劉淑清 王茜 李艷榮 陶曉燕 于鵬程 盧學(xué)新 吳未辰 閆江弘 朱武洋

102206 北京，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)病毒和病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

·論著·

肥皂水對(duì)狂犬病病毒滅活作用的研究

劉淑清 王茜 李艷榮 陶曉燕 于鵬程 盧學(xué)新 吳未辰 閆江弘 朱武洋

102206 北京，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)病毒和病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

目的 為考察肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活作用，探討狂犬病暴露后處置中沖洗傷口推薦使用肥皂水的濃度。方法 用不同濃度肥皂水與狂犬病病毒CVS-11混合作用后，分別感染BSR和N2a細(xì)胞，通過(guò)直接免疫熒光(DFA)和逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)的方法檢測(cè)不同濃度肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活效力。結(jié)果 在24孔板培養(yǎng)細(xì)胞為基礎(chǔ)的模型中，確定了BSR和N2a細(xì)胞所能承受的肥皂水濃度上限為1.0%；不同濃度肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活試驗(yàn)結(jié)果顯示，終濃度為0.5%的肥皂水作用BSR或N2a細(xì)胞3 min后可完全滅活狂犬病病毒，使其喪失感染細(xì)胞的能力，而濃度為0.1%的肥皂水不能完全抑制狂犬病病毒的存活。結(jié)論 使用濃度為0.5%～ 1.0%的肥皂水與狂犬病病毒CVS-11混合作用3 min后能使其完全滅活。

Fund programs: National Key Technology Research and Development Project (2016YFC1200905); National Key Technology R&D Program (2014BAI13B04); National Natural Science Foundation of China (31500152); National Key Research Program (2016YFD0500400)

狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus)感染引起的一種動(dòng)物源性傳染病。狂犬病病毒主要通過(guò)破損的皮膚或粘膜侵入人體，臨床大多表現(xiàn)為特異性恐風(fēng)、恐水、咽肌痙攣、進(jìn)行性癱瘓等[1,2]。近年來(lái)，狂犬病報(bào)告死亡數(shù)一直位居我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静∏傲校o人民群眾生命健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅[3]。暴露后處置是暴露后預(yù)防狂犬病的唯一有效手段。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為，及時(shí)、科學(xué)和徹底的暴露后預(yù)防處置能夠避免狂犬病的發(fā)生?？袢☆A(yù)防控制工作，尤其是暴露后的預(yù)防處置，及時(shí)沖洗處理傷口，則能將入侵的病毒全部或大部分消除或殺滅在傷口周圍，阻止其擴(kuò)散，降低狂犬病所致死亡。Kaplan等[4]的研究指出，1%的肥皂水即可在1 min內(nèi)滅活病毒，但1%以下濃度的肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活效率尚不清楚。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)首次針對(duì)狂犬病暴露后處置中肥皂水濃度建立了N2a和BSR細(xì)胞感染模型，并對(duì)肥皂水抑制狂犬病病毒存活的效力進(jìn)行進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)觀察。

1 材料與方法

1.1 病毒及細(xì)胞 本室制備的狂犬病病毒CVS-11國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒株(1.7×107LD50/ml)；試驗(yàn)用細(xì)胞來(lái)源：BSR細(xì)胞，為倉(cāng)鼠腎細(xì)胞BHK-21的克??；Neuro-2a(N2a)細(xì)胞為小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞, 均為本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 主要試劑及儀器 選取市售的某三種不同品牌的肥皂待用。HyClone改良Eagle細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM)和5%胰酶均購(gòu)自杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；四季青胎牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司；狂犬病病毒核蛋白熒光抗體購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；Trizol購(gòu)自Invitrogen公司；氯仿、異丙醇、無(wú)水乙醇、DEPC處理水購(gòu)自北京卓誠(chéng)惠生生物技術(shù)有限公司，READY TO GO 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Amersham公司)隨機(jī)引物pd(N)60.2 μg/μl(TaKaRa公司)。倒置顯微鏡為日本奧林巴斯CXX41型；熒光顯微鏡為日本奧林巴斯Ⅸ51型。

