張雪萍，郝 芳，譚英彩，林 嬰，

(1.西南醫(yī)科大學(xué)，四川 瀘州 646000；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610072)

成都漢族人群血脂異常與候選基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究

張雪萍1，郝 芳2，譚英彩1，林 嬰1，2

(1.西南醫(yī)科大學(xué)，四川 瀘州 646000；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610072)

目的 探討與血脂相關(guān)候選基因(APOC1，CELSR2，BUD13)多態(tài)性與漢族成都地區(qū)人群血脂亞組分異常的相關(guān)性。方法 將成都地區(qū)1900例受試者按TC、TG、LDL-C和HDL-C分為正常組和異常組；采用單堿基延伸測(cè)序法分別對(duì)rs17035630(CELSR2 基因)，rs4420638(APOC1基因)，rs11556024(BUD13基因)進(jìn)行基因分型。結(jié)果 rs17035630(A/G)等位基因分布在LDL-C兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.568，P= 0.010)；多因素Logistic回歸分析顯示，rs17035630 A等位基因攜帶者對(duì)增高LDL-C的風(fēng)險(xiǎn)是G等位基因的1.396倍(OR=1.396，95%CI：1.145～1.697，P= 0.001)。結(jié)論 CELSR2 基因多態(tài)性與血脂亞組份LDL-C異常有關(guān)。

血脂異常；單核苷酸多態(tài)性；心血管疾??；遺傳學(xué)

中國(guó)人群心血管疾病發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，是導(dǎo)致死亡的首要原因，血脂異常是心血管疾病的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]。除了年齡、高血壓、吸煙、飲食習(xí)慣等[2，3]流行病學(xué)影響因素外，一些雙生子和家系研究顯示空腹血脂的遺傳效力為0.42～0.81[4～6]，表明血脂水平具有遺傳易感性。近期的一些全基因組關(guān)聯(lián)研究(genome-wide association studies，GWAS)和人類遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，CELSR2、APOC1、BUD13等基因與血脂顯著關(guān)聯(lián)[7～9]。不同種族人群的重復(fù)性驗(yàn)證提示這些基因/位點(diǎn)與血脂水平的關(guān)聯(lián)程度不一致，仍需要在中國(guó)人群得到驗(yàn)證。我們篩選rs17035630(CELSR2基因)、rs4420638(APOC1基因)以及rs11556024(BUD13基因)3個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點(diǎn)，探討成都地區(qū)漢族人群空腹血脂水平與這些多態(tài)位點(diǎn)之間的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 2014年在成都地區(qū)隨機(jī)選擇1900例漢族人群作為受試者，其中男746例，女1154例。收集受試者身高、體重、血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)數(shù)據(jù)。指標(biāo)異常標(biāo)準(zhǔn)：TC>5.18 mmol/L為異常，TG>1.70 mmol/L為異常，LDL-C>3.37 mmol/L為異常，HDL-C<1.04 mmol/L為異常[10]。本研究經(jīng)四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有調(diào)查取樣均經(jīng)受試者同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 標(biāo)本采集和基因組DNA的提取 禁食12小時(shí)后于清晨采集外周血，2小時(shí)內(nèi)分離血漿，血糖、TC、TG、LDL-C、HDL-C均使用Hitachi 717(Hitachi Instruments Inc.，Tokyo，Japan)測(cè)定。抽取受試者外周血5 ml，使用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K)抗凝，常規(guī)酚氯仿抽提法提取基因組DNA，紫外分光光度計(jì)和0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA濃度和純度后于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和基因型的確定 從基因組數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站(http//www.ncbi.com)檢索SNP序列，由上海生工生物工程有限公司合成引物，引物序列見(jiàn)表1。擴(kuò)增反應(yīng)采用VeritiTMDx 96 Well Thermal Cycler 擴(kuò)增儀(美國(guó)Applied Biosystems公司)。利用單堿基引物延伸法、ABI 3130遺傳分析儀、GeneMapper軟件測(cè)定基因型。隨機(jī)抽取10%的樣本進(jìn)行PCR產(chǎn)物測(cè)序，結(jié)果與單堿基延伸法一致率達(dá)100%。

表1 引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布的連續(xù)變量以中位數(shù)(四分位間距數(shù))表示，采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；脂質(zhì)代謝紊亂及血脂相關(guān)組分的影響因素采用多元Logistic回歸分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。群體基因型頻率經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01，P> 0.01為符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料 1900位受試者中TC、TG、LDL-C、HDL-C正常組與異常組的年齡、體重指數(shù)(BMI)、血糖以及性別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，見(jiàn)表2。

