周 蒙， 劉功駿， 何凌霄， 王 飛

(1.南京林業(yè)大學(xué) 江蘇省林業(yè)資源高效加工利用協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210037；2.南京林業(yè)大學(xué) 化學(xué)工程學(xué)院；江蘇省生物質(zhì)綠色燃料與化學(xué)品重點實驗室，江蘇 南京 210037)

黑荊樹原花色素二聚體的分離制備及抗氧化活性研究

ZHOU Meng

周 蒙1,2， 劉功駿1,2， 何凌霄1,2， 王 飛1,2*

(1.南京林業(yè)大學(xué) 江蘇省林業(yè)資源高效加工利用協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210037；2.南京林業(yè)大學(xué) 化學(xué)工程學(xué)院；江蘇省生物質(zhì)綠色燃料與化學(xué)品重點實驗室，江蘇 南京 210037)

以黑荊樹皮為原料，采用超聲波輔助提取技術(shù)提取原花色素，并利用溶劑萃取法得到低聚原花色素含量較高的乙酸乙酯萃取物；進(jìn)一步通過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱和快速蛋白液相色譜(FPLC)分離純化制備黑荊樹原花色素二聚體，并采用HPLC-MS對產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明：超聲波輔助提取原花色素的粗提物得率高達(dá)50.21%，其中含原花色素為40.75%，乙酸乙酯萃取物經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱可得液相純度約為60%的組分I(得率約為5%)；組分I經(jīng)FPLC分離，水-甲醇為流動相，得到純度為91.72%的原花色素二聚體(得率約為13%)；HPLC-MS分析表明，原花色素二聚體相對分子質(zhì)量為578，可能是由原花青定的C-4鍵與原刺槐定的C- 8鍵相連。黑荊樹原花色素二聚體對DPPH自由基的清除率分析表明：原花色素二聚體的抗氧化活性總體高于兒茶素以及表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)標(biāo)樣，當(dāng)二聚體濃度為60 μmol/L時對DPPH清除率大于80%，高于EGCG(約為68%)和兒茶素(約為50%)。

黑荊樹皮；原花色素；制備；抗氧化活性

原花色素是自然界廣泛存在的一類多酚化合物的總稱，具有C6-C3-C6基本構(gòu)架，廣泛存在于植物的根、莖、葉、花、果實和樹皮中，已發(fā)現(xiàn)的原花色素含量較高的植物超過600種，其中對海岸松、花旗松、葡萄籽、山楂、高粱、越桔、地榆、蘋果等原花色素植物資源進(jìn)行的研究較系統(tǒng)[1-2]。原花色素優(yōu)越的抗氧化能力和自由基清除活性已被人們廣泛認(rèn)可，同時，原花色素還具有抑制腫瘤、改善人體微循環(huán)[3-4]、抗炎[5]等多種特殊功效。Wood等[6]研究了不同pH值條件下海岸松樹皮原花色素以及葡萄籽原花色素的抗氧化活性，結(jié)果表明堿性條件下原花色素的抗氧化活性高且兩種原料的原花色素超氧化自由基清除率均大于維生素C和維生素E。Oldoni等[7]從花生種皮中得到原花青素A1和原花青素A2，通過活性對比研究發(fā)現(xiàn)原花青素A1和原花青素A2的抗氧化活性高于合成抗氧化劑丁基羥基茴香醚(BHA)和二丁基羥基甲苯(BHT)。目前以葡萄籽中原花色素作為主要活性成分的保健品開發(fā)較多，市售的法國沿海松樹皮提取物膠囊主要生物活性成分也為原花青素。黑荊樹(AcaciamearnsiiDe Willd)為豆科金合歡屬常綠喬木，原產(chǎn)新南威爾士、維多利亞、南澳大利亞、塔斯馬尼亞等地，我國主要適宜栽植于福建、廣東、湖南、廣西、湖北、四川、云南、貴州等南方省區(qū)，是一種生長快、伐期短、用途廣、商業(yè)性強(qiáng)的樹種，其制成的栲膠顏色淺、鞣性好，為國際上公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)烤膠。近年來研究發(fā)現(xiàn)黑荊樹具有抑菌[8]、抗氧化等生物活性，其主要活性成分為黑荊樹原花色素。常見的葡萄籽中原花色素約占干基的3.9%[9]。黑荊樹樹皮中原花色素約占干基的20%[10]，其高含量使得黑荊樹皮原花色素的分離純化存在先天優(yōu)勢。黑荊樹皮原花色素存在4個單體：原菲瑟定、原花青定、原刺槐定以及原翠雀定[10]，復(fù)雜的單體組成導(dǎo)致二聚體、三聚體結(jié)構(gòu)增多，相比于葡萄籽原花色素更難分離。Kusano等[11]從黑荊樹皮中分離制備出16種純品，且首次分離出4′-O-甲基刺槐亭醇-3′-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷以及兩個原花色素二聚體(菲瑟亭醇-4α,6-沒食子兒茶素、表刺槐亭醇-4β，8-兒茶素)，但分離過程復(fù)雜且得率低。本研究利用葡聚糖凝膠柱以及快速蛋白液相色譜儀分離純化制備黑荊樹皮原花色素二聚體，采用HPLC-MS方法分析了二聚體的結(jié)構(gòu)，并考察了原花色素二聚體的DPPH清除能力，旨在尋找一種簡單、快速、高效的原花色素二聚體純品制備方法，同時為黑荊樹原花色素的抗氧化、抗腫瘤、抗炎等生物活性研究提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

