国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

改進(jìn)雙氫青蒿素哌喹片中雙氫青蒿素的溶出度測(cè)定方法Δ

2017-07-07 15:08重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院重慶401121
中國(guó)藥房 2017年15期
關(guān)鍵詞:溶出度青蒿素磷酸

張 勉,李 超(重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,重慶 401121)

·藥物分析與檢定·

改進(jìn)雙氫青蒿素哌喹片中雙氫青蒿素的溶出度測(cè)定方法Δ

張 勉*,李 超(重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,重慶 401121)

目的:改進(jìn)雙氫青蒿素哌喹片中雙氫青蒿素的溶出度測(cè)定方法。方法:采用槳法進(jìn)行溶出試驗(yàn),以0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì),溶出介質(zhì)體積為500m L,轉(zhuǎn)速為75 r/m in,取樣時(shí)間為45m in;樣品前處理中加入3.6%氫氧化鈉溶液的體積由原來(lái)的5 m L改為20m L,加入磷酸的體積由原來(lái)的0.2m L改為0.7m L。采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中雙氫青蒿素的溶出度:色譜柱為YMC-Pack ODS-A,流動(dòng)相為0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.4)-乙腈(65∶35,V/V),流速為1.0m L/m in,檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm,柱溫為30℃,進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果:雙氫青蒿素檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為7.802~117.03μg/m L(r=0.999 9);定量限為2.0 ng,檢測(cè)限為0.6 ng;精密度、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD<1.0%;回收率為99.18%~100.46%(RSD=0.45%,n=9)。3批樣品中雙氫青蒿素的平均溶出度分別為94.9%、77.9%、89.6%。結(jié)論:改進(jìn)后的方法提高了其靈敏度、溶出度以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

雙氫青蒿素哌喹片;雙氫青蒿素;溶出度測(cè)定;方法改進(jìn)

雙氫青蒿素哌喹片為雙氫青蒿素和磷酸哌喹的復(fù)方制劑。雙氫青蒿素為青蒿素的衍生物[1-2],能迅速控制癥狀和殺滅瘧原蟲(chóng)[3]。磷酸哌喹是一種長(zhǎng)效抗瘧疾藥物[4],能使滋養(yǎng)體食物泡膜和線粒體腫脹,導(dǎo)致其生理功能的破壞,從而殺死瘧原蟲(chóng)[5]。體外藥效學(xué)研究顯示,雙氫青蒿素與磷酸哌喹合用具有協(xié)同作用[6],可延緩瘧原蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生[7]。雙氫青蒿素哌喹片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于2010年版《中國(guó)藥典》(第一增補(bǔ)本)[8]。但在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn),雙氫青蒿素測(cè)定回收率偏低,溶出度測(cè)定結(jié)果也偏低。根據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)下達(dá)的全球基金項(xiàng)目國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高課題任務(wù)以及藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)雙氫青蒿素哌喹片公示標(biāo)準(zhǔn)的反饋意見(jiàn),為了更好地控制和評(píng)價(jià)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量,本課題組經(jīng)試驗(yàn)研究,通過(guò)在樣品前處理中增加3.6%氫氧化鈉溶液和磷酸的體積,使溶液中雙氫青蒿素衍生更加完全,以達(dá)到提高回收率和溶出度測(cè)定結(jié)果的目的。本研究改進(jìn)的方法已收載于2015年版《中國(guó)藥典》(二部)[9],現(xiàn)將有關(guān)情況報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

AT 7smart型溶出儀,包括CY7-50活塞泵及C613收集器(瑞士SOTAX公司);ZKT-18型真空脫氣機(jī)(天津天大天發(fā)科技有限公司);e2695型高效液相色譜(HPLC)儀,包括2489型紫外-可見(jiàn)吸收檢測(cè)器及Empower工作站(美國(guó)Waters公司);KQ5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司,功率:200W,頻率:40 kHz);BSA224S-CW型萬(wàn)分之一電子天平及ME215S型十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)Sartorius公司)。

