劉 凱， 田 立， 劉曉婷， 龐敬濤， 宋蒙蒙， 呂盼盼

尿AD7c-NTP表達(dá)水平對(duì)阿爾茨海默病早期診斷和病情評(píng)估價(jià)值的探討

劉 凱1， 田 立2， 劉曉婷2， 龐敬濤2， 宋蒙蒙1， 呂盼盼1

目的 探討阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白(AD7c-NTP)表達(dá)水平的變化在阿爾茨海默病(AD)早期診斷和病情評(píng)估中的意義。 方法 選取AD組58例(輕度AD組26例、中重度AD組32例)，輕度認(rèn)知功能障礙患者(MCI組)52例和對(duì)照組62例，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELLSA)測(cè)定各組患者尿AD7c-NTP值，通過(guò)MMSE量表評(píng)定并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 不同受試組尿AD7c-NTP表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中AD組和MCI組尿AD7c-NTP水平均高于對(duì)照組，AD組高于MCI組，中重度AD組高于輕度AD組。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，輕度AD組、中重度AD組、MCI組尿AD7c-NTP表達(dá)水平與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，與病程呈正相關(guān)。ROC曲線所顯示的曲線下面積為0.952(95%CI：0.913～0.992，P=0.000)，當(dāng)尿AD7c-NTP最佳臨界值為1.76 ng/ml時(shí)，診斷AD的靈敏度和特異度分別是93.1%和90.3%。結(jié)論 尿AD7c-NTP的表達(dá)水平對(duì)于AD的早期診斷和病情評(píng)估具有重要的參考價(jià)值。

阿爾茨海默??； 輕度認(rèn)知功能障礙； 尿AD7c-NTP； 神經(jīng)心理學(xué)量表

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)作為最常見(jiàn)的癡呆類型，是引起神經(jīng)系統(tǒng)退變的最主要原因[1]。輕度認(rèn)知功能障礙(Mild cognitive impairment,MCI)被公認(rèn)為AD的前期階段，即有認(rèn)知障礙卻未達(dá)到癡呆程度，但已存在AD特異性病理改變[2]。目前，AD診斷中最具特異性的生物標(biāo)記物是腦脊液β-淀粉樣蛋白類(Aβ42)和tau蛋白(總tau蛋白和磷酸化tau蛋白)[3]，其標(biāo)本獲取有創(chuàng)、患者接受程度低，因而臨床應(yīng)用受到限制。阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白(Alzheimer associated neuronal thread protein，AD7c- NTP)作為一種新的AD生物學(xué)標(biāo)志物，在AD的早期診斷和干預(yù)中具有重要意義[4]。本研究通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象尿AD7c-NTP表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，并結(jié)合神經(jīng)心理學(xué)量表，探討其在AD及MCI中的臨床診斷價(jià)值，以期為AD早期診斷和病情評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究資料 選取2015年3月-2017年3月期間就診于濰坊市中醫(yī)院腦病科門診及病房的患者110例，年齡60～90歲，其中AD組患者58例，男29例，女29例，平均病程(18.43±8.11)個(gè)月；AD組根據(jù)CDR評(píng)分分為輕度、中重度兩組，其中輕度AD組26例，中重度AD組32例。MCI組患者52例，男33例，女19例，平均病程(9.96±5.76)個(gè)月。選取同時(shí)期我院體檢的同年齡段認(rèn)知功能正常的老年人62例作為對(duì)照組。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 AD診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合美國(guó)國(guó)立神經(jīng)病學(xué)語(yǔ)言障礙卒中研究所及阿爾茨海默病及相關(guān)疾病協(xié)會(huì)(NINCDS-ADRDA)制定的“很可能”診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.2.2 AD程度分組標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)CDR評(píng)分將AD患者分為輕度AD(CDR評(píng)分=1分)、中重度AD(CDR評(píng)分≥2分)兩組。

1.2.3 MCI診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合美國(guó)Mayo神經(jīng)病學(xué)研究中心的Petersen診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.2.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)排除因藥物、外源性物質(zhì)、頭部外傷、系統(tǒng)性疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等導(dǎo)致的認(rèn)知功能進(jìn)行性減退者；(2)排除抑郁狀態(tài)和精神障礙者。

