黃冬妍，吳雙雙，朱婧，毛曉燕，李雷，吳建輝，孫祖越

（1.上海市計劃生育科學研究所藥理毒理學研究室，中國生育調(diào)節(jié)藥物毒理學檢測中心，上海200032；2.國家人口和計劃生育委員會計劃生育藥具重點實驗室，上海200032；3.復旦大學生殖與發(fā)育研究院，上海200032）

低劑量鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯對老年大鼠前列腺的促增生作用

黃冬妍1，2，3，吳雙雙1，3，朱婧1，3，毛曉燕1，2，3，李雷1，2，3，吳建輝1，2，3，孫祖越1，2，3

（1.上海市計劃生育科學研究所藥理毒理學研究室，中國生育調(diào)節(jié)藥物毒理學檢測中心，上海200032；2.國家人口和計劃生育委員會計劃生育藥具重點實驗室，上海200032；3.復旦大學生殖與發(fā)育研究院，上海200032）

目的 評價環(huán)境暴露劑量的鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）對老年大鼠前列腺的促增生作用及機制。方法32只1.5歲齡老年雄性SD大鼠隨機分成4組，每組8只，分別ig給予DEHP（30，90和270 μg·kg-1）或溶媒，每天1次，連續(xù)4周。于末次給藥24 h后將大鼠麻醉，而后①腹主動脈采血，采用ELISA檢測血清中睪酮（T）、雌二醇（E2）和泌乳素（PRL）水平；②處死后取前列腺，分葉，稱重、測量體積，計算臟器系數(shù)；③制作前列腺組織病理切片，HE染色后用顯微鏡觀察組織形態(tài)改變，并利用顯微圖像分析軟件分析前列腺上皮高度變化。結(jié)果 與溶媒對照組比較，DEHP 270 μg·kg-1組前列腺系數(shù)、背側(cè)前列腺質(zhì)量和背側(cè)前列腺系數(shù)均顯著增加（P＜0.05）；DEPH各劑量組腹側(cè)前列腺上皮高度明顯升高（P＜0.01）；DEHP 270 μg·kg-1組背側(cè)前列腺上皮高度明顯升高（P＜0.01）；DEHP各劑量組E2，PRL和T水平均無顯著改變，但DEHP 30和270 μg·kg-1組E2/T比值顯著增加（P＜0.05）。結(jié)論低劑量DEHP對老年大鼠前列腺具有促增生作用，該作用可能與其影響內(nèi)源性激素的相對水平有關(guān)。

鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯；環(huán)境內(nèi)分泌干擾物；前列腺增生；老年大鼠；雌激素；雄激素

DOl：10.3867/j.issn.1000-3002.2017.06.021

良性前列腺增生癥（benign prostatic hyperplasia，BPH）多發(fā)于中老年男性，隨著人們壽命的日益延長，社會人口老齡化問題日益突出，老年男性人口數(shù)量持續(xù)增加，BPH發(fā)病率不斷上升［1-2］。BPH在臨床上主要表現(xiàn)為逼尿肌功能障礙，膀胱出口梗阻，以及尿頻、尿急和急性尿潴留等癥狀，嚴重者甚至會出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)結(jié)石以及腎功能衰竭等［3］，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。前列腺是雄激素依賴性器官，其結(jié)構(gòu)和功能的維持都與雄激素密不可分。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)雌激素能調(diào)節(jié)雄激素活性并影響前列腺生長，在一定范圍內(nèi)，提高雌激素水平將刺激前列腺細胞生長［4-5］。除了內(nèi)源性雌激素，越來越多的學者將目光聚焦在具有雌激素活性的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（environmental endocrine disruptors，EDC）上。