1.2 藥品與試劑

雙氫青蒿素哌喹片(華立巖康制藥有限公司,批號(hào):010212、011110、010512,規(guī)格:每片含雙氫青蒿素40 mg、磷酸哌喹320mg);雙氫青蒿素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):100184-201202,純度:99.94%);乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純,水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:YMC-Pack ODS-A(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:0.02mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.4)-乙腈(65∶35,V/V);流速:1.0m L/min;檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取雙氫青蒿素對(duì)照品20mg,置于50m L量瓶中,加乙醇溶解并定容,搖勻,精密量取適量,置于10m L量瓶中,用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,于37℃保溫45 m in,放冷至室溫,即得質(zhì)量濃度為390.1μg/m L的對(duì)照品貯備液。取上述對(duì)照品貯備液5 m L,置于25m L量瓶中,用3.6%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,置于60℃水浴中反應(yīng)30m in,取出放冷至室溫,精密加入磷酸0.7m L,搖勻,經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品適量,采用2010年版《中國(guó)藥典》(二部)附錄ⅩC“溶出度測(cè)定”第二法(槳法),以0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì),溶出介質(zhì)體積為500 m L,轉(zhuǎn)速為75 r/min,依法操作,于45min時(shí)取溶出液適量,作為供試品貯備液。取上述供試品貯備液5m L,置于25m L量瓶中,用3.6%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,置于60℃水浴中反應(yīng)30min,取出放冷至室溫,精密加入磷酸0.7m L,搖勻,經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按樣品的處方稱取輔料(含磷酸哌喹)適量,再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜,詳見(jiàn)圖1。由圖1可知,在該色譜條件下,各成分均能達(dá)到基線分離,分離度>2.0;理論板數(shù)以雙氫青蒿素衍生物1峰計(jì)>3 000,保留時(shí)間為4.65m in。結(jié)果表明,其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 m L,各置于50 m L量瓶中,用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,于37℃保溫45m in,放冷至室溫,即得系列對(duì)照品溶液。精密量取上述系列對(duì)照品溶液各20μL,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。以雙氫青蒿素質(zhì)量濃度(x,μg/m L)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為y=0.000 03x-0.023 1(r=0.999 9)。結(jié)果表明,雙氫青蒿素檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為7.802~117.03μg/m L。

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量,倍比稀釋,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí),得定量限(LOQ);當(dāng)信噪比為3∶1時(shí),得檢測(cè)限(LOD)。結(jié)果,雙氫青蒿素的LOQ為2.0 ng,LOD為0.6 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,記錄峰面積。結(jié)果,雙氫青蒿素峰面積的RSD=0.20%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液(批號(hào):010212)適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果,雙氫青蒿素峰面積的RSD=0.46%(n=6),表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取低、中、高質(zhì)量的雙氫青蒿素對(duì)照品適量,共9份,再按樣品的處方比例加入空白輔料(含磷酸哌喹)適量,分別置于500m L量瓶中,加乙醇溶解并定容,搖勻,各取適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 溶出介質(zhì)的選擇

取樣品(批號(hào):010212)適量,分別以水、0.1mol/L鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì),溶出介質(zhì)體積為500m L,轉(zhuǎn)速為75 r/m in,于5、15、30、45、60m in時(shí)取樣(同時(shí)補(bǔ)充相應(yīng)的溶出介質(zhì)10m L),按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,考察樣品在4種溶出介質(zhì)中的平均累積溶出度,結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知,樣品在4種溶出介質(zhì)中的溶出行為均相似。但是在0.1mol/L鹽酸溶液中的各溶出時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度均較高,因此選擇0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab 1 Resultsof recovery tests(n=9)

圖2 樣品在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線Fig 2 Dissolution curvesof samples in 4 kindsof dissolutionmediums

