吳玉瓊陳瑩胡永樂(lè)左正宏王重剛

（1. 武夷學(xué)院茶與食品學(xué)院，武夷山 354300；2. 廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廈門(mén) 361005）

四種新型農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的毒性效應(yīng)

吳玉瓊1陳瑩2胡永樂(lè)1左正宏2王重剛2

（1. 武夷學(xué)院茶與食品學(xué)院，武夷山 354300；2. 廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廈門(mén) 361005）

為了研究4 種農(nóng)藥（腈苯唑、吡唑醚菌酯、惡霜靈、戊菌?。﹩为?dú)及聯(lián)合作用對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響，設(shè)計(jì)7個(gè)實(shí)驗(yàn)組（空白組、溶劑組、4種農(nóng)藥單獨(dú)暴露組及聯(lián)合暴露組）對(duì)斑馬魚(yú)胚胎暴露72 h，結(jié)果顯示，濃度50 ng/L的4種農(nóng)藥單獨(dú)暴露導(dǎo)致心包囊和卵黃囊水腫比率、脊柱彎曲率均顯著高于對(duì)照組；腈苯唑、惡霜靈及聯(lián)合暴露導(dǎo)致斑馬魚(yú)仔魚(yú)心率顯著下降，出現(xiàn)顯著的心律不齊；斑馬魚(yú)胚胎的Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性被顯著誘導(dǎo)，而聯(lián)合暴露表現(xiàn)出顯著的抑制作用。結(jié)果說(shuō)明，環(huán)境濃度的農(nóng)藥暴露對(duì)魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育具有明顯的毒性。

腈苯唑；吡唑醚菌酯；惡霜靈；戊菌??；聯(lián)合暴露；斑馬魚(yú)；胚胎發(fā)育

農(nóng)藥是化學(xué)品中毒性較高、降解緩慢的一種物質(zhì)［1］，其易隨降雨、徑流及灌溉水等進(jìn)入地表水、地下水和土壤等不同區(qū)域［2］。農(nóng)藥進(jìn)入水體后，易對(duì)水中的生物造成影響，嚴(yán)重時(shí)可引起水生生物急性中毒，即使未導(dǎo)致生物死亡，也可在生物體內(nèi)富集，通過(guò)食物鏈危害人群健康［3］。隨著人們環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)和生活質(zhì)量的提高，農(nóng)藥功用逐漸從殺死轉(zhuǎn)為調(diào)控，品種不斷更新，全面進(jìn)入高效化時(shí)代。據(jù)報(bào)道，不同農(nóng)藥在不同環(huán)境生物條件下降解速度、生物活性、環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)等均存在差異［4］。新型農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)被認(rèn)為是提高效率、減少用量的綠色化學(xué)之路［5］，對(duì)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和環(huán)境保護(hù)具有重要意義。

