張紅軍 房延鳳 劉偉 謝永宏 金發(fā)光 顧興

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·論著·

肺癌患者自身抗體與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析

張紅軍 房延鳳 劉偉 謝永宏 金發(fā)光 顧興

目的探討肺癌自身抗體與腫瘤標(biāo)志物之間的相互關(guān)系。方法收集2016年9月至2016年12月收治于第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院呼吸內(nèi)科的肺癌患者112例，分別采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法和電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)肺癌患者7種自身抗體和5種血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物的水平，對(duì)所得患者自身抗體P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE和CAGE，以及腫瘤標(biāo)志物CEA、SCC、CA125、NSE和CYFRA21-1，的數(shù)據(jù)進(jìn)行spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析。結(jié)果不同病理類型肺癌患者的自身抗體水平，肺腺癌患者GAGE7中位數(shù)為7.30 U/ml，明顯高于鱗癌、小細(xì)胞癌等其他類型的肺癌患者(P=0.041)，而P53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5、MAGE和CAGE水平則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物CEA和CA125在肺腺癌中、SCC在肺鱗癌中明顯升高(P值均<0.05)。經(jīng)spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析，在肺癌中，P53與CEA、SCC呈正相關(guān)(P值分別為0.024，0.016)，PGP9.5與NSE呈正相關(guān)(P<0.001)，GBU4-5與SCC、CA199呈正相關(guān)(P值分別<0.001，=0.011), MAGE與SCC、CA199呈正相關(guān)(P值分別=0.004，<0.001)。結(jié)論肺癌患者自身抗體與腫瘤標(biāo)志物存在正相關(guān)，同時(shí)檢測(cè)二者可相互補(bǔ)充，更益于肺癌的及時(shí)診斷。

自身抗體； 腫瘤標(biāo)志物； 支氣管肺癌

肺癌是目前發(fā)病率和死亡率居首位的惡性腫瘤，其死亡率高且5年生存率低于15%[1-2]，這是由于肺癌早期缺乏典型的臨床癥狀，多數(shù)患者在確診時(shí)已屬晚期[3]，失去了手術(shù)治療的機(jī)會(huì)。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷是降低肺癌死亡率、改善患者生存的關(guān)鍵所在。據(jù)2006年新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志報(bào)道的第一個(gè)大樣本10年生存率研究結(jié)果顯示IA肺癌患者10年生存率高達(dá)92%。所以，尋找有效的早期診斷技術(shù)和方法至關(guān)重要。目前，肺癌早期篩查的主要方法有胸部低劑量計(jì)算機(jī)斷層掃描(low-dose computed tomography, LDCT)技術(shù)和血液分子標(biāo)志物的檢測(cè)。血液分子標(biāo)志物主要包括小分子RNA(microRNAs)、循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell, CTC)及肺癌自身抗體。其中，肺癌自身抗體是免疫系統(tǒng)針對(duì)癌癥產(chǎn)生的特異性反應(yīng)，具有高敏感性和高特異性等特點(diǎn)，在肺癌發(fā)生早期的檢出比影像學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)要早5年左右[4-5]。

目前肺癌自身抗體譜已經(jīng)在北美廣泛應(yīng)用于臨床，我國(guó)也于2015年11月由中國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局(China Food and Drug Administration, CFDA)批準(zhǔn)上市了7種肺癌自身抗體檢測(cè)試劑盒[6]。隨著肺癌自身抗體檢測(cè)在臨床上逐漸應(yīng)用，諸多困惑臨床醫(yī)師的問題也隨之顯現(xiàn)出來(lái)，如自身抗體與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性、二者的輔助診斷效能及自身抗體本身的特點(diǎn)等等。本研究報(bào)道了P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE和CAGE等7種肺癌自身抗體在臨床中的應(yīng)用，并對(duì)上述問題進(jìn)行了初步探討。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