1.3 BSR和N2a細(xì)胞對(duì)肥皂水的耐受實(shí)驗(yàn) 胰酶消化BSR和N2a為單層細(xì)胞，以含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液吹打細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，每瓶接種2 ×106個(gè)細(xì)胞，補(bǔ)加培養(yǎng)液，于37 ℃ 5%CO2孵箱孵育。將消化好的BSR和N2a細(xì)胞分別加入24孔板，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞密度達(dá)到80%左右待用。選取某三種不同品牌的肥皂分別配置不同濃度的肥皂水，在100 ml DMEM中分別添加0.05 g﹑0.1 g﹑0.5 g﹑1 g﹑2 g﹑5 g和10 g的肥皂配置成終濃度為0.05%、0.1%、0.5%、1%、 2%、5%和10%的肥皂水。用500 μl不同濃度的肥皂水作用細(xì)胞，觀察細(xì)胞對(duì)肥皂水的耐受力，以確定BSR和N2a細(xì)胞所能承受的肥皂水濃度的上限。

1.4 不同濃度肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活試驗(yàn) 將BSR和N2a細(xì)胞分別加入24孔板，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞密度達(dá)到80%左右待用。將CVS-11病毒液稀釋到1.7×105LD50/ml，取100 μl與400 μl不同濃度的肥皂水混合作用3 min[5]，分別接種BSR和N2a細(xì)胞。反復(fù)凍融三次收集懸液，離心取上清液100 μl與400 μl DMEM培養(yǎng)液混合作用3 min，分別接種BSR和N2a細(xì)胞，連續(xù)傳代3次，DFA測(cè)定狂犬病病毒的存活情況。病毒感染組將CVS-11病毒液稀釋到1.7×105LD50/ml，取100 μl病毒液與400 μl DMEM培養(yǎng)液混合作用3 min，分別接種BSR和N2a細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.5 直接免疫熒光法檢測(cè)狂犬病病毒 使用直接免疫熒光法(Direct immunofluorescence assay，DFA)在細(xì)胞模型中檢測(cè)病毒的活力，在細(xì)胞孔中加入冷丙酮(4 ℃)固定10 min；用PBS振洗2遍，蒸餾水振洗1遍，每次2 min。將稀釋好的狂犬熒光抗體(約100 μl左右)加入細(xì)胞孔中，裝進(jìn)濕盒，放入37 ℃孵箱中，30 min；用PBS振洗2遍，蒸餾水振洗1遍，每次2 min；熒光顯微鏡觀察。

1.6 RT-PCR法檢測(cè)狂犬病病毒N基因片段 以RNA提取試劑盒(美國(guó)Qiagen公司)提取陽(yáng)性標(biāo)本總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)管(Ready-To-Go You-Prime First-Strand Beads)(Amersham公司)試劑盒反轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫(kù),采用巢式PCR的方法以cDNA文庫(kù)為模板擴(kuò)增病毒標(biāo)本N基因片段。PCR引物序列根據(jù)狂犬病病毒N基因(GenBank 號(hào)：M13215)序列設(shè)計(jì)，上游引物為N127(+): 5′-ATGTAACACCTCTACAATGG-3′,下游引物為N8m(-):5′-CAGTCTCYTCNGCCATCT-3′, 進(jìn)行第一次PCR擴(kuò)增。預(yù)期擴(kuò)增片段大小為1 533 bp(位于基因全長(zhǎng)的第55～1 587位核苷酸)，擴(kuò)增條件為：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s, 56 ℃ 30 s, 72 ℃ 100 s，共35個(gè)循環(huán)，72 ℃ 10 min。

以第1次PCR反應(yīng)產(chǎn)物作為第2次PCR反應(yīng)的模板，第2次PCR反應(yīng)上游引物為N577(+):5′-AAGATGYGCYAAYTGGAG-3′,下游引物為N829(-)：5′-GCCCTGGTTCGAACATTAT-3′。預(yù)期擴(kuò)增片段大小約為250 bp(位于基因全長(zhǎng)的第644-899 位核苷酸)，擴(kuò)增條件為：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 40 s， 72 ℃ 40 s，共35個(gè)循環(huán)，72 ℃ 10 min。

