褚天雪，邢立國，袁娟，戴維，王媛，龍新宇，劉亭，左代英，吳英良

（1.沈陽藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，遼寧沈陽110016；2.沈陽化工研究院安全評價(jià)中心，遼寧沈陽110021）

納米氧化鋅對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Ana-1的毒性作用及機(jī)制

褚天雪1，邢立國2，袁娟1，戴維1，王媛1，龍新宇1，劉亭1，左代英1，吳英良1

（1.沈陽藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，遼寧沈陽110016；2.沈陽化工研究院安全評價(jià)中心，遼寧沈陽110021）

目的 研究納米氧化鋅（ZnO-NP）對小鼠腹腔源巨噬細(xì)胞（Ana-1）的毒性作用及機(jī)制。方法ZnO-NP 2.5～160 mg·L-1與Ana-1細(xì)胞作用24 h后，MTT法檢測Ana-1細(xì)胞的存活率；吖啶橙-溴化乙錠（AO-EB）染色及流式細(xì)胞術(shù)觀察Ana-1細(xì)胞凋亡；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞對ZnO-NP的攝取；鋅離子熒光探針測定細(xì)胞內(nèi)的鋅離子；乙二胺四乙酸（EDTA）螯合鋅離子，檢測細(xì)胞存活率。結(jié)果 ZnO-NP在2.5，5，10和20 mg·L-1濃度范圍內(nèi)能夠濃度依賴性地抑制Ana-1細(xì)胞存活（r=0.905，P＜0.05）；ZnO-NP 20 mg·L-1組細(xì)胞存活率為細(xì)胞對照組的27.9%，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡樣改變；ZnO-NP 40，80和160 mg·L-1組細(xì)胞攝取的ZnO-NP比細(xì)胞對照組顯著增加（P＜0.05）；EDTA 2.5 mmol·L-1能夠明顯降低細(xì)胞內(nèi)的自由鋅離子，改善ZnO-NP 10 mg·L-1引起的細(xì)胞存活率下降（P＜0.05）。螯合鋅離子后，ZnO-NP對Ana-1細(xì)胞的毒性明顯降低（P＜0.05）。結(jié)論ZnO-NP可濃度依賴性增加Ana-1細(xì)胞的毒性，引起凋亡樣改變，其毒性可能與其進(jìn)入細(xì)胞并釋放鋅離子有關(guān)。

納米；氧化鋅；Ana-1細(xì)胞；細(xì)胞毒性

隨著納米科技的迅速發(fā)展，納米材料被越來越廣泛地應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。納米氧化鋅（zinc oxide nanoparticles，ZnO-NP）是一種應(yīng)用前景廣泛的多功能無機(jī)納米材料，其具有粒徑微小、比表面積大和化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于化妝品、電子產(chǎn)品、藥物載體、治療和診斷等各個(gè)領(lǐng)域［1-3］，ZnO-NP對人類健康的潛在影響也日益引起人們關(guān)注。ZnO-NP具有一般普通微米級ZnO所無法比擬的性能和用途。然而，隨著ZnO-NP的廣泛應(yīng)用，其安全性也越來越受到研究人員的廣泛重視。ZnO-NP一旦進(jìn)入生物體，與細(xì)胞膜作用形成微孔，或直接進(jìn)入某些細(xì)胞器甚至細(xì)胞核內(nèi)，產(chǎn)生一定的生物毒性［4］。

巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的一部分，以不同形式廣泛分布于人體不同部位，在體液免疫和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要作用。受外界刺激后，巨噬細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生一系列反應(yīng)，吞噬外來物質(zhì)，同時(shí)巨噬細(xì)胞本身也與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)有關(guān)，并分泌一系列活性物質(zhì)［5］。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Ana-1細(xì)胞，被廣泛用于免疫毒性相關(guān)的研究中［6-8］。有研究表明，ZnO-NP有較強(qiáng)的體內(nèi)毒性和體外細(xì)胞毒性；ZnO-NP可引起小鼠明顯的肝、肺、腎和腦等器官的氧化應(yīng)激及病理損傷［9-14］；ZnO-NP也能夠引起人肺上皮細(xì)胞、小鼠成纖維細(xì)胞、大鼠腎上皮細(xì)胞和人單核細(xì)胞等的明顯細(xì)胞毒性改變［15-18］。大量研究都表示，ZnO-NP對細(xì)胞生長有極強(qiáng)的抑制作用，且明顯高于其他類金屬氧化物的納米顆粒［19-24］；在不同濃度ZnO-NP對人體主動(dòng)脈細(xì)胞內(nèi)皮的毒性效應(yīng)的研究中，納米顆粒出現(xiàn)內(nèi)在化進(jìn)入細(xì)胞的現(xiàn)象，ZnO-NP 50 mg·L-1有細(xì)胞毒性，可導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡，但關(guān)于細(xì)胞死亡的機(jī)制尚不清楚，需進(jìn)一步研究［25］。

