陳 萍 李亮亮 梁申菊 何光橋 唐 艷 劉重陽

(第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院風濕免疫科，重慶400042)

IL- 17F基因多態(tài)性與類風濕關節(jié)炎發(fā)病風險關系的Meta分析

陳 萍 李亮亮 梁申菊 何光橋 唐 艷 劉重陽①

(第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院風濕免疫科，重慶400042)

目的：探討白介素17F(IL- 17F)基因多態(tài)性rs763780和rs2397084與類風濕關節(jié)炎(RA)易感性的關系。方法：計算機檢索中國學術期刊全文數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫、Pubmed、Embase以及Web of Science中已發(fā)表的與RA和IL- 17F基因多態(tài)性相關文獻，進行Meta分析。結果：納入的5項研究共收集RA患者1 174例(其中rs763780含1 174例，rs2397084含985例)，正常對照966例(rs763780含966例，rs2397084含766例)。Meta分析結果顯示，rs763780與RA密切相關(C vs.T:OR=1.74，95%CI=1.01-2.98，P=0.04；CC vs.TT:OR=3.17，95%CI=1.21-8.35，P=0.02；CT vs.TT:OR=1.80，95%CI=1.21-2.66，P=0.004；CC+CT vs.TT:OR=1.96，95%CI=1.35-2.83，P<0.001；CC vs.CT+ TT:OR=2.97，95%CI=1.13-2.66，P=0.03)。根據(jù)人種進行亞組分析發(fā)現(xiàn)，在歐洲人群中rs763780與RA密切相關，差異具有統(tǒng)計學意義。未發(fā)現(xiàn)rs2397084與RA之間的相關性。結論：IL- 17F rs763780 是RA的危險因素，IL- 17F rs2397084與RA易感性是否有關仍不明確。

類風濕關節(jié)炎；白介素17F；基因多態(tài)性；Meta分析

類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種異質性、系統(tǒng)性、慢性自身免疫性疾病，以關節(jié)滑膜炎癥為主要病理特征，可導致骨、關節(jié)的侵蝕和破壞，逐漸形成關節(jié)畸形和強直，最終導致關節(jié)功能喪失[1,2]。RA的病因到目前為止仍不清楚，可能與環(huán)境、免疫及遺傳因素相關。在遺傳因素中，研究最為廣泛的RA易感基因是人類白細胞抗原(Human leucocyte antigen，HLA)，被認為是RA最有力的遺傳致病因子,但是HLA在所有遺傳因素中所起的作用僅占到1/3[3]。因此探尋更多的RA易感基因有助于闡明RA的發(fā)病機制，并為RA的診斷、治療和預后判斷提供有效的遺傳標志物。

白介素17F(Interleukin- 17F,IL- 17F)是由Th17細胞分泌的一種促炎因子[4]。在RA中，IL- 17F可誘導多種細胞因子和趨化因子的表達，從而加劇滑膜的炎癥反應以及骨質的破壞[5]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)IL- 17F基因在多個位點上存在基因突變(如rs763780、rs11465553、rs2397084)，并且某些突變與RA發(fā)病存在密切的關系[6,7]。但在另外幾項研究中卻未發(fā)現(xiàn)IL- 17F基因多態(tài)性與RA易感性相關[8- 10]。因此，到目前為止IL- 17F基因多態(tài)性與RA發(fā)病風險關系的結論仍不統(tǒng)一。

在流行病學研究中，樣本量的大小對研究結論的可靠性具有決定性的影響?？紤]到這些單個研究的樣本量較小，不同研究可能存在較大的變異。通過Meta分析的研究方法，綜合各項研究擴大樣本量，采用合理的檢驗模型，提高檢驗效能和研究結果的穩(wěn)定性，有助于說明IL- 17F基因多態(tài)性與RA發(fā)病風險的相關關系。在本研究中，我們綜合當前研究結果，對RA與IL- 17F rs763780 和rs2397084進行了Meta分析，探討rs763780 和rs2397084與RA易感性的關系。

1 材料與方法

1.1 文獻檢索 檢索中文數(shù)據(jù)庫:以類風濕關節(jié)炎、IL- 17F、多態(tài)性等為主題詞檢索中國學術期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(CBM)。檢索英文數(shù)據(jù)庫:以rheumatoid arthritis、RA、interleukin- 17F、IL- 17、polymorphism等位主題詞檢索Pubmed、Embase、Web of Science。檢索時間為 2016 年7月1日之前發(fā)表的文獻。

