王 芮， 郭亞珂， 彭 靜， 邢燕蒙， 趙志慷， 黃曉曦， 劉洪波， 方樹友

多發(fā)性硬化血清麻疹、風(fēng)疹和水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平及臨床意義

王 芮1， 郭亞珂2， 彭 靜1， 邢燕蒙2， 趙志慷1， 黃曉曦1， 劉洪波1， 方樹友1

目的 通過檢測多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)抗體濃度，并進(jìn)行擴(kuò)展殘疾狀態(tài)量表(Expanded disability status scale，EDSS)評分，探討上述病毒在MS發(fā)病中的臨床意義及其與臨床神經(jīng)功能缺失的相關(guān)性。方法 收集2013年9月-2015年2月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的50例MS患者急性期(復(fù)發(fā)期)的血清標(biāo)本，其中臨床孤立綜合征(CIS亞組)22例，復(fù)發(fā)-緩解型MS(RRMS亞組)28例，對照組收集同一時期我院體檢結(jié)果正常的37例健康志愿者的血清標(biāo)本。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附方法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定并比較血清中3種病毒IgG抗體的濃度，分析血清中各病毒抗體水平與EDSS評分的相關(guān)性。 結(jié)果 (1)MS病例組麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體的血清濃度高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);(2)CIS亞組患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平低于RRMS亞組，EDSS評分亦低于RRMS亞組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);(3)MS病例組血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體與EDSS評分無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 MS患者血清中的麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒可能不僅與MS的發(fā)病相關(guān)，而且與疾病的復(fù)發(fā)有關(guān)。

多發(fā)性硬化； 病毒IgG抗體； EDSS

多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)的自身免疫性疾病，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多發(fā)炎性脫髓鞘、軸索變性和膠質(zhì)瘢痕形成為主要病理學(xué)特點(diǎn)，可累及CNS多個部位，臨床表現(xiàn)多變，同時可伴有周圍神經(jīng)損害和其他自身免疫性疾病。MS通常在20～40歲發(fā)病，全球范圍內(nèi)約有200～500萬患者，該疾病致殘率高，經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重[1]。MS的病因尚不明確，可能與遺傳、環(huán)境、病毒感染等多種因素相關(guān)。1992年Felgenhauer等首次描述了針對麻疹病毒(M)、風(fēng)疹病毒(R)和水痘-帶狀皰疹病毒(Z)產(chǎn)生的鞘內(nèi)多特異性體液免疫應(yīng)答，即“MRZ反應(yīng)”[2]，許多研究表明MRZ反應(yīng)在MS中具有較高特異性。臨床孤立綜合征(Clinically isolated syndrome，CIS)是MS的早期表現(xiàn)，復(fù)發(fā)-緩解型MS(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)是MS最常見的類型，本研究通過檢測MS患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒的IgG抗體濃度及其EDSS評分，分析其在MS發(fā)病中的臨床意義及其與臨床神經(jīng)功能缺失的相關(guān)性，并探討MRZ反應(yīng)在MS早期病情評估及預(yù)測預(yù)后中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2013年9月-2015年2月間在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的MS患者50例，包括臨床孤立綜合征(Clinically isolated syndrome，CIS)22例和復(fù)發(fā)-緩解型MS(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)28例，其中男性19例，女性31例，年齡7～78歲，平均年齡(40.34±19.21)歲，所有入選的患者均經(jīng)過鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科兩名以上醫(yī)師詳詢病史、神經(jīng)系統(tǒng)?？茩z查、肌肉神經(jīng)電圖檢查及腦脊液檢查，入選的MS患者均符合2010年修訂的McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

正常對照組則選取同一時期在我院體檢結(jié)果正常的健康志愿者37例，其中男性13例，女性24例，年齡8～83歲，平均(40.61±18.27)歲。采血前無手術(shù)史及免疫治療史，無免疫相關(guān)疾病、感染性疾病、腫瘤疾病及心腦血管疾病等。所有入選者均被告知相關(guān)研究信息，并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本的采集及處理 正常對照組和病例組均于清晨空腹抽靜脈血3 ml，置于真空采血管中(無抗凝劑)。將血液標(biāo)本離心，取上層血清置于0.5 ml EP管內(nèi)，-80 ℃保存。

1.2.2 ELISA法檢測風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體 采用ELISA法分別檢測血清中人麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體的水平，試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照ELISA試劑盒(美國R&D公司)說明書操作。

1.2.3 EDSS評分 留取血清標(biāo)本的同時對病例組患者進(jìn)行EDSS評分，EDSS評分是目前國際通用的MS評價系統(tǒng)，有助于對病情變化進(jìn)行全面評估。每項(xiàng)功能分為5～6個等級，評分范圍為0～10分，得分越高說明神經(jīng)功能缺失越嚴(yán)重。

2 結(jié) 果

2.1 性別與年齡 病例組及對照組的性別構(gòu)成和年齡的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

2.2 病例組與對照組血清中各病毒IgG抗體水平的比較 病例組血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平均明顯高于對照組(P<0.05)(見表2)。

