朱殿龍，梁 云，孫 楠，胡景蓮

(大連市藥品檢驗(yàn)所中藥室，遼寧 大連 116021)

氣相色譜法測(cè)定田七痛經(jīng)膠囊中冰片的含量

朱殿龍*，梁 云，孫 楠，胡景蓮

(大連市藥品檢驗(yàn)所中藥室，遼寧 大連 116021)

目的：建立田七痛經(jīng)膠囊中冰片的含量測(cè)定方法。方法：經(jīng)乙酸乙酯提取后，采用氣相色譜法測(cè)定田七痛經(jīng)膠囊中冰片的含量。結(jié)果：冰片在0.049 86～0.747 90 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101%，RSD為1.9%(n=9)。結(jié)論：本方法重復(fù)性良好，可用于田七痛經(jīng)膠囊中冰片的含量測(cè)定，但還需進(jìn)一步制定合理的含量限度以進(jìn)行質(zhì)量控制。

田七痛經(jīng)膠囊； 冰片； 質(zhì)量評(píng)價(jià)； 氣相色譜法

田七痛經(jīng)膠囊由三七、五靈脂、蒲黃、延胡索、川芎、木香、小茴香、冰片組成，具有通調(diào)氣血、止痛調(diào)經(jīng)之功效，常用于經(jīng)期腹痛及因寒所致的月經(jīng)失調(diào)，但方中冰片的作用機(jī)制尚不完全清楚[1-3]。冰片是中藥組方中常用的配伍成分，常作為“佐使藥”或“引經(jīng)藥”，效用獨(dú)特[4-5]。目前，其商品種類(lèi)較多[6-8]，且會(huì)在制劑及體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)化[9-10]，故應(yīng)控制其質(zhì)量。田七痛經(jīng)膠囊被收載于衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)[11]和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局單頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)中，但冰片的含量測(cè)定項(xiàng)目未被收載，故無(wú)法準(zhǔn)確控制冰片的質(zhì)量。氣相色譜法測(cè)定冰片含量分為內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法[12-13]。本研究結(jié)合冰片原料市場(chǎng)情況，采用外標(biāo)法建立了田七痛經(jīng)膠囊中冰片(合成龍腦)的含量測(cè)定方法，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫公司)；LabSolutions工作站(日本島津公司)。

1.2 藥品與試劑

冰片對(duì)照品(批號(hào)：110743—200905，含量為98.0%)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院。其余試劑均來(lái)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，且均為分析純；水為超純水。田七痛經(jīng)膠囊的來(lái)源及編號(hào)見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為以聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.53 mm，固定液膜厚1 μm)；檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器；程序初始溫度145 ℃，保持2 min，以2 ℃/min的速度升溫至155 ℃，不保持，以10 ℃/min的速度升溫至180 ℃，保持1.5 min；進(jìn)樣口溫度220 ℃；檢測(cè)器溫度250 ℃；載氣為氮?dú)猓w積流量為3.0 ml/min；進(jìn)樣量為1 μl；分流比為10∶1；定量方法為外標(biāo)法。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取冰片對(duì)照品50 mg，置于50 ml容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成1 mg/ml的對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置于10 ml容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液：取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混勻，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，精密加入乙酸乙酯10 ml，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理10 min，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液：取不含冰片的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，即得。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各1 μl，注入氣相色譜，按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，相鄰色譜峰分離度良好，陰性樣品無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

表1 田七痛經(jīng)膠囊的來(lái)源及編號(hào)

A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性樣品溶液；1.冰片A.reference solution; B.test solution; C.negative sample solution； 1. Borneol圖1 氣相色譜圖Fig 1 Gas chromatography

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液各0.5、1、2、3、5、7.5 ml，分別置于10 ml容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得一系列對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液1 μl，注入氣相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，線性回歸方程為Y=10 481 291.32X-20 557.51(r=0.999 9)。結(jié)果表明，冰片質(zhì)量濃度在0.049 86～0.747 90 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果冰片峰面積的RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(樣品編號(hào)：6-7)6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。冰片含量的RSD為1.6%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(樣品編號(hào)：6-7)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，于室溫下(25 ℃)放置0、2、4、12、24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。冰片峰面積的RSD為0.6%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(樣品編號(hào)：6-7，冰片含量8.4 mg/g)內(nèi)容物約0.25 g，精密稱(chēng)定，共9份，分別加入對(duì)照品溶液(0.992 9 mg/ml)1.2、2.5、3.8 ml，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，得低、中、高加樣供試品溶液各3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab 2 Recovery test results(n=9)