黑荊樹(AcaciamearnsiiDe Willd)樹皮，廣西黃冕林場提供，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎至0.25～0.55 mm，備用；兒茶素和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)購自SIGMA公司；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20購自GE Healthcare公司；乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水；石油醚、乙醇、乙酸乙酯、甲醇均為分析純試劑。

1.2 黑荊樹皮原花色素的提取和初步分離

采用超聲波輔助提取技術(shù)提取黑荊樹皮原花色素[12]：黑荊樹皮粗粉10.0g以體積分?jǐn)?shù)50%乙醇作為提取溶劑，料液比為1 ∶11(g ∶mL)，提取溫度34 ℃，提取時間30 min，超聲波頻率67 kHz，提取3次。提取液旋蒸后冷凍干燥得粗提物4.52 g，樣品用溶劑萃取法進(jìn)一步分級分離。10 g粗提物溶解于 100 mL 水中，加入石油醚萃取(體積比2 ∶1，萃取3次)。水層再用乙酸乙酯萃取(體積比1 ∶3，重復(fù)3次)。水層和乙酸乙酯層分別旋蒸后冷凍干燥，備用。根據(jù)文獻(xiàn)[13]乙酸乙酯萃取物中主要含中等相對分子質(zhì)量(Mn=860)的單寧化合物，如兒茶素的2～5聚體；水層主要是相對分子質(zhì)量較高(Mn=1 550)的多酚以及少量的非單寧化合物。本實驗以乙酸乙酯層的低聚原花色素為原料進(jìn)行分離純化。

黑荊樹皮原花色素粗提物得率計算公式見式(1)：

(1)

式中：y—粗提物得率，%；m0—樹皮質(zhì)量，g；m1—提取物質(zhì)量，g；W—樹皮含水量，%。

1.3 黑荊樹皮原花色素的分離純化

1.3.1 葡聚糖凝膠Sephadex LH-20分離 稱取2 g 1.2節(jié)所得低聚原花色素樣品(乙酸乙酯萃取物)溶于乙醇，過0.45 μm濾膜，所得溶液通過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱(3 cm×30 cm)進(jìn)行層析分離。洗脫液為無水乙醇，流速0.5 mL/min，洗脫液(10 mL/管)分管按順序收集(洗脫至少800 mL)，最后用50 %丙酮沖洗出吸附物質(zhì)。所得樣品經(jīng)液相分析后合并備用，得到組分I。

1.3.2 快速蛋白液相色譜(FPLC)分離 配制質(zhì)量濃度為10 g/L組分I的甲醇溶液，待FPLC基線平穩(wěn)后進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為 2 mL，按梯度洗脫方法純化組分I，根據(jù)色譜峰收集目標(biāo)組分。

梯度洗脫方法：FPLC分離選用反向?qū)游龅姆椒０?，制備色譜柱為博納艾杰爾科技XBP-C18柱(250 mm×10 mm，5 μm)；流動相為水和甲醇(流動相過0.45 μm濾膜，超聲波脫氣)；梯度洗脫程序為0～80 min下甲醇體積分?jǐn)?shù)10%→50%，流速為1.5 mL/min，檢測波長為280 nm。