選擇 2016年09月至 2016年12月由我院呼吸內(nèi)科經(jīng)治的肺癌患者112例，年齡34～88歲，平均年齡62歲，其中男性74例，女性38例；腺癌(adenocarcinoma)26例，鱗癌(squamous cell carcinoma)23例，小細(xì)胞癌(small cell carcinoma)28例，未分類癌(non classified carcinoma)28例，其它類型腫瘤(包括：縱隔轉(zhuǎn)移瘤、右肺血管肉瘤、大細(xì)胞癌、喉癌肺轉(zhuǎn)移、孤立性纖維性腫瘤及惡性胸腺瘤等)7例?；颊呷脒x標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)電子支氣管鏡或經(jīng)皮肺穿刺活檢行病理學(xué)檢查確診；②所有患者均同時(shí)進(jìn)行自身抗體和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。

二、研究方法

對(duì)所有經(jīng)治的肺癌患者均同時(shí)進(jìn)行自身抗體(P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGE和CAGE)和腫瘤標(biāo)志物(CEA、SCC、CA125、NSE和CYFRA21-1)檢測(cè)，分析這兩類輔助診斷指標(biāo)的陽(yáng)性率、水平及他們之間的相關(guān)性，并對(duì)其診斷效能進(jìn)行比較，歸納肺癌患者自身抗體的規(guī)律性。

三、測(cè)定方法

全部患者均清晨空腹，予5 ml注射器抽取靜脈血3 ml兩管，分別進(jìn)行自身抗體和腫瘤標(biāo)志物測(cè)定。其中，自身抗體采用杭州凱保羅生物科技有限公司的七種自身抗體檢測(cè)試劑盒用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)進(jìn)行檢測(cè)，腫瘤標(biāo)志物采用德國(guó)羅氏公司的 ELECYS 2010 型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定儀(electro-chemiluminescence immunoassay, ECLI)進(jìn)行檢測(cè)。二者均使用其公司原裝配套試劑盒，并按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料因不服從正態(tài)分布，故用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)形式表示，組間比較選用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的陽(yáng)性率用%表示，組間比較選用χ2檢驗(yàn)Fisher精確檢驗(yàn)；自身抗體與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的相互關(guān)系采用spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、不同年齡、性別及病理類型的肺癌患者自身抗體陽(yáng)性率特征

與年齡小于60歲的肺癌患者相比較，年齡大于60歲者GBU4-5、MAGE的陽(yáng)性率明顯升高(P值分別為0.017、0.041)，而P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7和CAGE的陽(yáng)性率沒有年齡差別。在112例肺癌患者中，男性74例，女性38例，研究發(fā)現(xiàn)自身抗體七項(xiàng)并無(wú)性別差異。另外，還進(jìn)一步分析了不同病理類型的肺癌患者自身抗體陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)腺癌患者GAGE7陽(yáng)性率高于鱗癌、小細(xì)胞癌等其他類型的肺癌患者(P=0.009)，而P53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5、MAGE和CAGE則不存在病理類型方面的差異，見表1。

二、不同病理類型肺癌患者的自身抗體與腫瘤標(biāo)志物水平

通過(guò)分析不同病理類型肺癌患者的自身抗體水平，發(fā)現(xiàn)肺腺癌患者GAGE7中位數(shù)為7.30 U/ml，明顯高于鱗癌、小細(xì)胞癌等其他類型的肺癌患者(P=0.041)，而P53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5、MAGE和CAGE水平則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物CEA和CA125在肺腺癌中、SCC在肺鱗癌中明顯升高(P值均<0.05)，而CA199、NSE和CYFRA21-1在不同病理類型的肺癌患者中沒有發(fā)現(xiàn)明顯差異，見表2。

表1 不同年齡、性別及病理類型的肺癌患者自身抗體陽(yáng)性率比較

注：包含0項(xiàng)未納入統(tǒng)計(jì)