EDC又稱環(huán)境激素，是指可通過干擾生物或人體內(nèi)保持自身平衡和調(diào)節(jié)發(fā)育過程天然激素的合成、分泌、運輸、結(jié)合、反應和代謝等，從而對生物或人體的生殖、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)等的功能產(chǎn)生影響的外源性化學物質(zhì)［6］。EDC在體內(nèi)富集后，一般以類激素的形式產(chǎn)生生物學效應，使體內(nèi)原有的內(nèi)分泌功能出現(xiàn)紊亂［7］。鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯〔di（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP〕是常見的樹脂原料，廣泛存在于填充劑原料、高分子材料、化妝品以及增塑劑中，是EDC中較為重要的一類?？偨Y(jié)以往的研究發(fā)現(xiàn)，DEHP具有的生殖毒性主要體現(xiàn)在2方面。一方面，親代暴露在DEHP中，會對子代雄性個體生殖器官和生育力產(chǎn)生影響；另一方面，雄性動物直接暴露在DEHP中，其生殖系統(tǒng)也會受到影響，如精子發(fā)生異常、睪丸萎縮和隱睪癥等［8-9］。但在DEHP生殖毒性研究中，尚無關(guān)于對前列腺毒性的報道，為數(shù)不多的研究也僅限于較高的暴露劑量。如張鴻毅等［10］報道，分別每天給予雄性SD大鼠DEHP 50，200和500 mg·kg-1，連續(xù)8周，大鼠前列腺腺上皮細胞呈柱狀或立方狀，腺腔增大，間充質(zhì)增生，符合前列腺增生的病理改變特征。

據(jù)文獻報道，在典型的飲食方式前提下，育齡婦女、青少年和嬰兒的DEHP暴露劑量分別為每天5.7，8.1和42.1 μg·kg-1，較高者暴露劑量可達每天2 mg［11-12］。因此，如能明確環(huán)境暴露劑量下DEHP對前列腺增生的作用，將是對DEHP生殖毒性研究的一個重要補充，也更具實際意義。前列腺增生是明確與年齡有關(guān)的疾病，故選用中老年動物作為研究對象。本研究探討環(huán)境暴露劑量的DEHP對老年SD大鼠前列腺的促增生作用及其可能的機制，旨在為探索前列腺增生的發(fā)生機制及尋找更好的治療藥物提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑及主要儀器

DEHP，純度≥99.5%，批號D201154，美國Sigma-Aldrich公司；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），批號20140520，國藥集團化學試劑有限公司。大鼠雌二醇（estradiol，E2，編號NB-E30608）和大鼠睪酮（testosterone，T，編號NB-E90064）ELISA檢測試劑盒，美國諾泰生物科技有限公司；大鼠泌乳素（prolactin，PRL，編號55-PRLRT-E01）ELISA檢測試劑盒，美國ALPCO公司。ML-104型電子天平和PL-203型電子太平（瑞士MettlerToledo公司）；Eclipse 50i顯微鏡和NIS-Elements BR 3.1顯微圖像分析軟件（日本Nikon公司）；ST5010全自動染色機（德國Leica公司）。

1.2 動物和分組

5～7周齡雄性SD大鼠32只，體質(zhì)量200～220 g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，許可證編號SCXK（滬）2013-0016。大鼠在上海市計劃生育科學研究所屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)，每籠2只，室溫20～26℃，相對濕度40%～70%，保持12/12 h晝夜節(jié)律，自由飲水攝食。大鼠飼養(yǎng)至1.5歲齡，按體質(zhì)量隨機分為4組，依次為溶媒對照組、DEHP 30，90和270 μg·kg-1劑量組，每組8只，分別ig給予不同劑量DEHP或同體積溶媒（0.5%CMC-Na水溶液），給藥容積為10 mL·kg-1，每天1次，連續(xù)4周。末次給藥24 h后，腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動脈采血，而后處死。

1.3 大鼠前列腺取材及臟器系數(shù)計算

大鼠處死后，取前列腺組織，稱量其總質(zhì)量，并用排水法測量其體積。將前列腺分為腹側(cè)葉和背側(cè)葉，分別測量其質(zhì)量。計算前列腺及其各葉的臟器系數(shù)，臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100。