表2 研究對(duì)象臨床特征

*與異常組比較，P< 0.05

2.2 SNP位點(diǎn)等位基因的頻率分布 rs17035630、rs4420638和rs11556024位點(diǎn)檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡定律(P> 0.01)；僅rs17035630位點(diǎn)LDL-C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，見(jiàn)表3。

表3 各SNP位點(diǎn)血脂亞組份組間差異統(tǒng)計(jì)結(jié)果

PHWE：Hardy-Weinberg遺傳平衡的P值；MAF：最小等位基因頻率

2.3 Lgistic回歸分析結(jié)果 以LDL-C正常與否為因變量，以SNPs位點(diǎn)、性別、年齡、BMI和血糖對(duì)數(shù)為協(xié)變量，對(duì)rs17035630位點(diǎn)進(jìn)行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，rs17035630 A等位基因是G等位基因攜帶者使LDL-C增高風(fēng)險(xiǎn)的1.396倍(OR=1.396，95%CI：1.145～1.697，P= 0.001)。

3 討論

近年來(lái)心血管疾病發(fā)病率和死亡率已居首位，血脂異常被認(rèn)為是導(dǎo)致心血管疾病發(fā)病的最重要的危險(xiǎn)因素之一，其形成的原因包括環(huán)境和遺傳兩方面的因素。近期的一些GWAS和人類遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，位于CELSR2、APOC1、BUD13基因多態(tài)性位點(diǎn)與血脂有顯著的關(guān)聯(lián)。但不同種族人群的重復(fù)性研究發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)程度不一致。

CELSR2基因位于1p13.3，與PSRC1和SORT1基因構(gòu)成一個(gè)基因簇，與血脂水平關(guān)系密切[11]。其中SORT1基因直接參與血脂代謝的調(diào)節(jié)[12]，CELSR2基因則通過(guò)編碼一種鈣黏素促進(jìn)新陳代謝和動(dòng)脈粥樣硬化的調(diào)節(jié)[13]。rs646776和rs17035630位于該基因簇且位置緊鄰，具有連鎖不平衡。研究顯示，rs646776作為保護(hù)因子與血脂特別是LDL-C濃度有相關(guān)性，Walia等[14]研究3342例印度人群發(fā)現(xiàn)rs646776的C等位基因能降低循環(huán)血液中的TC(P= 0.0003)及LDL-C(P= 0.0003)水平，Arvind等[11]對(duì)2058例居住在非洲印度人的研究中發(fā)現(xiàn)rs646776的C等位基因也能降低循環(huán)血液中的TC(P= 0.007)及LDL-C(P= 0.006)水平。根據(jù)rs646776和rs17035630的連鎖不平衡本研究擬將rs17035630作為候選位點(diǎn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs17035630 A等位基因和G等位基因在LDL-C濃度增高組和正常對(duì)照組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用Logistic回歸分析進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估發(fā)現(xiàn)rs17035630 A等位基因是G等位基因攜帶者LDL-C增高風(fēng)險(xiǎn)的1.396倍。

rs4420638位于19q13.2的APOE-APOC1-APO-C2基因簇。APOC1基因編碼的ApoC1蛋白缺陷導(dǎo)致卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)的活性改變[15]，APOC2編碼的apoC2蛋白則作為脂蛋白脂肪酶(LPL)的催化劑[16]，APOE基因發(fā)生缺陷使血液清除乳糜微粒、VLDL-C和LDL-C的功能發(fā)生障礙，從而導(dǎo)致血清膽固醇、甘油三酯增高[17]。由此可見(jiàn)APOE-APOC1-APOC2基因簇與血脂關(guān)系非常密切。Huang等[8]研究1508例中國(guó)人群，發(fā)現(xiàn)rs4420638位點(diǎn)的多態(tài)性與LDL-C水平密切相關(guān)，增加了中國(guó)人患心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)rs4420638 A等位基因和G等位基因與各血脂成分異常差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究的對(duì)象為1900例成都地區(qū)漢族人群，研究人群地域和樣本數(shù)量的差異可能是導(dǎo)致本研究與Huang等[8]研究結(jié)果不一致的原因。