表2 不同病理類型肺癌患者的自身抗體與腫瘤標(biāo)志物水平[M(P25-P50)]

表3 肺癌患者自身抗體與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析

三、肺癌患者自身抗體與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的相互關(guān)系

經(jīng)spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示，在肺癌中，P53與CEA、SCC呈正相關(guān)(P值分別為0.024，0.016)，PGP9.5與NSE呈正相關(guān)(P<0.001)，GBU4-5與SCC、CA199呈正相關(guān)(P值分別<0.001，=0.011), MAGE與SCC、CA199呈正相關(guān)(P值分別=0.004，P<0.001)，見表3。

在數(shù)據(jù)分析中發(fā)現(xiàn)，少數(shù)患者在0、21、42 d隨訪中僅存在自身抗體陽(yáng)性，而傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物一直處于陰性的現(xiàn)象。因這類樣本數(shù)量很少，對(duì)自身抗體與腫瘤標(biāo)志物相背離的情況尚不能進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

四、肺癌患者自身抗體與腫瘤標(biāo)志物的輔助診斷效能

在112例肺癌患者中，自身抗體7項(xiàng)中任一項(xiàng)大于其參考值者，視為自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性，共53例，陽(yáng)性率為47.3%。同理，5項(xiàng)傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物中任一項(xiàng)大于其參考值者，視為腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)陽(yáng)性，共80例，陽(yáng)性率71.4%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析顯示，腫瘤標(biāo)志物輔助診斷效能優(yōu)于自身抗體(P=0.031)，見表4。

表4 自身抗體與腫瘤標(biāo)志物輔助診斷效能的比較(n)

討 論

在肺癌患者體內(nèi)，腫瘤細(xì)胞可表達(dá)少量異常的蛋白，即腫瘤特異性抗原，它們是腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中細(xì)胞壞死后釋放、脫落或者外分泌的特異蛋白產(chǎn)物。這些腫瘤抗原能夠通過(guò)多種途徑獲得免疫原性，其主要有：①蛋白過(guò)度表達(dá)、突變、折疊錯(cuò)誤、不適當(dāng)降解；②異常表達(dá)，如正常情況下腫瘤/睪丸抗原(Cancer/Testis Antigens)僅在人體生殖細(xì)胞中表達(dá)(如睪丸、卵巢囊胚)，但研究發(fā)現(xiàn)各種腫瘤中約有40個(gè)腫瘤/睪丸抗原家族成員異常表達(dá)(如MAGE、CAGE)；③蛋白轉(zhuǎn)譯后修飾，如糖基化、磷酸化、氧化、剪切后出現(xiàn)新的表位或增強(qiáng)自身表位的展示；④蛋白異位表達(dá)，如腫瘤細(xì)胞的胞內(nèi)蛋白被分泌到胞外或重新定位到細(xì)胞表面[7-10]。在腫瘤發(fā)生的早期，機(jī)體的免疫系統(tǒng)就可識(shí)別這些腫瘤特異性抗原產(chǎn)生的自身抗體?；诿庖呦到y(tǒng)的信號(hào)放大功能，這些自身抗體早在2008年，Chapman等[4]就開始將其用于臨床研究。他們使用ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)104例肺癌患者(82例非小細(xì)胞肺癌和22例小細(xì)胞肺癌)和50例正常人群血清中7種腫瘤自身抗體(P53、c-myc、HER2、NYESO-1、GAGE、MUG1和GBU4-5)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)單一抗體的陽(yáng)性率在5%～36%之間，特異性在96%～100%之間，而7種自身抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度可達(dá)76%，特異性可達(dá)92%。之后，對(duì)肺癌自身抗體譜不斷優(yōu)化組合，并結(jié)合肺癌臨床分期進(jìn)行了許多研究[11-15]，使自身抗體的臨床應(yīng)用趨于成熟。