1.4 HPLC-MS分析方法

HPLC分析條件：色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈和水；線性洗脫方式為0～30 min時乙腈體積分?jǐn)?shù)10%→25%，30～35 min時乙腈體積分?jǐn)?shù)25%→75%。進(jìn)樣量為5 μL，流速為0.5 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長為280 nm。

MS分析條件：離子源為ESI，負(fù)離子掃描；掃描范圍m/z50～1 500 ；霧化氣溫度為350 ℃；霧化氣流速為12 L/min；霧化氣壓力241.38 kPa；毛細(xì)管電壓4 000 V；錐孔電壓-40.0 V；毛細(xì)管出口電壓-135 V。

1.5 原花色素抗氧化活性分析

參照文獻(xiàn)[14]抗氧化活性測定方法比較原花色素二聚體及兒茶素、EGCG標(biāo)樣的抗氧化活性。以50%乙醇為溶劑配制濃度為5×10-5mol/L的DPPH乙醇溶液，524 nm下DPPH有強(qiáng)吸收峰，原花色素與DPPH結(jié)合使其吸光度變小從而評價樣品的抗氧化能力。取0.5 mL不同濃度的樣品溶液加入3 mL DPPH溶液，反應(yīng)30 min后測得吸光度記為Ai；0.5 mL樣品溶液加入3 mL溶劑，測得吸光度記為Aj；0.5 mL溶劑加入3 mL DPPH溶液，測得吸光度記為Ac。

DPPH自由基清除率(yDPPH·)的計算方法見式(2)：

yDPPH·=(1-(Ai-Aj)/Ac) ×100%

(2)

2 結(jié)果與分析

2.1 黑荊樹皮原花色素的提取及初步分離

圖1 黑荊樹皮提取物乙酸乙酯層的HPLC圖Fig.1 HPLC chromatogram of acetic ether phase from A. mearnsii bark

超聲波輔助技術(shù)提取黑荊樹皮原花色素，其粗提物得率高達(dá)50.21%，經(jīng)香草醛-硫酸法測得含原花色素為40.75%。黑荊樹皮提取物先通過石油醚萃取除去皂苷和生物堿類物質(zhì)，水層用乙酸乙酯再次萃取，最終得乙酸乙酯層與水層質(zhì)量比為5.3 ∶4.3。原花色素屬于熱敏性物質(zhì)，傳統(tǒng)的熱水浸提會導(dǎo)致原花色素發(fā)生自聚，從而降低提取物中低聚原花色素的含量。超聲波輔助提取技術(shù)采用低溫提取，使得到低聚原花色素(乙酸乙酯萃取物)的量明顯增多，以乙酸乙酯萃取物為原料進(jìn)行下一步分離純化。黑荊樹皮提取物乙酸乙酯層HPLC圖，如圖1所示。

2.2 黑荊樹皮原花色素的分離純化

2.2.1 Sephadex LH-20柱層析結(jié)果 乙酸乙酯萃取后物質(zhì)過Sephadex LH-20柱(3 cm×30 cm)層析，樣品前沿到達(dá)柱長4/5時開始收集流出組分。2.0 g乙酸乙酯層樣品通過Sephadex LH-20，乙醇為洗脫液進(jìn)行分離純化，通過液相色譜-質(zhì)譜分析流出物質(zhì)并合并相同組分。結(jié)果表明：第106號～125號管為相同物質(zhì)且樣品純度均大于50%，該組分記為組分I，如圖2所示。組分I得率約5%，合并后該組分含有純度約60%的二聚體(相對分子質(zhì)量578)。純化過程簡單、便捷、快速且效果顯著，組分I旋蒸后冷凍干燥，備用。

由于黑荊樹皮原花色素單體組成成分多，二聚體、三聚體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同的二聚體以及三聚體可能極性相似，不同物質(zhì)間相似的極性給樣品的分離純化帶來困難，因此選用葡聚糖凝膠對黑荊樹皮的乙酸乙酯萃取物進(jìn)行粗分離是得到原花色素純品至關(guān)重要的一步。

2.2.2 FPLC純化結(jié)果 FPLC對植物組分的制備分離原理與制備液相一致，按峰將目標(biāo)組分進(jìn)行收集。以組分I為原料進(jìn)行FPLC分離純化，組分I中目標(biāo)組分(原花色素二聚體)純度大于60%。按照1.3.2節(jié)FPLC分離純化方法，根據(jù)色譜圖(圖3)的出峰情況，用自動收集器收集流出組分，并用液質(zhì)進(jìn)行檢測分析。合并相同組分后旋蒸冷凍干燥得粉末。