ZnO-NP可通過呼吸道、消化道和皮膚等多種途徑進(jìn)入人體，并能通過體循環(huán)分布到各組織中。進(jìn)入機(jī)體的ZnO-NP作為外來異物可能會(huì)引起機(jī)體特異性免疫反應(yīng)。然而，尚無關(guān)于ZnO-NP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Ana-1的毒性及相關(guān)機(jī)制研究報(bào)道。因此，為探討ZnO-NP對正常免疫細(xì)胞的潛在影響，研究ZnO-NP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Ana-1細(xì)胞的毒性及其機(jī)制，旨在為ZnO-NP的安全性評價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑和儀器

Ana-1細(xì)胞購自中國中科院上海生物細(xì)胞所，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天換液1次，培養(yǎng)至細(xì)胞融合70%～80%以上，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，傳代培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

RPMI 1640培養(yǎng)基（批號：1663936），購自美國Gibco公司；胎牛血清（批號：09087213-2272），購自中國天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司；96孔板（批號：701001）購自中國NEST公司；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT，批號：705B054），購自美國Sigma公司；吖啶橙-溴化乙錠（acridine orange-ethidium bromide，AO-EB，批號：20151023）染料和碘化丙啶（propidium iodide，PI，批號：C0080），均購自中國索萊寶公司；ZnO-NP（50 nm），購自中國皓田納米科技有限公司；Zinquin ethyl ester探針（批號：JM829），購自日本同仁化學(xué)研究所。

1.2 ZnO-NP懸液的制備

ZnO-NP在使用前經(jīng)183℃干熱滅菌3 h。滅菌后的ZnO-NP用無血清RPMI 1640培養(yǎng)基（pH 7.3）配成懸液。加ZnO-NP懸液前，用超聲波儀超聲30 min，以防ZnO-NP產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象。

1.3 MTT法檢測細(xì)胞存活率

將計(jì)數(shù)后的細(xì)胞懸液（4×108L-1）加入96孔板，每孔3.2×104個(gè)細(xì)胞，分為ZnO-NP 2.5，5，10，20，40，80和160 mg·L-1組和不加ZnO-NP的正常細(xì)胞對照組，各組設(shè)3復(fù)孔，待細(xì)胞與ZnO-NP共孵育24 h后，取出96孔板，每孔加入20 μL MTT（5 g·L-1），4 h后每孔加入100 μL三聯(lián)液（5 mL異丁醇，10 g SDS，0.1 mL HCl 10 mol·L-1），過夜后，用多功能酶標(biāo)儀測量570和630 nm處的吸光度值（A）。采用雙波長法計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）=（處理組A570nm-處理組A630nm）/（對照組A570nm-對照組A630nm）×100%。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測Ana-1細(xì)胞對ZnO-NP的攝取

納米顆粒被細(xì)胞攝取后，細(xì)胞會(huì)由于吞噬行為內(nèi)部結(jié)構(gòu)變復(fù)雜，細(xì)胞所攝取的納米顆粒與細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度正相關(guān)，流式細(xì)胞儀檢測側(cè)向散射（SSC）與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)呈近直線關(guān)系。細(xì)胞內(nèi)顆粒越復(fù)雜，其SSC越大，細(xì)胞攝取的顆粒越多。取對數(shù)生長期Ana-1細(xì)胞，吹打、重懸、計(jì)數(shù)后，以1×109L-1的密度接種于6孔板，分為ZnO-NP 10，20，40，80或160 mg·L-1組和不加ZnO-NP的細(xì)胞對照組，4 h后收集細(xì)胞。472×g離心5 min，重懸，上樣，計(jì)數(shù)1×104個(gè)細(xì)胞，數(shù)據(jù)采用Cell Quest軟件（Becton Dickison）進(jìn)行分析處理。

