趙巧云 范廣民 阮正英 應香嵐

核苷酸結合寡聚域在宮頸癌發(fā)病機制中的作用

趙巧云1范廣民2阮正英1應香嵐3

目的探討核苷酸結合寡聚域1（NOD1）在宮頸癌發(fā)病機制中的作用。方法免疫組化法檢測107例宮頸癌、50例宮頸上皮內(nèi)瘤變、50例慢性宮頸炎組織NOD1的表達。結果與慢性宮頸炎組比較，宮頸癌組NOD1的陽性率和陽性表達強度均顯著增高[91.59%比62.00%，P<0.01；（0.18±0.05）比（0.16±0.04），P<0.05]；宮頸癌組NOD1陽性率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組（91.59%比76.00%，P<0.05），但兩組間NOD1的陽性表達強度差異無統(tǒng)計學意義[（0.18±0.05）比（0.18±0.04），P>0.05]。宮頸癌組中，淋巴結轉移者NOD1陽性率和陽性表達強度與無淋巴結轉移者比較差異無統(tǒng)計學意義[94.44%比84.21%，P>0.05；（0.18±0.05）比（0.19±0.05），P>0.05]。結論NOD1在宮頸癌組織中表達增強，可能與宮頸癌的發(fā)病機制相關，但與淋巴結轉移無密切關系。

宮頸癌；核苷酸結合寡聚域；免疫組化

宮頸癌是一種常見的婦科腫瘤疾病，為發(fā)展中國家引起女性死亡最常見的一個病因。目前發(fā)現(xiàn)，宮頸癌與固有免疫的免疫逃避機制有關[1]。核苷酸結合寡聚域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）1是NOD樣受體家族成員之一，為人固有免疫的一種，屬于細胞內(nèi)模式識別受體，參與細胞內(nèi)信號傳導，與機體的抗感染、腫瘤、關節(jié)炎和炎癥性腸病等多種疾病的發(fā)病機制有關[2-3]，有望成為腫瘤治療的靶點。然而NOD1是否參與宮頸癌的發(fā)病機制至今尚不清楚。本研究通過檢測宮頸癌組織中NOD1的表達，探討NOD1與宮頸癌臨床病理特癥的關系，為臨床的靶向治療提供新的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料2008年6月—2015年8月臺州市三家醫(yī)院收治宮頸癌患者107例，其中浙江省臺州市中西醫(yī)結合醫(yī)院28例，臺州市腫瘤醫(yī)院31例，臺州市中心醫(yī)院48例；手術55例，活檢52例；年齡22～76歲，平均（46.2±14.3）歲。術畢取腫瘤組織、癌旁組織及腹腔淋巴結，常規(guī)HE染色，伴有淋巴結轉移36例。并選取同時期慢性宮頸炎患者50例，年齡20～67歲，平均（43.1±10.2）歲；宮頸上皮內(nèi)瘤樣變患者50例，年齡20～61歲，平均（41.2±9.4）歲。三組年齡差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。所有病例均經(jīng)病理確診，且術前均未接受放療或化療，無其他惡性腫瘤史。

1.2 主要試劑多克隆兔抗人NOD1 IgG抗體購自英國biorbyt公司（批號P10336），即用型SP試劑盒（PV-6000）和防脫玻片購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化SP法測定NOD1的表達，抗體稀釋濃度均為1∶100。

1.3 方法免疫組化法檢測107例宮頸癌、50例宮頸上皮內(nèi)瘤變、50例慢性宮頸炎組織NOD1的表達。光鏡下觀察細胞著色情況，陽性細胞的胞漿呈棕黃色表達。每張切片觀察5個視野（×200），取其平均值即為每張切片的觀察結果。按陽性細胞所占比例及分布情況判定[4]：陰性（-）：單個細胞染色，陽性細胞數(shù)<5%；弱陽性（+）：散在或小的細胞團染色，陽性細胞數(shù)5%～24%；陽性（++）：片狀或簇狀細胞染色，陽性細胞數(shù)為25%～50%；強陽性（+++）彌散的細胞染色，陽性細胞數(shù)>50%。每張切片隨機選擇5個視野，采用Image-pro Plus 5.1免疫組化圖像分析系統(tǒng)對陽性細胞進行灰度掃描，取其平均值代表該片的光密度（optical density，OD）值。

1.4 統(tǒng)計學方法應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（） 表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用成組資料的t檢驗；計數(shù)資料采用卡方檢驗；P<0.05（雙側）為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

免疫組化結果顯示，陽性細胞的胞漿呈棕黃色表達，三組患者的宮頸組織均有NOD1呈陽性表達。三組間NOD1陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=20.06，P<0.01），宮頸癌組NOD1陽性率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和慢性宮頸炎組（χ2=7.15、20.36，P<0.05或 0.01），宮頸上皮內(nèi)瘤變組和慢性宮頸炎組NOD1陽性率差異無統(tǒng)計學意義（χ2=2.29，P>0.05）。方差齊性檢驗結果，三組間NOD1的陽性表達強度方差齊（F= 2.96，P>0.05）。宮頸癌組患者NOD1的陽性表達強度顯著高于慢性宮頸炎組患者（P<0.05），宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者NOD1陽性表達強度與慢性宮頸炎組患者及宮頸癌組患者比較差異無統(tǒng)計學意義（P> 0.05）。見表1，圖1（封二）。