腈苯唑（Fenbuconazole）屬于唑類(lèi)農(nóng)藥。唑類(lèi)農(nóng)藥作為殺菌劑具有高效、廣譜、低毒、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)，自1976年以來(lái)數(shù)10種唑類(lèi)農(nóng)藥被推向市場(chǎng)［6］，2003-2004年銷(xiāo)售額年增長(zhǎng)率為47.7%，在所有農(nóng)藥類(lèi)別中高居第一位［7］。吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）屬于甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，該類(lèi)殺菌劑活性高，殺菌譜廣，作用機(jī)制獨(dú)特，對(duì)環(huán)境友好，是繼三唑類(lèi)殺菌劑之后一個(gè)新的里程碑［8］。惡霜靈（Metoxazon）屬于酰胺類(lèi)農(nóng)藥。酰胺類(lèi)除草劑在市場(chǎng)中所占份額極大，2009年，我國(guó)酰胺類(lèi)除草劑交易額達(dá)15億元，占我國(guó)農(nóng)用除草劑總金額的18%［9］。研究發(fā)現(xiàn)部分酰胺類(lèi)農(nóng)藥殘效期較長(zhǎng)，且具有明顯的致突變性［10，11］。戊菌?。≒encycurone）屬于脲類(lèi)新型農(nóng)藥，由日本特殊農(nóng)藥公司和德國(guó)拜耳公司聯(lián)合開(kāi)發(fā)的脲類(lèi)殺菌劑，無(wú)內(nèi)吸性，其具有良好的保護(hù)和持效活性［12］。在法國(guó)的河流表面水中，唑類(lèi)農(nóng)藥，包括腈苯唑，檢出的濃度從幾納克水平到最大的微克水平（丙環(huán)唑1.75 μg/L，Propiconazole）［13］。吡唑醚菌酯在美國(guó)加利福尼亞的一個(gè)河口被頻繁檢出，每升濃度從幾十到兩百多納克［14］。我國(guó)福建省九龍江流域水中農(nóng)藥污染，監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示存在82種農(nóng)藥，普遍的污染濃度達(dá)到幾十納克甚至100納克以上，最高的為腐霉利（Procymidone）（3 904 ng/L）［15］。孫廣大［16］于2008年在九龍江口及廈門(mén)西海域表層水和沉積物中，檢測(cè)出除傳統(tǒng)的有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥，苯胺類(lèi)、酰胺類(lèi)、唑類(lèi)、氨基甲酸酯類(lèi)、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)、苯胺基嘧啶等“新型”農(nóng)藥也被大量檢出，說(shuō)明農(nóng)業(yè)地區(qū)流域的水環(huán)境中存在多種類(lèi)農(nóng)藥復(fù)合污染狀況。

研究農(nóng)藥的急性、亞慢性與慢性毒性一般利用水中食物鏈的代表生物如藻類(lèi)、蚤與魚(yú)類(lèi)等，并用得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)水生生物的影響［17］。斑馬魚(yú)（Danio rerio）具有體型小、繁殖速度快、飼養(yǎng)管理簡(jiǎn)便、其胚胎的整個(gè)發(fā)育過(guò)程透明可見(jiàn)等優(yōu)點(diǎn)，多數(shù)國(guó)際組織和國(guó)家已將斑馬魚(yú)作為制定環(huán)境毒性標(biāo)準(zhǔn)的模式動(dòng)物［18-20］。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）于1996已制定了詳細(xì)的操作指南［21］。

有研究認(rèn)為斑馬魚(yú)胚胎比成魚(yú)對(duì)有毒化合物更加敏感，用斑馬魚(yú)胚胎為受試生物進(jìn)行急性毒性研究更為適宜［22］。近年來(lái)關(guān)于農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育影響的報(bào)道不為少見(jiàn)［23，24］，其中關(guān)于唑類(lèi)農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的發(fā)育毒性有較深入的研究［25，26］。但是新型農(nóng)藥在環(huán)境濃度下的毒性作用比較鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究腈苯唑、吡唑醚菌酯、惡霜靈、戊菌隆對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的毒性作用，通過(guò)分析相同濃度分別單獨(dú)作用及4種農(nóng)藥聯(lián)合暴露后斑馬魚(yú)胚胎的存活率、孵化率、畸形發(fā)生率、ATP酶活性以及心臟功能各生理指標(biāo)，比較常見(jiàn)的4種農(nóng)藥的毒性，為新型農(nóng)藥的合理使用提供科學(xué)依據(jù)，也為完善農(nóng)藥對(duì)水環(huán)境污染效應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 戊菌?。兌取?6%）、吡唑醚菌酯（純度≥96%）、腈苯唑（純度≥96%）、惡霜靈（純度≥96%）購(gòu)于Sigma-Aldrich公司；先以丙酮為助溶劑溶解配制濃度為50 μg/L儲(chǔ)備液，4℃避光保存。蛋白含量測(cè)定及ATP 酶活性測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純?cè)噭?/p>

1.1.2 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)和魚(yú)卵收集 斑馬魚(yú)（WT-U系）喂養(yǎng)根據(jù)Westerfield［27］的方法進(jìn)行，飼養(yǎng)于廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院斑馬魚(yú)養(yǎng)殖中心。循環(huán)養(yǎng)殖水，水溫26±1℃，光照周期14 h光照/10 h黑暗，每天喂食新鮮孵化的豐年蟲(chóng)（Artemia nauplii）2-3次。