1.2 納入與排除標準 納入標準:(1)研究內(nèi)容為IL- 17F基因多態(tài)性與類風濕關節(jié)炎相關性；(2)研究類型為病例對照研究；(3)所有病例診斷符合美國風濕病學會(ACR)1987年診斷標準或歐洲抗風濕聯(lián)盟(ACR/RULAR)2009年診斷標準；(4)包含rs763780和(或)rs239708等位基因頻率或基因型分布的數(shù)據(jù)，并可計算 OR 及 95%CI。排除標準:(1)無等位基因頻率和基因型分布的數(shù)據(jù)；(2)重復發(fā)表的文獻，如果同一作者或單位發(fā)表一篇以上相關或類似的文獻，則納入最全的文獻；(3)綜述、評論或會議記錄等；(4)排除家系研究。

1.3 數(shù)據(jù)提取 提取數(shù)據(jù)由兩位研究者獨立完成。每篇文獻提取的主要信息包括:第一作者姓名、發(fā)表年限、研究對象來源及特征、病例組及對照組病例數(shù)、病例及對照組等位基因及基因型分布、實驗方法、哈溫平衡等。兩位研究者完成數(shù)據(jù)提取后檢查核對，當不能確定或有分歧時，與第三研究者討論確定數(shù)據(jù)，直至所有數(shù)據(jù)均完全一致。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用χ2檢驗分析各研究中對照組的Hardy- Weinberg平衡(HWE)，若P<0.05，則不符合HWE。采用Meta分析軟件ReviewMan 5.2進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析。對納入的研究結果進行異質性檢驗，若無異質性(P>0.1或I2≤50%)則選用固定效應模型，反之當P<0.1或I2≥50%，則選用隨機效應模型進行顯著性檢驗。采用比值比(Odds ratios，OR)值及其95%置信區(qū)間(Confidence intervals,CI)表示IL- 17F rs763780和rs2397084與類風濕關節(jié)炎發(fā)病風險的相關性，并分別做等位基因模型(C vs.T)、純合子模型(CC vs.TT)、雜合子模型(CT vs.TT)、顯性模型(CC+CT vs.TT)、隱性模型(CC vs.CT+ TT)下的比較。所有檢驗采用雙側檢驗，當P<0.05則差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 納入研究的基本特征 根據(jù)檢索策略初步檢索到43篇相關文獻。通過標題和摘要排除34篇，其中綜述4篇，會議文獻7篇，未涉及多態(tài)性23篇。剩下9篇通過閱讀全文進一步篩檢，排除其中無相關數(shù)據(jù)的4篇文獻，最終共納入5篇文獻。文獻篩選過程見圖1。納入的5項研究共收集RA 病例1 174例，正常對照966例。其中有3篇文獻同時報道了rs763780和rs2397084，2篇文獻僅報道了rs763780。在Louahchi等[6]研究中只能提取到等位基因數(shù)據(jù)，另4項研究包含基因與基因型數(shù)據(jù)。5項研究共包含3種人群(歐洲人、非洲人及亞洲人)。在5項研究中，Carvalho等[9]對照組數(shù)據(jù)不滿足HWE,Louahchi等[6]對照組數(shù)據(jù)的HWE情況未知。納入研究特征見表1。納入研究各基因頻率及基因型情況見表2。

圖1 文獻篩選流程Fig.1 Flow chart of literature search and study select- ion process

2.2 rs763780 與RA關系的Meta分析結果 由于在等位基因模型比較中存在顯著的異質性(P=0.007，I2=71%)，故應用了隨機效應模型進行相關性分析。而在另外四種模型比較中不存在顯著異質性，故應用固定效應模型進行比較。結果顯示在五種模型中，rs763780在RA組和正常對照組間均有顯著差異(等位基因模型C vs.T:OR=1.74，95%CI=1.01-2.98，P=0.04；純合子模型CC vs.TT:OR=3.17，95%CI=1.21-8.35，P=0.02；雜合子模型CT vs.TT:OR=1.80，95%CI=1.21-2.66，P=0.004；顯性模型CC+CT vs.TT:OR=1.96，95%CI=1.35-2.83，P<0.001；隱性模型CC vs.CT+ TT:OR=2.97，95%CI=1.13-2.66，P=0.03)。結果見圖2。

根據(jù)人種進行亞組分析發(fā)現(xiàn)，在歐洲人群中rs763780與RA密切相關，差異具有統(tǒng)計學意義(等位基因模型C vs.T:OR=2.29，95%CI=1.05-5.02，P=0.04；純合子模型CC vs.TT:OR=6.84，95%CI=1.66-28.26，P=0.008；雜合子模型CT vs.TT:OR=1.72，95%CI=1.14-2.61，P=0.01；顯性模型CC+CT vs.TT:OR=2.08，95%CI=1.13-3.85，P=0.02；隱性模型CC vs.CT+ TT:OR=6.42，95%CI=1.54-26.74，P=0.01)。但在非歐洲人群中rs763780等位基因在病例組與對照組間無明顯差異(等位基因模型C vs.T:OR=1.11，95%CI=0.74-1.65，P=0.62)。

