白勝超　趙曉琴　孫君志　周越

摘要：探究針刺干預(yù)對(duì)一次離心運(yùn)動(dòng)后大鼠炎癥反應(yīng)的影響。方法：114只雄性（SD）大鼠，隨機(jī)分為4組：安靜對(duì)照組（C）、單純針刺組（A）、單純運(yùn)動(dòng)組（E）、運(yùn)動(dòng)針刺組（EA），E組和EA組均在坡度-16°的跑臺(tái)上進(jìn)行一次離心運(yùn)動(dòng)，A組和EA組進(jìn)行比目魚(yú)肌部位斜刺，之后按0h、2 h、24 h、48 h、72 h、120 h等時(shí)相進(jìn)行取材。HE染色觀察比目魚(yú)肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)；Western Blot法分別檢測(cè)比目魚(yú)肌、股直肌中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的蛋白表達(dá)；Elisa法檢測(cè)血漿中TNF-α的含量。結(jié)果：1）HE染色發(fā)現(xiàn)c組和A組均無(wú)顯著變化，E組出現(xiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行針刺使炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的峰值提前。2）比目魚(yú)肌中TNF-α，A組與c組相比均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；E組與C組、EA組具有顯著性差異（P<0.05），在E組72 h達(dá)到峰值，在EA組48 h時(shí)相達(dá)到峰值。3）股直肌和血漿中TNF-～結(jié)果基本一致，A組與C組相比均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；E組與C組具有顯著性差異（P<0.05），E組與EA組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論：?jiǎn)渭冞M(jìn)行針刺干預(yù)不會(huì)引起骨骼肌和血漿中明顯的炎癥反應(yīng)，離心運(yùn)動(dòng)可以導(dǎo)致骨骼肌出現(xiàn)一定程度的炎癥反應(yīng)，離心運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行針刺干預(yù)使針刺部位骨骼肌炎癥反應(yīng)的程度增加，并在峰值之后促使其消退；針刺產(chǎn)生的作用是局部效果，對(duì)非針刺部位骨骼肌和血漿的炎癥反應(yīng)不會(huì)產(chǎn)生顯著影響。

關(guān)鍵詞：離心運(yùn)動(dòng)；骨骼肌；血漿；炎癥；針刺

中圖分類(lèi)號(hào)：G 804.2 文章編號(hào)：1009-783X（2017）01-0085-06 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

針刺在中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中具有重要地位，許多研究領(lǐng)域中已有較為廣泛應(yīng)用，不同學(xué)科也對(duì)其機(jī)理進(jìn)行了大量探討。研究證實(shí)，運(yùn)動(dòng)能引起骨骼肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子（Ca²⁺）產(chǎn)生變化，進(jìn)而誘發(fā)后續(xù)的一系列生理反應(yīng)，而運(yùn)動(dòng)后對(duì)骨骼肌進(jìn)行針刺干預(yù)可以使胞漿內(nèi)Ca²⁺更快地恢復(fù)至正常水平，因此，針刺在運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域也有較多應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)針刺具有促進(jìn)骨骼肌機(jī)能恢復(fù)及治療肌肉損傷等作用，之后從骨骼肌與運(yùn)動(dòng)方面進(jìn)行了一系列的機(jī)理探索，其中有些研究發(fā)現(xiàn)針刺能夠促進(jìn)離心運(yùn)動(dòng)后大鼠骨骼肌腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表達(dá)。TNF-α具有較多的生物學(xué)功能，可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，有促使白細(xì)胞游出，具有強(qiáng)烈的趨化和激活嗜中性粒細(xì)胞的作用，可以作為炎癥反應(yīng)的重要指標(biāo)，這提示我們針刺干預(yù)對(duì)離心運(yùn)動(dòng)后大鼠炎癥反應(yīng)有一定影響。

20世紀(jì)70年代Tullson提出機(jī)體運(yùn)動(dòng)后會(huì)產(chǎn)生與急性免疫有關(guān)的反應(yīng)，之后較多研究者認(rèn)為大鼠進(jìn)行一次性長(zhǎng)時(shí)間離心運(yùn)動(dòng)，產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)在早期階段局部組織的主要浸潤(rùn)細(xì)胞為嗜中性粒細(xì)胞，后期炎癥反應(yīng)的主要細(xì)胞為巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的這些炎癥反應(yīng)和骨骼肌延遲性肌肉酸痛、骨骼肌微細(xì)損傷修復(fù)、骨骼肌凋亡自噬等均有重要關(guān)系，因此，探究針刺干預(yù)對(duì)運(yùn)動(dòng)后機(jī)體炎癥反應(yīng)的影響具有重要意義。