表1 三組患者宮頸組織NOD1表達水平比較（

表1 三組患者宮頸組織NOD1表達水平比較（

注：與慢性宮頸炎組比較，*P<0.05，**P<0.01；與宮頸上皮內(nèi)瘤變組比較，△P<0.05；NOD1：核苷酸結合寡聚域

組別慢性宮頸炎組宮頸上皮內(nèi)瘤變組宮頸癌組例數(shù)50 50 107陰性19 12 9陽性31 38 98陽性率（%）62.00 76.00 91.59**△陽性強度（OD值）0.16±0.04 0.18±0.04 0.18±0.05*

55例宮頸癌手術患者中，無淋巴結轉移36例，伴有淋巴結轉移19例，但兩者的NOD1陽性率和陽性表達強度比較差異均無統(tǒng)計學意義（χ2=1.58，t= 0.52，P>0.05）。見表2。

表2 55例宮頸癌手術患者淋巴結轉移情況及NOD1表達（）

表2 55例宮頸癌手術患者淋巴結轉移情況及NOD1表達（）

注：NOD1：核苷酸結合寡聚域

陽性強度（OD值）0.19±0.05 0.18±0.05淋巴結轉移陰性無有例數(shù)19 36 3 2陽性16 34陽性率（%）84.21 94.44

3 討論

人類的模式識別受體主要有兩類：一類是膜結合受體，如Toll樣受體；另一類是細胞內(nèi)的模式識別受體，包括NOD樣受體和具有螺旋酶結構域的抗病毒蛋白受體。目前研究最多的是Toll樣受體與腫瘤的關系，已證實Toll樣受體與腫瘤的生物學行為有關[5-6]，其基因多態(tài)性與宮頸癌的發(fā)病機制相關[7]。

NOD樣受體是一類類似于Toll樣受體的模式識別受體，通過識別病原體相關分子模式和損傷相關分子模式，在天然免疫反應中起著決定性的作用。根據(jù)氨基末端不同NOD樣受體可分為四個亞家族：NLRA、NLRB、NLRC和NLRP；如果根據(jù)不同功能還也可分為四種類型：炎癥、信號轉導、轉錄激活和自噬。在凋亡和發(fā)育早期中扮演關鍵的調節(jié)器[8]。NOD1是NOD樣受體的家族成員之一，廣泛表達于多種細胞，例如上皮細胞、間質細胞、內(nèi)皮細胞等，激活炎癥因子的產(chǎn)生，參與凋亡和炎癥反應等[3]。目前認為NOD1與癌癥的發(fā)病機制密切相關，可能成為癌癥的標志物[9]。在舌鱗狀細胞癌組織中，NOD1蛋白表達于細胞質，舌鱗狀細胞癌組織NOD1 mRNA和蛋白表達低于正常舌黏膜組織，認為NOD1可能通過機體的天然免疫功能，影響舌鱗狀細胞癌的發(fā)生及發(fā)展[10]。但NOD1在宮頸癌中的作用如何，目前知之甚少。

本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中NOD1的表達水平高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變的病變組織。提示隨著宮頸組織的分化程度降低，NOD1的表達水平也隨之增強，推測NOD1的過度表達可能與宮頸組織的惡性分化程度相關。本研究同時還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者伴有淋巴結轉移與不伴有淋巴結轉移組中，NOD1的陽性率和陽性表達強度均無差異，提示NOD1的表達水平與淋巴結轉移無密切相關。

本研究結果表明，NOD1在宮頸癌組織中表達增強，可能與宮頸癌的發(fā)病機制相關，但與淋巴結轉移無密切關系。

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（收稿：2016-07-27修回：2016-12-09）

Roles of Nucleotide-binding Oligomerization Domainin the Pathogenesis of Cervical Cancer

ZHAO Qiaoyun1, FANGuangmin2,RUANZhengying1,YINGXianglan3.
1DepartmentofGynaecologyandObstetrics(ZHAO Qiaoyun),Department of Pathology(RUAN Zhengying),Taizhou Integrated Western and Traditional Chinese Medicine Hospital,Wenling(317523),China;2 Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou(317000),China；3 Department of Pathology,Taizhou Tumor Hospital,Wenling(317500),China

ObjectiveTo investigate the potential roles of nucleotide-binding oligomerization domain 1（NOD1）in the pathogenesis of the cervical cancer.MethodsTissues from 107 patients with cervical cancer,50 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 50 cases of chronic cervicitis were obtained,then were examined with immunohistochemistryto determine the expression of NOD1 protein in them.ResultsThe positiverate and expression levels of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in chronic cervicitis group（91.59%vs 62.00%, P<0.01;0.18±0.05 vs 0.16±0.04 optical density,P<0.05）.The positiverate of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in cervical intraepithelial neoplasia group（91.59%vs 76.00%,P<0.05）,while there was no significant difference in NOD1 levels between the two groups（0.18±0.05 vs 0.18±0.04 optical density,P> 0.05）.In cervical cancer group,no significant difference in the positiverate and expression levels of NOD1 was found between the tissuewith lymph node metastasis and those without lymph node metastasis（94.44%vs 84.21%；0.18±0.05 vs 0.19±0.05 optical density,both P>0.05）.ConclusionExpression of NOD1 in cervical cancer were increased.This may be correlated with the pathogenesis of cervical cancer,but not related closely with lymph nodesmetastasis.

cervical cancer；nucleotide-binding oligomerization domain；Immunohistochemistry

浙江省溫嶺市科技計劃項目（No：2012-1-84）

1浙江省臺州市中西醫(yī)結合醫(yī)院婦產(chǎn)科（趙巧云）、病理科（阮正英）（臺州317523）；2浙江省臺州市中心醫(yī)院病理科（臺州317523）；3浙江省臺州市腫瘤醫(yī)院病理科（臺州317 523）

趙巧云，Tel：13750666948；E-mail：zqyzgyy@sohu.com