1.4 HE染色法分析前列腺病理變化

將各葉前列腺組織用4%甲醛溶液固定48 h，依次經(jīng)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，并制成4 μm病理切片，經(jīng)HE染色后，于光學顯微鏡下觀察前列腺組織病理學變化。每張切片在同一視野下隨機選取10個前列腺腺腔，并在對應的腺腔上選取2處上皮，利用顯微圖像分析軟件，定量分析前列腺腺腔面積和上皮高度。

1.5 ELlSA法檢測血清E2，T和PRL水平

腹主動脈采血后靜置2 h，3000×g離心15 min，分離血清。按照ELISA試劑盒說明書步驟檢測血清E2，T和PRL的水平。

1.6 統(tǒng)計學分析

實驗結(jié)果 數(shù)據(jù)以x±s表示，使用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，組間比較采用單因素方差分析，方差齊用LSD法進行組間兩兩比較，不齊則用Dunnett T3法進行組間兩兩比較，以P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 DEHP對老年大鼠體質(zhì)量的影響

給予DEHP期間，DEHP 90 μg·kg-1組1只老年大鼠自然死亡，其余大鼠攝食、飲水正常，行為體征狀況良好。各組大鼠體質(zhì)量在給予DEHP 1周后有所下降，之后緩慢增長，在第4周時體質(zhì)量與給藥前相當。與同時段溶媒對照組相比，各組大鼠體質(zhì)量無明顯差異，表明在受試劑量范圍內(nèi)DEHP對老年大鼠的生長無明顯影響（圖1）。

Fig.1 Mean body mass of aged rats treated with di（2-ethylhexyl）phthalate（DEHP）.The 1.5-year-old SD rats were ig treated with DEHP 0，30，90 and 270 μg·kg-1，once daily for 4 weeks，respectively.The body mass was measured at the initiation of treatment and once per week untill the end of study. x±s，n=8.

2.2 DEHP對老年大鼠前列腺質(zhì)量和臟器系數(shù)的影響

與溶媒對照組比較，DEHP各劑量組大鼠前列腺質(zhì)量和腹側(cè)葉前列腺質(zhì)量均無顯著差異，DEHP 270 μg·kg-1組背側(cè)葉前列腺質(zhì)量顯著增加（P＜0.05）。臟器系數(shù)隨DEHP暴露劑量的增加而增加，與溶媒對照組比較，DEHP 270 μg·kg-1組前列腺系數(shù)和背側(cè)葉前列腺系數(shù)均顯著增加（P＜0.05）（表1）。DEHP各劑量組大鼠前列腺體積與溶媒對照組均無顯著差異（數(shù)據(jù)未列出）。

2.3 DEHP對老年大鼠前列腺組織形態(tài)的影響

病理結(jié)果 顯示，給藥4周后，DEHP各劑量組老年大鼠前列腺腺腔向內(nèi)突出，褶皺增多（圖2和圖3）。各葉前列腺腺腔面積無明顯變化（表2）。顯微圖像分析結(jié)果 顯示，與溶媒對照組比較，DEHP各劑量組大鼠腹側(cè)葉前列腺上皮高度顯著性增加（P＜0.01），DEHP 270 μg·kg-1組背側(cè)葉前列腺上皮高度顯著增加（P＜0.01）（圖3和圖4）。

Tab.1 Effect of DEHP on prostate mass，prostate index and body mass of aged rats

Fig.2 Histological analysis of prostate in male aged rats treated with DEHP（HE staining×40）.See Tab.1 for the rat treatment.

Fig.3 Histological analysis of prostate in male aged rats treated with DEHP（×400）.See Fig.2 for the rat treatment.

Tab.2 Effect of DEHP on acinar luminal area of prostate in aged rats

Fig.4 Effect of DEHP on height of prostatic epithelium in aged rats.See Fig.1 for the rat treatment.A：epithelium of VP；B：epithelium of DLP.x±s，n=8.＊＊P＜0.01，compared with vehicle control（0）group.

