鄺潔容，陳伯叢，梁曉燕

(佛山市中醫(yī)院藥劑科，廣東 佛山 528000)

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·論 著·

毛蕊異黃酮葡萄糖苷自微乳給藥系統(tǒng)的制備及質(zhì)量控制Δ

鄺潔容*，陳伯叢，梁曉燕

(佛山市中醫(yī)院藥劑科，廣東 佛山 528000)

目的：制備毛蕊異黃酮苷自微乳給藥系統(tǒng)并建立其質(zhì)量評價方法。方法：以乳化劑OP-10、聚氧乙烯醚(40)和二乙二醇單乙基醚制備毛蕊異黃酮苷自微乳給藥系統(tǒng)，考察其外觀、粒徑分布、Zeta電位及穩(wěn)定性；采用高效液相色譜法建立毛蕊異黃酮苷自微乳的質(zhì)量評價方法。結(jié)果：所得自微乳穩(wěn)定性良好，平均粒徑為32.21 nm，電動電勢為-19.43 mV(n=3)。毛蕊異黃酮苷的進樣量在0.207～3.105 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.90%(n=9)，RSD=0.79%。結(jié)論：該制劑制備工藝簡便，質(zhì)量穩(wěn)定可控，符合良好的自微乳制劑的要求。

毛蕊異黃酮葡萄糖苷； 自微乳給藥系統(tǒng)； 質(zhì)量評價

毛蕊異黃酮苷是黃芪中具有代表性的黃酮類成分之一[1-3]，具有抗病毒、抗菌、調(diào)節(jié)血脂、抗氧自由基、抗缺血等作用[1，4]，能通過抑制內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷、炎性反應(yīng)和凋亡，保護血管內(nèi)皮不受糖尿病病變影響[5]，抑制宮頸癌Hela細胞增殖[6]，具有廣闊的臨床應(yīng)用價值。毛蕊異黃酮苷難溶于水，在體內(nèi)不能穩(wěn)定吸收[7]，無法正常發(fā)揮療效，從而限制了其制劑開發(fā)。自微乳給藥系統(tǒng)(self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)是由非離子表面活性劑、助表面活性劑和油相形成的各相同性、透明、均一并包含藥物的混合液，在37 ℃環(huán)境下慢慢攪拌乳化而成的微乳，粒徑<100 nm[8-10]。SMEDDS能提高難溶性藥物的溶解度，促進其在體內(nèi)吸收，從而提高生物利用度，保證療效。本研究將毛蕊異黃酮苷制成SMEDDS，并參考相關(guān)文獻[11-13]，采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測定毛蕊異黃酮苷-SMEDDS中毛蕊異黃酮苷的含量以評估自微乳的質(zhì)量，現(xiàn)報告如下。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；G1316A型二極管陣列檢測器檢測器(美國安捷倫公司)；SartoriusBT-125D型電子天平(德國賽多利斯公司)；ZNCL-TS型智能數(shù)顯磁力攪拌電熱套(鞏義市予華儀器有限公司)；Nicomp-380/ZLS型激光粒度分析儀(美國PSS Nicomp公司)。

1.2 儀器與試劑

毛蕊異黃酮苷(Aladdin Chemistry Co.Ltd，批號：67526)；毛蕊異黃酮苷對照品(中國食品藥物檢定研究院，批號：111930-201304)；乳化劑OP-10(西安悅來醫(yī)藥科技術(shù)有限公司，批號：20151207)；二乙二醇單乙基醚(Transcutol P)(上海三齊醫(yī)藥科技有限公司，批號：20160210)；聚氧乙烯醚(40)(Cremophor RH40)(德國巴斯夫公司，批號：18520263-G0)；甲醇(默克公司)為色譜純；超純水等。

2 方法

2.1 微乳制備與分析

2.1.1 處方：通過實驗篩選改進，結(jié)合參考文獻[14]，得到處方為Cremophor RH40 50 mg、乳化劑OP-10 30 mg、Transcutol P 18 mg、毛蕊異黃酮苷2.0 mg。

2.1.2 微乳制備：按處方量稱取1個處方量的輔料，攪拌均勻，得澄清透明的空白微乳，加入毛蕊異黃酮苷2 g，充分攪拌30 min，得到微黃色透明的毛蕊異黃酮苷自微乳。

