林永勝，張玉燦，張武君，周先治，陳 陽，黃曉蕓

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所，福建 福州 350003）

苦瓜（Momordica Charantia L. ）在我國南方地區(qū)栽培歷史悠久，在全國各地均有種植，是我國夏秋季的主要蔬菜種類之一。由于大面積連年種植，種植品種較為單一，導(dǎo)致苦瓜枯萎病大面積發(fā)生?？喙峡菸∈怯杉怄哏牭毒‵usarium oxysporum f. sp. Momodicae）引起的一種土傳病害，該病原菌除苦瓜外不侵染其他作物[1-3]。田間苦瓜發(fā)病率一般為10%～25%，嚴重的田塊達到60%以上，嚴重影響苦瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)[3-4]。生產(chǎn)實踐證明，選育和種植抗病品種是控制苦瓜枯萎病的有效措施之一?？喙腺Y源材料作為育種的基礎(chǔ)，其抗病性在很大程度上影響育成品種的抗病水平。所以開展苦瓜資源材料的抗枯萎病的評價，篩選抗枯萎病資源，并進行有針對性的抗病育種，可以縮短抗病育種歷程。因此，項目課題組開展了對61個苦瓜資源材料的抗枯萎病評價，有望為苦瓜抗病育種提供抗病親本。

1 材料和方法

1.1 苦瓜品種資源的收集

課題組自1994年起，從日本、泰國、馬來西亞及國內(nèi)福建、臺灣、湖南、四川，海南、廣西等地收集引進苦瓜品種資源，多數(shù)為雜交1代種子，經(jīng)過20年的試種、觀察、自交、純化和定向選擇，篩選出61個各具特色的穩(wěn)定自交系（表1）。

1.2 苦瓜接菌試驗使用的苦瓜?；怄哏牭毒膩碓?/h3>

病原菌由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所微生物中心提供，菌種名稱為FJAT-3015，具有強致病性，是從福建省福州市閩侯縣鴻尾鄉(xiāng)的苦瓜枯萎病發(fā)病植株上分離出來的。

表1 61份苦瓜自交系材料

1.3 苦瓜枯萎病鑒定用菌液的制備

先將枯萎病病菌接種于PDA培養(yǎng)基上，在25～28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，再將活化后的枯萎病菌接菌到PDA液體培養(yǎng)基中，在25～28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，之后培養(yǎng)液用雙層紗布過濾去菌絲，用無菌水洗出沉淀的孢子，制成母液，經(jīng)血球計數(shù)器將母液用無菌水調(diào)至1×106個/mL的孢子濃度，供接種試驗時用。

1.4 鑒定方法

采用苗期傷根與灌根相結(jié)合的接菌法。鑒定是在人工氣候室中進行，待瓜苗長到3～4片真葉時，挑選苗齡一致的瓜苗用剪刀剪掉部分須根后定植于塑料花盆里，之后每個花盆澆灌先前稀釋好的菌液300 mL，之后將花盆放置在人工氣候室的鐵架上，溫度設(shè)置為28～32 ℃，光照時間為7：00—19：00。

1.5 栽培方式

苦瓜于2月底3月初播種，采用50（5×10）穴育苗盤育苗，每個品種育苗50株；定植時，各個品種隨機排列，每個重復(fù)每個品種10株，定植30株，設(shè)3次重復(fù)。

1.6 調(diào)查方法

于接種28 d按照表2標準調(diào)查61個苦瓜品種資源的發(fā)病情況，并按照公式計算病情指數(shù)。

式中DI：病情指數(shù)；Si：發(fā)病級別；ni：相對病級級別的株數(shù)；i：病情分級各個級；N：調(diào)查總株數(shù)。

根據(jù)計算結(jié)果，按照表3分級標準確定抗性等級[5]。種質(zhì)群體對枯萎病的抗性依苗期病情指數(shù)分6 級（表2）。

表2 苦瓜枯萎病病情分級標準

2 結(jié)果與分析

接菌28 d后對61個苦瓜自交穩(wěn)定系進行病情指數(shù)調(diào)查（表4），結(jié)果表明61個材料中有高抗2個：0818-F5-⊕12♂和2012-5♂- op5-⊕15-14秋-⊕15，占3.3%；抗級2個：10A-1.2、213-4，占3.3%；中抗11個，占18.0%；感病11個，占18.0%；高感35個，占57.4%。其中，中抗水平以上15個，占總數(shù)的24.6%，感病和高感共46個，占總數(shù)的75.4%?？梢?，苦瓜品種資源中感病和高感占絕大多數(shù)，中抗以上占的比例較小，每個抗級具體所占百分比見圖1。

3 結(jié)論與討論

利用傷根與灌根相結(jié)合的接菌法來鑒定評價苦瓜種質(zhì)資源的抗病性，明確了部分國內(nèi)外苦瓜資源對枯萎病具有較高的抗性水平，中抗水平以上占總數(shù)的24.6%，而高抗僅占總數(shù)的3.3%，所以抗病材料的收集和抗性鑒定工作還要繼續(xù)進行。