2.4 DEHP對老年大鼠血清E2，T，PRL水平及E2/T比值的影響

與溶媒對照組比較，DEHP各劑量組大鼠血清E2，T和PRL水平均無顯著差異；DEHP 30和270 μg·kg-1組E2/T比值顯著升高（P＜0.05）（圖5）。

Fig.5 Effect of DEHP on serum estradiol（A），testosterone（B），prolactin（C）levels and ratio of estradiol/ testosterone（D）in aged rats.See Fig.1 for the rat treatment.Abdominal aortic blood samples were collected，then serum estradiol，testosterone，and prolactin levels were assayed by ELISA.x±s，n=8.＊P＜0.05，compared with vehicle control（0）group.

3 討論

由于DEHP應用廣泛，人們可通過攝取、吸入和皮膚接觸等多種途徑暴露在DEHP中。歐洲食品安全局規(guī)定DEHP日耐受攝入劑量為50 μg·kg-1，而美國環(huán)境保護署則將每天20 μg·kg-1作為安全參考劑量［13-14］。DEHP在生物體內(nèi)主要被分解為鄰苯二酸-單-2-乙基己酯〔mono-（2-ethylhexyl）phthalate〕、單（2-乙基-5氧乙基）鄰苯二甲酸酯〔mono-（2-ethyl-5-oxohexyl）phthalate〕、單（2-乙基-5羥基乙基）鄰苯二甲酸酯〔mono（2-ethyl-5-hydroxyhexyl）phthalate〕和單（2-乙基-5-羧基戊基）鄰苯二甲酸酯〔mono（2-ethyl-5-carboxypentyl）phthalate〕，其中前三者占絕大部分，DEHP的毒性可能取決于由化合物到代謝物的轉(zhuǎn)變，而轉(zhuǎn)變又與攝入途徑、種屬和年齡等因素相關(guān)［15-16］。本研究發(fā)現(xiàn)，低劑量DEHP（30～270 μg·kg-1）能顯著增加老年大鼠前列腺系數(shù)和背側(cè)葉前列腺系數(shù)，以及腹側(cè)葉和背側(cè)葉前列腺上皮高度。據(jù)文獻報道，在表達FGF-2的轉(zhuǎn)基因小鼠中，背側(cè)葉前列腺上皮增生要比腹側(cè)葉明顯，小鼠背側(cè)葉前列腺可能與人前列腺周圍帶同源，而前列腺增生和前列腺癌幾乎都源于移行帶和周圍帶［17］。本研究結(jié)果 顯示，老年大鼠背側(cè)葉前列腺增生對DEHP更為敏感，提示大鼠前列腺背側(cè)葉可能也與人前列腺移行帶或周圍帶同源。

文獻報道，每天給予E210 μg·kg-1可以促進前列腺上皮增生，并導致前列腺體積的整體增加，可能是通過直接刺激前列腺基質(zhì)細胞，或間接調(diào)節(jié)上皮細胞實現(xiàn)的［18］。作為環(huán)境激素，DEHP可模擬內(nèi)源性雌激素，與雌激素受體（estrogen receptor，ER）結(jié)合產(chǎn)生雌激素效應［19］。也有研究表明，DEHP能提高人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞ERα mRNA和蛋白質(zhì)的表達［20］，推測DEHP也可能通過提高組織中ER的表達，實現(xiàn)促進前列腺基質(zhì)細胞增生的作用。

前列腺是睪酮依賴性器官，睪酮在前列腺生長發(fā)育中起到重要的作用。許多研究發(fā)現(xiàn)，嚙齒類動物青春期暴露于較高劑量DEHP（＞100 mg·kg-1）中，雄激素調(diào)節(jié)基因的表達顯著性下調(diào)，出現(xiàn)比較明顯的抗雄激素作用［21-21］。DEHP可直接降低睪丸中睪酮的合成，也可通過其代謝物促進睪酮16α-羥化酶（CYP2C11）和睪酮6β-羥化酶（CYP3A2）的活性，加速睪酮的分解［24-25］，從而降低睪酮的水平。在本次研究中，DEHP在促進前列腺增生的同時，睪酮水平僅有下降的趨勢，這可能由于暴露水平太低，還不足以啟動抗雄激素活性。