1.3 方法

1.3.1 一般資料 收集受試者均接受全面臨床檢查，包括詳實(shí)的病史采集、神經(jīng)系統(tǒng)專科查體、頭部CT或MRI檢查等；由課題組中接受過(guò)量表培訓(xùn)的人員進(jìn)行神經(jīng)心理學(xué)量表測(cè)試，包括簡(jiǎn)易智能狀態(tài)量表(MMSE)、臨床癡呆評(píng)定量表(CDR)、Hachinski缺血指數(shù)(HIS)、漢密爾頓抑郁量表(HAMD)、日常生活能力量表(ADL)。

1.3.2 尿AD7c-NTP采集及測(cè)定 所有納入實(shí)驗(yàn)對(duì)象留取中段晨尿，剔除渾濁及存在尿液分析異常的標(biāo)本，將合格樣本立即置于專用試管并于2 ℃～8 ℃恒溫冰箱中保存(存放時(shí)間≤1 w)，采用AD7c-NTP檢測(cè)試劑盒(深圳市安群生物工程有限公司生產(chǎn)，許可證編號(hào)：粵食藥監(jiān)械20010230)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 總AD組、MCI組和對(duì)照組尿AD7c-NTP表達(dá)水平的比較 AD組和MCI組尿AD7c-NTP水平分別為(2.34±0.50)ng/ml和(1.84±0.26)ng/ml，均高于對(duì)照組(1.33±0.38)ng/ml，3組受試者尿AD7c-NTP水平有顯著性差異(F=97.67，P=0.00)，且總AD組與MCI組，總AD組與對(duì)照組，MCI組與對(duì)照組比較均有顯著差異(P=0.00<0.05)(見(jiàn)表1)。

2.2 輕度AD組與中重度AD組尿AD7c-NTP表達(dá)水平的比較 中重度AD組尿AD7c-NTP水平為(2.58±0.35)ng/ml，高于輕度AD組(2.05±0.35)ng/ml，兩組受試者尿AD7c-NTP水平有顯著差異(t=-4.69，P=0.00<0.05)(見(jiàn)表2)。

2.3 輕度AD組、中重度AD組和MCI組尿AD7c-NTP表達(dá)水平與各因素的相關(guān)性分析 為進(jìn)一步明確尿AD7c-NTP的水平與各因素的相關(guān)性，將輕度AD組、中重度AD組和MCI組尿AD7c-NTP與年齡、文化程度、MMSE評(píng)分及病程進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，得出結(jié)果：3組受試者尿AD7c-NTP水平與年齡無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；尿AD7c-NTP水平與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，與疾病病程呈正相關(guān)，且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表1 總AD組、MCI組和對(duì)照組尿AD7c-NTP表達(dá)水平的比較

與對(duì)照組比較*P<0.05；與MCI組比較#P<0.05

表2 輕度AD組與中重度AD組尿AD7c-NTP表達(dá)水平的比較

與輕度AD組比較*P<0.05

表3 輕度AD組、中重度AD組和MCI組尿AD7c-NTP表達(dá)水平與各因素的相關(guān)性分析

2.4 尿 AD7c-NTP表達(dá)水平的變化對(duì)AD的預(yù)測(cè)意義 取靈敏度作為縱坐標(biāo)，1-特異度為橫坐標(biāo)，以此繪制ROC曲線，本次研究ROC曲線所顯示的曲線下面積為0.952(95%CI：0.913～0.992，P=0.000)，當(dāng)尿AD7c-NTP最佳臨界值為1.76 ng/ml時(shí)，診斷AD的靈敏度和特異度分別是93.1%和90.3%(見(jiàn)圖1)。

圖1 尿AD7c-NTP表達(dá)水平診斷AD的ROC曲線

3 討 論

AD7c-NTP作為神經(jīng)絲蛋白屬的成員，是由Munzar等[7]在1997年首次從腦組織中分離提取到的，是一種分子量?jī)H為41 kD的跨膜磷蛋白，在AD患者的腦組織、腦脊液中選擇性的表達(dá)，其含量與癡呆的嚴(yán)重程度成正比[8]。Ghanbari等[9]以及尹黎英[10]、孫紅俠等[11]研究證明，AD7c-NTP在AD患者尿中的含量與腦組織及腦脊液中的含量均顯著升高，具有明顯相關(guān)性，對(duì)AD診斷的特異性和靈敏度高達(dá)90%，其在腦脊液和尿液中含量的變化與AD的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[12]。

