾爾族為主體的多民族聚居的地區(qū)，RhD（-）在維吾爾族等少數(shù)民族的分布為5%，漢族僅占0.3%，屬稀有血型。解決RhD（-）血型患者臨床用血救治以及應(yīng)對(duì)地方突發(fā)事件稀有血型血源儲(chǔ)備是我們急需解決的問題。目前國(guó)內(nèi)很多血站采用手工法制備RhD（-）冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞延長(zhǎng)紅細(xì)胞的有效期，我站引進(jìn)ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞洗滌儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞技術(shù)，減少了人為因素影響，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠?，F(xiàn)對(duì)制備方法和臨床效果評(píng)價(jià)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇來自2015年1月開始阿克蘇地區(qū)街頭自愿無償獻(xiàn)血者，經(jīng)街頭初篩為RhD（-）后，本站檢驗(yàn)科進(jìn)一步確認(rèn)為RhD（-），血液復(fù)檢合格后，在2～6℃冰箱保存6天以內(nèi)的全血或去白細(xì)胞紅細(xì)胞懸液，采用ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞洗滌儀制備成冰凍紅細(xì)胞，臨床需要時(shí)再解凍洗滌制備成去甘油紅細(xì)胞懸液，隨機(jī)跟蹤40U該制品臨床應(yīng)用效果并予以評(píng)價(jià)。

1.2 耗材

235型去甘油耗材（美國(guó)血液技術(shù)公司），57%甘油耗材、三珠袋（北京博德桑特公司），9%NaCl（山東威高公司），0.9%NaCl、PVC血液轉(zhuǎn)移袋（四川南格爾公司），一次性輸血器（內(nèi)蒙古赤峰公司）

1.3 儀器與設(shè)備

ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞洗滌儀（美國(guó)血液技術(shù)公司），Cryofuge-600i低溫離心機(jī)（德國(guó)賀立氏公司），CompoDcK無菌接管機(jī)（德國(guó)費(fèi)森尤斯公司），DW-86L386超低溫冰箱（青島海爾公司），CT-D4干式融化箱（美國(guó)克瑞特），振蕩儀（蘇州市醫(yī)用儀器廠），BC-5800血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（深圳邁瑞公司），BD-9050全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)（美國(guó)BD公司）。

1.4 方法

1.4.1 紅細(xì)胞甘油化

將全血或去白懸浮紅細(xì)胞4℃下離心（3500r/min×8min），目檢合格分出上層血漿/添加劑和白膜層后，轉(zhuǎn)移至三珠袋制備成壓積紅細(xì)胞，連接輸血器和復(fù)方甘油溶液，把血袋固定在振蕩儀上搖振（振幅60次/分），每U壓積紅細(xì)胞（200 ml全血制備） 血袋中由慢到快手工加入57%復(fù)方甘油溶液1袋160 ml（2U壓積紅細(xì)胞中加入2袋320 ml），時(shí)間控制在10-15 min內(nèi)完成，放置室溫平衡30分鐘后，放入-65℃以下超低溫冰箱快速冰凍保存，即制成冰凍紅細(xì)胞。

1.4.2 解凍與洗滌去甘油

將冰凍紅細(xì)胞從-65℃以下超低溫冰箱中取出后，先在室溫中平衡10分鐘后再放置于37℃干式融化箱中，設(shè)定時(shí)間30min自動(dòng)搖動(dòng)并充分融化至解凍紅細(xì)胞，將解凍紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至1000mlPVC空袋中，與235型去甘油耗材、無菌接管機(jī)連接，打開ACP215儀器，按照固定管路安裝連接高滲、等滲鹽水作為洗滌劑，檢查無誤后，選擇去甘油程序，按開始鍵，機(jī)器按程序設(shè)定自動(dòng)依次加入9% NaCl高滲溶液和0.9% NaCl低滲溶液，以梯度遞減洗滌的方法逐漸去除紅細(xì)胞內(nèi)外的甘油，，最后再每U加0.9%NaCl溶液120ml重新懸浮洗滌紅細(xì)胞，確保紅細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓平衡，制備成解凍紅細(xì)胞[1]。