雌、雄激素平衡，在維持雄性生理特征和生殖功能中發(fā)揮重要作用，隨年齡的增加，雄激素水平降低，雌激素水平相對升高，雌、雄激素比例失衡，是BPH病因?qū)W說之一［26］。在雄性體內(nèi)，PRL由前列腺上皮細胞合成，在雄性生殖腺體內(nèi)協(xié)同雄激素增強雄激素效應，并在前列腺增生發(fā)生中起作用［27］。本次研究暴露對象為老年大鼠，體內(nèi)E2/T比值的變化對外源性激素更為敏感。本研究結(jié)果 也表明，DEHP使E2/T比值明顯升高，提示DEHP可能通過升高雌、雄激素比例促進BPH發(fā)生。

綜上所述，低劑量DEHP對老年大鼠前列腺具有促增生作用，該作用可能通過改變內(nèi)源性激素的相對水平而實現(xiàn)。但是，DEHP究竟是通過介導哪種信號通路引起激素水平的改變還需要進一步研究。

［1］Liao LM，Schaefer W.Cross-sectional and longitudinal studies on interaction between bladder compliance and outflow obstruction in men with benign prostatic hyperplasia［J］.Asian J Androl，2007，9（1）：51-56.

［2］Wu Y，Pan H，Wang WM，Xu D，Zhang L，Gu ZQ，et al.A possible relationship between serum sex hormones and benign prostatic hyperplasia/lower urinary tract symptoms in men who underwent transurethral prostate resection［J］.Asian J Androl，2017，19（2）：230-233.

［3］Huang DY，Wu JH，Sun ZY.Categories and characteristics of BPH drug evaluation models：a comparative study［J］.Natl J Androl（中華男科學雜志），2014，20（2）：181-185.

［4］Roehrborn CG.Pathology of benign prostatic hyperplasia［J］.Int J Impot Res，2008，20（Suppl 3）：S11-S18.

［5］Liu XY.The study of the relation between estrogen or androgen and mechanism of benign prostatic hyperplasia（雌、雄激素引發(fā)前列腺增生的機制研究）［D］.Shanghai：Fudan University（復旦大學），2008.

［6］Diamanti-Kandarakis E，Bourguignon JP，Giudice LC，Hauser R，Prins GS，Soto AM，et al.Endocrinedisrupting chemicals：an endocrine society scientific statement［J］.Endocr Rev，2009，30（4）：293-342.

［7］Huang DY，Wu JH，Sun ZY.Progress in toxicological studies in environmental endocrine disruptors on prostate［J］.J Environ Health（環(huán)境與健康雜志），2014，31（9）：837-840.

［8］Stenz L，Escoffier J，Rahban R，Nef S，Paoloni-Giacobino A.Testicular dysgenesis syndrome and long-lasting epigenetic silencing of mouse sperm genes involved in the reproductive system after prenatal exposure to DEHP［J］.PLoS One，2017，12（1）：e0170441.

［9］Erkekoglu P，Rachidi W，Yuzugullu OG，Giray B，F(xiàn)avier A，Ozturk M，et al.Evaluation of cytotoxicity and oxidative DNA damaging effects of di（2-ethylhexyl）-phthalate（DEHP）and mono（2-ethylhexyl）-phthalate（MEHP）on MA-10 Leydig cells and protection by selenium［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2010，248（1）：52-62.

［10］Zhang HY，Zhang W，Bao TY，Bai AS，Gao JX，Zhang Y，et al.Relationship between environmental endocrine disruptor DEHP and prostatic hyperplasia in rats［J］.J Mod Urol（現(xiàn)代泌尿外科雜志），2009，14（5）：347-349.

