畢振原，黃繼紅，2*，劉 娜，馮軍偉，紀(jì)小國(guó)，李海月，趙 祎，張亞奇

（1.河南工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.河南省食品工業(yè)科學(xué)研究所有限公司，河南 鄭州 450000）

麥胚球蛋白的體外抗炎活性研究

畢振原1，黃繼紅1，2*，劉 娜1，馮軍偉1，紀(jì)小國(guó)1，李海月1，趙 祎1，張亞奇1

（1.河南工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.河南省食品工業(yè)科學(xué)研究所有限公司，河南 鄭州 450000）

麥胚球蛋白是一種優(yōu)質(zhì)蛋白，在改善身體機(jī)能和消除炎癥方面有著重要的研究?jī)r(jià)值。通過(guò)脂多糖（LPS）干預(yù)巨噬細(xì)胞建立炎癥細(xì)胞模型，對(duì)提取麥胚球蛋白的體外抗炎活性進(jìn)行了探究。通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)研究了麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性；利用Griess法研究了麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞經(jīng)LPS誘導(dǎo)前后NO產(chǎn)生量的影響；利用ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)炎癥細(xì)胞模型中細(xì)胞因子TNF-α含量的影響。結(jié)果表明：麥胚球蛋白能顯著降低經(jīng)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞因子TNF-α和NO的含量，并存在一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。麥胚球蛋白抗炎活性的研究為功能性保健品及抗炎藥品原料開(kāi)發(fā)提供了思路。

麥胚球蛋白；RAW264.7細(xì)胞；炎癥細(xì)胞模型；抗炎活性

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2017-4-20 14:09:31

0 引言

小麥?zhǔn)侨祟?lèi)歷史上最早被人工栽培的糧食作物之一，有“五谷之尊”的美譽(yù)。小麥胚芽是小麥籽粒的生命中樞，質(zhì)量相當(dāng)于整粒小麥的2%左右，卻蘊(yùn)含著其97%的營(yíng)養(yǎng)，被營(yíng)養(yǎng)學(xué)家美譽(yù)為“人類(lèi)天然的營(yíng)養(yǎng)寶庫(kù)”，營(yíng)養(yǎng)豐富，功能全面[1]。麥胚蛋白主要由清蛋白和球蛋白組成，分別占26%和20%左右[2]。到目前為止，國(guó)內(nèi)外研究的重點(diǎn)大都是麥胚清蛋白，且研究表明其主要組成是一些蛋白酶類(lèi)[3-4]；而對(duì)麥胚球蛋白的關(guān)注程度較小，尚未成為主要研究對(duì)象。

巨噬細(xì)胞源自單核細(xì)胞，是免疫效應(yīng)細(xì)胞，可以對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行吞噬以及消化，并通過(guò)釋放細(xì)胞因子等激活免疫系統(tǒng)中的其他細(xì)胞，具有免疫防御、免疫監(jiān)視、免疫調(diào)節(jié)以及抗原呈遞等多種免疫功能，在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中起重要作用[5-7]。NO是激活巨噬細(xì)胞殺滅病原微生物及腫瘤細(xì)胞的主要效應(yīng)分子，能提高機(jī)體免疫力，但過(guò)量的NO也會(huì)促進(jìn)炎癥發(fā)生，對(duì)組織造成損傷[8-10]。

本研究通過(guò)體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞觀察了麥胚球蛋白對(duì)經(jīng)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞因子（TNF-α）和一氧化氮的產(chǎn)生量，從細(xì)胞水平研究麥胚球蛋白的抗炎活性，為研究麥胚球蛋白的抗炎活性及其作用機(jī)制提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為麥胚蛋白作為功能性保健品及抗炎藥品原料開(kāi)發(fā)提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

麥胚：河南財(cái)鑫糖業(yè)有限公司；DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）高糖培養(yǎng)液：美國(guó)Hyclone公司；四季青優(yōu)級(jí)胎牛血清：浙江天杭生物科技有限公司；雙抗貯存液、Hank's溶液：杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；噻唑藍(lán)（Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide，MTT）、 臺(tái) 盼 藍(lán) ： 美 國(guó)AMERISCO 公司；脂多糖（Lipopolysaccharides, LPS）：美國(guó)Sigma-Aldrich貿(mào)易有限公司；0.25%胰酶、TrypLETM Express重組酶：美國(guó)Life Technologies公司；腫瘤壞死因子（TNF-α）試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他化學(xué)試劑均為分析純。