目前針刺對(duì)運(yùn)動(dòng)后骨骼肌的作用機(jī)制已有較多研究，但對(duì)于炎癥反應(yīng)的影響方面還尚未有很清楚的認(rèn)識(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)離心運(yùn)動(dòng)后大鼠進(jìn)行針刺干預(yù)，觀察大鼠比目魚(yú)肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，分析比目魚(yú)肌、股直肌、血漿中TNF-α的變化，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室以往的研究結(jié)果，探究針刺干預(yù)對(duì)一次離心運(yùn)動(dòng)后機(jī)體炎癥反應(yīng)的作用效果和部位，以期能夠從炎癥角度對(duì)針刺在運(yùn)動(dòng)方面的作用機(jī)理進(jìn)行一定理論補(bǔ)充。

1材料與方法

1.1動(dòng)物與分組

本實(shí)驗(yàn)選用8周齡雄性（SD）大鼠共114只，SPF級(jí)別，體重為（199±6.8）g，購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（京）2009-0007。大鼠在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所動(dòng)物房?jī)?nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)和相應(yīng)訓(xùn)練。分籠飼養(yǎng)，每籠6只，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水，室內(nèi)溫度為（22±2）℃，相對(duì)濕度30%～60%，光照12 h+黑暗12 h模擬晝夜交替。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d以后，進(jìn)行相應(yīng)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分為安靜對(duì)照組（Control，C）、單純針刺組（Acupuncture，A）、單純運(yùn)動(dòng)組（Exercise，E）、運(yùn)動(dòng)針刺組（Exercise+Acupuncture，EA）4個(gè)組。其中，后3組按取材時(shí)間又分為O h、2 h、24 h、48 h、72 h、120 h等時(shí)相組，每組各6只。

1.2處理方法與取材

運(yùn)動(dòng)方案：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)方案參照Armstrong的經(jīng)典離心運(yùn)動(dòng)模型，所有參與運(yùn)動(dòng)的大鼠在正式實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行為期3 d適應(yīng)性跑臺(tái)訓(xùn)練：第1天跑臺(tái)坡度0°，跑速16 m/min，時(shí)間5min第2天跑臺(tái)坡度0°，跑速16 m/min，時(shí)間10 min第3天進(jìn)行休息。第4天開(kāi)始正式實(shí)驗(yàn)，坡度-16°，跑速16 m/min，每次訓(xùn)練時(shí)間90 min。E組和EA組進(jìn)行運(yùn)動(dòng)，C組和A組不予運(yùn)動(dòng)。

針刺方案：在一次大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后即刻對(duì)EA組大鼠進(jìn)行針刺干預(yù)，同期對(duì)A組予以相同的針刺處理。用固定器將大鼠固定好，用酒精棉球?qū)﹄p后肢進(jìn)行消毒，用直徑0.25 mm的針灸針沿小腿三頭肌的縱向，從離跟腱約5 mm處的遠(yuǎn)端中心部位進(jìn)行斜刺，進(jìn)針角度約30°，進(jìn)針長(zhǎng)度約18 mm，穿過(guò)小腿三頭肌的肌腹，針刺大鼠比目魚(yú)肌位置，留針2 min。

大鼠腹主動(dòng)脈采血至抗凝管中，靜置10～20 min后，3 000r/min，離心20 min，取上清液，用于ELISA備測(cè)。將分離出來(lái)的比目魚(yú)肌和股直肌分別裝入凍存管中，立即投入液氮速凍，之后移至-80℃冰箱保存，用于Western Blot待測(cè)。EA組在離心運(yùn)動(dòng)后即刻進(jìn)行針刺干預(yù)，同期對(duì)A組進(jìn)行針刺處理。

1.3主要儀器與試劑endprint

-20℃恒冷切片機(jī)（LEICAUC6i萊卡），德國(guó)；奧林巴斯（OlympusIX71）倒置顯微鏡圖像采集系統(tǒng)；電泳儀（LKB 2301Macrodrive Power Supply LKBBROMMA），瑞典；垂直電泳槽（Cavoy MiniP-4），北京凱元儀器廠；電轉(zhuǎn)膜槽，BIO-RAD公司，美國(guó)；凝膠成像（Chemi Doc TMXRS），BIO-RAD，美國(guó)；酶標(biāo)儀（xMarkTMMicroplate Spectrophotometer），BIO-RAD公司；漢醫(yī)牌針灸針，直徑25mm，津食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2009第2270002號(hào)。