2.10 轉(zhuǎn)速的確定

取樣品(批號(hào):010212)適量,以0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì),溶出介質(zhì)體積為500m L,轉(zhuǎn)速分別為50、75 r/min,于5、15、30、45、60min時(shí)取樣(同時(shí)補(bǔ)充相應(yīng)的溶出介質(zhì)10m L),并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,考察樣品在不同轉(zhuǎn)速、不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度,結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知,75 r/min轉(zhuǎn)速的平均累積溶出度較好,因此選擇75 r/min為本試驗(yàn)的轉(zhuǎn)速。

表2 樣品在不同轉(zhuǎn)速及不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度(n=6,%)Tab 2 Average accumulative dissolution of samplesat different rotation speeds and different time points(n=6,%)

2.11 取樣時(shí)間的確定

取樣品(批號(hào):010212)適量,共6份,以0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì),溶出介質(zhì)體積為500m L,轉(zhuǎn)速為75 r/m in,于5、15、30、45、60m in時(shí)取樣(同時(shí)補(bǔ)充相應(yīng)的溶出介質(zhì)10m L),按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,考察樣品在不同時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度,結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可知,樣品在45 min時(shí)溶出曲線達(dá)到平臺(tái)期。

圖3 樣品在不同時(shí)間點(diǎn)的溶出曲線(n=6)Fig 3 Dissolution curves of samples at different time points(n=6)

2.12 濾膜吸附試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下濾過(guò)前和濾過(guò)后的對(duì)照品溶液各適量,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算吸附量。結(jié)果,0.45μm微孔濾膜對(duì)雙氫青蒿素的吸附量<2.0%(n=6),符合規(guī)定[10]。

2.13 樣品溶出度測(cè)定

取3批樣品各適量,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算溶出度(要求≥標(biāo)示量的70%);同時(shí),以2010年版《中國(guó)藥典》(第一增補(bǔ)本)的方法測(cè)定溶出度,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品溶出度測(cè)定結(jié)果(n=6,%)Tab 3 Results of dissolution determ ination of samples(n=6,%)

3 討論

本課題組曾取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液(批號(hào):010212)適量,分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果顯示,供試品溶液在室溫下放置2 h后,其中的雙氫青蒿素峰面積呈顯著遞減趨勢(shì),因此本試驗(yàn)制備的供試品溶液應(yīng)在2 h內(nèi)完成測(cè)定。

因?yàn)殡p氫青蒿素存在α和β兩種差向異構(gòu)體,在不同溶劑中溶解兩種異構(gòu)體可能會(huì)相互轉(zhuǎn)換且雙氫青蒿素中無(wú)共軛結(jié)構(gòu)和發(fā)色基團(tuán),不宜用分光光度法和HPLC法直接測(cè)定??紤]到雙氫青蒿素含內(nèi)酯結(jié)構(gòu),在堿性條件下易水解,能得到更加穩(wěn)定和紫外吸收更強(qiáng)的衍生物(雙氫青蒿素衍生物1和2)。故本試驗(yàn)將樣品前處理中加入3.6%氫氧化鈉溶液體積由5 m L改為20 m L,加入磷酸的體積由0.2m L改為0.7m L,使其衍生更加完全,使其定量更準(zhǔn)確;且所有方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)均按外標(biāo)法以雙氫青蒿素衍生物1和2的峰面積之和計(jì)算結(jié)果。

按2010年版《中國(guó)藥典》(第一增補(bǔ)本)[8]方法測(cè)定,3批樣品的平均溶出度分別為83.1%、71.0%、86.8%;而按本試驗(yàn)方法測(cè)定,3批樣品的平均溶出度分別為94.9%、77.9%、89.6%,溶出度測(cè)定結(jié)果顯示靈敏度明顯提高。

綜上所述,改進(jìn)后的方法提高了其靈敏度、溶出度以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1] 韋國(guó)峰,何有成,黃祖良.雙氫青蒿素的制備及其含量測(cè)定[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,23(5):691-692.

[2] 王滿元.青蒿素類藥物的發(fā)展歷史[J].自然雜志,2012,34(1):44-47.