圖2 Sephadex LH-20柱層析所得組分I的HLPC圖

Fig.2 HPLC chromatogram of sample I purified by Sephadex LH-20

圖3 原花色素二聚體的FPLC制備圖譜

Fig.3 Preparation of proanthocyanidins dimer by FPLC

由圖3分析發(fā)現(xiàn)：橫坐標(biāo)為82～95 min時流出物含量最高，每4 mL收集組分，經(jīng)液相色譜分析后發(fā)現(xiàn)該部分物質(zhì)為二聚體578。

2.3 HPLC-MS分析結(jié)果

二聚體578的HPLC-MS圖如圖4所示，根據(jù)面積歸一法計算得二聚體578純度為91.72%。

圖4 FPLC制備的二聚體的HPLC-MS圖

為進(jìn)一步確定該二聚體578的結(jié)構(gòu)，對其進(jìn)行二級質(zhì)譜分析，如圖5所示。

圖5 m/z 577.5離子的二級質(zhì)譜圖

圖6 相對分子質(zhì)量578二聚體結(jié)構(gòu)圖Fig.6 Chemical structure of dimer with the relative molecular weight of 578

從圖5可以看出，[M-H]-m/z577.5的碎片峰主要有m/z558.6、534.2、467.4、425.4、409.5、289.2和245.2。m/z558.6主要是原花色素失去一分子H2O得到的碎片峰；m/z534.2主要是原花色素失去A環(huán)的一個中性分子CO2(相對分子質(zhì)量44)；m/z467.4主要是原花色素失去B環(huán)上的C6H6O2結(jié)構(gòu)(相對分子質(zhì)量為110)；m/z409.5主要是由于逆Diels-Alder(RDA)反應(yīng)，在黃酮骨架結(jié)構(gòu)的C環(huán)上發(fā)生RDA反應(yīng)后失去一個中性的C8H8O4結(jié)構(gòu)(相對分子質(zhì)量168)，由此碎片峰可以初步確定該二聚體中單體結(jié)構(gòu)可能存在原刺槐定；m/z289.2是由于C—C連接鍵的斷裂出現(xiàn)的單分子離子峰；m/z245.2則是經(jīng)過上述斷裂后失去A環(huán)的一個中性分子CO2(相對分子質(zhì)量44)。裂變規(guī)律與劉國強(qiáng)等的研究一致[15]，猜測相對分子質(zhì)量為578的二聚體是由原花青定的C- 4鍵與原刺槐定的C- 8鍵相連，其可能的結(jié)構(gòu)如圖6所示。

200mg組分Ⅰ經(jīng)FPLC純化分離，純度91.72%的二聚體得率約13%，純化制備過程操作簡單、快速、高效且重復(fù)性好。

2.4 抗氧化活性結(jié)果

圖7 原花色素對DPPH·清除率Fig.7 The free radical-scavenging ability of proanthocyanidins

采用DPPH法對分離得到的原花色素二聚體以及兒茶素、EGCG標(biāo)樣進(jìn)行抗氧化活性分析，結(jié)果如圖7所示。由圖7可以看出，分離得到的二聚體抗氧化活性高于兒茶素及EGCG；在10 μmol/L濃度下，兒茶素對DPPH自由基清除率約10%，二聚體578及EGCG對其清除率約為15%；隨著濃度的增加，各物質(zhì)對DPPH自由基的清除率均明顯增加，當(dāng)濃度為60 μmol/L時，二聚體578對DPPH自由基清除率大于80%，EGCG對其清除率約為68%，兒茶素對其清除率約為50%。

兒茶素含有4個酚羥基，二聚體578含有8個酚羥基，根據(jù)結(jié)構(gòu)對比，基本確定酚羥基越多，物質(zhì)的抗氧化活性越高。EGCG含有8個酚羥基，其抗氧化活性低于二聚體578，結(jié)構(gòu)差別在于EGCG上含有沒食子酸酯上的3個酚羥基，猜測二聚體578的B環(huán)上的酚羥基具有較強(qiáng)的抗氧化活性。本研究從原花色素構(gòu)效關(guān)系出發(fā)，研究其抗氧化活性，為尋找活性位點奠定基礎(chǔ)，具有一定的藥學(xué)意義。