實(shí)驗(yàn)前1 d晚上，將雌雄魚(yú)按照2∶1比例放置在孵化槽中，并用隔板將雌雄分開(kāi)，第2天早上9點(diǎn)左右打開(kāi)隔板，開(kāi)燈給予光照刺激使其交配產(chǎn)卵。0.5-1 h內(nèi)收集魚(yú)卵，用斑馬魚(yú)養(yǎng)殖液清洗并在顯微鏡下觀(guān)察，選取受精胚胎用于暴露實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 暴露實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前將農(nóng)藥儲(chǔ)備液用培養(yǎng)液（3.5 g/L NaCl，0.05 g/L NaHCO3，0.05g/L KCl，0.05 g/L CaCl2）分別配制終濃度為50 ng/L的單種農(nóng)藥曝污液及4種農(nóng)藥混合曝污液（即4種農(nóng)藥分別為12.5 ng/L，總濃度為50 ng/L），共5個(gè)曝污組，并設(shè)空白組和對(duì)照組（丙酮濃度為0.1%。丙酮作為助溶劑適宜濃度為≤0.1%［28］），每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)5個(gè)平行組。分別置于直徑 90 mm 培養(yǎng)皿中，注入曝污培養(yǎng)液30 mL，每皿培養(yǎng)100枚斑馬魚(yú)胚胎。實(shí)驗(yàn)期間28±0.5℃恒溫培養(yǎng)，每隔 12 h 更換等量等濃度的培養(yǎng)液并清理死亡胚胎。

1.2.2 相關(guān)形態(tài)學(xué)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)及計(jì)算 分別于斑馬魚(yú)胚胎12、24、36、48、72 hpf（Hour postfertilization）時(shí)，觀(guān)察胚胎的存活（肉眼觀(guān)察胚胎變白或者顯微鏡下觀(guān)察胚胎絮狀凝結(jié)、心臟不跳動(dòng)即可判定死亡），統(tǒng)計(jì)存活率。48 hpf時(shí)，統(tǒng)計(jì)孵化率（胚胎出膜并能游動(dòng)視為已孵化），72 hpf時(shí)統(tǒng)計(jì)畸形率（主要指心包囊水腫、卵黃囊水腫和脊柱彎曲）。

存活率（%）=存活胚胎數(shù)/總胚胎數(shù)×100%

孵化率（%）=已孵化胚胎數(shù)/總胚胎數(shù)×100%

畸形率（%）=畸形胚胎數(shù)/存活胚胎數(shù)×100%

1.2.3 心率及相關(guān)功能指標(biāo)的分析 根據(jù)Incardona等［29］、Chen等［30］的方法測(cè)量及計(jì)算。將斑馬魚(yú)仔魚(yú)（每個(gè)處理組設(shè)5個(gè)平行，每個(gè)平行隨機(jī)取3條），固定于6%的甲基纖維素中，并于28±0.5℃下靜置5-10 min，直到仔魚(yú)心跳穩(wěn)定后于顯微鏡下對(duì)20 s內(nèi)心房和心室的搏動(dòng)次數(shù)進(jìn)行記錄并攝影，分別測(cè)量心室舒張/收縮末期的長(zhǎng)軸（a），短軸（b）長(zhǎng)，記錄胚胎20 s內(nèi)心跳次數(shù)，計(jì)算1 min心率（HR）、心室舒張/收縮容積（EDV/ESV）、每搏輸出量（SV）、心輸出量（CO）。采用Incardona［29］的方法，記錄一個(gè)完整心跳所經(jīng)歷的時(shí)間幀數(shù)，每條仔魚(yú)測(cè)3次，取3次所得到的數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差作為這條仔魚(yú)的心律參數(shù)，獲得它們的心律參數(shù)分析心律不齊。

