林寧

·臨床經(jīng)驗(yàn)·

多配體蛋白聚糖-1聯(lián)合E-鈣黏素在宮頸癌中的表達(dá)及其意義

林寧

目的：探討宮頸癌組織中Syndecan-l與E-cadherin的表達(dá)及其臨床意義。方法：采取免疫組織化學(xué)法(HE染色法)觀察Syndecan-l與E-cadherin在正常宮頸組織(對(duì)照組)、宮頸癌組織(觀察組)中的表達(dá)，結(jié)合臨床資料分析2種蛋白的表達(dá)與患者年齡、組織類型、腫瘤大小、臨床分期、病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移有無相關(guān)性。結(jié)果：Syndecan-1在宮頸癌組織中陽性表達(dá)率25.6%，正常宮頸組織中為75.0%， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。E-cadherin在宮頸癌及正常宮頸組織中陽性表達(dá)率為32.1%，90.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2種蛋白均與臨床分期、病理分級(jí)有相關(guān)性(P<0.05)；2種蛋白在宮頸癌組織中均低表達(dá)，2者呈正相關(guān)性(R=0.058)。Syndecan-1還與淋巴轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)，2種蛋白均與患者年齡、組織類型、腫瘤大小無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論：Syndecan-l與E-cadherin的低表達(dá)可能參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展并發(fā)揮重要作用。

宮頸腫瘤； 多配體蛋白聚糖-1； E-鈣黏素； 免疫組織化學(xué)

女性惡性腫瘤中最常見的是宮頸癌，且具有越來越年輕化趨勢(shì)，該腫瘤卻是可以早發(fā)現(xiàn)早干預(yù)可治愈的，其預(yù)后與淋巴轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)、臨床分期密切相關(guān)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多基因多步驟的，其浸潤轉(zhuǎn)移的步驟包括細(xì)胞黏附、基質(zhì)降解和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，因而探討發(fā)現(xiàn)與其相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物可提高預(yù)后的判斷率。Syndecan-1，E-cadherin均表達(dá)于正常細(xì)胞膜表面，均屬于細(xì)胞間黏附蛋白，已有惡性腫瘤研究[1]表明兩者有協(xié)同作用，有保持正常上皮形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，保持細(xì)胞分化發(fā)育增值遷移能力，介導(dǎo)正常細(xì)胞間接觸抑制，進(jìn)而抑制腫瘤惡性細(xì)胞接觸依賴性生長的功能。本文用HE染色法分別檢測(cè)正常組織與宮頸癌組織中2種蛋白的表達(dá)，探討分析2種蛋白和宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有無相關(guān)性，有望為臨床診斷、疾病預(yù)后提供一個(gè)新的指標(biāo)。

1 資料和方法

1.1 資料 收集2013年3月-2016年2月馬鞍山市中心醫(yī)院病理科經(jīng)婦科手術(shù)(宮頸活檢+宮頸癌根治性手術(shù))確定為宮頸癌78例(宮頸鱗癌68例及腺癌10例)為觀察組，年齡25～64歲，術(shù)前經(jīng)2位主任醫(yī)師或副主任醫(yī)師確定臨床分期、腫塊大小、術(shù)后病理確定分級(jí)及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。對(duì)照組選取因子宮肌瘤行全子宮切除的宮頸組織，術(shù)前白帶常規(guī)及TCT均無異常，術(shù)后病理提示為正常宮頸組織20例，年齡35～59歲。

1.2 方法 Syndecan-1和E-cadherin檢測(cè)采取免疫組化SP法，按試劑盒說明進(jìn)行操作，一抗工作濃度均為1:100，以已知陽性片分別做Syndecan-1和E-cadherin陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。兔抗人Syndecan-1多克隆抗(anbobio公司)，鼠抗人E-cadherin單克隆抗體(Lab Vision公司)，S-P免疫組化試劑盒(K27-9901)(福州邁新Elivision plus公司)。Elivision plus法染色進(jìn)行組織中Syndecan-1和E-cadherin染色：石蠟切片脫水、高壓修復(fù)抗體活性、冷卻后加滴加過氧化物酶阻斷試劑，在室溫下孵育10 min。PBS沖洗3次×3 min、滴加兔抗人Syndecan-1單克隆抗體，鼠抗人E-cadherin單克隆抗體，室溫下孵育60 min。PBS沖洗3次×3 min、滴加聚合物增強(qiáng)劑(試劑A)，室溫下孵育20 min。PBS沖洗3次×3 min。去除PBS，滴加酶標(biāo)抗兔聚合物(試劑B)，室溫下孵育30 min。PBS沖洗3次×3 min、滴加新鮮配制的DAB顯色劑(二氨基聯(lián)本)酶底物顯色試劑盒，購自博皂森生物生物工程技術(shù)有限公司)顯色,顯微鏡下觀察5 min，陽性染色為棕黃色。