DMEM高糖完全培養(yǎng)液：89%DMEM高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)液，10%胎牛血清，1%終濃度分別為100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的雙抗貯存液。

Griess試劑的配制：稱(chēng)取1 g對(duì)氨基苯磺酸，加入100 mL 5%磷酸溶液溶解；再稱(chēng)取0.1 g N-（1-萘基）乙二胺二鹽酸鹽，加入100 mL 5%磷酸溶液溶解；使用前，將兩者等體積混合，即為Griess試劑。

1.2 儀器與設(shè)備

Perkin Elmer 1420酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀：美國(guó)；SHELLAB型CO2培養(yǎng)箱；Water Jacketed Incubator：美國(guó)；OLYMPUS IMT-2型倒置顯微鏡：美國(guó)；5810R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：德國(guó)Eppendorf公司；SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺(tái)：蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 麥胚提取物的制備

將麥胚進(jìn)行粉碎，然后在料液比為1∶13、NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%、溫度為30℃的條件下，提取1 h，經(jīng)離心后，上清即為麥胚球蛋白提取液，冷凍干燥得到麥胚球蛋白[2]。

1.3.2 RAW264.7細(xì)胞的復(fù)蘇

從-80℃冰箱中取出RAW264.7細(xì)胞，在37℃水浴中解凍，解凍后將細(xì)胞懸液移入無(wú)菌離心管中，加入少量的DMEM完全培養(yǎng)液，1 000 r/min離心5 min后棄上清，再加入DMEM完全培養(yǎng)液，吹打均勻后移入培養(yǎng)瓶中，在37℃、5%CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)[11-12]。

1.3.3 RAW264.7細(xì)胞懸液的制備

當(dāng)RAW264.7細(xì)胞長(zhǎng)至70%～80%的豐度（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期）時(shí)，取出培養(yǎng)瓶，棄掉瓶中的培養(yǎng)基，加入10 mL PBS緩沖溶液洗滌2次，然后加入約1.5 mL 0.25%的TrypLETM Express重組酶進(jìn)行消化，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使重組酶覆蓋均勻，將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中消化5 min。倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)培養(yǎng)瓶中貼壁細(xì)胞大部分變?yōu)閳A狀時(shí)，即認(rèn)為消化完全。此時(shí)加入10 mL DMEM高糖完全培養(yǎng)液，以終止消化作用，輕輕反復(fù)吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁脫落。然后將細(xì)胞懸液移入50 mL離心管，1 000 r/min條件下離心5 min，棄上清后加入適量DMEM完全培養(yǎng)液，混勻后用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至 5.0×105個(gè)/mL[5,13]。

1.3.4 麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的毒性

取密度為5.0×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，吹打均勻后接種于96孔培養(yǎng)板，100 μL/孔，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后吸棄孔內(nèi)的培養(yǎng)基，對(duì)照組每孔加入100 μL DMEM完全培養(yǎng)液，樣品組分別加入等量不同質(zhì)量濃度的樣品溶液（終質(zhì)量濃度為0、12.5、25、50、100、200、400、800 μg/mL），在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，MTT法檢測(cè)吸光度，根據(jù)公式（1）計(jì)算麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的存活率[5]。

1.3.5 麥胚球蛋白對(duì)未經(jīng)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞NO產(chǎn)生量的影響

取密度為5.0×105個(gè)/mL的RAW264.7細(xì)胞懸液，吹打均勻后以2 mL/孔的量接種于12孔培養(yǎng)板，在37℃、5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后吸棄孔內(nèi)的培養(yǎng)基，空白對(duì)照組每孔加入500 μL DMEM高糖完全培養(yǎng)液，樣品組分別加入500 μL終濃度為0、12.5、25、50、100、200、400、800 μg/mL樣品溶液，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h。

NO標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制：配制濃度為0、2、5、10、15、30、40、50、60、80、100 μmol/L的 NaNO2溶液，各取100 μL并加入100 μL Griess試劑混合均勻，避光作用20 min后，在535 nm處檢測(cè)各孔的光吸收值。

細(xì)胞培養(yǎng)基中NO含量的檢測(cè)：培養(yǎng)結(jié)束后，各組每孔取培養(yǎng)基上清液 100 μL與 100 μL Griess試劑混合，避光作用20 min后，用DMEM完全培養(yǎng)液作空白對(duì)照，在535 nm處檢測(cè)其光吸收值，通過(guò)NO標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各孔NO的含量。