2.3 MS患者亞組間血清中各病毒IgG抗體水平和EDSS評分的比較 CIS亞組患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平低于RRMS亞組(P<0.05)，EDSS評分亦低于RRMS亞組(P<0.05)(見表3)。

2.4 MS患者血清各病毒IgG抗體水平與EDSS評分的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示，病例組患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平與EDSS評分無相關(guān)性(P>0.05)(見表4)。

表1 病例組及對照組的性別及年齡比較

表2 病例組與對照組血清各病毒IgG抗體水平比較

與正常對照組比較*P均<0.05

表3 MS亞組患者血清中各病毒IgG抗體水平及EDSS評分比較

與CIS亞組比較*P均<0.05

表4 病例組血清各病毒抗體IgG抗體水平與EDSS評分相關(guān)性(r)

雙變量相關(guān)性*P均>0.05

3 討 論

MS是一種病因不明，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，MS是遺傳易感個體在環(huán)境因素作用下發(fā)生的慢性自身免疫性疾病，男女比例約為1∶1.5～2.5[4]。大量證據(jù)表明遺傳因素與環(huán)境因素的綜合作用對于MS的發(fā)病具有重要作用[5]。1886年P(guān)ierre Marie首先提出了感染在MS發(fā)病中的作用[6]。Adams和Imagawa[7]在1962年的研究中首次發(fā)現(xiàn)了病毒與MS之間關(guān)系的證據(jù)。90%的MS患者腦脊液中存在不同病毒的抗體，但是MS患者的分離腦組織培養(yǎng)并沒有發(fā)現(xiàn)這些病毒的存在[8]。1992年Felgenhauer等首次描述了針對麻疹病毒(M)、風(fēng)疹病毒(R)和水痘-帶狀皰疹病毒(Z)產(chǎn)生的鞘內(nèi)多特異性體液免疫應(yīng)答，即“MRZ反應(yīng)”，其在MS診斷中具有高度特異性[2]。而MRZ反應(yīng)在視神經(jīng)脊髓炎、周圍神經(jīng)病、神經(jīng)萊姆病、病毒性腦炎、脊髓炎和周圍神經(jīng)病中少見[9]。雖然約95%的MS患者腦脊液中出現(xiàn)寡克隆區(qū)帶(Oligoclonal bands，OCB)，但它不是MS唯一的指標(biāo)，還有一部分MS患者缺乏OCB的存在[8]。2012年Brecht[10]在OCB陰性的MS患者CSF中發(fā)現(xiàn)麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、帶狀皰疹病毒抗體(MRZ反應(yīng))，或單純皰疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)抗體，研究表明檢測MRZ反應(yīng)或單純皰疹病毒抗體有助于OCB陰性患者的診斷。

這些研究表明OCB在MS中靈敏度高，但是MRZ反應(yīng)相對OCB具有較高特異性。2016年Huss[11]用多重免疫分析技術(shù)(Multiplexing technique)測定97例MS患者血清和CSF中的麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒抗體，其與ELISA法的結(jié)果高度一致，再次證明了MS患者鞘內(nèi)免疫活躍。

本研究顯示MS患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體較對照組明顯升高，提示檢測MRZ反應(yīng)可能與MS的發(fā)病有關(guān)，其在CIS患者血清中病毒IgG抗體升高有助于MS的早期診斷，與國內(nèi)外研究結(jié)果一致。2016年Saeideh發(fā)現(xiàn)MS患者CSF和白細(xì)胞中水痘-帶狀皰疹病毒DNA復(fù)制量高僅限于MS復(fù)發(fā)的過渡階段，在緩解期消失。RRMS患者水痘-帶狀皰疹病毒DNA較對照組高，表明病毒感染在MS的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用[12]。本研究中RRMS亞組患者血清中各病毒IgG抗體水平較CIS亞組患者明顯升高，且EDSS評分亦顯著高于CIS亞組患者，提示MRZ反應(yīng)及EDSS評分可能與疾病的發(fā)展相關(guān)，進(jìn)一步提示了MRZ反應(yīng)與MS的發(fā)病、CIS向RRMS轉(zhuǎn)變密切相關(guān)。但是本研究中MS患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平與EDSS評分無相關(guān)性，表明血清中病毒IgG抗體水平的高低與神經(jīng)功能的缺失程度不相關(guān)，可能由于MS患者神經(jīng)功能的障礙不僅僅受單一因素的影響，與病程、抑郁焦慮狀態(tài)、復(fù)發(fā)次數(shù)、首次發(fā)病年齡等多種因素有關(guān)。近年研究顯示MS患者CSF中組胺水平與神經(jīng)功能缺失程度呈正相關(guān)[13]。

麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘帶狀皰疹病毒均為噬神經(jīng)病毒。人群中感染較為普遍，大多數(shù)人群在早期至少感染過其中一種病毒。病毒導(dǎo)致MS的具體機(jī)制尚不清楚，可能是潛伏在外周系統(tǒng)中噬神經(jīng)病毒的病毒蛋白與人體自身蛋白具有相似的氨基酸序列，針對病毒產(chǎn)生的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致人體產(chǎn)生自身免疫[14]，即分子模擬。Zhao等[15]的研究證實(shí)通過分子模擬，病毒感染能引起自身免疫的產(chǎn)生。也可能是一些病毒的急性感染如EB病毒引起了存在于系統(tǒng)中的成分(如細(xì)胞產(chǎn)生的麻疹病毒、風(fēng)疹病毒或水痘-帶狀皰疹病毒抗體)侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此發(fā)展為MS[16]。也可能是病毒的隱蔽表位在機(jī)體初始的免疫應(yīng)答中未被清除，而在后續(xù)的應(yīng)答過程中，被抗原提呈細(xì)胞(Antigen presenting cells，APC)提呈給機(jī)體自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞克隆，從而誘發(fā)自身免疫性疾病。隨著疾病的進(jìn)展，免疫系統(tǒng)不斷擴(kuò)大所識別的自身抗原表位的范圍，使更多自身抗原遭受免疫攻擊，導(dǎo)致疾病遷延不愈并不斷加重。在MS發(fā)病過程中，包括B細(xì)胞和T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，可首先針對急性或者慢性病毒感染，而后通過分子模擬、旁路活化及表位擴(kuò)增攻擊自身組織[6]，從而引發(fā)CNS的自身免疫反應(yīng)，導(dǎo)致脫髓鞘的產(chǎn)生。其他可能的機(jī)制包括超抗原活化，αB-晶狀體蛋白的表達(dá)增加，或自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞的感染[17]。綜上，考慮到MS病變的病理異質(zhì)性，可能導(dǎo)致MS患者發(fā)病機(jī)制的不同。且在某一特定地區(qū)，MRZ反應(yīng)的陽性率與病毒的自然感染率、疫苗接種率有關(guān)。

本研究通過ELISA方法測定了MS患者與健康對照組血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和水痘帶狀皰疹病毒IgG抗體的濃度并對MS患者進(jìn)行EDSS評分，結(jié)果顯示MS組各病毒IgG抗體水平均高于健康對照組， RRMS亞組患者血清中病毒IgG抗體水平及EDSS評分均高于CIS亞組，與國內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果一致。之前的研究多檢測CSF中MRZ反應(yīng)，本研究發(fā)現(xiàn)MS患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體(MRZ反應(yīng))也較對照組升高，且可能與疾病的轉(zhuǎn)歸相關(guān)，這將更有利于患者的隨訪及病情的監(jiān)測。MS是一種復(fù)雜的疾病，單一的生物學(xué)標(biāo)志物水平可能只能反映其疾病過程的某一方面，因此，需結(jié)合病史、體征及影像學(xué)檢查結(jié)果綜合考慮，才能確立MS診斷以及評估預(yù)后等。

檢測患者血清中麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體水平，可以輔助MS的診斷以及判斷疾病轉(zhuǎn)歸。本研究首次證明MS患者在疾病初期和復(fù)發(fā)期，外周系統(tǒng)中存在針對這3種病毒的免疫反應(yīng)，即MRZ反應(yīng)。未來研究病毒誘導(dǎo)的MS動物模型，高度敏感的病原體檢測方法以及有效的抗病毒藥物的臨床試驗(yàn)，將能更好的探究病毒與MS的關(guān)系。

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The clinical significance of serum IgG antibodies against measles,rubella and varicella zoster virus of multiple sclerosis

WANG Rui,GUO Yake,PENG Jing,et al.

(Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

Objective To investigate the role of measles virus,rubella virus and varicella zoster virus in the pathogenesis of Multiple Sclerosis and its correlation with clinical neurological dysfunction.Methods From September 2013 to February 2015,50 MS patients who were admitted to Department of Neurology,Zhengzhou University First Affiliated Hospital,were enrolled as observation group,including clinically isolated syndrome (CIS) subgroup of patients (22 cases) and relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) of 28 patients.37 healthy volunteers were enrolled as the healthy control group during the same period in our clinic examination.Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect the level of three kinds of virus IgG antibodies in serum.We compared the results and analyzed the correlation between serum antibody level and expanded disability status scale (EDSS) score.Results (1)The measles virus,rubella virus,varicella zoster virus IgG antibody level in MS cases was statistically higher than the control group(P<0.05).(2)The measles virus,rubella virus,varicella zoster virus IgG antibody level in CIS subgroup patients was statistically lower than the RRMS subgroup (P<0.05),EDSS score was statistically lower than that of RRMS subgroup(P<0.05).(3)There was no correlation between IgG antibody of measles virus,rubella virus,varicella zoster virus in MS patients serum and EDSS score (P>0.05).Conclusions Measles virus,rubella virus and varicella zoster virus may be associated not noly with the pathogenesis of MS,but also the development of the disease.

Multiple Sclerosis; Virus IgG antibody; EDSS

2017-04-13；

2017-05-30

河南省科技廳普通攻關(guān)資助項(xiàng)目(No.142102310057)

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450052： 2.鄭州市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450052)

劉洪波，E-mail:liuhongbo6279@126.com

1003-2754(2017)08-0707-04

R744.5+1

A