GWAS研究發(fā)現(xiàn)位于染色體11q23.3上的基因簇與TC關(guān)系密切，其中BUD13基因多態(tài)性與TC的關(guān)聯(lián)性已經(jīng)被證實(shí)[9]。曾煥玉等[18]研究發(fā)現(xiàn)rs11556024基因型在漢族人群的血脂中有差異。但本研究并未發(fā)現(xiàn)rs11556024等位基因與成都地區(qū)漢族人群血脂亞組份異常有差異。

[1] XI B，HE D，HU Y，et al.Prevalence of metabolic syndrome and its influencing factors among the Chinese adults：The China Health and Nutrition Survey in 2009[J].Preventive Medicine，2013，57(6)：867-871.

[2] 方圻，王鐘林.血脂異常防治建議[J].中華心血管病雜志，1997，26(3)：169-175.

[3] 吳應(yīng)紅，周曉芳.高血壓與高脂血癥的相關(guān)性[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2011，8(3)：162-164.

[4] Draisma HHM，Reijmers TH，Meulman JJ，et al.Hierarchical clustering analysis of blood plasma lipidomics profiles from mono- and dizygotic twin families[J].European Journal of Human Genetics Ejhg，2013，21(1)：95-101.

[5] Liao C，Gao W，Cao W，et al.Associations of body composition measurements with serum lipid，glucose and insulin profile：a chinese twin study[J].Plos One，2015，10(11)：e0140595.

[6] Panizzon MS，Hauger RL，Sailors M，et al.A new look at the genetic and environmental coherence of metabolic syndrome components[J].Obesity，2015，23(12)：2499-2507.

[7] Peden JF，Hopewell JC，Saleheen D，et al.A genome-wide association study in Europeans and South Asians identifies five new loci for coronary artery disease[J].Nature Genetics，2011，43(4)：339-344.

[8] Huang Y，Ye HD，Gao X，et al.Significant interaction of APOE rs4420638 polymorphism with HDL-C and APOA-I levels in coronary heart disease in Han Chinese men[J].Genetics & Molecular Research Gmr，2015，14(4)：13414-13424.

[9] Timothy RB,Latonya FB,Akhit S，et al.A replication study of GWAS-derived lipid genes in Asian Indians：the chromosomal region 11q23.3 harbors loci contributing to triglycerides[J].Plos One，2012，7(5)：e37056.

[10] Zhan Y，Zhang F，Lu L，et al.Prevalence of dyslipidemia and its association with insomnia in a community based population in China[J].Bmc Public Health，2014，14(1)：1-9.

[11]Arvind P，Nair J，Jambunathan S，et al.CELSR2-PSRC1-SORT1 gene expression and association with coronary artery disease and plasma lipid levels in an Asian Indian cohort[J].Journal of Cardiology，2014，64(5)：339-346.

[12]Kjolby M，Nielsen MS，Petersen CM.Sortilin，encoded by the cardiovascular risk gene SORT1，and its suggested functions in cardiovascular disease[J].Current Atherosclerosis Reports，2015，17(4)：1-9.

[13]Tissir F，Qu Y，Montcouquiol M，et al.Lack of cadherins Celsr2 and Celsr3 impairs ependymal ciliogenesis，leading to fatal hydrocephalus[J].Nature Neuroscience，2010，13(6)：700-707.

[14]Walia GK，Gupta V，Aggarwal A，et al.Association of common genetic variants with lipid traits in the Indian population[J].Plos One，2014，9(7)：e101688.

[15]Glomset JA，Janssen ET，Kennedy R，et al.Role of plasma lecithin：cholesterol acyltransferase in the metabolism of high density lipoproteins[J].Journal of Lipid Research，1966，7(5)：638-648.

[16]Wang CS.Structure and functional properties of apolipoprotein C-II[J].Progress in Lipid Research，1991，30(30)：253-258.

[17]Mendivil CO，Rimm EB，F(xiàn)urtado J，et al.Apolipoprotein E in VLDL and LDL with apolipoprotein C-III is associated with a lower risk of coronary heart disease[J].Journal of the American Heart Association，2013，2(3)：18-24.

[18]曾煥玉.廣西仫佬族人群幾種基因多態(tài)性與血脂異常的關(guān)系[D].廣西醫(yī)科大學(xué)，2014.

林 嬰

R446.11+2

A

1672-6170(2017)01-0089-04

2016-01-09；

2016-06-24)