1.3 結(jié)果判斷 Syndecan-1主要位于正常復(fù)層鱗狀上皮及腫瘤細(xì)胞的胞膜上，E-cadherin正常染色部位位于細(xì)胞相鄰的側(cè)面即細(xì)胞與細(xì)胞的連接處。顯微鏡下觀察細(xì)胞膜表面出現(xiàn)棕黃色的顆粒為陽性表達(dá)，以陽性顆粒占每個(gè)高倍鏡觀察視野的50%為界，<50%高倍鏡視野為陰性組，>50%高倍鏡視野為陽性組。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法 實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)制成Excel表格，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包，使用Fisher’s確切概率法或者χ2檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)數(shù)資料的分析，2種蛋白之間的相關(guān)性分析使用Spearman秩和方法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Syndecan-1鏡下觀察主要表達(dá)上皮細(xì)胞膜上 隨著癌組織的進(jìn)展陽性表達(dá)數(shù)下降，散在分布，甚至消失。Syndecan-1正常宮頸組織和宮頸組織中的鏡下表達(dá)情況，見圖1。

1A：正常宮頸組織Syndecan-1的表達(dá)×400倍 1B：宮頸鱗癌Syndecan-1的表達(dá)×400倍 1C：宮頸腺癌Syndecan-1的表達(dá)×400倍 圖1 正常宮頸組織與宮頸癌組織中Syndecan-1的鏡下表達(dá)

2.2 E-cadherin表達(dá)于正常宮頸上皮和宮頸癌細(xì)胞的包漿及包膜 鏡下見包漿及包膜中均勻分布棕黃或黃褐色顆粒，隨著癌組織的進(jìn)展，其異常表達(dá)率逐漸增高，表現(xiàn)于陽性表達(dá)數(shù)下降，散在分布，甚至消失。

正常宮頸組織與宮頸癌組織中E-cadherin的鏡下表達(dá)情況，見圖2。

2A：正常宮頸組織E-cadherin的表達(dá)×400倍 2B：宮頸鱗癌E-cadherin的表達(dá)×400倍 2C：宮頸腺癌E-cadherin的表達(dá)×400倍 圖2 正常宮頸組織與宮頸癌組織中E-cadherin的鏡下表達(dá)

2.3 2組患者宮頸組織中Syndecan-1,E-cadherin的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)得出正常宮頸組織中Syndecan-1表達(dá)陽性率為75.0%，對(duì)比宮頸癌組織的25.6%，2者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。正常宮頸組織中E-cadherin表達(dá)陽性率為90.0%，對(duì)比宮頸癌組織的32.1%，2者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.4 Syndecan-1，E-cadherin與宮頸癌臨床各因素間的關(guān)系 宮頸癌臨床分期以≤Ⅱa期，≥Ⅱb期分2組，Syndecan-1蛋白隨臨床分期越晚表達(dá)越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以有無淋巴轉(zhuǎn)移分2組，發(fā)現(xiàn)有淋巴轉(zhuǎn)移組其陽性表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病理分級(jí)分為Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)，隨級(jí)別越高其表達(dá)陽性率越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Syndecan-1蛋白的表達(dá)與宮頸癌患者的年齡，腫瘤的大小及組織的類型無相關(guān)性(P>0.05)。E-cadherin淋巴轉(zhuǎn)移組其陽性表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨病理分級(jí)級(jí)別越高其表達(dá)陽性率越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。E-cadherin蛋白的表達(dá)與宮頸癌患者的年齡，腫瘤的大小及組織的類型、臨床分期間無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

表1 正常宮頸組織和宮頸癌組織中Syndecan-1和E-cadherin的表達(dá)

表2 Syndecan-1，E-cadherin和宮頸癌臨床病理因素間關(guān)系

2.5 Syndecan-1與E-cadherin在宮頸癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性分析 由表3得知在E-cadherin表達(dá)陽性數(shù)組織中，Syndecan-1表達(dá)陽性數(shù)13例，在E-cadherin表達(dá)陰性數(shù)53例組織中，Syndecan-1陰性表達(dá)數(shù)48例，E-cadherin與Syndecan-1兩者間的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(R=0.058)，即隨著E-cadherin陽性數(shù)的減少，Syndecan-1的陽性率遞減。

表3 宮頸癌組織中E-cadherin與Syndecan-1表達(dá)的相關(guān)性

注：χ2=9.0；P<0.05；R=0.058,正相關(guān)。

3 討論

宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤，目前已明確HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的十分明確的病因，檢測(cè)HPV病毒結(jié)合宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)可提高宮頸病變的診斷率，及早發(fā)現(xiàn)病變及早干預(yù)，減少晚期宮頸癌的發(fā)生率，提高患者生存率。進(jìn)一步研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)于預(yù)防、診斷和治療宮頸癌亦有著十分重要的意義。