3 結(jié) 論

3.1 以黑荊樹皮為原料，采用超聲波輔助提取技術(shù)提取原花色素，并利用溶劑萃取法得到低聚原花色素含量較高的乙酸乙酯萃取物；進(jìn)一步通過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱和快速蛋白液相色譜(FPLC)分離純化制備黑荊樹原花色素二聚體，并采用HPLC-MS對產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明：超聲波輔助提取原花色素的粗提物得率高達(dá)50.21%，其中含原花色素為40.75%，乙酸乙酯萃取物經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱可得液相純度約為60%的組分I(得率約為5%)；組分I 經(jīng)FPLC分離，水-甲醇為流動相，得到純度為91.72%的原花色素二聚體(得率約為13%)；HPLC-MS分析表明，原花色素二聚體相對分子質(zhì)量為578，可能是由原花青定的C- 4鍵與原刺槐定的C- 8鍵相連。

3.2 黑荊樹原花色素二聚體對DPPH自由基的清除率分析表明：原花色素二聚體的抗氧化活性總體高于兒茶素以及表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)標(biāo)樣，二聚體濃度為60 μmol/L時對DPPH自由基清除率大于80%，此時EGCG的清除率約為68%，兒茶素的清除率約為50%。

3.3 葡聚糖凝膠柱層析結(jié)合快速蛋白液相色譜法是一種簡單、快速、高效的原花色素二聚體制備方法，該方法分離效果好、綠色環(huán)保；所得二聚體的抗氧化活性高、水溶性好，可進(jìn)一步開發(fā)黑荊樹的藥用價值，從而拓寬該樹種的應(yīng)用領(lǐng)域，具有重要的經(jīng)濟(jì)價值和實踐意義。

[1]石碧, 杜曉. 植物原花色素研究利用進(jìn)展與發(fā)展趨勢[J]. 四川大學(xué)學(xué)報：工程科學(xué)版, 2006, 38(5): 16-24. SHI B, DU X. The progress on research and utilization of plant proanthocyanidins[J]. Journal of Sichuan University: Engineering Science Edition, 2006, 38(5): 16-24.

[2]伍麗娜, 孫皓, 孫娜. 分光光度法測原花色素抗氧化活性條件研究[J]. 農(nóng)業(yè)機(jī)械, 2012(21): 110-112. WU L N, SUN H, SUN N. Study on antioxidant activity of proanthocyanidins by spectrophotometry[J]. Farm Machinery, 2012(21): 110-112.

[3]張長貴, 董加寶, 王禎旭. 原花色素及其開發(fā)應(yīng)用[J]. 四川食品與發(fā)酵, 2006(1): 8-12. ZHANG C G, DONG J B,WANG Z X. Proanthocyanidin and it′s development & application[J]. Sichuan Food and Fermentation, 2006(1): 8-12.

[4]張長貴, 董加寶, 謝伍容. 原花色素抗氧化生物活性研究進(jìn)展[J]. 糧食與油脂, 2009(6): 10-12. ZHANG C G, DONG J B, XIE W R. Research progress on antioxidative bioactivities of proanthocyanidins[J]. Cereals & Oils, 2009(6): 10-12.

[5]CHU H, TANG Q, HUANG H, et al. Grape-seed proanthocyanidins inhibit the lipopolysaccharide-induced inflammatory mediator expression in RAW264.7 macrophages by suppressing MAPK and NF-κb signal pathways [J]. Environmental Toxicology and Pharmacology, 2016, 41:159-166.

[6]WOOD J E, SENTHILMONAN S T, PESKIN A V. Antioxidant activity of procyanidin-containing plant extracts at different pHs [J]. Food Chemistry, 2002, 77(2): 155-161.

[7]OLDONI T L, MELO P S, MASSARIOLI A P, et al. Bioassay-guided isolation of proanthocyanidins with antioxidant activity from peanut (Arachishypogaea) skin by combination of chromatography techniques [J]. Food Chemistry, 2016, 192: 306-312.

[8]何有節(jié), 狄瑩, 趙宇,等. 黑荊樹皮單寧降解產(chǎn)物的抑菌性能 [J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 1999,19 (2): 3-9. HE Y J, DI Y, ZHAO Y, et al. Antibacterial study of degradations of tannis from black wattle bark [J].Chemistry and Industry of Forest Products, 1999, 19(2): 3-9.

[9]時國慶. 葡萄籽中原花色素的提取,分離與抗氧化性研究[D]. 鄭州：鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2004. SHI G Q.The study of extraction, separation and antioxidant from grape seeds proanthocyanidins[D]. Zhengzhou: Master Degree Thesis of Zhengzhou University, 2004.

