宋麗娟，侯志敏，張巧云

·實(shí)驗(yàn)研究·

用于無(wú)償獻(xiàn)血初篩的最佳HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條的篩選及意義

宋麗娟，侯志敏，張巧云

目的 篩選最佳的乙肝表面抗原(HBsAg)和梅毒螺旋體(TP)金標(biāo)試紙條對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg和TP進(jìn)行初篩，預(yù)算如果使用HBsAg/TP聯(lián)合金標(biāo)試紙條作為街頭初篩檢測(cè)項(xiàng)目可能有效降低血液資源浪費(fèi)和血液成本。方法 用三種金標(biāo)試紙條(雙試劑HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條、單試劑HBsAg檢測(cè)金標(biāo)試紙條和TP檢測(cè)金標(biāo)試紙條)分別檢測(cè)臨床科研血清盤，從中選擇最佳金標(biāo)試紙條，對(duì)330例HBV和140例TP酶聯(lián)免疫法陽(yáng)性樣本檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)的陽(yáng)性率，預(yù)算可有效節(jié)約成本的百分率。結(jié)果 通過(guò)比對(duì)驗(yàn)證和分析靈敏度驗(yàn)證選擇HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條為最佳試紙條，對(duì)330例HBsAg酶聯(lián)免疫法陽(yáng)性樣本檢測(cè)的陽(yáng)性率為3.03%～8.2%，對(duì)140例TP酶聯(lián)免疫法陽(yáng)性樣本檢測(cè)的陽(yáng)性率為58.6%～68.6%，預(yù)算出可有效節(jié)約成本0.29%～0.36%。結(jié)論 HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條同時(shí)可得到HBsAg和抗TP 2個(gè)結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，且特異度100%、靈敏度尚可，可避免無(wú)效采集帶來(lái)的血液資源和成本浪費(fèi)，適合于血站街頭初篩檢測(cè)。

HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條；初篩檢測(cè)；基礎(chǔ)成本

近年來(lái)，全國(guó)法定傳染病疫情概況報(bào)告發(fā)病數(shù)居前5位的病種一直有病毒性肝炎、梅毒[1]，為此，衛(wèi)計(jì)委一直很重視經(jīng)血傳播疾病的檢測(cè)方法。迄今為止，酶聯(lián)免疫法(ELISA)因操作簡(jiǎn)便、成本低廉而被我國(guó)廣泛應(yīng)用[2]。目前，寧夏無(wú)償獻(xiàn)血街頭初篩只做快速金標(biāo)試紙檢測(cè)HBsAg，而對(duì)TP不做快篩。為此，我們對(duì)寧夏無(wú)償獻(xiàn)血血液采集后HBsAg和TP的ELISA檢測(cè)陽(yáng)性樣本用篩選的最佳金標(biāo)試紙條重新檢測(cè)，詮釋合理的初篩方案可以有效減少血液采集后所發(fā)生的檢測(cè)、制備、保存、將來(lái)用血返還等一系列成本浪費(fèi)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：收集寧夏血液中心2014年7月-2016年8月采集的銀川市無(wú)償獻(xiàn)血者用ELISA法檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性報(bào)廢的血辮330份和TP陽(yáng)性報(bào)廢的血辮140份，共計(jì)470份。

1.2 試劑：TP ELISA診斷試劑盒兩種，上海科華和北京萬(wàn)泰；HBsAg ELISA診斷試劑盒兩種，法國(guó)伯樂(lè)和北京萬(wàn)泰。酶免檢測(cè)質(zhì)控品來(lái)源北京金豪，HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試劑(膠體金法)、HBsAg檢測(cè)試劑盒(膠體金法)、TP檢測(cè)試劑(膠體金法)，均為英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)。

1.3 臨床科研血清盤

1.3.1 HBsAg臨床科研血清盤(01504007批)：包括46份樣本，其中陰性20份，陽(yáng)性20份，梯度稀釋樣本5份(其中L5為基質(zhì)液，其他4份為陽(yáng)性梯度稀釋樣本，濃度水平依次為2 IU/mL、1 IU/mL、0.5 IU/mL、0.2 IU/mL)，1份精密性樣本(濃度約為1 IU/mL)，北京康徹斯坦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3.2 梅毒抗體臨床科研血清盤(201410005批)：包括46份樣本，其中陰性20份，陽(yáng)性20份，梯度稀釋樣本5份(其中L5為基質(zhì)液，其他4份為陽(yáng)性梯度稀釋樣本，濃度水平依次為21 mIU/mL、12 mIU/mL、6 mIU/mL、3 mIU/mL)，1份精密性樣本(濃度約為6 mIU/mL)，北京康徹斯坦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.4 儀器：STAR全自動(dòng)加樣儀，F(xiàn)AME全自動(dòng)酶免檢測(cè)儀(瑞士HAMILTON公司)。