本研究發(fā)現(xiàn)自身抗體本身的特點(diǎn)： ①年齡大于60歲的肺癌患者GBU4-5、MAGE的陽(yáng)性率較高；②腺癌GAGE7陽(yáng)性率及水平高于其他類型的肺癌患者；③自身抗體沒有性別差別。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，P53與CEA及SCC、PGP9.5與NSE、GBU4-5與SCC及CA199、MAGE與SCC及CA199分別存在正相關(guān)。另外，本研究還比較了自身抗體與腫瘤標(biāo)志物輔助診斷效能，發(fā)現(xiàn)自身抗體并不優(yōu)于傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物，這和以前的研究結(jié)果存在明顯差異。據(jù)2015年在第16屆世界肺癌大會(huì)(WCLC)公布的英國(guó)NHS(國(guó)家醫(yī)療服務(wù)體系)第一階段成果顯示，肺癌自身抗體特異性、敏感性分別高達(dá)91%和81%[13，16-18]。造成這種差別的主要原因可能是：①所選樣本以中晚期肺癌較多，而早期肺癌相對(duì)較少；②樣本量小，代表性差。今后需擴(kuò)大樣本量，按照肺癌分期進(jìn)一步研究，特別是探究肺癌自身抗體與腫瘤標(biāo)志物背離現(xiàn)象的深層原因，這對(duì)于自身抗體在臨床的廣泛應(yīng)用有重大意義。

綜上所述，肺癌自身抗體與腫瘤標(biāo)志物存在正相關(guān)關(guān)系，但在某些情況下自身抗體與腫瘤標(biāo)志物會(huì)產(chǎn)生背離現(xiàn)象，這時(shí)如將二者相互補(bǔ)充，可能更益于肺癌的及時(shí)診斷。

1 錢桂生. 肺癌不同病理類型發(fā)病率的變化情況及原因[J/CD]. 中華肺部疾病雜志(電子版), 2011, 4(1): 1-6.

2 Jemal A, Siegel R, Xu J, et al. Cancer statistics, 2010[J]. CA Cancer J Clin, 2010, 60(5): 277-300.

3 Smith RA, Cokkinides V, Brawley OW. Cancer screening in the United States, 2009: a review of current American Cancer Society guidelines and issues in cancer screening[J]. CA Cancer J Clin, 2009, 59(1): 27-41.

4 Li Y, Karjalainen A, Koskinen H, et al. p53 autoantibodies predict subsequent development of cancer[J]. Int J Cancer, 2005, 114(1): 157-160.

5 Chapman CJ, Murray A, McElveen JE, et al. Autoantibodies in lung cancer: possibilities for early detection and subsequent cure[J]. Thorax, 2008, 63(3): 228-233.

6 張卉, 張樹才. 肺癌篩查方法現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)肺癌雜志, 2016, 19(10): 715-720.

7 李佳, 齊軍. 小細(xì)胞肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 2015, 22(12): 1293-1296.

8 卞春安, 李忠佑, 許有濤, 等. 突變型P53蛋白在肺腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國(guó)肺癌雜志, 2015, 18(1): 23-28.

9 高燕, 吳雅清, 許嶸. 非小細(xì)胞肺癌早期診斷生物標(biāo)志物的研究[J]. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志, 2014, 11(4): 234-239.

10 張紅軍, 顧興, 劉偉, 等. 腫瘤標(biāo)志物動(dòng)態(tài)變化在肺癌療效判斷與隨訪中的意義[J/CD]. 中華肺部疾病雜志(電子版), 2016, 9(1): 26-30.

11 Boyle P, Chapman CJ, Holdenrieder S, et al. Clinical validation of an autoantibody test for lung cancer[J]. Ann Oncol, 2011, 22(2): 383-389.

12 Chapman CJ, Healey GF, Murray A, et al. early CDT(R)-lung test: improved clinical utility through additional autoantibody assays[J]. Tumour Biol, 2012, 33(5): 1319-1326.