2.1.3 評價：(1)外觀。觀察所制備的自微乳在不同溫度下的性狀，4 ℃時為微黃色黏稠狀液體，25、37 ℃時均為微黃色透明、流動性較好的油狀溶液。(2)Zeta電位。取“2.1.2”制備好的自微乳適量，在常溫(25 ℃)條件下，以超純水稀釋10倍后，利用激光粒度儀分析毛蕊異黃酮苷自微乳的Zeta電位。結(jié)果顯示，本研究所制備的毛蕊異黃酮苷自微乳的Zeta電位為-19.43 mV(n=3)，見圖1。(3)粒徑分析。取“2.1.2”制備好的毛蕊異黃酮苷自微乳10 ml，在常溫(25 ℃)下，以超純水稀釋后，采用激光粒度分析儀測定。結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮苷自微乳平均粒徑為32.21 nm(n=3)，粒度在20～40 nm占97.0%。(4)穩(wěn)定性考察。取西林瓶裝取毛蕊異黃酮苷自微乳20 ml進行影響因素考察，分別于高溫(40和60 ℃)、低溫(4 ℃)、光照[(4 500±500)lx]條件下各放置10 d，同時在室溫(25 ℃)條件下放置1個月。結(jié)果顯示，該自微乳表面無分層現(xiàn)象，理化性質(zhì)及含量均無明顯變化，表明該SMEDDS穩(wěn)定性好。

圖1 毛蕊異黃酮苷自微乳的Zeta電位分析結(jié)果Fig 1 Zeta potential result of Calycosin-7-glucoside-SMEDDS

2.2 質(zhì)量評價

采用HPLC建立毛蕊異黃酮苷-SMEDDS的質(zhì)量評價方法。

2.2.1 色譜條件：色譜柱為Agilent Extend C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相為甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脫，見表1；柱溫為25 ℃；進樣量為10 μl；流速為1.0 ml/min。采用以上色譜條件，毛蕊異黃酮苷色譜峰與其他成分的分離度良好，空白輔料無干擾，專屬性良好，理論塔板數(shù)以毛蕊異黃酮苷計≥4 000。吸收波長的選擇方面，將毛蕊異黃酮苷溶于甲醇，于200～400 nm處全波長掃描，結(jié)果在220、260、290 nm處均有吸收，結(jié)合《中華人民共和國藥典》(2015年版)關(guān)于毛蕊異黃酮苷的檢測波長為260 nm，因此，本研究選擇260 nm為檢測波長，見圖2。

2.2.2 樣品制備：稱取毛蕊異黃酮苷對照品約5 mg，精密稱定，置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.207 mg/ml)。取毛蕊異黃酮苷自微乳1 ml，精密稱定，置于100 ml容量瓶中，用少量甲醇稀釋，并定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取空白自微乳(不含毛蕊異黃酮苷)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用少量甲醇稀釋，并定容至刻度，搖勻，作為空白溶液。

表1 梯度洗脫程序

圖2 毛蕊異黃酮苷紫外吸收圖譜Fig 2 Ultraviolet absorption spectrum of Calycosin-7-glucoside

2.2.3 結(jié)果分析：吸取“2.2.2”所制備的供試品、對照品、空白溶液各10 μl，分別按“2.2.1”項下色譜條件進行分析，結(jié)果顯示，供試品色譜圖中與對照品相應(yīng)位有相同色譜峰，而空白溶液色譜圖中相應(yīng)位置上無干擾峰，見圖3。

A. 空白溶液；B.對照品溶液；C.供試品溶液A.blank solution；B.reference solution；C.test solution圖3 HPLC圖Fig 3 HPLC chromatogram

2.2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0 μl，分別按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，分別記錄各峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，畫回歸曲線，回歸方程為：Y=7 356.4X-3 522.7(R2=0.999 9)。結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮苷的進樣量在0.207～3.105 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗：精密吸取上述毛蕊異黃酮苷對照品溶液，采用“2.2.1”項下色譜條件進行檢測分析，重復進樣6次，記錄每次的色譜峰面積。計算RSD值為0.62%，結(jié)果表明該儀器的精密度良好，見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果(n=6)

2.2.6 重復性試驗：取同一批次(批號：20160613)供試品，采用“2.2.2”項下方法進行制備，同法平衡制備6份供試品溶液，以“2.2.1”項下色譜條件進行檢測，記錄毛蕊異黃酮苷的色譜峰面積。結(jié)果顯示，6份樣品的RSD值為1.00%，表明其重復性良好，見表3。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗：精密量取供試品溶液500 μl，采用“2.2.2”項下制備方法操作，以“2.2.1”項下色譜條件進行檢測分析，分別于0、4、8、16、24、48 h時進樣，記錄峰面積。結(jié)果顯示，6份樣品的RSD=1.12%，表明該SMEDDS溶液在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，見表4。

表3 重復性試驗結(jié)果(n=6)

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果(n=6)