將巢式二次PCR產(chǎn)物在凝膠成像儀中觀察結(jié)果。與Marker中250 bp條帶平行的位置能觀察到明亮的條帶，即為陽(yáng)性結(jié)果。PCR擴(kuò)增陽(yáng)性樣品送北京天一輝遠(yuǎn)科技有限公司純化、測(cè)序。采用NCBI網(wǎng)站的BLAST在線軟件比對(duì)所測(cè)病毒N基因序列。

2 結(jié)果

2.1 肥皂水作用BSR和N2a細(xì)胞濃度上限的確定 用500 μl不同濃度的肥皂水作用BSR和N2a細(xì)胞48 h，5% 濃度的肥皂水加入細(xì)胞后，細(xì)胞均完全崩解死亡(圖1A，圖2A)； 2% 濃度的肥皂水分別加入BSR和N2a細(xì)胞后，細(xì)胞均出現(xiàn)部分崩解變形(圖1B，圖2B)；1% 濃度的肥皂水分別作用BSR和N2a細(xì)胞后，細(xì)胞均形態(tài)完整，結(jié)構(gòu)清晰，生長(zhǎng)良好(圖1C，圖2C)，0.05%、0.1%和0.5%濃度的肥皂水分別作用BSR和N2a細(xì)胞均與1% 濃度的肥皂水作用效果一致(圖略)；并且不同品牌的肥皂分別配置的不同濃度肥皂水作用BSR和N2a兩種細(xì)胞的耐受實(shí)驗(yàn)均一致，說(shuō)明了肥皂水作用細(xì)胞耐受實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和有效性。因此，BSR細(xì)胞所能承受的肥皂水濃度上限為1%， 后續(xù)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)選取一種肥皂水配置0.05%～ 1.0% 濃度的肥皂水建立抑制狂犬病病毒CVS-11在BSR和N2a細(xì)胞上的感染模型。

注：A：5% 肥皂水對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)；B：2% 肥皂水對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)；C：1% 肥皂水對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)；D：空白BSR細(xì)胞對(duì)照(200×)圖1 不同濃度肥皂水對(duì)BSR細(xì)胞的影響Note: A: effect of 5% soap solution on BSR cells (200×); B: effect of 2% soap solution on BSR cells (200×); C: effect of 1% soap solution on BSR cells (200×); D: blank BSR cells (200×)Fig.1 Effect of different concentration of soap solution on BSR cells

注：A：5% 肥皂水對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)；B：2% 肥皂水對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)；C：1% 肥皂水對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)；D：空白N2a細(xì)胞對(duì)照(200×)圖2 不同濃度肥皂水對(duì)N2a細(xì)胞的影響Note: A: effect of 5% soap solution on N2a cells (200×); B: effect of 2% soap solution on N2a cells (200×); C: effect of 1% concentration soap solution on N2a cells (200×); D: blank N2a cells (200×)Fig.2 Effect of different concentrations of soap solutions on N2a cells

2.2 肥皂水對(duì)狂犬病病毒的滅活效果分析 分別使用終濃度為0.05%、0.1%、0.5%和1%的肥皂水與狂犬病病毒CVS-11混合作用3 min后，感染BSR和N2a細(xì)胞48 h后，反復(fù)凍融三次收集懸液，離心取上清液100 μl與400 μl DMEM培養(yǎng)液混合作用3 min，分別接種BSR和N2a細(xì)胞，連續(xù)傳代3次后DFA測(cè)定狂犬病病毒細(xì)胞的情況。結(jié)果表明：病毒感染組能引起明顯的細(xì)胞病變現(xiàn)象，約有90%(+++)的BSR細(xì)胞被狂犬病病毒感染而呈現(xiàn)特異的綠色熒光(圖3A)；約有65%(+++)的N2a細(xì)胞被感染呈特異的點(diǎn)狀綠色熒光(圖4A)；濃度為0.05%的肥皂水與CVS-11混合后分別作用細(xì)胞，約有35%(++)的BSR細(xì)胞(圖3B)及30%(++)的N2a細(xì)胞(圖4B)被狂犬病病毒感染；0.1% 濃度的肥皂水與CVS-11混合后分別作用BSR和N2a細(xì)胞，約有5%(+)的細(xì)胞被狂犬病病毒感染(圖3C，圖4C)。濃度為0.5%或1%的肥皂水與CVS-11混合液作用的BSR和N2a細(xì)胞均生長(zhǎng)狀況良好， 熒光顯微鏡下未觀察到特異的綠色熒光(圖3D，圖4D)，DFA檢測(cè)結(jié)果提示，CVS-11病毒已被完全滅活喪失感染力。因此，終濃度為0.5%的肥皂水作用BSR或N2a細(xì)胞3 min后可完全滅活狂犬病毒，使其喪失感染細(xì)胞的能力，而0.1% 濃度的肥皂水不能完全抑制狂犬病病毒的存活。