1.5 AO-EB染色法檢測細(xì)胞膜完整性

取對數(shù)生長期Ana-1細(xì)胞，吹打、重懸、計(jì)數(shù)后，以1×109L-1的密度接種于24孔板中，根據(jù)MTT結(jié)果 ，使用ZnO-NP 40 mg·L-1與Ana-1細(xì)胞共孵育24 h，收集細(xì)胞。每孔加入200 μL AO-EB應(yīng)用液（5 mg·L-1），避光孵育5 min，118×g離心5 min，棄上清，加入PBS重懸，吸取50 μL滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，于熒光顯微鏡下觀察。AO能透過完整細(xì)胞膜并嵌入細(xì)胞核DNA，使之發(fā)出亮綠色熒光，而EB僅能透過細(xì)胞膜受損的細(xì)胞，嵌入DNA后發(fā)出橘黃色熒光。

1.6 PI染色法檢測細(xì)胞凋亡

取對數(shù)生長期Ana-1細(xì)胞，吹打、重懸和計(jì)數(shù)后，以1×106L-1的密度接種于6孔板中，分為ZnO-NP 10，20，40和80 mg·L-1組和不加ZnO-NP的細(xì)胞對照組，作用48 h后收集細(xì)胞。472×g離心10 min，棄上清，加入500 μL的PBS，混勻。再加入10 mL 70%冰乙醇，-20℃保存，實(shí)驗(yàn)前1天置于4℃預(yù)冷。472×g離心10 min，棄上清。PBS重懸，洗滌3次，上樣，計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞，數(shù)據(jù)采用Cell Quest軟件（Becton Dickison）進(jìn)行分析處理。PI是一種DNA熒光染料，結(jié)合DNA后發(fā)出熒光，以流式細(xì)胞儀進(jìn)行測量，可得出細(xì)胞內(nèi)DNA含量分布情況，亞G1期是細(xì)胞凋亡的特征之一，由此分析細(xì)胞凋亡。

1.7 熒光探針法檢測細(xì)胞內(nèi)自由鋅離子

按1.5處理細(xì)胞，作用4 h后收集細(xì)胞。472×g離心5 min，加入鋅離子熒光探針懸液，終濃度為2.4 μmol·L-1，避光、共孵育30 min，用無血清RPMI 1640培養(yǎng)基洗3次，然后加入50 μL封片劑，混勻，滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，操作過程避免振動(dòng)。于共聚焦顯微鏡下觀察。zinquin ethyl ester具有膜通透性，自身也有熒光，但它自身的熒光強(qiáng)度幾乎可忽略不計(jì)，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，結(jié)合鋅離子后在紫外激發(fā)下發(fā)藍(lán)色熒光。

1.8 EDTA螯合鋅離子MTT法檢測細(xì)胞存活

使用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tet-raacetic acid，EDTA）2.5，5，10和20 mmol·L-1分別與ZnO-NP 0，10，20，40和80 mg·L-1共孵育Ana-1細(xì)胞24 h，MTT法檢測細(xì)胞存活，采用雙波長法計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果 數(shù)據(jù)均用x±s表示，使用SPSS 13.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），方差齊時(shí)用LSD法，方差不齊時(shí)用Dunnettt法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ZnO-NP對細(xì)胞存活率的影響

Ana-1細(xì)胞與ZnO-NP 2.5，5，10和20 mg·L-1共同孵育24 h后，細(xì)胞的存活率隨ZnO-NP濃度的增加呈濃度依賴性地降低（r=0.905，P＜0.05）（圖1）。ZnO-NP 20 mg·L-1組細(xì)胞存活率下降至細(xì)胞對照組的27.9%，ZnO-NP濃度≥40 mg·L-1時(shí)，細(xì)胞存活率＜14.5%。

Tig.1 Effect of zinc oxide nanoparticles（ZnO-NPs）on viability of Ana-1 cells by MTT assay.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs 2.5，5，10，20，40，80 and 160 mg·L-1for 24 h.x±s，n=3.＊P＜0.05 compared with cell control（0）group.

2.2 ZnO-NP對Ana-1細(xì)胞攝取能力的影響

Ana-1細(xì)胞攝取ZnO-NP結(jié)果 如圖2所示，與細(xì)胞對照組比較，ZnO-NP 40，80和160 mg·L-1組攝取ZnO-NP的細(xì)胞百分率顯著增多（P＜0.05）。ZnO-NP 10和20 mg·L-1組攝取ZnO-NP細(xì)胞的百分率與細(xì)胞對照組無顯著差異。

2.3 ZnO-NP對Ana-1細(xì)胞膜完整性的影響

AO染色結(jié)果 （圖3）顯示，細(xì)胞對照組細(xì)胞核呈現(xiàn)為均勻的綠色，位于細(xì)胞中央，EB基本未見著色；而ZnO-NP 40 mg·L-1組可見細(xì)胞核發(fā)出明亮的綠色熒光，部分細(xì)胞被EB染色，表現(xiàn)為橘紅色熒光增強(qiáng)，提示細(xì)胞膜完整性被破壞，凋亡及壞死細(xì)胞逐漸增多。

Fig.2 Effect of ZnO-NP on uptake of Ana-1 cells.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs 10，20，40，80 and 160 mg·L-1for 4 h.x±s，n=3.＊P＜0.05，compared with cell control（0）group.