苦瓜枯萎病病原菌能以孢子形式在土壤和病株殘體上長時間存活，化學(xué)防治效果普遍不佳，化學(xué)殺菌劑的大量使用易導(dǎo)致環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留等一系列問題；輪作可減輕枯萎病危害，特別是與禾本科和豆科類作物輪作效果更好[6]。但福建省耕地面積有限，且禾本科和豆科非福建省主栽作物品種，田間實施可操作性不大；土壤改良、高溫消毒和無土栽培等措施可有效減輕苦瓜枯萎病危害[7-9]，但這些防治措施成本較高，其田間實際應(yīng)用情況較少；砧木嫁接是生產(chǎn)中常用的防治苦瓜枯萎病危害的一項措施[10-11]，目前為止，嫁接砧木主要是同科的絲瓜砧木，連續(xù)使用后，砧木本身也會受到枯萎病危害；生物防治是一種環(huán)境友好型的苦瓜枯萎病防治措施[6,12-13]，生物防治室內(nèi)防效尚可，但大田應(yīng)用效果普遍不佳。

表3 枯萎病抗性的分級

表4 61份苦瓜自交系材料的果實性狀和抗病性表現(xiàn)

續(xù)表4

許多研究表明選育和種植抗病品種是最經(jīng)濟有效的防治苦瓜枯萎病的措施之一，目前各地篩選的苦瓜抗病品種中達到中抗水平居多，尚無達到高抗水平的材料[4,14-15]，這與本研究結(jié)論不符，估計與接菌試驗中使用的菌株致病力、接菌量和接菌后發(fā)病時間有關(guān)，有待進一步研究論證。由于苦瓜尖孢鐮刀菌?；筒煌谖鞴虾吞鸸蠈；停洳淮嬖诙鄠€生理小種，且苦瓜枯萎病抗性受單一顯性基因控制[16]，這為苦瓜枯萎病抗病育種奠定了良好基礎(chǔ)。

圖1 61個苦瓜品種資源對枯萎病抗性等級占百分比

苦瓜具有悠久的種植栽培歷史，品種資源材料比較豐富，因此，廣泛收集種質(zhì)資源，加強地方種質(zhì)資源材料的抗枯萎病鑒定及抗病材料的篩選，可以為苦瓜抗病育種提供優(yōu)良親本材料。

[1] SUN SK, HUANG JW. A new Fusarium bitter gourd in Taiwan[J]. Plant disease, 1983,67 (2): 226-227.

[2] 楊葉,周琴,嵇豪,等.苦瓜枯萎病病菌的分離與鑒定[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2010,22(3):354-357.

[3] 朱天圣,戚佩坤.苦瓜枯萎病病原菌研究[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1998,19(4):14-18.

[4] 羅方芳,何自福,佘小漫,等.廣東苦瓜主要品種對枯萎病的抗性評價[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,37(9):72-73.

[5] 張偉光,張玉燦,張少平.苦瓜栽培育種與貯藏加工[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2014.

[6] 劉陽華,肖昌華,劉志華.苦瓜枯萎病病殘體上病菌的存活力及其傳病作用[J].植物保護,2009,35(3):133-136.

[7] 高軍,高增貴,趙世波,等.瓜類枯萎病及其防治研究進展[J].長江蔬菜,2006(1):35-38.

[8] 郭曉冬.設(shè)施栽培條件下土壤的連作障礙及防治措施[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技,2003(7):38-40.

[9] 喻景權(quán),杜堯舜.蔬菜設(shè)施栽培可持續(xù)發(fā)展中的連作障礙[J].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,31(1):124-126.

[10] 張玉燦,賴正鋒,張少平,等.絲瓜砧木對夏秋連作苦瓜產(chǎn)量及品質(zhì)影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2013,29(4):189-194.

[11] 張玉燦,張武君,陳陽,等.絲瓜砧木對苦瓜產(chǎn)量及品質(zhì)的影響[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報,2012,27(4):337-342.

[12] 胡繁榮,羅軍,劉健,等.殼聚糖抑制苦瓜枯萎病菌活性初探[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,51(11):2233-2235.

[13] 解開治,徐培智,張仁陟.養(yǎng)蛆產(chǎn)物對苦瓜枯萎病抑菌抗病的效果初探[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2007,26(增刊1):232-235.

[14] 郭堂勛,莫賤友.幾個苦瓜品種對枯萎病的抗性測定[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,38(4):408-410.

[15] 曾華蘭,何煉,劉朝輝,等.苦瓜品種資源抗枯萎病性評價[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2011,24(1):137-139.

[16] 趙秀娟,唐鑫,胡開林.苦瓜枯萎病抗性鑒定與抗性遺傳規(guī)律研究[J].園藝學(xué)報,2013,40(4):685-692.