劉曉麗，梁羽茜，王如峰，胡秀華

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

金蓮花提取物保護(hù)H1N1病毒感染模型小鼠肺臟的實(shí)驗(yàn)研究

劉曉麗，梁羽茜，王如峰，胡秀華

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)流感病毒A/FM/1/47 (H1N1)引起小鼠死亡或體重百分?jǐn)?shù)降低，此次實(shí)驗(yàn)采用金蓮花粗提物灌胃的方法，確定金蓮花粗提物的抗病毒作用對(duì)小鼠的肺臟的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 病毒株 亞洲甲型鼠肺適應(yīng)株A/FM/1/47 (H1N1)，中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。血凝滴度1 ∶512，Reed Muench法測(cè)定對(duì)小鼠的半數(shù)致死量(LD50)10-3.68。

1.2 主要試劑及儀器 金蓮花粗提物(由本課題組其他成員提取獲得)，JJ200型電子天平，常熟雙杰測(cè)試儀器廠。

1.3 動(dòng)物分組及給藥 ICR小鼠80只，♀♂各半，體質(zhì)量14 g～16 g，購(gòu)自斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2011-0004,隨機(jī)分為對(duì)照組(Control組)、金蓮花粗提物灌胃組(TGC組)、病毒感染模型1～3組(Ⅵ 1～3組)、治療1～3組(Ⅵ+TGC 1～3組)，每組10只。Control組和TGC組用50 μL生理鹽水滴鼻，其他小鼠分別取50 ul病毒滴鼻感染，1～3組感染病毒的滴度分別為101LD50，100LD50，10-1LD50。各組小鼠于病毒感染1 h后進(jìn)行給藥：TGC組和Ⅵ+TGC 1～3組灌胃金蓮花提取物，其它以生理鹽水灌胃，劑量均為0.2 mg每g體重每日，連續(xù)給藥7 d?！狻岱只\正常飼養(yǎng)。

1.4 藥物抗病毒作用研究 計(jì)算病毒感染Ⅵ 1～3組小鼠的平均體重變化百分比±標(biāo)準(zhǔn)差(SEs)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、肺組織變化、計(jì)算臟器指數(shù)。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

接種病毒后，與Control組和TGC組相比，Ⅵ 1～3組和Ⅵ+TGC 1～3組小鼠精神狀態(tài)明顯變差，蜷縮、豎毛、飲食量減少，取材時(shí)Ⅵ 1～3組和Ⅵ+TGC 1～3組小鼠肺組織有明顯充血，表明病毒感染小鼠模型造模成功。藥物治療明顯提高感染病毒小鼠體重百分?jǐn)?shù)、降低白細(xì)胞數(shù)量、降低小鼠肺指數(shù)，結(jié)果如Tab 1～3所示。

Tab 1 Change of body weight percentage on day 5,8 after virus vaccination(±s,n=6)

*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsⅥ+TGC

Tab 2 Venous WBC result of mice(±s，n=4，×109·L-1)

*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsⅥ+TGC

4 討論

甲型流感病毒是最致命的流感病毒亞型[1-2]，不僅導(dǎo)致腸道損傷，影響患者食欲[3]，還能引起小鼠糖基化突變并導(dǎo)致肺實(shí)質(zhì)和肺充血[4]，并引發(fā)白細(xì)胞發(fā)揮對(duì)流感病毒感染和細(xì)菌繼發(fā)感染的易感性的直接作用而發(fā)生數(shù)目的先升高后降低[5]。金蓮花抗炎、抗病毒等作用能夠抑制炎癥早期毛細(xì)血管通透性的亢進(jìn)、滲出和水腫癥狀，并能抑制炎癥中期白細(xì)胞游走，增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示金蓮花粗提物灌胃能明顯改善小鼠食欲，提高抗病毒能力，并明顯改善病毒引起的肺充血等肺部疾病，但金蓮花對(duì)小鼠肺臟抗炎作用的具體機(jī)制將于下一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。

Tab 3 Organ index of mice in Ⅵ+TGC group and Ⅵ

*P<0.05 Control;#P<0.05 Ⅵ+TGC

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物教研室完成，在此表示感謝！)

[1] Mi L,Xiang Z,Sha H,et al. Antigenic patterns and evolution of the human influenza A(H1N1) Virus[J].SciRep,2015,5:14171.

[2] 趙鐵華,鄧淑華,楊鶴松,等. 半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒感染的藥效學(xué)研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2014,30(1):147-8.

[2] Zhao T H, Deng S H, Yang H S,et al. Effect of total flavonoids of Scutellariabarbata against influenza A virus H1N1 infection of[J].ChinPharmacolBull, 2014,30(1):147-8.

[3] Ding Y O,Aeron C H.A Review of the antiviral susceptibility of human and avian influenza viruses over the last decade[J].Scientifica(Cairo),2014,2014:430629.

[4] Nedzad M, Adrian J R, Aleksandr S L,et al. Influenza vaccination accelerates recovery of ferrets from lymphopenia[J].PLoSOne,2014,9(6):e100926.

[5] A. Sally D,Jeffery K T,Mike B. The use of nonhuman primates in research on seasonal, pandemic and avian influenza, 1893～2014[J].AntiviralRes,2015,117:75-98.

[6] 楊靜偉, 張貴君, 吳明俠. 中藥金蓮花藥效組分抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 中國(guó)藥物評(píng)價(jià), 2013, 30(4): 210-3.

[6] Yang J W, Zhang G J, Wu M X. The Chinese globe flower active components to study the anti-inflammatory and analgesic effects of[J].ChinaDrugEvaluat, 2013, 30(4):210-3.

Experimental study on Trollius chinensis extract protecting lung of the H1N1 virus infection model mice

LIU Xiao-li,LIANG Yu-xi,WANG Ru-feng,HU Xiu-hua1

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029)

流感；中藥；金蓮花；甲型H1N1流感病毒；小鼠模型; 保護(hù)

flu; traditional Chinese medicine(TCM);TrolliusChinensis; influenza a (H1N1) virus; mouse model； protect

2017-04-14,

2017-05-15

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81274044)

劉曉麗(1990-)，女，碩士生，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，E-mail：651260405@qq.com； 梁羽茜(1990-)，女，碩士生，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，E-mail：945016034@qq.com； 胡秀華(1975-)，女，副教授，博士(后)，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，通訊作者，E-mail：xiuhuahu@126.com； 王如峰(1970-)，男，教授，博士(后)，通訊作者，E-mail：wangrufeng@tsinghua.org

時(shí)間：2017-6-7 19:04 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170607.1904.058.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.07.029

A

1001-1978(2017)07-1035-02

R-332；R284.1 R363-332；R373.13