BCA蛋白定量試劑盒，貨號(hào)-23225，Pierce公司；發(fā)光液，貨號(hào)-34080MN Super Signal West Pico化學(xué)發(fā)光底物ThermoSCIENTIFIC；膜再生液，貨號(hào)-P1650，普利萊基因技術(shù)有限公司；PVDF轉(zhuǎn)膜，Millipore公司；預(yù)染蛋白Marker，貨號(hào)-P7708，NEW ENGLAND BioLabs TNF-α抗體，貨號(hào)-ab65157，abcam公司；兔抗GAPDH多克隆IgG抗體，杭州至賢生物科技有限公司；HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG，貨號(hào)-ZB-2301，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；大鼠TNF-α酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒，北京鑫方程生物技術(shù)有限公司。

1.4測(cè)試指標(biāo)與方法

1.4.1比目魚(yú)肌HE染色

恒冷切片機(jī)上調(diào)節(jié)溫度為-20℃，將樣品沿橫向截面切成厚度為8μm的薄片，貼在多聚賴(lài)氨酸處理過(guò)的載玻片上，將樣片放置4%的多聚甲醛中固定30 min，之后放置雙蒸水中1min，甩掉水分，用蘇木素染色5 min，再用自來(lái)水沖洗去切片上的殘留染色液直至切片變成藍(lán)色，用配置的含1%鹽酸的70%乙醇溶液，浸泡分色3 s左右，之后自來(lái)水沖洗5 min，再用蒸餾水浸洗大約1 min，放入伊紅水溶液，浸染2 min。將組織切片用蒸餾水洗去附在載玻片上的殘余染液，30%、70%、95%、無(wú)水乙醇、無(wú)水乙醇脫色，每次2 min，透明切片入二甲苯2次進(jìn)行透明，每次2 min，樹(shù)膠封片。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每一比目魚(yú)肌切片的中心視野處進(jìn)行圖像采集。

1.4.2 Western Blot方法檢測(cè)比目魚(yú)肌、股直肌中TNF-α蛋白表達(dá)

使用電子天平稱(chēng)取大鼠比目魚(yú)肌和股直肌組織的質(zhì)量，按照1 mg肌組織加入10μL配置的裂解液比例進(jìn)行混合，在冰上剪碎，勻漿，低溫高速離心機(jī)1萬(wàn)4 000 r/min、溫度4℃、離心10 min。取離心后的上清液，4℃暫時(shí)儲(chǔ)存。BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，調(diào)整所有樣品的蛋白濃度，使上樣量保持一致，按比例4：1加入5×樣品緩沖液，煮沸5 min，備用。配置SDS-PAGE凝膠進(jìn)行電泳，電壓90 V，時(shí)間30 min，跑入分離膠以后，電壓140 V，電泳60～90 min，根據(jù)跑膠具體情況適當(dāng)調(diào)整時(shí)間。轉(zhuǎn)膜為恒流300 mA，時(shí)間90 min。之后將膜放置于5%BSA封閉液中，室溫輕搖封閉3 h。封閉液稀釋一抗（TNF-α1：2000，GAPDH1：1 000）將膜放置于一抗溶液中，室溫6 h搖床孵育或4℃冰箱過(guò)夜。室溫TBST進(jìn)行洗膜6次×5 min。二抗孵育用封閉液按比例1：5 000稀釋HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG，室溫孵育2 h。室溫TBST搖床洗膜6次，5 min。取相同體積量的超敏發(fā)光液A液和B液進(jìn)行混合，并滴加到膜上，使充分與發(fā)光液接觸。去除氣泡，吸去多余的發(fā)光工作液，將膜置于凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)，顯像。利用Gel-pro軟件進(jìn)行相應(yīng)的條帶灰度值分析。