1.5 方法：本中心對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者在采血之前只做HBsAg(膠體金法)初篩檢測(cè)，檢測(cè)和體檢合格者可成為初篩合格的無(wú)償獻(xiàn)血者，采集血液，所有采集后的樣本送到檢驗(yàn)科做ELISA雙試劑檢測(cè)。

1.5.1 用臨床標(biāo)準(zhǔn)血清盤驗(yàn)證ELISA試劑的準(zhǔn)確性：用伯樂(lè)、萬(wàn)泰兩種HBsAg ELISA試劑和科華、萬(wàn)泰兩種TP ELISA試劑，分別對(duì)HBsAg和TP臨床標(biāo)準(zhǔn)血清盤檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與血清盤使用說(shuō)明書(shū)中的已知結(jié)果比較。目的是確認(rèn)此次收集的無(wú)償獻(xiàn)血者470份ELISA陽(yáng)性樣本，其陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果來(lái)源可靠。

1.5.2 最佳金標(biāo)檢測(cè)試劑條的選擇：通過(guò)比對(duì)驗(yàn)證和分析靈敏度驗(yàn)證選擇，比對(duì)驗(yàn)證是用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條、單聯(lián)HBsAg檢測(cè)金標(biāo)試紙條、單聯(lián)TP檢測(cè)金標(biāo)試紙條，分別對(duì)臨床標(biāo)準(zhǔn)血清盤樣本進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的一致性；分析靈敏度驗(yàn)證，采用血清盤梯度濃度分析試紙條檢測(cè)的靈敏度[3]。

1.5.3 用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條檢測(cè)標(biāo)本：用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條對(duì)收集的330份HBsAg ELISA陽(yáng)性和140份TP ELISA陽(yáng)性樣做檢測(cè)，根據(jù)其不同反應(yīng)時(shí)間的陽(yáng)性結(jié)果(計(jì)算方法見(jiàn)2.6和2.7)。如果推廣使用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條作為街頭初篩檢測(cè)，預(yù)測(cè)可能節(jié)約血資源的成本[4]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA檢測(cè)：對(duì)雙試劑ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的報(bào)告結(jié)論為陽(yáng)性，對(duì)單試劑ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的做雙孔復(fù)查，復(fù)查結(jié)果為雙孔陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)均報(bào)告結(jié)論為陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)得出HBsAg和抗TP臨床科研血清盤的ELISA檢測(cè)與血清盤已知結(jié)果符合率100%。結(jié)果顯示，該ELISA檢測(cè)試劑靈敏度和特異性為100%。

2.2 篩選最佳金標(biāo)試紙條

2.2.1 篩選最佳HBsAg檢測(cè)金標(biāo)試紙條：HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條和單聯(lián)HBsAg檢測(cè)試紙條檢測(cè)HBsAg血清盤樣本46個(gè)(其中陽(yáng)性25個(gè)，陰性21個(gè))，兩種試紙條檢測(cè)結(jié)果一致?，F(xiàn)以街頭檢測(cè)實(shí)際發(fā)生的快速判讀5 min為最小判讀時(shí)間，以金標(biāo)試紙條SOP規(guī)定的15 min為最大判讀時(shí)間，5 min內(nèi)立刻出現(xiàn)陽(yáng)性8份，計(jì)算得出最小陽(yáng)性檢出率=8÷25=32%；15 min內(nèi)出現(xiàn)總陽(yáng)性數(shù)13個(gè)，計(jì)算得出最大陽(yáng)性檢出率=13÷25=52%，即：兩種試紙條陽(yáng)性檢出率32%～52%；血清盤陰性樣本用兩種試紙條檢測(cè)均顯示陰性結(jié)果，無(wú)假陽(yáng)性，計(jì)算得出：兩種試紙條的特異度為100%，靈敏度為59.5%～67.6%。

2.2.2 篩選最佳TP檢測(cè)金標(biāo)試紙條：HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條和TP單聯(lián)檢測(cè)試紙條檢測(cè)TP血清盤樣本46個(gè)(其中陽(yáng)性25個(gè)，陰性21個(gè))，兩種試紙條檢測(cè)結(jié)果一致(判讀方法同2.2.1)，5 min內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性7份，計(jì)算得出最小陽(yáng)性檢出率=7÷25=28%；15 min內(nèi)出現(xiàn)總陽(yáng)性數(shù)25個(gè)，計(jì)算得出最大陽(yáng)性檢出率=25÷25=100%，即：兩種試紙條陽(yáng)性檢出率28%～100%；血清盤陰性樣本用兩種試紙條檢測(cè)均顯示陰性結(jié)果，無(wú)假陽(yáng)性，計(jì)算得出：兩種試紙條的特異度為100%，靈敏度為58.1%-100%。