本研究中總AD組尿AD7c- NTP表達(dá)水平為(2.34±0.50)ng/ml，較對(duì)照組(1.33±0.38)ng/ml明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示尿AD7c-NTP的檢測(cè)對(duì)AD的診斷具有重要的意義。MCI組尿AD7c-NTP表達(dá)水平為(1.84±0.26)ng/ml，高于對(duì)照組(1.33±0.38)ng/ml，低于總AD組(2.34±0.50)ng/ml，兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明尿AD7c-NTP的表達(dá)水平可能是MCI的生物學(xué)標(biāo)志物指標(biāo)之一。中重度AD組尿AD7c-NTP表達(dá)水平為(2.58±0.48)ng/ml，較輕度AD組(2.05±0.35)ng/ml明顯升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示AD7c-NTP表達(dá)水平的高低在一定程度上能反映認(rèn)知障礙的程度。

繪制ROC曲線，在以1.76 ng/ml為診斷界點(diǎn)時(shí)，尿AD7c- NTP診斷AD的敏感度為93.1%，特異性為90.3%，表明尿AD7c-NTP的表達(dá)對(duì)AD的診斷有著較高的敏感度和特異性。將尿AD7c-NTP測(cè)定值定為1.76 ng/ml可作為AD診斷的指標(biāo)之一，可以提高臨床診斷率。

經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，輕度AD組、中重度AD組及MCI組尿AD7c-NTP表達(dá)水平與疾病病程均呈正相關(guān)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明尿AD7c-NTP的表達(dá)水平隨著病情的進(jìn)展不斷升高，對(duì)于AD患者的病情評(píng)估也有一定的參考價(jià)值，這與閆鵬[13]、Goodman[14]等研究報(bào)道結(jié)果相一致。

綜上，采用以尿液為標(biāo)本，ELLSA為測(cè)定方法的AD7c-NTP檢測(cè)，具有快速便捷、可操作性強(qiáng)、無(wú)侵入性、性價(jià)比及特異性高等優(yōu)點(diǎn)，為AD的早期診斷和病情評(píng)估提供了重要的生物學(xué)標(biāo)記物檢測(cè)手段。但目前，關(guān)于AD7c-NTP在AD發(fā)病過(guò)程中產(chǎn)生表達(dá)的具體機(jī)制研究尚不透徹，尿AD7c-NTP檢測(cè)價(jià)值尚缺乏大樣本多中心數(shù)據(jù)支持，有待進(jìn)一步研究。

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Objective to investigate the value of urinary AD7c-NTP expression in the early diagnosis and disease evaluation of Alzheimer’s disease

LIU Kai,TIAN Li,LIU Xiaoting,et al.

(Clinical Medical College of Weifang Medical University,Weifang 261042,China)

Objective Objective to investigate the value of urine AD7c-NTP expression in early diagnosis and evaluation of Alzheimer’s disease.Methods Select 58 cases of Alzheimer’s disease (group AD) (mild AD group of 26 cases,moderate to severe AD group of 32 cases),mild cognitive impairment (MCI group) of 52 cases,and control group of 62 cases,Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (ELLSA) was used to detect the expression of unrine AD7c-NTP,scoring by MMSE scale and collecting and analyzing the urine AD7c-NTP expression level.Results The results showed that there was a obvious statistical significance (P<0.05) in the expression level of urine AD7c-NTP among the different test groups.Besides,the expression level of urine AD7c-NTP of AD group and the MCI group were all exceeding the control group.The urine AD7c-NTP level of AD group was higher than that of MCI group,the urine AD7c-NTP level of moderate and severe AD group was higher than that of mild AD group.Analyzed by the spearman rank correlation,the group of mild AD group,the moderate-severe AD group and MCI group had a negative correlation with the level of MMSE,and a positive correlation with the course of the disease.Area under the ROC curve was 0.952 (95%CI:0.913～0.992,P=0.000),when the optimum critical value get 1.76 ng/ml,sensitivity and specificity for diagnosing AD was 93.1% and 90.3%.Conclusion The expression level of AD7c-NTP in urine has an important reference value for the early diagnosis and assessment of Alzheimer’s disease.

Alzheimer’s disease; Mild cognitive impairment; Urine AD7c-NTP; Neuropsychology

2017-04-04；

2017-05-29

濰坊市軟科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016RKX035)

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261042；2.山東省濰坊市中醫(yī)院腦病二科，山東 濰坊 261041)

田 立，E-mail：wftianli@126.com

1003-2754(2017)08-0684-03

R749.1

A