1.4.3 ELISA方法檢測(cè)血漿中TNF-α水平

取血漿恢復(fù)室溫進(jìn)行測(cè)定。主要測(cè)試步驟為：稀釋標(biāo)準(zhǔn)品、加樣并設(shè)空白孔和待測(cè)樣品孔，37℃溫育30 min，甩干液體，洗滌液重復(fù)洗滌5次，待測(cè)樣品孔加入酶標(biāo)試劑液，37℃再溫育30 min，洗滌，顯色，加入終止液，酶標(biāo)儀測(cè)OD值并進(jìn)行濃度計(jì)算。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)均使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）的形式進(jìn)行表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用多因素方差分析和單因素方差分析，多因素方差分析采用固定效應(yīng)模型，對(duì)固定因素分組方式（安靜對(duì)照、離心運(yùn)動(dòng)、單純針刺、運(yùn)動(dòng)針刺）和取材時(shí)間（0、2、24、48、72、120 h）進(jìn)行主效應(yīng)及兩者的交互作用分析。如果主效應(yīng)顯著（P<0.05）則采用LSD方法進(jìn)行事后多重比較分析（LSD Post Hoc Tests），對(duì)某一因素中單一水平內(nèi)各觀測(cè)值之間的相互比較采用單因素方差分析，方差齊性時(shí)用LSD方法，方差不齊性時(shí)用Tamhanes方法，顯著性水平取P<0.05，非常顯著性水平取P<0.01。

2結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果

從圖1的染色結(jié)果可見(jiàn)，安靜組比目魚(yú)肌組織橫切片的細(xì)胞大多呈多角形，骨骼肌細(xì)胞核呈圓形或橢圓形分布于肌膜邊緣，未見(jiàn)到腫脹固縮等情況，肌膜清晰完整，肌細(xì)胞之間未見(jiàn)到明顯的血管改變和炎性反應(yīng)。

從圖2的HE染色結(jié)果可見(jiàn)，0、2、24、48、72、120 h肌纖維結(jié)構(gòu)趨于正常，骨骼肌纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)和安靜組基本相問(wèn)，細(xì)胞間未見(jiàn)到明顯的浸潤(rùn)。

從圖3的HE染色結(jié)果可見(jiàn)，離心運(yùn)動(dòng)后0 h、2 h大鼠比目魚(yú)肌局部偶見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，24 h大鼠比目魚(yú)肌肌纖維局部有少量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)到骨骼肌細(xì)胞間，48 h、72 h浸潤(rùn)明顯增多，120 h浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞相比72 h時(shí)相可見(jiàn)到有所減少。

從圖4的HE染色結(jié)果可見(jiàn)，運(yùn)動(dòng)針刺組0 h和2 h，并未發(fā)現(xiàn)明顯的浸潤(rùn)，偶見(jiàn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，和單純運(yùn)動(dòng)組的相似，在24 h組發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞較多，受此實(shí)驗(yàn)條件限制，不能確定此模型下浸潤(rùn)細(xì)胞的類(lèi)型，48 h能夠看到浸潤(rùn)程度明顯要比單純運(yùn)動(dòng)組48 h嚴(yán)重，72 h開(kāi)始出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，120 h浸潤(rùn)程度相比同時(shí)相的單純運(yùn)動(dòng)組明顯減輕，并且細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨于完整。endprint

2.2大鼠比目魚(yú)肌中TNF-α的變化

對(duì)分組方式因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有極顯著差異（P<0.01），進(jìn)一步進(jìn)行事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示C組和A組無(wú)顯著性差異（P>0.05），C組和E組、EA組均有極顯著性差異（P<0.01），A組和EA組有極顯著性差異（P<0.01），E組和EA組具有顯著性性差異（P<0.05）。

對(duì)取材時(shí)間因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有顯著影響，進(jìn)一步的事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，24 h與0、48、120 h，48、72 h與0、2、120 h之間具有顯著性差異（P<0.05），其余時(shí)相相互比較均未有顯著性差異（P>0.05）。對(duì)兩因素的交互作用進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有顯著性影響（P<0.01）。各個(gè)分組內(nèi)不同時(shí)相的均值及單因素方差分析結(jié)果見(jiàn)表1，均值變化趨勢(shì)如圖5所示。

2.3大鼠股直肌中TNF-α的變化

對(duì)分組方式因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有極顯著差異（P<0.01），進(jìn)一步進(jìn)行事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示C組和A組無(wú)顯著性差異（P>0.05），C組和E組、EA組均有極顯著性差異（P<0.01），A組和EA組有極顯著性差異（P<0.01），E組和EA組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

對(duì)取材時(shí)間因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有顯著影響，進(jìn)一步的事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，48、120 h與0、2、24 h等時(shí)相及72 h與所有時(shí)相之間都具有顯著性差異（P<0.05），其余時(shí)相相互比較均未有顯著性差異（P>0.05）。對(duì)兩因素的交互作用進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有顯著性影響（P<0.01）。