［11］Serrano SE，Braun J，Trasande L，Dills R，Sathyanarayana S.Phthalates and diet：a review of the food monitoring and epidemiology data［J］.Environ Health，2014，13（1）：43.

［12］Sui HX，Zhang L，Wu PG，Song Y，Yong L，Yang DJ，et al.Concentration of di（2-ethylhexyl）phthalate（DEHP）in foods and its dietary exposure in China［J］.Int J Hyg Environ Health，2014，217（6）：695-701.

［13］Wittassek M，Heger W，Koch HM，Becker K，Angerer J，Kolossa-Gehring M.Daily intake of di（2-ethylhexyl）phthalate（DEHP）by German children-A comparison of two estimation models based on urinary DEHP metabolite levels［J］.Int J Hyg Environ Health，2007，210（1）：35-42.

［14］Koch HM，Preuss R，Angerer J.Di（2-ethylhexyl）phthalate（DEHP）：human metabolism and internal exposure-an update and latest results［J］.Int J Androl，2006，29（1）：155-165.

［15］Christensen KL，Makris SL，Lorber M.Generation of hazard indices for cumulative exposure to phthalates for use in cumulative risk assessment［J］.Regul Toxicol Pharmacol，2014，69（3）：380-389.

［16］Huang LP，Lee CC，F(xiàn)an JP，Kuo PH，Shih TS，Hsu PC.Urinary metabolites of di（2-ethylhexyl）phthalate：relation to sperm motility，reactive oxygen species generation，and apoptosis in polyvinyl chloride workers［J］.Int Arch Occup Environ Health，2014，87（6）：635-646.

［17］Konno-Takahashi N，Takeuchi T，Nishimatsu H，Kamijo T，Tomita K，Schalken JA，et al.Engineered FGF-2 expression induces glandular epithelial hyperplasia in the murine prostatic dorsal lobe［J］. Eur Urol，2004，46（1）：126-132.

［18］Wu JH，Jiang XR，Liu GM，Liu XY，He GL，Sun ZY. Oral exposure to low-dose bisphenol A aggravates testosterone-induced benign hyperplasia prostate in rats［J］.Toxicol Ind Health，2011，27（9）：810-819.

［19］Mu X，Liao X，Chen X，Li Y，Wang M，Shen C，et al.DEHP Exposure impairs mouse oocyte cyst breakdown and primordial follicle assembly through estrogen receptor-dependent and independent mechanisms［J］.J Hazard Mater，2015，298：232-240.

［20］Cho YJ，Park SB，Han M.Di-（2-ethylhexyl）-phthalate induces oxidative stress in human endometrial stromal cells in vitro［J］.Mol Cell Endocrinol，2015，407：9-17.

［21］Dobrzyńska MM.Phthalates-widespread occurrence and the effect on male gametes.Part 2.The effects of phthalates on male gametes and on the offspring［J］.Rocz Panstw Zakl Hig，2016，67（3）：209-221.

［22］Christiansen S，Boberg J，Axelstad M，Dalgaard M，Vinggaard AM，Metzdorff SB，et al.Low-dose perinatal exposure to di（2-ethylhexyl）phthalate induces anti-androgenic effects in male rats［J］. Reprod Toxicol，2010，30（2）：313-321.

［23］Jarfelt K，Dalgaard M，Hass U，Borch J，Jacobsen H，Ladefoged O.Antiandrogenic effects in male rats perinatally exposed to a mixture of di（2-ethylhexyl）phthalate and di（2-ethylhexyl）adipate［J］.Reprod Toxicol，2005，19（4）：505-515.

［24］Borch J，Axelstad M，Vinggaard AM，Dalgaard M. Diisobutyl phthalate has comparable anti-androgenic effects to di-n-butyl phthalate in fetal rat testis［J］.Toxicol Lett，2006，163（3）：183-190.