1.2.4 ATP 酶活性測(cè)定 選擇 72 hpf 的仔魚(yú)以超純水蕩洗后用液氮速凍，保存于-80℃冰箱。實(shí)驗(yàn)前將樣品于冰盒上解凍，按1∶4的比例加入生理鹽水，在勻漿器內(nèi)仔細(xì)研磨。準(zhǔn)備好的勻漿液在冷凍離心機(jī)上，4℃下，4 000 r/min 離心10 min，取上清液測(cè)定蛋白含量和酶活性。

蛋白含量測(cè)定、Na+/K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性的測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒。計(jì)算酶活力時(shí)，定義每小時(shí)每毫克組織蛋白的組織中ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1 μmoL 無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)ATP 酶活力單位，即微摩爾磷/毫克蛋白/小時(shí)（μmol Pi/mg pro/h）。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差（Mean±SE）表示，單因素方差分析（one-way ANOVA）的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間數(shù)據(jù)用Tukey HSD法進(jìn)行顯著性水平分析，設(shè)定P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 四種農(nóng)藥暴露對(duì)斑馬魚(yú)胚胎存活率及孵化率的影響

斑馬魚(yú)胚胎分別經(jīng)4種農(nóng)藥單獨(dú)暴露及聯(lián)合暴露72 h，胚胎的存活率與溶劑對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（結(jié)果未顯示）。胚胎孵化率，惡霜靈、腈苯唑及聯(lián)合暴露組與溶劑對(duì)照組相比顯著下降，吡唑醚菌酯、戊菌隆組無(wú)顯著差異（圖1）。

圖1 暴露48 h對(duì)斑馬魚(yú)胚胎孵化率的影響

2.2 四種農(nóng)藥暴露對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)囊腫率及脊柱彎曲率的影響

圖2、圖3顯示，各暴露組的脊柱彎曲率顯著上升，其中腈苯唑作用最明顯。囊腫率在各農(nóng)藥單獨(dú)暴露組也表現(xiàn)出明顯上升，在戊菌隆、惡霜靈和腈苯唑組出現(xiàn)顯著差異，但聯(lián)合暴露組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

2.3 四種農(nóng)藥暴露對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)心臟功能指標(biāo)的影響

除惡霜靈與對(duì)照組無(wú)差異，其他各暴露實(shí)驗(yàn)組顯示心率顯著下降（圖4）；從心室容量的變化而言，惡霜靈及聯(lián)合作用導(dǎo)致EDV顯著上升，戊菌隆、吡唑醚菌酯和腈苯唑沒(méi)有產(chǎn)生顯著的影響，而ESV在惡霜靈組及聯(lián)合作用組與溶劑對(duì)照相比無(wú)差異，戊菌隆、吡唑醚菌酯和腈苯唑暴露使ESV下降（圖5-A）；惡霜靈暴露及聯(lián)合暴露導(dǎo)致每搏輸出量（SV）顯著上升（圖5-B）；心輸出量CO在惡霜靈組顯著增加，在吡唑醚菌酯、戊菌隆和腈苯唑組顯著下降，聯(lián)合作用組與對(duì)照組無(wú)顯著差異（圖5-C）。各農(nóng)藥暴露組均導(dǎo)致仔魚(yú)出現(xiàn)心律不齊，惡霜靈、腈苯唑及聯(lián)合暴露組呈現(xiàn)心律不齊效應(yīng)顯著（圖6）。

2.4 四種農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)ATP酶活性的影響

斑馬魚(yú)胚胎經(jīng)惡霜靈暴露72 h，其仔魚(yú)組織的Na+/K+-ATP酶活性表現(xiàn)出顯著上升，在聯(lián)合作用組則出現(xiàn)顯著降低，其它暴露組均與對(duì)照組無(wú)差異；Ca2+-ATP酶活性在吡唑醚菌酯、惡霜靈、腈苯唑暴露組顯著上升，而聯(lián)合作用組為顯著下降（圖7）。

圖2 暴露72 h對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)脊柱彎曲率的影響

圖3 暴露72 h對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)囊腫率（含心包囊腫和卵黃囊腫）的影響