[10]孫達(dá)旺. 植物單寧化學(xué) [M]. 北京: 中國林業(yè)出版社, 1992. SUN D W. Chemistry of Vegetable Tannins [M]. Beijing: China Forestry Publishing House, 1992.

[11]KUSANO R, OGAWA S, MATSUO Y, et al. Alpha-amylase and lipase inhibitory activity and structural characterization of acacia bark proanthocyanidins [J]. Journal of Natural Products, 2011, 74(2): 119-128.

[12]李田田, 王飛. 超聲波輔助提取黑荊樹皮原花色素工藝優(yōu)化 [J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2012, 32(5): 56-62. LI T T, WANG F. Investigation on ultrasonic-assisted extraction of proanthocyanidins from black wattle bark[J].Chemistry and Industry of Forest Products, 2012, 32(5): 56-62.

[13]姚開, 呂遠(yuǎn)平, 石碧,等. 黑荊樹皮單寧不同級分的抑菌性能 [J]. 精細(xì)化工, 2000(7): 398-401. YAO K, LV Y P, SHI B, et al. Antibacterial study of different samples of proanthocyanidins from black wattle bark [J]. Fine Chemicals, 2000(7): 398-401.

[14]劉夏睿, 王飛. 黑荊樹樹皮原花色素生物活性的研究(英文) [J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2007,27( 3): 43-48. LIU X R,WANG F. Investifation on biological activities of proanthocyanidins from black wattle bark [J]. Chemistry and Industry of Forest Products, 2007, 27(3): 43-48.

[15]劉國強(qiáng), 董靜, 王弘, 等. 4種兒茶素類化合物電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律的研究 [J]. 高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報, 2009, 30(8): 1566-1570. LIU G Q, DONG J,WANG H, et al. ESI fragmentation studies of four tea catechins[J]. Chemical Journal of Chinese Universities, 2009, 30(8): 1566-1570.

Preparation and Antioxidant Activity of Proanthocyanidins Dimers fromAcaciamearnsiiDe Willd

ZHOU Meng1,2, LIU Gongjun1,2, HE Lingxiao1,2, WANG Fei1,2

(1. Jiangsu Co-innovation Center of Efficient Processing and Utilization of Forest Resources, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China; 2. College of Chemical Engineering, Nanjing Forestry University;Jiangsu Key Lab. of Biomass-based Green Fuels and Chemicals, Nanjing 210037，China)

Proanthocyanidins were ultrasonic extraction was adopted to extract proanthocyanidins (PC) fromAcaciamearnsiiDe Willd bark powders. Oligomeric proanthocyanidins (OPC) (ethyl acetate extract) were obtained by solvent extraction. Sephadex LH-20 and fast protein liquid chromatography (FPLC) were applied to the separation and purification of PC dimers. The compound was characterized by HPLC-MS. The results indicated that the yield of PC was about 50.21%. The extract was separated by Sephadex LH-20 to obtain the sample Ⅰ with the purity of 60% and the yield of about 5%. The sample Ⅰ was further separated by FPLC with water-methanol as mobile phase, and then the dimer were obtained with the purity of 91.72% and the yield of about 13%. The result of HPLC-MS analysis showed that the relative molecular weight of dimer was 578 and the structure was supposed to be procyandin-(4, 6)-prorobinetinidin. Meanwhile, the results of radical scavenging ability assay indicated that the antioxidant activity of PC dimer was higher than that of catechin and epigallocatechin gallate (EGCG). The scavenging rate of dimer (60 μmol/L) was ≥80% which is higher than that of EGCG (68%) and catechin (50%).

AcaciamearnsiiDe Willd bark；proanthocyanidins; preparation; antioxidant activity

10.3969/j.issn.0253-2417.2017.02.018

2016-12-19

國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0600801)；國家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(201104019)

周 蒙(1991— )，女，江蘇南通人，碩士生，主要從事天然產(chǎn)物分離及其活性方面的研究

*通訊作者：王 飛，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要研究領(lǐng)域為生物質(zhì)能源與生物質(zhì)化學(xué)品；E-mail:hgwf@njfu.edu.cn。

TQ35

A

0253-2417(2017)02- 0135- 06

周蒙，劉功駿，何凌霄，等.黑荊樹原花色素二聚體的分離制備及抗氧化活性研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2017，37(2)：135-140.