［25］Stroheker T，Cabaton N，Nourdin G，Régnier JF，Lhuguenot JC，Chagnon MC.Evaluation of antiandrogenic activity of di-（2-ethylhexyl）phthalate［J］.Toxicology，2005，208（1）：115-121.

［26］Lee CH，Akin-Olugbade O，Kirschenbaum A. Overview of prostate anatomy，histology，and pathology［J］.Endocrinol Metab Clin North Am，2011，40（3）：565-575.

［27］Janulis L，Grayhack JT，Lee C.Prostatic diseases［M］//Lepor H.Endocrinology of the Prostate.Saunders WB，Orlando：Science Press and Harcourt Asia Pte.Ltd.2001，58-74.

Promotion of proliferation of prostate in aged rats by low-dose di（2-ethylhexyl）phthalate

HUANG Dong-yan1,2,3,WU Shuang-shuang1,3,ZHU Jing1,3,MAO Xiao-yan1,2,3,Li Lei1,2,3, WU Jian-hui1,2,3,SUN Zu-yue1,2,3
(1.Shanghai Institute of Planned Parenthood Research,National Evaluation Center for Toxicology of Fertility Regulating Drugs,Shanghai 200032,China;2.National Population and Family Planning Key Laboratory of Contraceptive Drugs and Devices,Shanghai 200032,China;3.Reproductive and Developmental Research Institute,Fudan University,Shanghai 200032,China)

OBJECTlVETo investigate the proliferation effect of di(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP) on prostate in aged rats at the environmental exposure dose and the possible mechanism.METHODSThirty-two male Sprague-Dawley rats,aged 1.5 years,were randomly divided into 4 groups(8 rats per group)and treated with DEHP(30,90 and 270 μg·kg-1,ig)and vehicle once daily respectively for 4 weeks.All the animals were anesthetized with pentobarbital sodium and sacrificed on the day subsequent to the last treatment.①Abdominal aortic blood samples were collected,and serum estradiol(E2), testosterone(T)and prolactin(PRL)levels were assayed by ELISA.②The prostate tissues were dissected and categorized into different lobes,weighed and measured.The prostate relative mass was calculated.③The morphological changes were detected by HE staining and prostate epithelial height was analyzed with microscopic image analysis software.RESULTSCompared with vehicle control group,the prostate relative mass,dorsolateral prostate mass,and dorsolateral prostate index in DEHP 270 μg·kg-1group were significantly higher(P＜0.05).The height of the ventral prostate epithelium in DEHP 30,90 and 270 μg·kg-1groups was increased significantly(P＜0.01),so was the height of dorsal prostate epithelium in DEHP 270 μg·kg-1group(P＜0.01).There were no significant changes in levels of E2,PRL or T in DEHP 30,90 and 270 μg·kg-1groups,but the ratios of E2/T in DEHP 30 and 270 μg·kg-1groups were increased significantly(P＜0.05).CONCLUSlONLow-dose DEHP could promote the proliferation of prostatic hyperplasia in the aged rats,which might be associated with the relative levels of endogenous hormone.

di(2-ethylhexyl)phthalate;environmental endocrine disruptor;benign prostatic hyperplasia;aged rats;estrogen;androgen

The project supported by Talents Developmental Fund of Shanghai City(201372);and Professional Technical Service Platform of Shanghai City(15DZ2290400)

WU Jian-hui,E-mail:wujh_731@163.com,Tel:(021)64438949

R99

A

1000-3002-（2017）06-0642-07

2017-03-30接受日期：2017-06-02）

（本文編輯：趙楠）

上海市人才發(fā)展基金項目（201372）；上海市科委研發(fā)公共服務平臺項目（15DZ2290400）

黃冬妍，研究實習員，主要從事生殖藥理毒理學研究，E-mail：hdy043@163.com

吳建輝，E-mail：wujh_731@163.com，Tel：（021）64438949