[3] 常明,張相林,劉曉,等.雙氫青蒿素人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究[J].中國(guó)藥房,2006,17(14):1086-1088.

[4] 劉昌輝,黃天來(lái),洪馨,等.高效液相色譜法測(cè)定人血漿中磷酸哌喹[J].藥物分析雜志,2007,27(1):63-65.

[5] 周琳.HPLC測(cè)定雙氫青蒿素哌喹片中的磷酸哌喹及有關(guān)物質(zhì)[J].華西藥學(xué)雜志,2015,30(5):610-612.

[6] 朱凱,范琦,張小松,等.HPLC測(cè)定雙氫青蒿素哌喹片中磷酸哌喹的含量[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2008,43(9):713-714.

[7] 韓韜,代勇.簡(jiǎn)述使用青蒿素聯(lián)合西藥治療瘧疾的研究進(jìn)展[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2015,13(6):10-11.

[8] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:第一增補(bǔ)本[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2012:271.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[S].2015年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:95.

[10] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2009.

Improvement of Determ ination Method for the Dissolution of Dihydroartem isinin in Dihydroartem isinin and Piperaquine Phosphate Tablets

ZHANG M ian,LIChao(Chongqing Institute for Drug and Food Control,Chongqing 401121,China)

OBJECTIVE:To improve the detection method for the dissolution of dihydroartem isinin in Dihydroartem isinin and piperaquine phosphate tablets.METHODS:The dissolution experiment adopted paddlemethod using 0.1mol/L hydrochloric acid solution 500m L as solventw ith rotating speed of 75 r/m in and sampling time of 45m in.In sample pre-treatment,the volume of 3.6% sodium hydroxide solution was increased from 5 m L to 20 m L,and that of phosphoric acid was increased from 0.2 m L to 0.7 m L. HPLC was adopted to determ ine the dissolution of dihydroartem isinin.The determ ination was performed on YMC-Pack ODS-A column w ith mobile phase consisted of 0.02 mol/L disodium hydrogen phosphate solution(pH adjusted to 2.4 using phosphoric acid)-acetonitrile(65∶35,V/V)at the flow rate of 1.0m L/min.The detection wavelength was set at 237 nm,and column temperature was 30℃.The sample size was 20μL.RESULTS:The linear range of dihydroartem isinin were 7.802-117.03μg/m L(r=0.999 9).The limit of quantitation was2.0 ng,and the limit of detection was 0.6 ng.RSDsof precision and reproducibility testswere all lower than 1.0%.The recoverieswere 99.18%-100.46%(RSD=0.45%,n=9).Average dissolutionsof dihydroartem isinin in 3 batchesof sampleswere 94.9%,77.9%,89.6%,respectively.CONCLUSIONS:Improved method enhance the accuracy for the lim it of sensitivity,dissolution and detection results.

Dihydroartem isinin and piperaquine phosphate tablets;Dihydroartem isinin;Dissolution determ ination;Method improvement

R 927.2

A

1001-0408(2017)15-2086-04

2016-05-31

2016-11-30)

(編輯:劉 柳)

全球基金項(xiàng)目國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高課題(No. GF2012.39)

*主管藥師。研究方向:藥物分析。電話:023-86072743。E-mail:7183503@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.20

猜你喜歡
溶出度青蒿素磷酸
磷酸MER值對(duì)磷酸二銨產(chǎn)品質(zhì)量影響研究
《青蒿素:人類征服疾病的一小步》任務(wù)學(xué)習(xí)
不同纖維對(duì)磷酸鎂水泥砂漿早期性能的影響研究
濕法磷酸制備磷酸脲的研究進(jìn)展
國(guó)際磷酸—銨市場(chǎng)再次走跌
青蒿素及其類似物抗瘧構(gòu)效關(guān)系的DFT研究
凝膠法二氧化硅用于提高難溶性藥物溶出度的研究
凝膠法二氧化硅用于提高難溶性藥物溶出度的研究
固體藥物制劑的體外溶出度的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)分析
切莫盲信所謂的“青蒿素食品”