注：A：CVS-11病毒感染組(200×)；B：0.05% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)C: 0.1% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)；D：0.5% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)BSR細(xì)胞的影響(200×)圖3 0.05%～ 1% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)BSR細(xì)胞的影響Note: A: CVS-11 infection group(200×); B: the mixture of CVS-11 with 0.05% soap solution effect on BSR cells (200×); C: the mixture of CVS-11 with 0.1% soap solution effect on BSR cells (200×); D: the mixture of CVS-11 with 0.5% soap solution effect on BSR cells (200×)Fig.3 The effect of mixture of 0.05%-1% soap solutions and CVS-11 on BSR cells

注：A：CVS-11病毒感染組(200×)；B：0.05% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)C: 0.1% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)；D：0.5% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)N2a細(xì)胞的影響(200×)圖4 0.05%～ 1% 肥皂水與CVS-11混合作用對(duì)N2a細(xì)胞的影響Note: A: CVS-11 virus infection group (200×); B: the mixture of CVS-11 virus with 0.05% soap solution effect on N2a cells (200×); C: the mixture of CVS-11 virus with 0.1% soap solution effect on N2a cells (200×); D: the mixture of CVS-11 virus with 0.5% soap solution effect on N2a cells (200×)Fig.4 The effect of mixture of 0.05%～1% soap solutions and CVS-11 on N2a cells

2.3 RT-PCR法檢測(cè)狂犬病病毒N基因片段 將1%、 0.5%、0.1%和0.05% 濃度的肥皂水與病毒混合液分別感染BSR和N2a細(xì)胞，連續(xù)傳代3次后收獲懸液，離心取上清液進(jìn)行狂犬病病毒N基因檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如下 0.5% 和1% 濃度的肥皂水與病毒混合液感染BSR細(xì)胞和N2a細(xì)胞，連續(xù)3次傳代后收集的上清液樣品RT-PCR結(jié)果均為陰性； 0.05% 和0.1% 濃度的肥皂水與病毒混合液感染的BSR細(xì)胞和N2a細(xì)胞，連續(xù)3次傳代后收集的上清液樣品RT-PCR結(jié)果均為陽(yáng)性，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)特異性條帶約為250 bp(圖5)。PCR擴(kuò)增陽(yáng)性樣品經(jīng)測(cè)序及軟件比對(duì)發(fā)現(xiàn)，測(cè)序樣品為狂犬病病毒N基因片段。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果與DFA檢測(cè)的狂犬病病毒感染情況一致，進(jìn)一步證明0.5% 濃度的肥皂水與狂犬病病毒作用后可使其完全滅活。

注：M：2000 Marker；1-4：依次為1%、 0.5%、0.1% 和0.05% 濃度的肥皂水與CVS-11混合液感染BSR細(xì)胞，連續(xù)3次傳代后收集的上清液樣品；5-8：依次為1%、0.5%、0.1% 和0.05% 濃度的肥皂水與CVS-11混合液感染N2a細(xì)胞，連續(xù)3次傳代后收集的上清液樣品；9：陰性對(duì)照； 10：陽(yáng)性對(duì)照?qǐng)D5 RT-PCR檢測(cè)BSR和N2a細(xì)胞中的狂犬病病毒N基因片段Note: M: 2000 Marker; 1-4: the mixture of CVS-11 with 1%,0.5%,0.1% and 0.05% soap solution infect the BSR cells in order, the supernatant collected after three passages;5-8: the mixture of CVS-11 with 1%,0.5%,0.1% and 0.05% soap solution infect the N2a cells in order, the supernatant collected after three passages; 9: negative control; 10: positive control.Fig.5 The results of RT-PCR detection of N gene segment of CVS-11 in BSR and N2a cells