2.2.8 加樣回收率試驗：精密量取含毛蕊異黃酮苷0.207 mg/ml的對照品溶液50、100、150 μl各3份，置于帶蓋磨口錐形瓶中，揮干甲醇。精密量取供試品溶液500 μl，加入上述錐形瓶中，按“2.2.2”項下方法制備得供試品溶液，以“2.2.1”色譜條件下進行檢測分析，記錄毛蕊異黃酮苷的色譜峰面積，計算加樣回收率。結(jié)果顯示，9份供試品溶液的平均加樣回收率為99.90%(n=9)，RSD=0.79%，見表5。

表5 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)Tab 5 Recovery test results(n=9)

2.2.9 樣品含量測定：取處方輔料制備3批毛蕊異黃酮苷-SMEDDS，分別取樣品適量，采用“2.2.2”項下方法進行制備，按“2.2.1”色譜條件下測定，記錄毛蕊異黃酮苷的峰面積，采用外標一點法計算含量。結(jié)果顯示，3批樣品的平均標示量為100.23%。

3 討論

油相和表面活性劑的選擇對制備毛蕊異黃酮苷自微乳的影響至關(guān)重要。本研究選用的油相可以很好地溶解藥物；選用的表面活性劑毒性低，具有較強的乳化能力，其親水疏水平衡值>10，在攪拌中與油相制成微乳，微乳粒徑為32.21 nm，Zeta電位為-19.43 mV(n=3)。從Zeta電位值分析，該自微乳體系似乎不穩(wěn)定，但經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，該自微乳系統(tǒng)非常穩(wěn)定，說明自微乳的Zeta電位不能作為穩(wěn)定性的評定指標，與穩(wěn)定性無直接關(guān)系，而是由自微乳本身的藥物及輔料的性質(zhì)即所產(chǎn)生的表面張力變化所決定。

毛蕊異黃酮苷水溶性較差、口服吸收困難，導致其生物利用度低；同時，其在肝臟或胃腸道被代謝和分解，難以達到治療效果。自微乳屬于納米乳劑，粒徑小，服用后，通過胃腸道蠕動可自發(fā)形成乳滴(O/W型)，增加藥物接觸范圍，促進吸收，保證療效。自微乳對胃腸道淋巴組織具有良好的親和力，能使藥物避開肝臟、腸道的生物轉(zhuǎn)化，直接通過淋巴組織進入血液系統(tǒng)，從而更好地促進藥物吸收，提高療效[15]。本研究將毛蕊異黃酮苷制成穩(wěn)定的自微乳，可顯著提高藥物在體內(nèi)的生物利用度，從而保證療效。同時，采用HPLC建立了毛蕊異黃酮苷-SMEDDS的質(zhì)量評價方法，方法簡便、可控。

自微乳的制備工藝簡單，可填充到膠囊中；也可以通過各種制劑技術(shù)制備固體自微乳，可同時具有穩(wěn)定性好、易于保存、可過濾滅菌、生物利用度高等優(yōu)勢。因此，SMEDDS具有廣闊的開發(fā)及市場前景，本研究具有重要意義。

綜上所述，SMEDDS是一種新的給藥系統(tǒng)，具有穩(wěn)定性好、制備簡單、適合大生產(chǎn)等優(yōu)點，可較好地提高口服制劑的生物利用度、保證療效，具有廣闊的應(yīng)用前景和研究價值。

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Study on Self-Microemulsifying Drug Delivery System of Calycosin-7-glucoside and Quality EvaluationΔ

KUANG Jierong, CHEN Bocong, LIANG Xiaoyan

(Dept.of Pharmacy, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Foshan 528000, China)

OBJECTIVE: To establish the self-Microemulsifying drug delivery system of calycosin-7-glucoside and quality evaluation method. METHODS: The Calycosin-7-glucoside-SMEDDS was prepared with OP-10 emulsifier, Cremophor RH40 and Transcutol P, and the appearance, size distribution, Zeta potential and stability were examined. The contents of Calycosin-7-glucosidecwas determined by HPLC. RESULTS: The Calycosin-7-glucoside-SMEDDSwas stable, the average particle size and Zeta potential were 32.21 nm and -19.43 mV(n=3), respectively.The linear ranges of Stanozolol was 0.207 μg-3.105 μg. The average recovery of Trenbolone Acetate was 99.90%(n=9),RSD=0.79%. CONCLUSIONS: The preparation technique of the microemulsion is simple and feasible, and the quality is stable and controllable, which meets the needs of good SMEDDS formulation.

Calycosin-7-glucoside; Self microemulsifying drug delivery system; Quality evaluation

澳門科學技術(shù)發(fā)展基金(No.049/2012/A2)

R943

A

1672-2124(2017)07-0885-04

2017-02-08)

*主管中藥師。研究方向：中藥新藥研究與開發(fā)。E-mail：kkjjrr2007@126.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.07.007