2.9 檢出限

精密量取對(duì)照品溶液(0.992 9 mg/ml)1 ml，置于200 ml容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置于10 ml容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為檢出限測(cè)定溶液。結(jié)果表明，檢出限為2.482 μg，見(jiàn)圖2。

圖2 檢出限測(cè)定色譜圖Fig 2 Limit determination chromatogram

2.10 不同廠家田七痛經(jīng)膠囊中冰片含量

取20個(gè)廠家103批樣品，分別按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算含量。結(jié)果表明，樣品中冰片含量為1.2～7.9 mg/粒，服從正態(tài)分布，最大值與最小值差額達(dá)到6.7 mg/粒，均值為3.8 mg/粒，其中3.2～4.5 mg/粒者有70批，占68%，若限度為不低于3.0 mg/粒，合格率約為70%，見(jiàn)圖3。處方中冰片投藥量較少且易揮發(fā)，在與大量中藥粉末充分混合均勻過(guò)程中，勢(shì)必會(huì)造成損失，加上裝量差異，按照理論值80%(4.0 mg/粒)為限度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，冰片含量<4.0 mg/粒者56批，占54%，含量為4.0～5.0 mg/粒者36批，占35%，含量>5.0 mg/粒者11批，占11%，見(jiàn)圖4。則限度為≥4.0 mg/粒時(shí)，合格率僅為54%，形勢(shì)不容樂(lè)觀。對(duì)于批次較多的9個(gè)廠家樣品含量結(jié)果進(jìn)行離散分析，見(jiàn)圖5。多數(shù)廠家樣品含量結(jié)果比較集中，質(zhì)量比較穩(wěn)定，但是大部分樣品冰片損失較多；個(gè)別廠家大于處方量投料，樣品結(jié)果比較分散，質(zhì)量控制有待完善。

圖3 103批田七痛經(jīng)膠囊中冰片含量的正態(tài)分布圖Fig 3 Normal quantie plot of borneol in 103 batches of Tianqitongjing capsules

圖4 103批田七痛經(jīng)膠囊中冰片含量的結(jié)果分布Fig 4 Content distribution of borneol in 103 batches of Tianqitongjing capsules

圖5 不同廠家田七痛經(jīng)膠囊中冰片含量的結(jié)果分布Fig 5 Content distribution of borneol from different manufacturers

3 討論

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典：一部》(2015年版)[14]中“冰片”項(xiàng)下規(guī)定，成人日用量為0.15～0.30 g，入丸散用，含龍腦(C10H18O)不得低于55.0%。田七痛經(jīng)膠囊的最大日用量為15粒，按處方量計(jì)算冰片的含量理論值為5.0 mg/粒[11]，冰片最大日用量為0.075 g，按處方投料無(wú)損失情況下達(dá)不到規(guī)定的用法與用量。但冰片作為具有獨(dú)特作用的配伍藥，不能簡(jiǎn)單以其單味用量衡量制劑用量。冰片易揮發(fā)，投藥量少，產(chǎn)品含量普遍低，含量均勻程度可能也會(huì)受到影響。田七痛經(jīng)膠囊中冰片能否有效發(fā)揮作用，從樣品測(cè)定結(jié)果和用法與用量的規(guī)定來(lái)看，有必要進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究，探索冰片的作用機(jī)制，完善制劑工藝，確定合理的含量限度，制定有效地質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

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Content of Borneol in Tianqitongjing Capsules by Gas Chromatography

ZHU Dianlong, LIANG Yun, SUN Nan, HU Jinglian

(Dept.of Traditional Chinese Medicine, Dalian Institute for Drug Control, Liaoning Dalian 116021, China)

OBJECTIVE：To establish a method for content determination of borneol in Tianqitongjing capsules. METHODS: The samples were extracted with ethyl acetate and the content of borneol in samples was determined by gas chromatography. RESULTS: The linearity of borneol in the range of 0.049 86 mg/ml-0.747 90 mg/ml was satisfactory. The average recovery of borneol was 101% andRSDwas 1.9% (n=9). CONCLUSIONS: This method has good repeatability, which can be used for content determination of Tianqitongjing capsules, yet further rational content limit are supposed to be formulated for quality control.

Tianqitongjing capsules; Borneol; Quality control; Gas chromatography

R927.2

A

1672-2124(2017)05-0664-04

2017-01-10)

*主管中藥師。研究方向：中藥鑒定。E-mail：zhudianlong@126.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.05.033