2.2.3 確定最佳金標(biāo)試紙條：2.2.1和2.2.2結(jié)果證明，2組試紙條的特異性高，靈敏度受HBsAg和抗TP濃度含量的影響而不同，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條同時(shí)可得到HBsAg和抗TP 2個(gè)結(jié)果，提高檢測(cè)速度和降低檢測(cè)成本[5]，最終確定HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)金標(biāo)試紙條為最佳選擇，同時(shí)證明金標(biāo)試紙條比ELISA法的敏感度低。

2.3 HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條檢測(cè)樣本：見(jiàn)表1。

表1 HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條檢測(cè)結(jié)果

2.3.1 對(duì)已做過(guò)街頭快速金標(biāo)試紙條HBsAg初篩的330份ELISA陽(yáng)性樣本重新檢測(cè)：5 min內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性10份，15 min內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性27份，參照2.2.1項(xiàng)計(jì)算方法得出陽(yáng)性率為3.03%～8.2%。此次因重復(fù)檢測(cè)可以認(rèn)為該陽(yáng)性率為街頭初篩漏檢率，導(dǎo)致這些乙肝攜帶者在初篩漏檢后參與了無(wú)償獻(xiàn)血。

2.3.2 對(duì)未做過(guò)街頭快篩TP 的140份ELISA陽(yáng)性樣本檢測(cè)：5 min內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性82份，15 min內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性96份，參照2.2.2項(xiàng)計(jì)算方法得出陽(yáng)性率為58.6%～68.6%。

2.4 如果對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者全部采用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條做初篩檢測(cè)則可節(jié)約成本

2.4.1 基礎(chǔ)成本核算=血液采集血袋+病毒滅活袋+檢驗(yàn)科檢測(cè)試劑(包含：采樣管+兩遍ELISA+血型+ALT+質(zhì)控品=65元；羅氏核酸檢測(cè)+采樣管=74元)，其中核酸檢測(cè)是從2015年開(kāi)始。其他耗材及血液運(yùn)輸、冷凍、保存、儀器、人力、耗電等所發(fā)生費(fèi)用均忽略不計(jì)。

2.4.2 HBV經(jīng)濟(jì)損失=HBsAg陽(yáng)性血制品基礎(chǔ)成本×HBsAg漏檢率(即3.03%或8.2%)；TP經(jīng)濟(jì)損失=TP陽(yáng)性血制品基礎(chǔ)成本×TP陽(yáng)性率(即58.6%或68.6%)，見(jiàn)表2。

表2 寧夏血液中心2013-2015年因HBsAg和TP陽(yáng)性報(bào)廢血制品成本核算

2.4.3 計(jì)算2013-2015年如果用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條作為街頭初篩檢測(cè)，可節(jié)約成本=(HBV經(jīng)濟(jì)損失+TP經(jīng)濟(jì)損失)÷關(guān)鍵物料及試劑采購(gòu)價(jià)=0.29%～0.36%。

3 討論

根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部公布的法定傳染病疫情概況，2009-2011年梅毒報(bào)告病例數(shù)在我國(guó)甲乙類傳染病報(bào)告中連續(xù)3年居第3位，有逐年上升趨勢(shì)[6]。近年來(lái)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展與人們生活觀念的改變，出現(xiàn)了兩種趨勢(shì)：一是人口流動(dòng)頻繁，造成吸毒、性亂現(xiàn)象增加，疾病傳播呈廣泛復(fù)雜性；二是疾病預(yù)防觀念增強(qiáng)，我國(guó)從2013年開(kāi)始乙肝感染比往年呈下降趨勢(shì)，而梅毒有所抬頭[7]。因此，分析我國(guó)近幾年乙肝和梅毒感染狀況以及由血源和性傳播傳染病情況，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血的招募和血液篩查成為醫(yī)療衛(wèi)生工作中安全輸血的重要研究課題。

寧夏全區(qū)2013-2015年無(wú)償獻(xiàn)血篩查HBsAg和抗TP陽(yáng)性者存在一些特點(diǎn)：①陽(yáng)性率逐年呈下降趨勢(shì)；②TP陽(yáng)性率比HBsAg陽(yáng)性率高；③各地市級(jí)血站采集的無(wú)償獻(xiàn)血者陽(yáng)性率比血液中心采集的高。在獻(xiàn)血前加強(qiáng)HBsAg和TP的快速篩查工作，要從根本上認(rèn)識(shí)到這是全區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血工作中的重中之重，可大大降低采血后血液檢測(cè)不合格率，達(dá)到從源頭上防止血液傳播疾病，提高輸血安全性的目的。