2.3 rs239704 與RA關系的Meta分析結果 異質性檢驗結果提示在純合子模型與隱性模型比較時存在明顯異質性，故用隨機效應模型進行相關性分析。用固定效應模型分析等位基因模型，雜合子模型和顯性模型。結果顯示，在5種模型比較下，rs2397084在RA組與對照組間差異均無統(tǒng)計學意義(等位基因模型C vs.T:OR=0.94，95%CI=0.74-1.19，P=0.60；純合子模型CC vs.TT:OR=0.64，95%CI=0.05-8.38，P=0.73；雜合子模型CT vs.TT:OR=0.98，95%CI=0.72-1.33，P=0.88；顯性模型CC+CT vs.TT:OR=0.94，95%CI=0.69-1.27，P=0.69；隱性模型CC vs.CT+ TT:OR=0.65，95%CI=0.05-9.03，P=0.75)。

2.4 發(fā)表偏倚及敏感性分析 對rs763780各比較模型進行Egger′s檢驗，未發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚(P>0.05)。通過剔除對照組數(shù)據(jù)不滿足HWE的Carvalho等[9]的研究做了敏感性分析，結果顯示剔除Carvalho等[9]研究后合并效應OR及P值無顯著改變。對于rs2397084，由于納入研究數(shù)量有限，則不進行發(fā)表偏倚檢驗及敏感性分析。

表1 納入文獻基本特征

Tab.1 Characteristics of studies included in this Meta- analysis

StudyYearCountryEthnicityPolymorphismSpecimenGenotypingmethodN.CaseN.ControlsHWELouahchi2016AlgeriaAfricanrs763780,rs2397084BloodTaqMan343323NAPawlik2016PolandEuropeanrs763780,rs11465553,rs2397084BloodTaqMan422337YCarvalho2016BrazilAmericanrs763780SalivaRFLP10075NBogunia-Kubik2015PolandEuropeanrs763780BloodRFLP89125YParadowska-Gorycka2010PolandEuropeanrs763780,rs2397084BloodRFLP220106Y

Note：RFLP.Restricted fragment length polymorphisms;HWE.Hardy- Weinberg equilibrium;NA.Not available;Y.Yes;N.No.

表2 納入研究各基因頻率及基因型信息

Tab.2 Allele and genotype information of rs763780 and rs2397084

StudyPolymorphismCasesCTCCCTTTControlsCTCCCTTTLouahchi(2016)rs7637804264438608Pawlik(2016)rs7637803980523538521655119318Carvalho(2016)rs763780161843108791413369Bogunia-Kubik(2015)rs763780341449166411239011114Paradowska-Gorycka(2010)rs7637802641412419582040898Louahchi(2016)rs23970844464241605Pawlik(2016)rs23970848775728333777599763268Paradowska-Gorycka(2010)rs2397084443963381792219002284

圖2 rs763780 與RA關系的Meta分析森林圖Fig.2 Forest plots of Meta- analysis of rs763780Note: A.Allelic model(C vs.T);B.Homozygote model(CC vs.TT);C.Heterozygote model(CT vs.TT);D.Dominant model(CC+CT vs.TT);E.Regressive model(CC vs.CT+ TT).

3 討論

在本研究中，對于IL- 17F 基因多態(tài)性rs763780和rs2397084分別納入了5項病例對照研究(共包含1 174例RA患者和966例健康對照)和3項病例對照研究(共包含985例RA患者和766例健康對照)。Meta分析結果顯示，在等位基因模型、純合子模型、雜合子模型、顯性模型和隱性模型中rs763780與RA易感性均存在密切關系，并且攜帶C等位基因的個體具有較高的RA發(fā)病風險。此外，在亞組分析中我們發(fā)現(xiàn)，rs763780與RA易感性之間的相關性同樣存在于歐洲人群中，但在非歐洲人群中未發(fā)現(xiàn)rs763780與RA有關。對于rs2397084，在五種模型中均未發(fā)現(xiàn)與RA具有相關性。