2 結(jié) 果

2.1 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量抽檢

按《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2012版）和《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）中的檢測(cè)方法和檢測(cè)項(xiàng)目，抽取40U（20袋×2U）的冰凍解凍紅細(xì)胞解凍后留樣檢測(cè)，均符合《全血成分血質(zhì)量要求》[2]。見表1

表1 40 U冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果一覽表

2.2 臨床應(yīng)用情況

將以上使用ACP215全自動(dòng)紅細(xì)胞處理機(jī)制備的40U（20袋*2U）冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，用于臨床輸注，輸注主要用于產(chǎn)科手術(shù)、外傷、血液病等13例患者，每位患者用量為2-8U不等，血液平均保存期為105天，查看《臨床輸血效果評(píng)價(jià)記錄表》，描述輸血過程順利，輸血中及輸血后無不適反應(yīng)，其中11例患者輸注后血紅蛋白有所上升，貧血狀態(tài)得到改善，2例患者輸注后血紅蛋白上升不明顯，其中1例活動(dòng)性出血現(xiàn)象出現(xiàn)，1例為自身溶血性貧血患者。

3 討 論

1）全血或去白懸浮紅細(xì)胞在2-6℃儲(chǔ)血冰箱可保存35天，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞內(nèi)2，3-二磷酸甘油酸及ATP逐漸下降，從而影響了氧的釋放能力和紅細(xì)胞的活性，紅細(xì)胞的變形能力和滲透脆性增加，紅細(xì)胞的溶血程度也隨著增加，故要選擇保存6d以內(nèi)（相對(duì)新鮮）的血液進(jìn)行冰凍保存；2）選擇甘油作為紅細(xì)胞保護(hù)劑，是因?yàn)楦视蜔o毒、中性、相對(duì)分子質(zhì)量小，能滲透入細(xì)胞，與水結(jié)合力強(qiáng)，對(duì)細(xì)胞膜有良好的保存作用。將采集6天以內(nèi)的全血或去白懸浮紅細(xì)胞中的紅細(xì)胞甘油化后置-65℃以下保存，紅細(xì)胞耗能較少，紅細(xì)胞的代謝活動(dòng)降低或完全停止，避免了代謝毒性產(chǎn)物的積累，達(dá)到延長(zhǎng)紅細(xì)胞保存期的目的，最長(zhǎng)保存期為十年；3）臨床需要RhD（-）血時(shí)，將甘油化冰凍紅細(xì)胞去甘油復(fù)蘇，采用滲透壓梯度遞減（9%NaCl→0.9%NaCl）的方法，使用全自動(dòng)ACP215血細(xì)胞洗滌儀，去除了細(xì)胞代謝產(chǎn)物及抗凝劑，全密閉管路，此方法約需1.5 h，產(chǎn)品人為因素影響較小，時(shí)間短，操作快捷安全；4）經(jīng)質(zhì)量抽檢，洗滌后的紅細(xì)胞生理形態(tài)及生化特性與液體保存的紅細(xì)胞相似，產(chǎn)品質(zhì)量可靠、較穩(wěn)定；5）跟蹤輸血患者，經(jīng)評(píng)價(jià)基本達(dá)到輸血目的。冰凍紅細(xì)胞保存期長(zhǎng)，可大量?jī)?chǔ)存，在少數(shù)民族地區(qū)稀有血型血源匱乏的情況下，對(duì)調(diào)節(jié)血液供需平衡，保障突發(fā)公共事件緊急大量用血[3]，維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定有著重要的戰(zhàn)略意義。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).《血站技術(shù)操作規(guī)程》2012版[Z].北京:衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[2012]1號(hào)附件,2012.

[2] 中國(guó)人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB18469-2012全血成分血質(zhì)量要求[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012

[3] 夏愛軍,張獻(xiàn)清,穆士杰,等.手術(shù)患者輸注冰凍紅細(xì)胞的安全性探討[J],現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(2):26.

本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-8242.2017.05.803.02