1.3.6 麥胚球蛋白對(duì)經(jīng)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞NO產(chǎn)生量的影響

細(xì)胞種板和培養(yǎng)：取密度為5.0×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，吹打均勻后以2 mL/孔的量接種于12孔培養(yǎng)板，在37℃、5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后吸棄孔內(nèi)的培養(yǎng)液，空白對(duì)照組每孔加入500 μL DMEM完全培養(yǎng)液，LPS對(duì)照組、地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組、樣品組分別加入500 μL 2 μg/mL的LPS溶液，培養(yǎng)0.5-1 h后，空白對(duì)照組和LPS對(duì)照組每孔加入500 μL DMEM完全培養(yǎng)液，地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組每孔加入500 μL終濃度為8 μmol/L的地塞米松溶液，樣品組分別加入500 μL終質(zhì)量濃度為0、12.5、25、50、100、200、400、800 μg/mL樣品溶液，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24 h。用Griess法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中NO的含量。

1.3.7 麥胚球蛋白對(duì)經(jīng)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞因子含量的影響

ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)炎癥細(xì)胞模型中細(xì)胞因子含量TNF-α的影響。細(xì)胞干預(yù)24 h后取上清液，利用相應(yīng)的ELISA試劑盒按說(shuō)明進(jìn)行操作，測(cè)定TNF-α含量，每個(gè)試驗(yàn)均設(shè)3個(gè)重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的毒性

如圖1所示，麥胚球蛋白在100～1 600 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)RAW264.7細(xì)胞顯示無(wú)毒性；并在100～1 600 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用（P<0.01）；隨著質(zhì)量濃度的升高，麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的存活率呈上升趨勢(shì)，當(dāng)質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí)，細(xì)胞存活率達(dá)到最高值，之后出現(xiàn)下降，但是細(xì)胞存活率仍顯著高于空白組（P<0.01）。表明麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)毒性，且對(duì)其具有顯著的增殖作用。

圖1 麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞的毒性Fig.1 The toxicity of wheat germ globulin against RAW 264.7 macrophages

2.2 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)正常RAW264.7的NO產(chǎn)生量的影響

圖2為NO標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性回歸方程為 y=0.003 1x+0.001 9，R2=0.999 7。圖3為不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)正常RAW264.7的NO產(chǎn)生量的影響。由圖3可知，質(zhì)量濃度為100 μg/mL時(shí)對(duì)正常RAW264.7細(xì)胞NO產(chǎn)生無(wú)顯著影響（P>0.05），200～1 600 μg/mL內(nèi)具有顯著的促進(jìn)作用（P< 0.01）。NO是激活的巨噬細(xì)胞殺滅病原微生物及腫瘤細(xì)胞的主要效應(yīng)分子，能提高機(jī)體免疫。試驗(yàn)表明，麥胚球蛋白能夠顯著促進(jìn)正常RAW264.7的NO產(chǎn)生量。

2.3 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì) LPS誘導(dǎo)RAW264.7的炎癥的抑制作用

圖2 NO標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.2 The standard curve of NO

圖3 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)正常RAW264.7的NO產(chǎn)生量的影響Fig.3 Effect of different concentrations of wheat germ globulin on NO production of RAW264.7 cells

圖4 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7的NO產(chǎn)生量的影響Fig.4 Effect of different concentration of wheat germ globulin on NO production of RAW264.7 cells induced by LPS

如圖4所示，地塞米松與各質(zhì)量濃度麥胚球蛋白均能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NO的產(chǎn)生（P<0.05），但與空白組相比仍有較顯著性差異（P<0.01），麥胚球蛋白隨著質(zhì)量濃度的升高抑制效應(yīng)愈加顯著；當(dāng)麥胚球蛋白質(zhì)量濃度為100 μg/mL時(shí)，其抑制效應(yīng)顯著低于地塞米松（P< 0.05）；當(dāng)麥胚球蛋白質(zhì)量濃度為1 600 μg/mL時(shí)，其抑制效應(yīng)顯著高于地塞米松（P<0.05）；當(dāng)麥胚球蛋白質(zhì)量濃度在200～800 μg/mL范圍內(nèi)，其抑制效應(yīng)與地塞米松無(wú)顯著性差異。綜上所述，各質(zhì)量濃度麥胚球蛋白均能顯著抑制 LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NO的產(chǎn)生的效應(yīng)，表現(xiàn)出抗炎活性，且當(dāng)質(zhì)量濃度為1 600 μg/mL時(shí)抗炎活性顯著高于地塞米松（P<0.05）。