IL- 17是一類與適應性和固有性免疫應答相關的細胞因子，其家族至少存在6個成員:IL- 17A、IL- 17B、IL- 17C、IL- 17D、IL- 17E、IL- 17F。在這個細胞因子家族中，IL- 17A與IL- 17F是最早被發(fā)現(xiàn)的，二者具有高度同源性，其氨基酸構成相似性達到50%[11]。研究證實，IL- 17在RA的病理發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用[12,13]。在RA患者的關節(jié)液或組織中IL- 17的水平常常較高，這在一方面促進了局部的炎癥反應，另一方面還可上調破骨細胞分化因子刺激破骨細胞的生成[14- 19]。近年來，在IL- 17基因上檢測到了多個基因位點的突變，并且這些突變很可能影響到了IL- 17的表達并改變細胞因子的結構。

在本研究中，我們重點分析了IL- 17F的兩個突變(rs763780和rs2397084)，其中rs763780使得該位點氨基酸由谷氨酸變?yōu)榱烁拾彼?，rs2397084使得該位點由組氨酸變?yōu)榫彼帷Ｔ?010年，Paradowska- Gorycka等最先研究了rs763780和rs2397084與RA的相關性，但是在該研究中無論基因頻率還是基因型分布在RA組和對照組中均無差異。隨后，Bogunia- Kubik等研究發(fā)現(xiàn)rs763780與RA存在相關性，等位基因C在RA患者中的頻率較正常人高。因此，rs763780和rs2397084與RA易感性是否相關，仍不明確。然而，到目前為止還沒有相關Meta分析對IL- 17F的基因多態(tài)性與RA之間的關系進行系統(tǒng)研究。本文通過納入較大樣本量，分析發(fā)現(xiàn)rs763780是RA的一個危險因素，但未發(fā)現(xiàn)rs2397084與RA易感性有關。此外，本研究仍存在以下局限性:(1)納入的研究數(shù)量相對較少，樣本量仍然不夠充足，尤其是對于rs2397084；(2)納入的研究大多來自歐美洲，結論對于亞洲人群還具有局限性；(3)在rs763780和rs2397084的分析中均檢測到了異質性，而納入研究的樣本量大小，種族以及檢測方法等可能是導致異質性較大的原因。綜上所述，本研究結果表明，IL- 17F rs763780是RA的危險因素，而rs2397084與RA發(fā)生可能不存在相關性?？紤]到現(xiàn)有研究在種群數(shù)量以及樣本量大小相對不足，更多高質量包含多種人群及大樣本的病例對照研究有助于進一步明確IL- 17 基因多態(tài)性rs763780和rs2397084與RA易感性之間的關系。

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[收稿2016- 12- 01 修回2017- 02- 04]

(編輯 張曉舟)

Association of IL- 17F rs763780 and rs2397084 polymorphisms with rheumatoid arthritis:a Meta- analysis

CHEN Ping,LI Liang- Liang,LIANG Shen- Ju,HE Guang- Qiao,TANG Yan,LIU Chong- Yang.

Department of Rheumatology,the Third Affiliated Hospital of Third Military Medical University,Chongqing 400042,China

Objective:To explore the association between rheumatoid arthritis(RA)and two polymorphisms of interleukin- 17(IL- 17F)rs763780 and rs2397084.Methods: A systematic search of relevant studies was conducted in China National Knowledge Infrastructure,Wanfang Chinese Periodical Database,China Biology Medical Literature Database,Pubmed,Embase and Web of Science.Results: A total of 5 case- control studies including 1 174 RA cases and 966 health controls for rs763780 and 985 RA cases and 766 health controls for rs2397084 were included in this Meta- analysis.The results showed that rs763780 was significantly associated with increased susceptibility to RA(C vs.T:OR=1.74，95%CI=1.01-2.98，P=0.04；CC vs.TT:OR=3.17，95%CI=1.21-8.35，P=0.02；CT vs.TT:OR=1.80，95%CI=1.21-2.66，P=0.004；CC+CT vs.TT:OR=1.96，95%CI=1.35-2.83，P<0.001；CC vs.CT+ TT:OR=2.97，95%CI=1.13-2.66，P=0.03).In subgroup analysis based on ethnicity,rs763780 was positively correlated with RA in Europeans.No significant association was found between rs2397084 and RA.Conclusion: The present study revealed that IL- 17F rs763780 polymorphism is a risk factor of RA,while the association of rs2397084 with RA remains uncertain.

Rheumatoid arthritis;Interleukin- 17;Polymorphism;Meta- analysis

10.3969/j.issn.1000- 484X.2017.08.020

陳 萍(1989年-)，女，護士，主要從事免疫系統(tǒng)疾病方面的研究，Email:chenping010809@126.com。

R392

A

1000- 484X(2017)08- 1218- 05

①通訊作者，E- mail:dpyylcy@126.com。