3 討論

狂犬病在全球廣泛分布，全球每年約有60000 人死于狂犬病，是致死人數(shù)最多的動(dòng)物源性傳染病[6], 亞洲的狂犬病病例數(shù)居全球首位[7]，中國(guó)人間狂犬病發(fā)病僅次于印度， 2004—2014 年，狂犬病死亡人數(shù)一直高居我國(guó)傳染病死亡數(shù)的前3 位[3]。2015年全國(guó)27個(gè)省份共報(bào)告病例801例，暴露后處置規(guī)范性有所提高，但仍未達(dá)到完全覆蓋[8]。大多數(shù)人間狂犬病病例是由于被患狂犬病的動(dòng)物咬傷所致，文獻(xiàn)報(bào)道，犬咬傷后感染的時(shí)間是15～54 h，平均為25 h，因此在狂犬病暴露后，早期、正確的傷口處理極為重要[9]?？袢〔《緦?duì)脂溶劑(肥皂水、氯仿、丙酮等)、乙醇、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、碘制劑以及季銨類化合物(如苯扎溴銨)等敏感，及早用脂溶劑或弱洗滌劑(肥皂水或新潔爾滅溶液)反復(fù)沖洗傷口，即可起到?jīng)_洗作用也可分解狂犬病病毒的糖蛋白和脂蛋白，使病毒失去感染力并易被洗脫[4]。相對(duì)傷口未處理者，消毒或肥皂水沖洗加消毒的處理方法可以降低狂犬病發(fā)病的危險(xiǎn)性[10]。

在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，配置的肥皂水時(shí)，多憑經(jīng)驗(yàn)和感官來(lái)簡(jiǎn)單的判定肥皂水的濃度，隨意性強(qiáng)，肥皂水的濃度究竟多少為宜？目前資料報(bào)道也不一致，有些資料認(rèn)為可選用20%濃度的肥皂水，但本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，20 g肥皂根本無(wú)法溶解于100 ml水溶液中，并且肥皂水是一種陰離子型的表面活性劑，有文獻(xiàn)報(bào)道，10% 濃度的肥皂水能夠引起兔腸粘膜的充血水腫，其程度隨著濃度的升高而加重，認(rèn)為臨床上選用的肥皂水濃度應(yīng)嚴(yán)格控制在1%[11]。然而，但肥皂水體外滅活狂犬病病毒的下限濃度及對(duì)細(xì)胞損傷程度尚不清楚，因此本實(shí)驗(yàn)選取了倉(cāng)鼠腎細(xì)胞BHK-21的克隆細(xì)胞株BSR及小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞N2a兩種細(xì)胞模型，以此為工具評(píng)價(jià)不同濃度肥皂水對(duì)細(xì)胞損傷的影響及滅活細(xì)胞中狂犬病病毒的下限濃度。研究發(fā)現(xiàn)0.05%～ 1.0% 濃度的肥皂水對(duì)BSR和N2a細(xì)胞的生長(zhǎng)均無(wú)影響，高于1%濃度的肥皂水均能引起兩種細(xì)胞崩解死亡。Kaplan等[5]研究發(fā)現(xiàn)，1% 以上的肥皂或香皂溶液與狂犬病毒混合作用1～ 2 min后能使其完全滅活。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用DFA和RT-PCR方法在細(xì)胞模型上檢測(cè)了0.05%～ 1.0% 肥皂水濃度對(duì)狂犬病病毒的滅活作用，研究發(fā)現(xiàn)，終濃度為0.5% 的肥皂水與狂犬病病毒混合作用3 min后能使其滅活，0.1% 濃度的肥皂水不能完全抑制狂犬病病毒的存活，這與Kaplan等人的研究結(jié)果一致。但不同濃度的肥皂水在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中滅活狂犬病病毒的情況尚不清楚，需要進(jìn)一步探討研究。

[1] Jackson A. In Rabies (Third edition) [M]. London: Elservier Science, 2013.