2.4 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)經(jīng) LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞因子（TNF-α）含量的影響

細(xì)胞受到有毒性的化學(xué)物質(zhì)或病原體侵襲的時(shí)候，機(jī)體的免疫系統(tǒng)就會(huì)釋放出NF-κB。NF-κB是調(diào)控許多炎癥基因表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，狀態(tài)通常是非活性，存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到TNF等刺激時(shí)，NF-κB得以活化并從細(xì)胞質(zhì)移到細(xì)胞核，啟動(dòng)多種炎癥基因表達(dá)，使大量的炎癥細(xì)胞處于發(fā)生炎癥的部位周?chē)鶾15]。NF-κB發(fā)生核轉(zhuǎn)位是一些免疫和炎癥反應(yīng)的重要步驟，應(yīng)用NF-κB抑制劑來(lái)減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生成為治療炎癥的新思路。TNF-α在炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生的級(jí)聯(lián)效應(yīng)中屬于末期的分子，同時(shí)也是炎癥中起正反饋調(diào)控的關(guān)鍵分子，參與多種局部和全身的炎癥反應(yīng)[15-16]。

從圖5可以看出，LPS誘導(dǎo)后細(xì)胞因子TNF-α的含量與空白對(duì)照組比較有極顯著的升高（P< 0.01），說(shuō)明造模成功。而地塞米松與麥胚球蛋白干預(yù)組中的TNF-α的含量均顯著低于LPS組。其中，當(dāng)麥胚球蛋白質(zhì)量濃度為100 μg/mL時(shí)，TNF-α的含量顯著高于地塞米松組（P＜0.05）；當(dāng)麥胚球蛋白質(zhì)量濃度為1 600 μg/mL時(shí)，TNF-α的含量顯著低于地塞米松組（P＜0.05）。這表明麥胚球蛋白干預(yù)后細(xì)胞所分泌的炎癥介質(zhì)TNF-α的含量有顯著降低，且成一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，表明麥胚球蛋白對(duì)促炎因子有明顯的抑制作用。

圖5 不同質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7的TNF-α產(chǎn)生量的影響Fig.5 Effect of different concentrations of wheat germ globulin on TNF-α production of RAW264.7 cells induced by LPS

3 結(jié)論

TNF-α能促使中性粒細(xì)胞聚集、內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子上調(diào)、凝血酶原效應(yīng)等，在炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和持續(xù)過(guò)程中具有不可或缺的作用，是炎癥反應(yīng)的核心環(huán)節(jié)，血清 TNF-α的水平可反映炎癥的嚴(yán)重程度[16-17]。試驗(yàn)假設(shè)麥胚球蛋白具有抗炎作用，以LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)及抗炎機(jī)制普遍模型為研究載體，以TNF-α作為抗炎療效指標(biāo)，采用直接干預(yù)模式探討了麥胚球蛋白的抗炎作用。

炎癥反應(yīng)Toll信號(hào)傳導(dǎo)通路顯示，LPS進(jìn)入細(xì)胞主要通過(guò)脂多糖結(jié)合蛋白 CD14受體和Toll樣受體4等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而引起系列的炎癥反應(yīng)[5,15-16]。RAW264.7細(xì)胞受到脂多糖 (LPS)等外界刺激后能夠啟動(dòng)體內(nèi)炎癥介質(zhì)產(chǎn)生并啟動(dòng)機(jī)體抵抗炎癥系統(tǒng)的功能，激活轉(zhuǎn)錄因子細(xì)胞核因子NF-κB和活化相關(guān)蛋白，引起各種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的過(guò)度表達(dá)，引起機(jī)體內(nèi)的炎癥多米諾骨牌反應(yīng)，進(jìn)一步引起全身炎癥反應(yīng)綜合征。一氧化氮 (NO)作為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子，在外界刺激致機(jī)體損傷中起重要作用。一氧化氮在炎癥初期，起保護(hù)作用，但是過(guò)多的 NO可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放 IL-1、TNF-α等促炎因子，這些促炎性細(xì)胞因子可以刺激巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生更多的 NO，形成惡性循環(huán)，加重炎癥反應(yīng)，因此能抑制NO分泌產(chǎn)生的物質(zhì)具有抗炎的作用。