Syndecan-1是黏附分子整合素跨膜粘結(jié)蛋白聚糖家族成員之一，由核心蛋白與未分枝的糖胺聚糖構(gòu)成，定位在上皮細(xì)胞基底的外側(cè)部并具有調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附、保持上皮細(xì)胞的形態(tài)等功能[2]。國外Kim YI[3]研究報(bào)道指出，Syndecan-1表達(dá)于宮頸正常鱗狀上皮細(xì)胞膜表面，細(xì)胞質(zhì)中不表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中細(xì)胞質(zhì)Syndecan-1高表達(dá)，在新生腫瘤細(xì)胞中Syndecan-1在細(xì)胞膜上分布消失，正是由于這種分布的改變，使得細(xì)胞-細(xì)胞及細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)間的緊密連接減弱或者消失，加快細(xì)胞移行，進(jìn)而使腫瘤細(xì)胞獲得浸潤和轉(zhuǎn)移的能力。引起Syndecan-1分布改變的原因可能是單胺聚糖鏈的降解，或者是核心蛋白域突變不能形成糖鏈,調(diào)節(jié)細(xì)胞多種生物學(xué)行為進(jìn)而影響腫瘤進(jìn)展。Masola等[4]用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)13例活體組織皮膚鱗癌Syndecan-1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在正常的皮膚上皮細(xì)胞Syndecan-1呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，在浸潤性皮膚癌為低表達(dá)狀態(tài)，進(jìn)而提示Syndecan-1表達(dá)與皮膚鱗癌的惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)。Yang N[5]發(fā)現(xiàn)在乳腺基質(zhì)纖維母細(xì)胞中Syndecan-1調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的組裝和決定細(xì)胞外基質(zhì)纖維的結(jié)構(gòu)，研究表明Syndecan-1改變細(xì)胞外基質(zhì)成分的組成和結(jié)構(gòu)，包括在活的有機(jī)體內(nèi)和體外。改變過的細(xì)胞外基質(zhì)纖維結(jié)構(gòu)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲方向。Jary M等[6]提示，Syndecan-1可以作為評(píng)估轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預(yù)后的指標(biāo)，指導(dǎo)臨床診斷和治療。本研究中Syndecan-1蛋白的表達(dá)與宮頸癌腫瘤分期及組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)，與宮頸癌患者的年齡，腫瘤的大小及組織的類型無相關(guān)性(P>0.05)，推測(cè)宮頸癌細(xì)胞質(zhì)中Syndecan-1的高表達(dá)預(yù)示患者有較好的預(yù)后。

E-cadherin作為重要的黏附分子，主要抑制上皮組織來源的惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展[7]，Myong NH等研究指出E-cadherin的缺失與宮頸癌的進(jìn)展密切相關(guān)。孟茜等[8]應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)E-cadherin在宮頸癌中的表達(dá)情況,研究表明在宮頸癌組織中E-cadherin低表達(dá)并且和臨床分期、宮頸管浸潤長度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。國外研究如Korean J Pathol[9]，Auvinen E等[10]與國內(nèi)研究一致。本研究結(jié)果顯示：正常宮頸組織中E-cadherin表達(dá)陽性率為90.0%，對(duì)比宮頸癌組織的32.1%，2者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),并與宮頸癌患者淋巴轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)間的差別有相關(guān)性(P<0.05)，與宮頸癌患者的年齡，腫瘤的大小及組織的類型、臨床分期無相關(guān)性(P>0.05)。

E-cadherin和Syndecan-1都表達(dá)于上皮細(xì)胞，都與腫瘤細(xì)胞分子的侵襲轉(zhuǎn)染有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用Spearman秩相關(guān)對(duì)78例宮頸癌組織中E-cadherin與Syndecan-1的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，在E-cadherin表達(dá)陽性組織中Syndecan-1陽性13例，在E-cadherin表達(dá)陰性53例組織中Syndecan-1陰性表達(dá)48例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，E-cadherin與Syndecan-1的相關(guān)系數(shù)R=0.058(P<0.05)，說明宮頸癌組織中的E-cadherin與Syndecan-1表達(dá)成正相關(guān)，實(shí)驗(yàn)得出2者在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到重要作用，對(duì)宮頸癌的預(yù)后具有重要意義。

綜上所述，通過本研究結(jié)果認(rèn)為在宮頸癌中E-cadherin和Syndecan-1表達(dá)均降低，且二者之間呈明顯正相關(guān)性。二者的異常表達(dá)造成宮頸癌細(xì)胞間黏附分子復(fù)合體的破壞，進(jìn)而破壞上皮形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，介導(dǎo)正常細(xì)胞接觸抑制和腫瘤細(xì)胞接觸依賴性生長抑制功能減退或者消失，使得腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移。所以由此得出Syndecan-l與E-cadherin的低表達(dá)可能參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展并發(fā)揮重要作用，可有望用于宮頸癌臨床診斷及其預(yù)后的指標(biāo)。

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安徽省馬鞍山市中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科，243000

林寧(1987-)，女，醫(yī)師，研究生。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.04.013

R 737.33

A

1008-7044(2017)04-0415-04

2017-03-06)