崔 瑩，田 樺，程 開，遲男男，張雪梅，卓 越

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院， 黑龍江 佳木斯 154003)

急性胰腺炎大鼠胰腺細(xì)胞骨架F-actin與再生因子RegI相關(guān)性研究①

崔 瑩，田 樺，程 開，遲男男，張雪梅，卓 越

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院， 黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究L-精氨酸誘導(dǎo)大鼠急性胰腺炎胰腺細(xì)胞骨架F-actin與再生因子RegI的水平變化情況及相關(guān)性。方法：將SD大鼠隨機(jī)分為空白組、對(duì)照組、模型組，通過腹腔注射L-精氨酸誘導(dǎo)急性胰腺炎模型后將兩組分別選取12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)觀察胰腺大體病理變化，通過westernblot檢測(cè)各組F-actin與RegI的含量。結(jié)果：western-blotting檢測(cè)模型組F-actin相對(duì)表達(dá)量與空白組、對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組RegI相對(duì)表達(dá)量較空白組、對(duì)照組明顯升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：腹腔注射L-精氨酸誘導(dǎo)的急性胰腺炎胰腺細(xì)胞骨架F-actin與再生因子RegI可能呈負(fù)相關(guān)。

胰腺炎；細(xì)胞骨架；F-actin；RegI蛋白

急性胰腺炎(AP)是以胰腺局部炎癥反應(yīng)為主要特征的疾病，細(xì)胞骨架對(duì)于維持細(xì)胞的形態(tài)有一定作用，同時(shí)在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和細(xì)胞器移動(dòng)間起著交通作用，并在細(xì)胞有絲分裂中起著重要作用。急性胰腺炎時(shí)胰腺腺泡細(xì)胞骨架發(fā)生變化，F(xiàn)-actin(纖維狀肌動(dòng)蛋白)出現(xiàn)解聚，含量降低。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)F-actin與再生因子RegI(胰島再生源蛋白)各時(shí)間段的含量變化，從而探討二者的相關(guān)性以及急性胰腺炎組織壞死后再生蛋白R(shí)egI對(duì)胰腺的保護(hù)與修復(fù)作用。

1 材料與方法[1,2]

1.1 主要?jiǎng)游锛安牧?/p>

雄性SD大鼠(n=45), 體重250～300g(由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。L-精氨酸(上海翊圣公司)，RegIβ抗體(博奧森生物公司)，F(xiàn)-actin抗體(美國abcam公司)，β-actin抗體(三鷹生物有限公司)，二抗(博奧森公司)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

隨機(jī)分為A組(AP模型組)、B組(對(duì)照組)、C組(空白組)，前兩組再按12h、24h、48h、72h(每個(gè)時(shí)點(diǎn)n=5)分組。實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物禁食12h，不禁水。A組腹腔注射20%L-精氨酸(200mg/100g3次，每隔1h)，B組腹腔注射同體積的生理鹽水，C組不予處理。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別于各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，取胰腺分為固定和凍存用。常規(guī)脫水、透明、包埋、切片(3μm)，蘇木精-伊紅染色(HE染色)；Western-blotting檢測(cè)F-actin和RegI表達(dá)量，應(yīng)用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行曝光并對(duì)其灰度值分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用Pearson積差相關(guān)分析法分析F-actin和RegI的相關(guān)性，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 根據(jù)Nakamura[3]等標(biāo)準(zhǔn)從水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死進(jìn)行病理組織評(píng)分，各組胰腺織病理評(píng)分見表1。

表1 大鼠胰腺病理評(píng)分±s，分)

注:P<0.05

2.2western-blotting檢測(cè)結(jié)果顯示：AP模型組F-actin蛋白表達(dá)量較空白組、對(duì)照組減少；AP模型組RegI蛋白表達(dá)量與空白組、對(duì)照組相比明顯增多。見表2。