實(shí)驗(yàn)研究顯示麥胚球蛋白有顯著的抗炎作用，各質(zhì)量濃度麥胚球蛋白對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)毒性，能夠顯著促進(jìn)正常RAW264.7的NO產(chǎn)生量；各質(zhì)量濃度麥胚球蛋白均能顯著抑制 LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NO的產(chǎn)生，且隨著質(zhì)量濃度的升高抑制效應(yīng)愈加顯著；對(duì)促炎因子TNF-α有明顯的抑制作用，說(shuō)明麥胚球蛋白在與促炎因子相關(guān)的炎癥疾病中起到一定的抗擊炎癥的作用。

雖然試驗(yàn)證實(shí)了麥胚球蛋白的良好的抗炎效果，但麥胚球蛋白的抗炎機(jī)制及其構(gòu)效關(guān)系還需要做以下工作：（1）麥胚球蛋白的抗炎活性的大小與其分子質(zhì)量、氨基酸組成、首末段氨基酸、二級(jí)結(jié)構(gòu)等關(guān)系密切，需要應(yīng)用高度專(zhuān)一性的分離手段如親和層析技術(shù)、分子印跡技術(shù)分離具有高抗炎活性的麥胚球蛋白單體。（2）大量人源化細(xì)胞的抗炎效果和對(duì)促炎因子的作用需要進(jìn)一步的深入研究。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合驗(yàn)證麥胚球蛋白的抗炎效果及對(duì)應(yīng)的劑量關(guān)系是未來(lái)研究的重點(diǎn)。（3）麥胚球蛋白抗炎過(guò)程中，細(xì)胞通路的研究如在Toll信號(hào)傳導(dǎo)通路中的具體的作用位點(diǎn)和機(jī)制需要從理論上和實(shí)驗(yàn)上做進(jìn)一步的驗(yàn)證?？傊?，麥胚球蛋白的抗炎作用的研究可以有效地提高麥胚資源的綜合利用，同時(shí)也為功能性保健品及藥品原料的開(kāi)發(fā)提供了借鑒。

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Abstract：Wheat germ globulin is a kind of high quality protein，which has important research value on improving somatic function and eliminating inflammation.Lipopolysaccharide（LPS）intervening macrophage inflammatory cell model was established，and the anti-inflammatory activity of extracted wheat germ globulin was studied in vitro.The cytotoxicity of wheat germ globulin on RAW264.7 cells was examined through cell culturation in vitro.The influence of wheat germ globulin on the NO production before and after RAW264.7 cells induced by LPS were studied by Griess method，while the content of cytokines TNF-α in inflammatory cell model was detected by ELISA method.The results showed wheat germ globulin had significant anti-inflammatory ability，and was non-toxic on RAW264.7 cells；wheat germ globulin could significantly promote the NO production of normal RAW264.7；the different concentrations of wheat germ globulin could significantly inhibit the NO production of RAW264.7 cell induced LPS，and the inhibitory effect was increased in dose manner; wheat germ globulin also had significantly inhibition effect on proinflammatory factor TNF-α.It was concluded thatwheatgerm globulin had anti-inflammation effecton theassociated diseasesofpro-inflammatory inflammatory.The present study will provide supplyment for the development of the functional health food and raw materials of anti-inflammatory drugs.

THE ANTI-INFLAMMATORY FUNCTION OF WHEAT GERM GLOBULIN IN VITRO

BI Zhenyuan1，HUANG Jihong1，2，LIU Na1，F(xiàn)ENG Junwei1，JI Xiaoguo1，LI Haiyue1，ZHAO Yi1，ZHANG Yaqi1
（1.School of Biological Engineering，Henan University of Technology，Zhengzhou 450001，China；2.Food Industry Research Institute of Henan Province，Zhengzhou 450000，China；）

wheat germ globulin；RAW264.7 cell；macrophage inflammatory cell model；anti-Inflammatory

Q26

B

1673-2383(2017)02-0063-06

http://kns.cnki.net/kcms/detail/41.1378.N.20170420.1409.022.html

2016-08-24

河南工業(yè)大學(xué)谷物資源轉(zhuǎn)化與利用省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（001254）；河南省國(guó)際科技合作與交流項(xiàng)目（152102410032）；鄭州市國(guó)際科技合作與交流項(xiàng)目（141PGJHZ546）

畢振原（1990—），男，河南商丘人，碩士研究生，研究方向?yàn)槲⑸锱c生化藥學(xué)。

*通信作者