各個(gè)分組內(nèi)不同時(shí)相的均值及單因素方差分析結(jié)果見(jiàn)表2，均值變化趨勢(shì)如圖6所示。

2.4大鼠血漿中TNF-α的變化

對(duì)分組方式因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有極顯著差異（P<0.01），進(jìn)一步進(jìn)行事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示C組和A組無(wú)顯著性差異（P>0.05），C組和E組、EA組均有極顯著性差異（P<0.01），A組和EA組有極顯著性差異（P<0.01），E組和EA組無(wú)顯著性性差異（P>0.05）。

對(duì)取材時(shí)間因素進(jìn)行主體效應(yīng)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示具有顯著影響，進(jìn)一步的事后多重檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，0h與24、48、72、120 h，2 h與120 h之間具有顯著性差異，其余時(shí)相相互比較均未有顯著性差異（P>0.05）。對(duì)兩因素的交互作用進(jìn)行檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示不具有顯著性影響（P>0.05）。各個(gè)分組內(nèi)不同時(shí)相的均值及單因素方差分析結(jié)果見(jiàn)表3，均值變化趨勢(shì)如圖7所示。

3分析討論

從事不習(xí)慣或長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后會(huì)導(dǎo)致骨骼肌結(jié)構(gòu)產(chǎn)生損傷性變化，并伴隨著炎癥反應(yīng)，最開(kāi)始為中性粒細(xì)胞進(jìn)入受損部位，之后巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)增多并成為主要的炎癥細(xì)胞，炎癥細(xì)胞發(fā)揮雙重作用，一是中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞吞噬壞死細(xì)胞和碎片，二是分泌一些生長(zhǎng)因子可以激活肌衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行修復(fù)再生。

HE染色發(fā)現(xiàn)，在單純針刺組并未發(fā)現(xiàn)明顯浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞，說(shuō)明單獨(dú)進(jìn)行針刺并不能引起明顯的炎癥反應(yīng)，可能是由于并未產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，或是炎癥反應(yīng)程度較低，范圍較小，在光鏡下很難找到針刺所導(dǎo)致炎癥的反應(yīng)區(qū)域。屈芳的研究發(fā)現(xiàn)比目魚(yú)肌在運(yùn)動(dòng)后6 h，肌纖維間出現(xiàn)大量的炎性細(xì)胞，在12 h一直到運(yùn)動(dòng)后72 h，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸增多，在72 h時(shí)達(dá)到浸潤(rùn)高峰。在本實(shí)驗(yàn)單純運(yùn)動(dòng)組中O h和2 h組幾乎未見(jiàn)到浸潤(rùn)，是由于炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到骨骼肌中需要一定的時(shí)間，72 h浸潤(rùn)達(dá)到峰值，120 h與安靜組相比存在較顯著的浸潤(rùn)，這與許多研究結(jié)果類(lèi)似，說(shuō)明骨骼肌在離心運(yùn)動(dòng)后的120 h內(nèi)一直存在著炎癥反應(yīng)。

離心運(yùn)動(dòng)后針刺使炎癥反應(yīng)的高峰時(shí)相出現(xiàn)在48 h，而在120 h能夠看到浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞明顯要比單純運(yùn)動(dòng)組少，說(shuō)明進(jìn)行針刺能夠使針刺部位骨骼肌炎癥反應(yīng)的峰值時(shí)相提前，并能提早結(jié)束。在離心運(yùn)動(dòng)后對(duì)骨骼肌炎癥反應(yīng)進(jìn)行干預(yù)的類(lèi)似實(shí)驗(yàn)中，艾磊的研究發(fā)現(xiàn)布洛芬可以加快損傷較重的跖肌的炎癥反應(yīng)速度，并促使肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖。在本模型中針刺比目魚(yú)肌也有類(lèi)似的結(jié)果，但其機(jī)理是否相同還有待于進(jìn)一步研究。

TNF-α作為炎癥標(biāo)志物，在一定程度上能夠反映炎癥變化情況，結(jié)合HE染色可以更準(zhǔn)確地分析炎癥反應(yīng)的程度。Kim-berly等研究發(fā)現(xiàn)，骨骼肌進(jìn)行超載負(fù)荷后的12 h、24 h、48h、72 h等時(shí)相，TNF-α蛋白表達(dá)均顯著高于對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果比目魚(yú)肌、股直肌、血漿中TNF-α均受時(shí)相的影響較大，其中比目魚(yú)肌中48 h、72 h時(shí)相是本實(shí)驗(yàn)中蛋白表達(dá)變化的主要時(shí)刻點(diǎn)，結(jié)合HE染色可知48 h為運(yùn)動(dòng)針刺組的峰值，72 h為單純運(yùn)動(dòng)組的峰值，而0h和2 h是血漿質(zhì)量濃度變化的主要時(shí)刻點(diǎn)。