表2 胰腺組織F-actin和RegI western blot圖像凈光密度比值

注:P<0.05

3 討論

細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)是F-actin與G-actin之間維持著聚合和解聚的動(dòng)態(tài)平衡，大量的F-actin趨向于胞周分布,形成F-actin環(huán)，從而維持著細(xì)胞的形態(tài)與功能。有文獻(xiàn)表明[4]，F(xiàn)-actin與細(xì)胞周期進(jìn)入分裂末期的胞質(zhì)分裂有密切關(guān)聯(lián)。細(xì)胞骨架的改變可致細(xì)胞遷移及黏附力降低，同時(shí)也降低細(xì)胞增殖能力。當(dāng)胰腺受損時(shí)，胰酶原顆粒提前釋放胰酶并激活，細(xì)胞骨架微絲出現(xiàn)結(jié)構(gòu)紊亂，F(xiàn)-actin含量減少，導(dǎo)致腺泡細(xì)胞分泌胰酶受阻，加重自身消化[5]。Reg是胰腺炎時(shí)胰腺組織中提取出的一組蛋白，當(dāng)胰腺損傷時(shí)腺泡細(xì)胞分泌大量Reg，故該蛋白表達(dá)呈升高趨勢(shì)，RegI在48h雖有下降，但仍呈現(xiàn)較高水平，因此被稱為應(yīng)激蛋白，對(duì)保護(hù)、修復(fù)胰腺有重要作用。R.Graf,Ph.D[6]使用雨蛙素誘導(dǎo)急性胰腺炎，發(fā)現(xiàn)胰腺組織中RegI明顯表達(dá)，并在48h達(dá)高峰，說明RegI對(duì)胰腺具有保護(hù)、修復(fù)作用，并促進(jìn)導(dǎo)管和β胰島細(xì)胞有絲分裂；但在Bimmler[7]的實(shí)驗(yàn)則證明輕度、中度急性胰腺炎可見RegI表達(dá)明顯升高，而在重度急性胰腺炎則出現(xiàn)低表達(dá)情況，說明在胰腺受到輕、中度損害的前提下，RegI出現(xiàn)明顯高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)F-actin在胰腺受損時(shí)逐漸下降，RegI在胰腺炎發(fā)展時(shí)逐漸升高，于24h后兩者呈相反趨勢(shì)，RegI在一定水平刺激F-actin增多,從而穩(wěn)定細(xì)胞達(dá)到再生修復(fù)的作用。RegI蛋白與F-actin具體相互作用機(jī)制及信號(hào)傳導(dǎo)途徑尚不十分清楚，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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[6]GrafR,SchinesserM,LussiA,etal.Coordinateregulationofsecretorystressproteins(PSP/regandPAPIPAPII&Ⅲ)intheratexocrinepancreasduringexperimentalacutepancreatitis[J].SurgRes,2002,105:136-144

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Correlation between cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in acute pancreatitis ratsL

CUIYing,TIANHua,CHENGKai,CHINan-nan,ZHANGXue-mei,ZHUOYue

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)

Objective: To investigate the changes and correlation of cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in pancreas tissue of rats with acute pancreatitis induced by L-arginine. Methods: SD rats (n=45)were randomly divided into blank group, control group and model group. Acute pancreatitis was induced by intraperitoneal injection of L-arginine, then the rats were sacrificed at 12h, 24h, 48h and 72h. The levels of F-actin and RegI were detected by western blot. Results: The relative expression of F-actin in model group was significantly lower than those in blank group and control group (P<0.05),andtherelativeexpressionofRegIinmodelgroupwassignificantlyhigherthanthoseinblankgroupandcontrolgroup(P<0.05). Conclusion: Cytoskeleton F-actin may be negatively correlated with RegI in acute pancreatitis induced by intraperitoneal injection of L-arginine.

pancreatitis；cytoskeleton；F-actin；RegI

1. 黑龍江省自然基金面上項(xiàng)目, 編號(hào)：H2015072；2. 佳木斯大學(xué)研究生創(chuàng)新項(xiàng)目,編號(hào)：YM2016_021；3. 佳木斯大學(xué)校管項(xiàng)目,編號(hào):S2009-060；S2011-038。

崔瑩(1987～)女，內(nèi)蒙古呼倫貝爾人，在讀碩士研究生。

卓越(1964～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：zhuoyuejmsu@126.com。

R

A

1008-0104(2017)03-0028-02

2017-03-03)