楊冬梅，黃利紅，夏瓊，劉佩佩

(華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬普愛醫(yī)院，武漢430033)

宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白表達變化及其意義

楊冬梅，黃利紅，夏瓊，劉佩佩

(華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬普愛醫(yī)院，武漢430033)

目的 觀察宮頸鱗癌組織中β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、磷酸酶及張力蛋白同源(PTEN)蛋白的表達變化，并探討其臨床意義。方法 82例份宮頸鱗癌組織標本為觀察組，32例份宮頸上皮內瘤變(CIN)組織標本為CIN組，30例份正常宮頸組織標本為正常組。采用免疫組化SP法進行檢測各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白，表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關系，分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白的相關性，采用ROC曲線判斷β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸癌診斷中的靈敏度及特異度。結果 觀察組β-catenin陽性表達率高于CIN組和對照組，E-cadherin、PTEN蛋白陽性表達率均低于CIN組和對照組(P均<0.05)。CIN組β-catenin陽性表達率高于對照組，E-cadherin、PTEN蛋白陽性表達率均低于對照組(P均<0.05)。β-catenin表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移相關(P均<0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結轉移相關(P均<0.05)。β-catenin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為89.02%、87.10%，E-cadherin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為85.37%、83.87%，PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為84.15%、85.48%。宮頸鱗癌組織中β-catenin表達與E-cadherin、PTEN呈負相關(r分別為-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表達與PTEN蛋白表達呈正相關(r=0.694，P<0.05)。結論 宮頸鱗癌組織中β-catenin高表達，E-cadherin、PTEN蛋白低表達。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的敏感度和特異度均較高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在相互作用。

宮頸腫瘤；宮頸癌；宮頸鱗癌；β-連環(huán)蛋白；E-鈣黏蛋白；磷酸酶及張力蛋白同源

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)的常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居婦科惡性腫瘤的第二位，且呈年輕化趨勢[1]。宮頸鱗癌發(fā)病率占宮頸癌的90%以上，但其具體病因尚未明確。研究認為宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與原癌基因的激活、抑癌基因的失活及信號通路的激活等關系密切[1]。β-連環(huán)蛋白(β-catenin)是一種細胞膜內黏著蛋白，可與、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)形成復合體，可保證組織結構的完整性和功能性。同時β-catenin又是Wnt信號通路的調節(jié)中心環(huán)節(jié)調控細胞的分化，其在細胞核內可與T淋巴細胞的轉錄因子相結合，激活原癌基因，導致腫瘤的發(fā)生[2]。E-cadherin可維持上皮細胞的正常狀態(tài)，在腫瘤的在腫瘤的轉移、侵襲過程中發(fā)揮重要作用[3]。磷酸酶及張力蛋白同源(PTEN)是一種抑癌基因，可反饋性抑制腫瘤細胞信號通路，抑制腫瘤細胞增殖、加速細胞凋亡[4]。目前關于β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸癌組織腫的表達報道則較少。我們觀察了宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白的表達變化，并探討其臨床意義，旨在為臨床治療宮頸癌提供新的靶點。

1 資料與方法

1.1 標本來源 2014年1月～2016年12月間我院病理科存檔的宮頸組織標本144例份，其中宮頸鱗癌組織標本82例份(觀察組)、宮頸上皮內瘤變(CIN)組織標本32例份(CIN組)、正常宮頸組織標本30例份(正常組)?；颊吣挲g26～76(48.24±4.26)歲；三組標本提供者均未接受放、化療。根據(jù)國際婦產科聯(lián)盟對宮頸癌的分期標準[5]將觀察組分為Ⅰ期42例、Ⅱ期40例；組織的分化程度為低分化50例，高、中分化32例；浸潤深度≤1/2者46例、>1/2者36例；存在淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移52例；腫瘤直徑≥4 cm者28例，<4 cm者54例。本研究納入患者臨床資料完整，且未合并其他腫瘤。