[2] Nel LH, Markotter W. Lyssaviruses [J]. Crit Rev Microbiol, 2007, 33 (4):301-324. doi: 10.1080/10408 410701647602.

[3] Yin W, Dong J, Tu C, et al. Challenges and needs for China to eliminate rabies [J]. Infect Dis Pov, 2013, 2 (1):3-23. doi: 10.1186/2049-9957-2-23.

[4] WHO. WHO Expert Consultation on Rabies [R]. Geneva: WHO. 2013 Contract No.: 982.

[5] Kaplan MM, Wiktor T, Koprowski H. An intracerebral assay procedure in mice for chemical inactivation of rabies virus [J]. Bull World Health Organ, 1966, 34:293-297.

[6] Hampson K, Coudeville L, Lembo T, et al. Estimating the global burden of endemic canine rabies[J/OL]. PLoS Negl Trop Dis, 2015, 9 (4):e0003709. doi: 10.1371/journal.pntd.0003709.

[7] Yao HW, Yang Y, Liu K, et al. The spatiotemporal expansion of human rabies and its probable explanation in mainland China, 2004—2013 [J/OL]. PLoS Negl Trop Dis, 2015, 9 (2):e0003502. doi: 10.1371/journal.pntd.0003502.

[8] 劉淑清, 陶曉燕, 于鵬程, 等. 中國(guó)2015年狂犬病流行特征分析[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué), 2016, 30(6):537-541. doi: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.06.000.

[9] Talan DA, Citron DM, Abrahamian FM. Bacteriologic analysis of infected dog and cat bites. Emergency Medicine Animal Bite Infection Study Group[J]. N Engl J Med, 1999, 340 (2):85-92. doi: 10.1056/NEJM199901143400202.

[10] Abrahamian FM, Goldstein EJ. Microbiology of animal bite wound infections[J]. Clin Microbiol Rev, 2011, 24 (2):231-246. doi: 10.1128/CMR.00041-10.

[11] 鄒莉, 劉錦紅, 王平, 等. 不同濃度肥皂水清潔灌腸對(duì)兔腸粘膜影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].護(hù)士進(jìn)修雜志, 2006, 21(9):786-787.

(本文編輯：呂新軍)

Experimental study on the inhibitory effect of soap solution on rabies viruses

Liu Shuqing, Wang Qian, Li Yanrong, Tao Xiaoyan, Yu Pengcheng, Lu Xuexin, Wu Weichen, Yan Jianghong, Zhu Wuyang

National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Key Laboratory of Medical Virology, Ministry of Health, Beijing 102206, China

Zhu Wuyang, Email：zhuwuyang1971@sina.com

Objective To investigate the inactivating effect of soap solution on rabies virus and to explore the concentration of soap solutions which could be effective in post-exposure prophylaxis (PEP) of rabies virus infection. Methods The BSR and N2a cells were respectively infected by the mixture of different concentrations of soap solution and rabies virus CVS-11. Based on the direct immunofluorescent method (DFA) and reverse transcription PCR (RT-PCR), the inactivating effects of soap solutions on rabies viruse in BSR and N2a cells were detected, respectively. Results This experiment established the BSR or N2a cells model in 24 well cell culture plates, and we found that the upper limit of soap solution concentration which BSR or N2a cells could tolerate was 1%. The inhibitory effect test of different soap solution on rabies virus showed that the 0.5% concentration of soap solution could completely inhibit the survival of CVS-11 strain in both the BSR and N2a cells, but the 0.1% concentration of soap solution could not inhibit the rabies viruses completely. Conclusions The 0.5%-1% concentration of soap solutions could inhibit the survival of CVS-11 strain in three minutes in vivo experiment.

Rabies virus; Soap solutions; Inhibitory effect

朱武洋， Email：zhuwuyang1971@sina.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.03.010

狂犬病病毒；肥皂水；滅活作用

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃課題(2016YFC1200905)； 國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2014BAI13B04)；國(guó)家自然科學(xué)基金(31500152)；國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0500400)

2017-03-06)