單獨(dú)進(jìn)行比目魚(yú)肌針刺，并未明顯引起血漿和骨骼肌TNF-α的變化，這與HE的染色結(jié)果相符，可能原因是并未引起比目魚(yú)肌TNF-α的產(chǎn)生或是產(chǎn)生量較少，入血后質(zhì)量濃度較低導(dǎo)致血漿TNF-α質(zhì)量濃度變化較小，也使得股直肌中幾乎無(wú)變化。

運(yùn)動(dòng)對(duì)TNF-α的影響，目前相關(guān)研究較多，Vassilakopou-los等發(fā)現(xiàn)，沒(méi)有訓(xùn)練經(jīng)歷的健康男性進(jìn)行70%最大攝氧量的運(yùn)動(dòng)可以引起血漿中TNF-α升高。Andrei等研究發(fā)現(xiàn)，健康青年男性進(jìn)行3 h的60～65%功率自行車(chē)和跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)中1 h和3 h時(shí)相血漿中TNF-α顯著高于運(yùn)動(dòng)前安靜水平，在運(yùn)動(dòng)結(jié)束后3 h和24 h時(shí)相仍然高于運(yùn)動(dòng)前水平。這些研究均表明，運(yùn)動(dòng)能夠促使TNF-α高表達(dá)。在本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果中也表明進(jìn)行離心運(yùn)動(dòng)能引起比目魚(yú)肌、股直肌和血漿中TNF-α的極顯著變化，這與目前的研究結(jié)論一致。對(duì)于運(yùn)動(dòng)后TNF-α的峰值變化情況，屈芳采用坡度為-16°的跑臺(tái)上，實(shí)驗(yàn)大鼠以16 m/min的速度進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，持續(xù)90min，發(fā)現(xiàn)比目魚(yú)肌中在72 h時(shí)TNF-α的表達(dá)達(dá)到高峰。在本實(shí)驗(yàn)的單純運(yùn)動(dòng)組內(nèi)比目魚(yú)肌和股直肌中均是在72 h達(dá)到峰值，這與屈芳的研究相同。結(jié)合HE染色可知是由于骨骼肌的炎癥反應(yīng)加強(qiáng)，并且浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞增多，TNF-α分泌較多的緣故。

運(yùn)動(dòng)針刺對(duì)TNF-α的影響，徐濤對(duì)大鼠進(jìn)行離心運(yùn)動(dòng)3周，并進(jìn)行比目魚(yú)肌針刺干預(yù)，發(fā)現(xiàn)針刺作為干預(yù)手段能夠提高TNF-α的表達(dá)。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)針刺對(duì)運(yùn)動(dòng)后比目魚(yú)肌TNF-α蛋白有顯著影響，但并未引起股直肌和血漿中TNF-α明顯的變化。說(shuō)明針刺對(duì)于離心運(yùn)動(dòng)后的影響是局部的，局限于針刺部位，而對(duì)于非針刺部位骨骼肌和血漿則不能產(chǎn)生明顯的作用效果。本研究發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)針刺比目魚(yú)肌后TNF-α在48 h上升到峰值，與同時(shí)相的運(yùn)動(dòng)組相比具有顯著性差異，結(jié)合HE染色可知炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的峰值時(shí)相比單純運(yùn)動(dòng)組提前出現(xiàn)，之后在120 h恢復(fù)到較低水平。

運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行針刺可能的意義在于，促使針刺部位骨骼肌炎癥程度增加并維持在較高水平，有利于加快局部清除受損肌纖維的速度，但對(duì)骨骼肌的最終恢復(fù)效果是否產(chǎn)生影響還有待于進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中單純進(jìn)行針刺干預(yù)不會(huì)引起骨骼肌和血漿中明顯的炎癥反應(yīng)，離心運(yùn)動(dòng)可以導(dǎo)致骨骼肌出現(xiàn)一定程度的炎癥反應(yīng)，離心運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行針刺干預(yù)使針刺部位骨骼肌炎癥反應(yīng)的程度增加，并在峰值之后促使其消退；針刺產(chǎn)生的作用是局部效果，對(duì)非針刺部位骨骼肌和血漿不會(huì)產(chǎn)生顯著影響。endprint