1.2 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白檢測方法 采用免疫組化SP法。所有操作均嚴格按照使用說明書進行。單克隆抗體均是由北京中杉金橋生物技術有限公司提供，分別為鼠抗人β-catenin單克隆抗體、鼠抗人E-cadherin單克隆抗體和小鼠抗人PTEN單克隆抗體，二氨基聯(lián)苯胺顯色劑及載玻片購自武漢博士德生物工程有限公司。將各組標本制作成石蠟切片，常規(guī)脫蠟、包埋、切片，以0.01 mol/L的枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)加熱修復抗原，待溫度降至室溫30 min后，加入0.01mol/L的PBS溶液沖洗3次，5 min/次；加入5%的正常山羊血清，37 ℃封閉40 min，然后滴加一抗，4 ℃過夜；37 ℃依次滴加生物素標記的二抗和辣根酶標記鏈酶卵白素液，分別反應25 min；二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復染，脫水、透明和封片。以空白PBS液作陰性對照。每張切片在高倍鏡(×400)下隨機選擇10個不重復視野。結合染色強度和陽性細胞百分比綜合判定結果[2]。染色強度為無著色計0分，黃色計1分，棕黃色計2分，黃褐色計3分；陽性細胞百分比<10%計0分，10%～<40%計1分，40%～<70%計2分，≥70%計3分；將上述兩項得分相加， 0～1分為蛋白表達陰性，2分為弱陽性，3～4分為陽性，5～6分為強陽性，其中2～6分為蛋白表達陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料用百分率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗； 采用ROC曲線判斷β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸鱗癌診斷中的靈敏度、特異度，采用Pearson相關性分析法分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達的相關性。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達比較 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白陽性表達率比較見表1。

表1 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白陽性表達率比較(%)

注：與正常組比較，*P<0.05；與CIN組比較，#P<0.05。

2.2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關系 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關系見表2。β-catenin表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移相關(P均<0.05)，而與年齡、浸潤深度和腫瘤直徑無關(P均>0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結轉移相關(P均<0.05)，而與年齡和腫瘤直徑無關(P>0.05)。

2.3 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度 ROC曲線分析結果顯示，β-catenin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為89.02%、87.10%，E-cadherin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為85.37%、83.87%，PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為84.15%、85.48%。

2.4 宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達的相關性 相關性分析顯示，宮頸鱗癌組織中β-catenin表達與E-cadherin、PTEN呈負相關(r分別為-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表達與PTEN蛋白表達呈正相關(r=0.694，P<0.05)。

表2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關系(例)

3 討論

β-catenin作為一種細胞膜上的多功能蛋白質，是鈣離子依賴性黏蛋白家族成員，由多條肽鏈組成，人體中的編碼基因為CTNNB1，位于3號染色的p21和p22上[6]。β-catenin不僅是組成Cadherin/Catenin 復合體的一部分，而且可以調節(jié)Wnt信號轉導通路[7]。本研究結果顯示，觀察組β-catenin陽性表達率高于CIN組和對照組，CIN組β-catenin陽性表達率高于對照組。同時β-catenin表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移相關，而與年齡、浸潤深度和腫瘤直徑無關，提示宮頸鱗癌組織中存在β-catenin表達異常，且與宮頸癌的發(fā)展具有緊密聯(lián)系。β-catenin在細胞內有兩種形式：游離型和結合型，游離型β-catenin參與Wnt信號轉導，作用機制是通過核膜在細胞質或細胞核中結合轉錄因子Tcf/Lef，從而激活Wnt信號轉導通路中的靶基因，發(fā)揮調節(jié)細胞增殖或凋亡的作用，加速腫瘤細胞的惡性增殖。結合型β-catenin在正常細胞中可以與細胞膜上的E-cadherin結合，從而調節(jié)細胞的黏附作用。Wnt信號轉導通路處于失活狀態(tài)時，多數(shù)β-catenin為結合型，形成蛋白復合體，可以通過磷酸化被降解，一旦Wnt信號轉導通路處于激活狀態(tài)，Wnt蛋白與多種蛋白受體結合，導致與β-catenin相結合的相關蛋白解離斌剛進入細胞質，阻斷磷酸化進程，繼而造成β-catenin沉積在細胞質中，而β-catenin又可以與細胞核中的轉錄因子相結合，激活Wnt信號轉導通路中的腫瘤靶基因[2,8]。