Fig.3 Effect of ZnO-NPs on integrity of cell membrane of Ana-1 cell by AO-EB staining.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs 40 mg·L-1for 24 h.Arrows show cells stained by ethidium bromide（EB）.

2.4 ZnO-NP對Ana-1細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果 （圖4）顯示，與細(xì)胞對照組相比，ZnO-NP 20，40和80 mg·L-1組亞G1期細(xì)胞數(shù)明顯增多（r=0.776，P＜0.05），提示ZnO-NP能夠誘導(dǎo)Ana-1細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)。

Fig.4 Effect of ZnO-NPs on Ana-1 cell number at sub-G1by flow cytometry.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs for 48 h.x±s，n=3.＊P＜0.05，compared with cell control（0）group.

2.5 ZnO-NP對細(xì)胞內(nèi)鋅離子的影響

細(xì)胞內(nèi)自由鋅離子檢測結(jié)果 （圖5）顯示，細(xì)胞對照組細(xì)胞內(nèi)未檢測到自由鋅離子；加入ZnO-NP 40 mg·L-14 h后細(xì)胞內(nèi)檢測到自由鋅離子；提示ZnO-NP可被Ana-1細(xì)胞攝取，并在細(xì)胞內(nèi)釋放出自由鋅離子。

Fig.5 Effect of ZnO-NPs on intracellular free zinc ion of Ana-1 cells by zinquin ethyl ester.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs 40 mg·L-1for 4 h.

2.6 EDTA螯合鋅離子后ZnO-NP對細(xì)胞存活率的影響

EDTA 2.5和5 mmol·L-1能夠明顯改善ZnO-NP 10 mg·L-1所引起的細(xì)胞存活率下降（P＜0.05）。EDTA 10 mmol·L-1能夠明顯改善ZnO-NP 20 mg·L-1所引起的細(xì)胞存活率下降（P＜0.05），而EDTA 20 mmol·L-1能夠明顯改善ZnO-NP 10，20和40 mg·L-1所引起的細(xì)胞存活率下降（P＜0.05）（圖6）。提示ZnO-NP在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的鋅離子是ZnO-NP對細(xì)胞產(chǎn)生毒性的主要途徑之一。

Fig.6 Effect of ZnO-NPs on viability of Ana-1 cells after chelating zinc ions with EDTA by MTT assay.Ana-1 cells were incubated with ZnO-NPs and EDTA for 24 h.x±s，n=3.＊P＜0.05，compared with ZnO-NPs only group.

3 討論

本研究結(jié)果 表明，ZnO-NP隨著濃度增加，對細(xì)胞產(chǎn)生的毒性也逐漸加大，表現(xiàn)為細(xì)胞存活率降低，這與文獻(xiàn)中報(bào)道的ZnO-NP對細(xì)胞具有極強(qiáng)的抑制作用一致［19-24］。AO-EB染色和PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果 顯示，ZnO-NP作用Ana-1細(xì)胞后，均出現(xiàn)明顯的凋亡樣改變。流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞攝取ZnO-NP顆粒的結(jié)果 表明，細(xì)胞內(nèi)ZnO-NP顆粒濃度依賴性增多，這與MTT法測定不同濃度ZnO-NP對細(xì)胞存活率影響的趨勢一致；隨著細(xì)胞內(nèi)ZnO-NP顆粒的增加，產(chǎn)生的毒性也顯著升高。文獻(xiàn)報(bào)道，納米顆粒在體外和體內(nèi)條件下都易被攝入細(xì)胞膜，從而影響細(xì)胞功能［26］，這與本研究的流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞攝取ZnO-NP顆粒的結(jié)果 一致。同時(shí)，檢測細(xì)胞內(nèi)自由鋅離子時(shí)，只有加入ZnO-NP組可檢測到鋅離子，未加ZnO-NP的對照組則無法檢測到鋅離子的存在，提示ZnO-NP顆粒會(huì)在介質(zhì)中解離出鋅離子，并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)采用EDTA螯合介質(zhì)中的鋅離子時(shí)，ZnO-NP產(chǎn)生的毒性明顯降低，提示ZnO-NP可能通過介質(zhì)中解離出的自由鋅離子產(chǎn)生細(xì)胞毒性。已有研究表明，解離的鋅離子是納米氧化鋅顆粒產(chǎn)生毒性作用的原因，這個(gè)觀點(diǎn)在本研究的結(jié)果 中得到印證［27］。