圖4 胚胎暴露72 h對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)心率的影響

3 討論

魚(yú)類(lèi)是對(duì)化學(xué)污染物較敏感的脊椎動(dòng)物之一，其胚胎發(fā)育階段更為敏感，生理和器官形成方面更易受到外界環(huán)境影響［31］。心包囊腫、脊柱彎曲等是斑馬魚(yú)胚胎毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中常出現(xiàn)的毒性反應(yīng)［32］。已有研究表明，甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺等農(nóng)藥誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎出現(xiàn)心包囊水腫、軀干彎曲等癥狀［23］；戊唑醇、烯唑醇、異丙甲草胺、阿特拉津等農(nóng)藥在高濃度時(shí)對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育顯著表現(xiàn)出心包囊腫和脊柱彎曲［33］；斑馬魚(yú)胚胎在β-氯氰菊酯暴露后幼魚(yú)體軸表現(xiàn)出嚴(yán)重致畸效應(yīng)［34］；還有表面活性劑［35］、四溴聯(lián)苯醚［36］、四氯二苯并-p-二噁英［37］、重金屬銅、鎘、汞［38，39］等都會(huì)引起斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育畸形。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各農(nóng)藥暴露組對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)出現(xiàn)顯著的心包囊和卵黃囊水腫、脊柱彎曲等反應(yīng)，表明4種農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)胚胎具有發(fā)育毒性。

Ca2+-ATP酶是質(zhì)膜上鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)中最重要的部分，可利用ATP水解的能量維持細(xì)胞內(nèi)外鈣離子濃度［40］。Na+/ K+-ATP 酶在水生生物體內(nèi)普遍存在，是橫跨質(zhì)膜的一種固有蛋白，也是組成Na+/ K+泵活性的主要部分，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)以及能量代謝有著重要作用［40］。體軸的彎曲通常是由于體軸肌肉組織損壞，包括肌肉細(xì)胞壞死及肌纖維受損，或脊椎骨自身發(fā)生畸形所致［41］。此外，Ca2+通道功能紊亂也會(huì)導(dǎo)致脊柱彎曲［41］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，斑馬魚(yú)胚胎在各農(nóng)藥暴露后Ca2+-ATP酶、Na+/ K+-ATP酶活性上升，聯(lián)合作用中兩種ATP酶活性下降，兩種ATP酶活性的上升或下降引起Ca2+通道功能紊亂都引起脊柱彎曲［41］。所以，Na+/ K+-ATP 酶和Ca2+-ATP酶活性的改變可能是農(nóng)藥導(dǎo)致斑馬魚(yú)胚胎脊柱彎曲的原因之一。ATP 酶活性作為生態(tài)毒理學(xué)指標(biāo)可以作為水體農(nóng)藥監(jiān)測(cè)的生物標(biāo)志物［42］。

圖5 暴露72 h對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)心室容量（舒張/收縮容量）（A）、每搏輸出量（B）、心輸出量（C）的影響

圖6 暴露72 h導(dǎo)致斑馬魚(yú)仔魚(yú)心律不齊

圖7 暴露72 h對(duì)斑馬魚(yú)仔魚(yú)Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的影響

心臟作為胚胎發(fā)育過(guò)程中最早發(fā)揮功能的器官，其完善的循環(huán)功能對(duì)于胚胎正常發(fā)育起關(guān)鍵作用。斑馬魚(yú)發(fā)育過(guò)程中心血管在20 hpf 開(kāi)始形成，能夠收縮但尚未與發(fā)育中的血液循環(huán)系統(tǒng)相連，發(fā)育至30 hpf時(shí)心臟分化出心室和心房，36 hpf 時(shí)開(kāi)始規(guī)律心跳［43］。正常生長(zhǎng)條件下，48 hpf 時(shí)主要的器官系統(tǒng)完成形態(tài)發(fā)生并開(kāi)始破膜孵化，此時(shí)心臟功能已相對(duì)比較完善，是斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育進(jìn)程的一個(gè)重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)。心率易受外界因素如溫度、污染等影響，有研究表明化學(xué)污染物暴露會(huì)使斑馬魚(yú)心率上升或下降［44］。心律不齊是心血管疾病危害的病癥之一，而引起心律不齊的原因很多，研究表明K+和Ca2+失調(diào)在心律不齊中有重要影響［45］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示4種農(nóng)藥單獨(dú)暴露后表現(xiàn)心率下降趨勢(shì)，心室容量有不同程度的上升或下降，致使每搏輸出量及心輸出量出現(xiàn)上升或下降，從而使各暴露組表現(xiàn)出心律不齊。4種農(nóng)藥的暴露均可致斑馬魚(yú)胚胎心臟功能異常。