E-cadherin是一種鈣黏蛋白，具有Ca2+依賴性，分子量為120 kD，能夠通過與α-、β-和γ-catenin形成復合體E-cadherin/catenin維持上皮細胞的形態(tài)及結構完整性，從而參與宮頸上皮細胞的分化成熟[8]。研究結果顯示，觀察組E-cadherin陽性表達率均低于CIN組和對照組，CIN組E-cadherin低于對照組。E-cadherin表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結轉移相關，而與年齡和腫瘤直徑無關。這與相關研究[9]結果一致。PTEN是繼p53后機體內腫瘤細胞中的的一種抑癌基因，可以調控細胞的生長周期，加速細胞的凋亡，調節(jié)細胞的黏附及遷移作用，另外能夠參與生成新的血管，從而抑制惡性腫瘤生長，編碼PTEN的蛋白同時具有脂質磷酸酶和蛋白磷酸酶的雙重活性，對細胞中的信號因子產生廣泛作用[10,11]。從PTEN表達情況的研究結果來看，在CIN組及觀察組中的表達明顯降低，且PTEN蛋白表達與宮頸鱗癌組織學分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結轉移相關，而與年齡和腫瘤大小無關。說明PTEN表達的缺失是宮頸癌發(fā)生的主要事件，并且與其關系密切。

β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度及特異度均超過80%，表明三種指標均能有效地診斷宮頸癌，分析其原因主要與三種蛋白質的作用機理密切相關，研究中的不足是需要對三種指標的聯(lián)合檢測進行研究。宮頸鱗癌組織中β-catenin表達與E-cadherin和PTEN表達呈負相關，E-cadherin表達與PTEN蛋白表達呈正相關。說明三種蛋白間聯(lián)系密切，β-catenin和E-cadherin可在細胞膜上形成復合體，共同維持細胞的形態(tài)及結構功能性，PTEN 的缺失表達會導致磷脂酰肌醇三磷酸去磷酸化失敗，持續(xù)激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信號通路，加速E-cadherin的表達缺失。而β-catenin與PTEN之間的具體聯(lián)系尚有待進一步研究[4]。

綜上所述，宮頸鱗癌組織中β-catenin高表達，E-cadherin、PTEN蛋白低表達。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的敏感度和特異度均較高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在相互作用。

[1] 劉衛(wèi)梅.β-catenin及EGFR在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].中國醫(yī)藥指南,2016,14(16):58-58.

[2] 張嘉美,趙寧,吳曉玲,等.Wnt/β-catenin信號通路對細胞凋亡和壞死的調控研究進展[J].中國細胞生物學學報,2015,37(9):1309-1316.

[3] 鄧秀文,鄒文.E-cadherin和Vimentin表達與早期宮頸癌臨床病理特征及預后的關系[J].臨床腫瘤學雜志,2016,21(2):160-165.

[4] 盧丹,錢靜,孫飛,等.宮頸癌演變過程中PTEN、survivin基因的表達及其意義[J].揚州大學學報(農業(yè)與生命科學版),2014,35(4):10-13.

[5] 李雙,李雄,張媛,等.宮頸癌的手術-病理分期和評分系統(tǒng)的建立和驗證[J].現(xiàn)代婦產科進展,2016,25(11):801-807.

[6] 劉醫(yī)輝.β-catenin在子宮病變中的研究進展[J].大家健康(中旬版),2014,13(7):324-325.

[7] 周慧麗,周惠斌,何立花.β-catenin、p120 ctn在尖銳濕疣及宮頸鱗癌中的表達和意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志,2013,22(8):806-808.

[8] 郝丹,田曉予.E-cadherin、Ezrin在宮頸癌組織中的表達及臨床意義[J].河南科技大學學報(醫(yī)學版),2015,33(3):169-172.

[9] 田園,馮定慶,伍嬌嬌,等.E-cadherin表達和AKT磷酸化水平與宮頸病變的相關性分析[J].安徽醫(yī)科大學學報,2014,49(7):1007-1012.

[10] 郭蘇陽,李勝澤,郭偉,等.Twist和E-cadherin在宮頸鱗癌中的表達及其與KAI1表達的關系[J].華中科技大學學報(醫(yī)學版),2015,44(4):411-415.

[11] 李程程,宋偉奇.宮頸癌部分相關抑癌基因研究進展[J].內蒙古民族大學學報(自然科學版),2015,30(5):441-443.

湖北省自然科學基金資助項目(2014CFB36)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.19.016

R711

B

1002-266X(2017)19-0054-03

2017-02-10)