AO-EB染色與PI單染流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果 共同表明，ZnO-NP可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在ZnO-NP暴露24 h后，AO-EB染色結(jié)果 出現(xiàn)凋亡樣改變，但僅有少量細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。在PI單染流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果 中，ZnO-NP暴露48 h后，細(xì)胞出現(xiàn)顯著的凋亡現(xiàn)象。這可能是由于ZnO-NP通過多種方式誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，如接觸初期主要通過其他途徑誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，ZnO-NP長時(shí)間暴露才會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。ZnO-NP是通過何種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，尚有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，ZnO-NP在低濃度時(shí)產(chǎn)生的毒性較小，當(dāng)濃度40 mg·L-1時(shí)產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性，所以在ZnO-NP的應(yīng)用過程中，應(yīng)注意ZnO-NP使用劑量的安全范圍。ZnO-NP確實(shí)對免疫細(xì)胞產(chǎn)生毒性，且隨著暴露濃度增大而加大。同時(shí)，ZnO-NP產(chǎn)生毒性的機(jī)制可能與細(xì)胞攝取納米顆粒的量和ZnO-NP解離出自由鋅離子的量有關(guān)。

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Cytotoxicity and mechanism of zinc oxide nanoparticles on murine macrophage Ana-1 cells

CHU Tian-xue1,XING Li-guo2,YUAN Juan1,DAI Wei1,WANG Yuan1,LONG Xin-yu1,
LIU Ting1,ZUO Dai-ying1,WU Ying-liang1
(1.College of Life Science and Biopharmaceuticals,Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016,China;2.Safety Evaluation Center of Shenyang Research Institute of Chemical Industry Ltd.,Shenyang 110021,China)

OBJECTIVETo study the toxicity of zinc oxide nanoparticles(ZnO-NPs)on murine macrophage Ana-1 cells and the mechanism.METHODSAna-1 cells were incubated with ZnO-NP (2.5-160 mg·L-1).Cell viability was investigated by MTT assay.The integrity of cell membrane was investigated by acridine orange-ethidium bromide(AO-EB)staining.The intracellular uptake of ZnO-NP and the percentage of sub-G1of Ana-1 cells were detected by flow cytometry.Zinc ions were determined by fluorescent probe.The change of cell viability was studied after chelating zinc ions with ethylene diamine tetraacetic acid(EDTA).RESULTSZnO-NP 2.5,5,10 and 20 mg·L-1decreased cell viability of Ana-1 cells(r=0.905,P＜0.05)in a concentration-dependent manner.The cell viability was decreased to 27.9%after exposure to ZnO-NP 20 mg·L-1.Intracellular uptake of ZnO-NP was increased after Ana-1 cell incubated with ZnO-NP at concentrations ranging from 40 to 160 mg·L-1(P＜0.05).There were obvious free zinc ions in the cells.EDTA 2.5 mmol·L-1significantly increased the cell viability decreased by ZnO-NP 20 mg·L-1(P＜0.05).Chelating free zinc ions significantly mitigated ZnO-NP induced cell toxicity (P＜0.05).CONCLUSIONCytotoxicity and apoptosis of Ana-1 cells induced by ZnO-NP might be related to intracellular uptake of ZnO-NP and release of zinc ions.

nanoparticles;zinc oxide;Ana-1 cells;cytotoxicity

The project supported by National Science and Technology Major Project of China(2013ZX09302304); and Liaoning Province Undergraduate Training Program for Innovation and Entrepreneurship(125010128)

ZUO Dai-ying,E-mail:zuodaiying@163.com;WU Ying-liang,E-mail:yingliang_1016@163.com

R99

A

1000-3002-（2017）06-0636-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2017.06.020

2016-04-22接受日期：2017-05-23）

（本文編輯：賀云霞）

國家科技重大專項(xiàng)（2013ZX09302304）；遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（125010128）

褚天雪，女，碩士研究生，主要從事納米材料的毒性研究。

左代英，E-mail:zuodaiying@163.com;吳英良，E-mail:yingliang_1016@163.com