生物處于脅迫條件下時(shí)，酶活性會(huì)隨之變化，可表現(xiàn)為抑制或誘導(dǎo)，還能反映能量代謝的變化［46］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中各農(nóng)藥單獨(dú)暴露組Na+/ K+-ATP酶和Ca2+-ATP 酶的活性被誘導(dǎo)，聯(lián)合作用則抑制了兩種ATP酶活性，提示雖然農(nóng)藥的濃度相同，聯(lián)合暴露對(duì)這兩種ATP酶活性的影響更大。ATP酶在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能［47］，在離子平衡和滲透壓穩(wěn)態(tài)的維持方面具有重要作用［48］。K+和Ca2+的轉(zhuǎn)運(yùn)相互協(xié)調(diào)和制約共同維持心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的穩(wěn)定［49］，Ca2+-ATP 酶活性的改變會(huì)影響心臟功能［50，51］，所以Na+/ K+-ATP 酶和Ca2+-ATP酶活性的改變也是農(nóng)藥暴露影響?hù)~(yú)類(lèi)胚胎心臟功能的原因。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)腈苯唑、吡唑醚菌酯、惡霜靈、戊菌隆等4種新型農(nóng)藥在相同濃度下斑馬魚(yú)胚胎的暴露實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，在低濃度下4種農(nóng)藥單獨(dú)作用均可導(dǎo)致斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的毒性，尤其心臟發(fā)育受毒性影響較敏感；從導(dǎo)致脊柱彎曲及心律不齊效應(yīng)來(lái)看腈苯唑毒性最強(qiáng)；Na+/ K+-ATP 酶和Ca2+-ATP酶是功能較廣泛的酶，聯(lián)合暴露抑制這兩種ATP酶的活性，可能對(duì)斑馬魚(yú)許多生理活動(dòng)產(chǎn)生不利的影響。

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（責(zé)任編輯 李楠）

Toxic Effects of Four Currently-used Pesticides on Zebrafish Embryonic Development

WU Yu-qiong1CHEN Ying2HU Yong-le1ZUO Zheng-hong2WANG Chong-gang2
（1. College of Tea and Food Science，Wuyi University，Wuyishan 354300；2. School of life Sciences，Xiamen University，Xiamen 361005）

In order to study the effects of four pesticides（fenbuconazole，pyraclostrobin，metoxazon，and pencycurone），either individually or jointly，on the development of zebrafish embryos，seven experiments（blank control，solvent control，individual of 4 pesticides，and jointly combined four pesticides）were designed to treat zebrafish embryos for 72 h. The results showed that individual exposure to any of 4 pesticides at 50 ng/L led to the significant elevation on the rate of pericardial and yolk sac edema and the frequency of dorsal curvature in the larvae compared to the control. The exposure to fenbuconazole，metoxazon，and combined four pesticides resulted in a significant reduction in the heart rate and a significant increase in cardiac arrhythmia in the zebrafish larvae. The activities of Na+/K+-ATPase and Ca2+-ATPase of the embryos were significantly induced by the individual exposure to 4 pesticides，while the both activities were remarkably inhibited by the combined exposure. The results confirmed that these pesticides at environmental relevant concentration presented the clear toxicity to the development of fish embryo.

fenbuconazole；pyraclostrobin；metoxazon；pencycurone；combined exposure；Zebrafish；development of embryo

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0032

2017-01-20

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（41376118），福建省2011協(xié)同創(chuàng)新中心（閩教科［2015］75號(hào)）

吳玉瓊，女，副教授，研究方向：環(huán)境毒理、食品營(yíng)養(yǎng)與安全；E-mail：wyq93042@163.com