13 Jett JR, Peek LJ, Fredericks L, et al. Audit of the autoantibody test, early CDT(R)-lung, in 1 600 patients: an evaluation of its performance in routine clinical practice[J]. Lung Cancer, 2014, 83(1): 51-55.

14 Wilz SW, Liu D, Liu C, et al. Development of a test to identify bladder cancer in the urine of patients using mass spectroscopy and subcellular localization of the detected proteins[J]. Am J Transl Res, 2015, 7(8): 1458-1466.

15 王會(huì)中, 任成山, 金發(fā)光. 腫瘤生物標(biāo)志物在肺癌患者檢測(cè)中的臨床意義及研究進(jìn)展[J/CD]. 中華肺部疾病雜志(電子版), 2016, 9(3): 329-333.

16 Yin L, Qu H, Chen Q. Proliferative response of peripheral blood mononuclear cells in anti-Hu antibody-associated patients with paraneoplastic neurological syndrome and their depressant effect on small cell lung cancer cells[J]. Mol Med Rep, 2015, 11(3): 1595-1600.

17 丁湘彧, 張寶秋, 張潔, 等. 肺癌患者血清中腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床意義[J/CD]. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版), 2011, 5(16): 4646-4650.

18 支修益, 姚舒洋. 腫瘤標(biāo)志物在肺癌患者管理中的研究進(jìn)展[J]. 首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 36(6): 986-991.

(本文編輯：張大春)

張紅軍，房延鳳，劉偉，等. 肺癌患者自身抗體與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析[J/CD]. 中華肺部疾病雜志(電子版)， 2017， 10(2)： 141-145.

Correlation between autoantibodies and tumor markers in patients with lung cancer

ZhangHongjun,FangYanfeng,LiuWei,XieYonghong,JinFaguang,GuXing.

Departmentofpulmonaryandcriticalcaremedicine,TangduHospital,theFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi′an710038,China

GuXing,Email:guxingxg@163.com

Objective The levels of autoantibodies (P53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5 and MAGE) and tumor markers (CEA, SCC, CA125, NSE and CYFRA21-1) were studied in patients with lung cancer, to explore their correlation between autoantibodies and tumor markers in lung cancer. Methods To collected 112 cases of patients with lung cancer were recruited in Department of Respiratory Medicine Tang Du Hospital the Fourth Military Medical University from September 2016 to December 2016. The autoantibodies P53, PGP9.5, SOX2, GAGE7, GBU4-5 and MAGE were measured by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELSA). And their CEA, SCC, CA125, NSE and CYFRA21-1 were measured by Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI). Then the relations between Autoantibodies and Tumor Markers were analyzed by spearman correlation test. Results By analyzing the levels of autoantibodies in patients with different pathological types of lung cancer, the median of GAGE7 is 7.30 U/ml in Lung adenocarcinoma patients, the result was significantly higher than squamous cell carcinoma, small cell carcinoma and other types of lung cancer patients(P=0.041). But P53, PGP9.5, SOX2, GBU4-5, MAGE and CAGE were no statistical difference. CEA and CA125 in lung adenocarcinoma, and SCC in lung squamous cell carcinoma were significantly increased(P<0.05). There were positive correlations between P53 and CEA and SCC (P=0.024, 0.016, respectively), between PGP9.5 and NSE (P<0.001), between GBU4-5 and SCC and CA199 (P<0.001, 0.011, respectively), between MAGE and SCC and CA199 (P=0.004, <0.001, respectively). Conclusion There was a positive correlation between autoantibodies and tumor markers. The both complement each other and more conducive to timely diagnosis of lung cancer.

Autoantibodies; Tumor markers; Bronchiogenic carcinoma

10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2017.02.006

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81071933)

710038 西安，第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院呼吸 與危重癥醫(yī)學(xué)科

顧興， Email: guxingxg@163.com

R734.2

A

2017-02-10)