由于多數(shù)情況下由于血液采集工作環(huán)境和工作量大的影響，工作人員沒(méi)有嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)中最終判定結(jié)果時(shí)間要求，采用5 min內(nèi)快速讀取結(jié)果；再者工作人員的粗心，誤判、漏檢時(shí)有發(fā)生，以及試紙條自身靈敏度的限制等影響[8]，造成HBsAg初篩漏檢率為3.03%～8.2%；又因TP不做初篩檢測(cè)，導(dǎo)致58.6%～68.6%的陽(yáng)性血沒(méi)有被阻擋在獻(xiàn)血者征詢體檢中而進(jìn)入后期血液制備檢驗(yàn)各環(huán)節(jié)。如果用HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條作為街頭初篩檢測(cè)，2013-2015年可有效節(jié)約成本0.29%～0.36%。以上預(yù)算還僅僅是面向?qū)幭难褐行脑阢y川范圍所采集血液，如果面向?qū)幭娜珔^(qū)，由于4個(gè)地市級(jí)血站采集血液總量比血液中心少約1倍，但其陽(yáng)性率比血液中心高，估計(jì)又可造成很大的血液采集制備等成本浪費(fèi)以及帶來(lái)可觀的血液資源的浪費(fèi)。總之，不科學(xué)的獻(xiàn)血初篩計(jì)劃，不但無(wú)形中會(huì)大大增加血液成本，而且加大了輸血風(fēng)險(xiǎn),HBsAg/TP聯(lián)合檢測(cè)試紙條可面向全區(qū)作為無(wú)償獻(xiàn)血街頭初篩檢測(cè)的推廣使用。

[1] 濮云峰，曹鎖春.2011-2014年常州市無(wú)償獻(xiàn)血人群梅毒、HIV、HCV、HBV感染分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2016，18(2)：119-121.

[2] 楊剛，馬曉軍，楊文勇，等.核酸檢測(cè)技術(shù)在基層血站血液篩查中的應(yīng)用[J].中國(guó)輸血雜志，2016，29(11)：1249.

[3] 黃力勤，劉正敏，冷嬋，等.Cobas S201 核酸檢測(cè)系統(tǒng)使用前性能驗(yàn)證[J].中國(guó)輸血雜志，2016，12(8)：1339-1343.

[4] 趙水長(zhǎng).血制品成本核算方法探討[J].中國(guó)衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)，2016，7:91-93.

[5] 雷皖秋.金標(biāo)試紙條聯(lián)合快速檢測(cè)HBsAg/TP法在無(wú)償獻(xiàn)血中的應(yīng)用探討[J].中國(guó)輸血雜志，2006,12(19)：462-466.

[6] 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員.2014年度全國(guó)法定傳染病疫情概況[R].中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)公報(bào)，2015-02-16.

[7] 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員.2015年度全國(guó)法定傳染病疫情概況[R].中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)公報(bào),2016-02-18.

[8] 郭建波，段榮，郭滔，等.酶免檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HBsAg的比對(duì)分析[J].中國(guó)輸血雜志，2016，29(2)：151-153.

Screening and significance of the optimal HBsAg / TP Joint Test Gold Strips for Free Blood Donation

SONGLijuan,HOUZhimin,ZHANGQiaoyun.

NingxiaBloodCenter,Yinchuan750001,China

Objective To screen the best hepatitis B surface antigen (HBsAg) and Treponema pallidum (TP) gold standard test strips in order to reduce the waste and extra cost of blood resource.Methods Three gold standard test strips (HBsAg/TP combined with double reagent test strip, single HBsAg reagent test strip and TP test strip) were used to detect clinical research serum disk and chose the best gold standard test paper.The cost-effective percentage was predicted by testing the positive rate of 330 cases of HBV and 140 cases of TP-free positive samples.Results The HBsAg/TP Joint Test Gold Strips was the best test strips by matching verification and analysis sensitivity verification.The positive rate of 330 cases of HBsAg was 3.03%-8.2%.The positive rate of 140 TP Enzyme-free samples was 58.6% -68.6%.The cost-effective saving was 0.29%～0.36%.Conclusion The result of HBsAg and anti TP can be obtained simultaneously from using HBsAg/TP joint detectiong gold strips.With simple The operation is simple and the,specificity is 100% .It can effectively avoid invalid collection which can result in the waste of resource and cost.As a consequence, it is suitable for screening blood in the street.

HBsAg/TPjointdetectiongoldstrip;Screeningtest;Basiccost

10.13621/j.1001-5949.2017.06.0532

寧夏衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(2013009)

寧夏血液中心，寧夏 銀川 750001

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170614.1315.036.html

R446.11

A

2016-12-08 [責(zé)任編輯]馬興忠